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螞蟻與大象范文1
就是這個“靜悄悄”的網站的域名，卻引起了一場軒然大波，成了葉文龍和美國通用電氣公司（GE）爭奪的目標。一邊是普通的個體工商經營戶，一邊是世界五百強企業，實力的懸殊顯而易見，因此這場域名爭奪戰被戲稱為“螞蟻斗大象”。
稀里糊涂上擂臺
2006年，葉文龍進入寧波一家照明公司做銷售。學軟件出身的他深知網絡的威力，于是決定建個網站。注冊域名的時候，為了配合寧波這家公司名字中的“通用電器”，他根據“通用電器”的譯名General Electrics的縮寫，加上“照明”的意思，就組合成了gelighting。他申請注冊時發現gelighting.省略”。2006年12月20日，葉文龍在中國互聯網中心成功注冊gelighting.省略，只花了80塊錢。
不久，葉文龍創辦了“寧波市江東大港豐虎電子經營部”，繼續銷售照明電器，并使用自己一手創辦的gelighting.省略網站?！熬W站開通后，生意相當紅火。”不過好景不長，2007年9月，葉文龍接到很多要求退貨的電話，指責他銷售的產品存在質量問題。他覺得莫名其妙。
“這個產品不是我出售的，為什么會找到我？”“產品上印有你們的網址，還說不是你們的產品？現在有了質量問題，想推脫責任吧？”打電話的人不依不饒，強烈要求換貨。
緊接著，工商部門也找上門來。葉文龍這才留意到，那些被投訴的產品都是出自美國通用電氣公司，產品包裝上赫然印著他的網站域名gelighting.省略。
原來，“省略”是GE公司經營照明器械的一個域名，和寧波大港經營部域名“省略”僅相差兩個字母。就是“.省略交給GE公司，并補償葉文龍150萬元人民幣；而葉文龍提議讓他做GE公司產品的區域銷售，同時由他來負責維護這個網站。但是雙方都沒有接受對方的提議。
當時對方的一句話讓葉文龍感到非常氣憤――我們的網站絕對不可能讓你用的?！斑@怎么成了他們的網站？明明是我注冊的！”
由于談判未果，2008 年4 月9 日，GE公司向中國國際經濟貿易仲裁委員會域名爭議解決中心（簡稱域名爭議解決中心）提交了投訴書，請求裁決將“gelighting.省略”域名轉移給自己。
在這份厚達50頁的投訴書中，有40多頁都是在講GE公司悠久的歷史和世界范圍內的影響力。從飛機發動機、發電設備、金融服務、醫療造影、電視節目到工業塑料等等，美國通用電氣公司的產品種類繁多，是世界上最大的多元化服務性公司，多年來銷售收入一直位于世界第一。而在旁人看來，葉文龍那成立還不到兩年的大港經營部，無論從目前的規模、實力還是影響力來說，都無法和GE公司相提并論。葉文龍能否保住自己的域名？
“GE”=“gelighting”？
首先，GE公司稱去年3月份已在我國國家商標局注冊了“GE”商標，取得了該注冊商標的所有權，同時也早已注冊、使用了“gelighting.省略”域名又回到葉文龍手中。
開始反擊討說法
不過，保衛戰才剛結束，葉文龍又打響了反擊戰。原來在應訴過程中，葉文龍發現，GE公司在其部分燈具等產品的外包裝以及產品外表上，已經公然印上自己經營部的域名。
“既然仲裁域名是我的，還在包裝上印域名就是損害了我的權益。賠償損失不是最重要的，關鍵是要討個說法?！?008年8月底，他正式向北京市朝陽區人民法院GE公司及北京一家經銷商，要求兩被告停止侵權，不再使用相關域名，賠償經濟損失，并且公開賠禮道歉。
螞蟻與大象范文2
【摘要】 【目的】觀察針刺對抑郁模型大鼠海馬腦源性神經營養因子(BDNF)和神經生長因子(NGF)表達的影響，探討針刺的抗抑郁機制?！痉椒ā窟x用SD大鼠隨機分為正常組、模型組、針刺組、西藥組，應用孤養和長期不可預見的慢性應激刺激復制抑郁大鼠模型，同時西藥組按2 mg·kg-1·d-1劑量給予氟西汀灌胃，針刺組予以針刺百會、心俞、肝俞穴，每天1次，共21 d。采用免疫組化方法檢測各組大鼠海馬BDNF和NGF蛋白表達的情況。【結果】與正常組比較，模型組BDNF和NGF陽性細胞數量顯著減少(P
【關鍵詞】 抑郁癥/針灸療法;海馬/病理學;神經營養因子;神經生長因子;疾病模型，動物;大鼠
研究表明，抑郁癥的發病機制及治療可能涉及神經元可塑性的假說，神經元可塑性失調可導致抑郁癥[1]。神經生長因子(nerve growth factor，NGF)與腦源性神經營養因子(brainderived neurotrophic factor，BDNF)是神經因子家族的兩個成員，在神經系統的生長發育中有重要作用，對神經元的可塑性及其形成和生存起著重要的調節作用[2]。本研究采用孤養和長期不可預見的慢性應激刺激復制抑郁大鼠模型，觀察針刺對模型大鼠海馬神經元BDNF和NGF表達的影響，現報道如下。
1材料與方法
11實驗動物和分組SPF級成年SD大鼠，體質量220～290 g，雌雄各半。由廣州中醫藥大學動物中心提供，實驗動物合格證編號：2007A017。首先采用Openfield法[3]作行為學評分，選擇得分相近的32只大鼠，適應性喂養7 d后，隨機分為正常組、模型組、氟西汀組(西藥組)、針刺組，每組8只。正常組每籠飼養4只，雌雄分開。用普通大鼠飼料喂養，飲用自來水，室溫控制在20℃～25℃，濕度60%～80%。實驗在廣州中醫藥大學動物實驗中心進行(合格證編號：0007047)。
12試劑與儀器BDNF、NGF免疫組化試劑盒購自中山生物試劑有限公司廣州分公司。33’二氨基聯苯胺四鹽酸鹽(DAB)顯色劑，兔抗NGF和BDNF多克隆抗體：一抗(工作濃度為1∶100)、二抗、三抗，40 g/L多聚甲醛，磷酸鹽緩沖液(PBS)均購自武漢博士德生物有限公司。CX21BIMSET生物顯微鏡(OLYMPUS公司生產)，圖像分析儀(北京航空航天大學24版本)。
13動物模型的復制按照參考文獻方法[3]進行抑郁癥模型大鼠的復制。模型組、針刺組、西藥組每籠飼養1只，各組分別接受21 d各種不同的應激刺激，包括斷水24 h;斷食24 h;夾尾1 min;4℃冰水游泳5 min;搖晃：1次/s，5 min;晝夜顛倒;電擊足底，電壓50 mV，每5 s刺激1次，間歇5 s，共刺激10次。每天隨機選擇1種刺激，每種刺激平均使用3次，共21 d。
14治療方法給予大鼠各種不可預知的應激刺激同時，西藥組按照2 mg·kg-1·d-1劑量給予鹽酸氟西汀(美國禮來公司)，將藥物溶于生理鹽水中灌胃，每天1次。針刺組每天應激刺激前1 h進行治療，根據《實驗針灸學》[4]大鼠穴位定位方法取穴，選取百會、心俞、肝俞。穴位常規消毒，選用華佗牌025 mm×13 mm針灸針進行針刺。百會向尾部斜刺，進針深度約為2 mm，心俞、肝俞(左右兩側穴位交替使用，每次取單側)斜刺5 mm，每穴均勻捻轉刺激30 s，留針15 min。每天1次，共21次。
15檢測指標和方法
151取材方法各組大鼠在治療21 d結束后，全部斷頭取腦，剝離全腦，于冰浴下迅速分離出海馬，40 g/L多聚甲醛固定6 h，再依次浸入200、300 g/L的蔗糖PBS(pH 72)中，直至組織塊下降到底部，恒冷冰凍切片機連續冠狀切片，取海馬與齒狀回互包平面，片厚40 μm，直接置于01 mmol/L PBS液中，4℃冰箱保存。
152BDNF、NGF免疫組織化學染色載玻片經防脫片劑PolyLysine處理，體積分數3%H2O2室溫作用10 min以滅活內源性酶，蒸餾水洗3次。熱修復抗原：將切片浸入001mol/L枸櫞酸鹽緩沖液(pH 60)， 微波爐加熱至沸騰后斷電，間隔5～10 min，反復1～2次。冷卻后PBS(pH 72～76)洗滌2次，加50 mg/L的牛血清白蛋白(BSA)封閉液，室溫20 min。甩去多余液體，不洗，滴加1∶100稀釋的一抗(抗BDNF、NGF)，37℃放置1 h。PBS洗滌2 min×3次，滴加生物素化山羊抗小鼠IgG，37℃、20 min。PBS洗滌2min×3次，滴加鏈霉親和素—生物素—過氧化物酶連結法(SABC)試劑，37℃、20 min。PBS洗滌5 min×4次，使用DAB顯色試劑顯色。取1 mL蒸餾水，加入試劑盒中ABC試劑各1滴，混勻后加至切片。室溫顯色，鏡下控制反應時間，一般在5～30 min之間。蒸餾水洗滌，蘇木素輕度復染。脫水，透明，封片，顯微鏡觀察。每組各取1張切片貼在載玻片上，通過比較吸光度(D)半定量分析BDNF和NGF的表達量。每張隨機取2個視野，在10×40光鏡下用圖像分析儀進行分析。
16統計學方法采用SPSS 120軟件分析數據，用單因素方差分析：方差齊時采用LSD法(最小顯著差異法);方差不齊時采用Dunnett T3法。
2結果
正常組大鼠海馬結構中，BDNF陽性細胞表達很強，廣泛分布于海馬的錐體細胞和齒狀回的顆粒細胞層，細胞排列密集，著色深，有的有較長的突起。與正常組比較，模型組BDNF陽性細胞數量明顯減少，且多數細胞呈空泡狀，胞漿著色較淺。針刺組、西藥組BDNF陽性細胞數顯著增加(與模型組比較，P005)。結果見表1、圖1(見彩圖頁第615頁)。
正常組大鼠海馬神經元中可見較多的NGF免疫反應陽性顆粒，呈淺棕色。與正常組比較，模型組大鼠海馬神經元NGF 陽性細胞數顯著減少(P
【摘要】 【目的】觀察針刺對抑郁模型大鼠海馬腦源性神經營養因子(BDNF)和神經生長因子(NGF)表達的影響，探討針刺的抗抑郁機制?！痉椒ā窟x用SD大鼠隨機分為正常組、模型組、針刺組、西藥組，應用孤養和長期不可預見的慢性應激刺激復制抑郁大鼠模型，同時西藥組按2 mg·kg-1·d-1劑量給予氟西汀灌胃，針刺組予以針刺百會、心俞、肝俞穴，每天1次，共21 d。采用免疫組化方法檢測各組大鼠海馬BDNF和NGF蛋白表達的情況?！窘Y果】與正常組比較，模型組BDNF和NGF陽性細胞數量顯著減少(P
【關鍵詞】 抑郁癥/針灸療法;海馬/病理學;神經營養因子;神經生長因子;疾病模型，動物;大鼠
研究表明，抑郁癥的發病機制及治療可能涉及神經元可塑性的假說，神經元可塑性失調可導致抑郁癥[1]。神經生長因子(nerve growth factor，NGF)與腦源性神經營養因子(brainderived neurotrophic factor，BDNF)是神經因子家族的兩個成員，在神經系統的生長發育中有重要作用，對神經元的可塑性及其形成和生存起著重要的調節作用[2]。本研究采用孤養和長期不可預見的慢性應激刺激復制抑郁大鼠模型，觀察針刺對模型大鼠海馬神經元BDNF和NGF表達的影響，現報道如下。
1材料與方法
11實驗動物和分組SPF級成年SD大鼠，體質量220～290 g，雌雄各半。由廣州中醫藥大學動物中心提供，實驗動物合格證編號：2007A017。首先采用Openfield法[3]作行為學評分，選擇得分相近的32只大鼠，適應性喂養7 d后，隨機分為正常組、模型組、氟西汀組(西藥組)、針刺組，每組8只。正常組每籠飼養4只，雌雄分開。用普通大鼠飼料喂養，飲用自來水，室溫控制在20℃～25℃，濕度60%～80%。實驗在廣州中醫藥大學動物實驗中心進行(合格證編號：0007047)。
12試劑與儀器BDNF、NGF免疫組化試劑盒購自中山生物試劑有限公司廣州分公司。33’二氨基聯苯胺四鹽酸鹽(DAB)顯色劑，兔抗NGF和BDNF多克隆抗體：一抗(工作濃度為1∶100)、二抗、三抗，40 g/L多聚甲醛，磷酸鹽緩沖液(PBS)均購自武漢博士德生物有限公司。CX21BIMSET生物顯微鏡(OLYMPUS公司生產)，圖像分析儀(北京航空航天大學24版本)。
13動物模型的復制按照參考文獻方法[3]進行抑郁癥模型大鼠的復制。模型組、針刺組、西藥組每籠飼養1只，各組分別接受21 d各種不同的應激刺激，包括斷水24 h;斷食24 h;夾尾1 min;4℃冰水游泳5 min;搖晃：1次/s，5 min;晝夜顛倒;電擊足底，電壓50 mV，每5 s刺激1次，間歇5 s，共刺激10次。每天隨機選擇1種刺激，每種刺激平均使用3次，共21 d。
14治療方法給予大鼠各種不可預知的應激刺激同時，西藥組按照2 mg·kg-1·d-1劑量給予鹽酸氟西汀(美國禮來公司)，將藥物溶于生理鹽水中灌胃，每天1次。針刺組每天應激刺激前1 h進行治療，根據《實驗針灸學》[4]大鼠穴位定位方法取穴，選取百會、心俞、肝俞。穴位常規消毒，選用華佗牌025 mm×13 mm針灸針進行針刺。百會向尾部斜刺，進針深度約為2 mm，心俞、肝俞(左右兩側穴位交替使用，每次取單側)斜刺5 mm，每穴均勻捻轉刺激30 s，留針15 min。每天1次，共21次。
15檢測指標和方法
151取材方法各組大鼠在治療21 d結束后，全部斷頭取腦，剝離全腦，于冰浴下迅速分離出海馬，40 g/L多聚甲醛固定6 h，再依次浸入200、300 g/L的蔗糖PBS(pH 72)中，直至組織塊下降到底部，恒冷冰凍切片機連續冠狀切片，取海馬與齒狀回互包平面，片厚40 μm，直接置于01 mmol/L PBS液中，4℃冰箱保存。
152BDNF、NGF免疫組織化學染色載玻片經防脫片劑PolyLysine處理，體積分數3%H2O2室溫作用10 min以滅活內源性酶，蒸餾水洗3次。熱修復抗原：將切片浸入001mol/L枸櫞酸鹽緩沖液(pH 60)， 微波爐加熱至沸騰后斷電，間隔5～10 min，反復1～2次。冷卻后PBS(pH 72～76)洗滌2次，加50 mg/L的牛血清白蛋白(BSA)封閉液，室溫20 min。甩去多余液體，不洗，滴加1∶100稀釋的一抗(抗BDNF、NGF)，37℃放置1 h。PBS洗滌2 min×3次，滴加生物素化山羊抗小鼠IgG，37℃、20 min。PBS洗滌2min×3次，滴加鏈霉親和素—生物素—過氧化物酶連結法(SABC)試劑，37℃、20 min。PBS洗滌5 min×4次，使用DAB顯色試劑顯色。取1 mL蒸餾水，加入試劑盒中ABC試劑各1滴，混勻后加至切片。室溫顯色，鏡下控制反應時間，一般在5～30 min之間。蒸餾水洗滌，蘇木素輕度復染。脫水，透明，封片，顯微鏡觀察。每組各取1張切片貼在載玻片上，通過比較吸光度(D)半定量分析BDNF和NGF的表達量。每張隨機取2個視野，在10×40光鏡下用圖像分析儀進行分析。
16統計學方法采用SPSS 120軟件分析數據，用單因素方差分析：方差齊時采用LSD法(最小顯著差異法);方差不齊時采用Dunnett T3法。
2結果
正常組大鼠海馬結構中，BDNF陽性細胞表達很強，廣泛分布于海馬的錐體細胞和齒狀回的顆粒細胞層，細胞排列密集，著色深，有的有較長的突起。與正常組比較，模型組BDNF陽性細胞數量明顯減少，且多數細胞呈空泡狀，胞漿著色較淺。針刺組、西藥組BDNF陽性細胞數顯著增加(與模型組比較，P005)。結果見表1、圖1(見彩圖頁第615頁)。
正常組大鼠海馬神經元中可見較多的NGF免疫反應陽性顆粒，呈淺棕色。與正常組比較，模型組大鼠海馬神經元NGF 陽性細胞數顯著減少(P
3討論
海馬是邊緣系統重要組成部分，參與情緒、學習、記憶、行為、免疫等調節，它的損傷在各種應激所致疾患中起關鍵作用。應激所致的海馬樹突結構重建、神經元形成的減少和細胞生存能力的下降為抑郁癥患者海馬損害提供了細胞學基礎[5]。NGF和BDNF是神經生長因子家族的兩個成員，其作用比較廣泛，胚胎發育期對神經系統的發育、分化、成熟以及突觸的形成不可缺少，成年期對神經功能的調節和神經系統的可塑性具有重要作用[6]。成熟的神經元對刺激具有調節其結構和功能的能力，稱為可塑性。BDNF可能是作為這種結構可塑性的分子媒介。有人認為，NGF可調節神經元的結構，BDNF可調節神經元的活性，其機制可能是改變了膽堿能神經元的功能，進而調節了海馬神經元的可塑性[7]。
研究表明，海馬是成年大鼠神經生長因子含量最高的部位，各種應激造成海馬神經元損害時，NGF和BDNF也會發生變化。如束縛應激可以使大鼠齒狀回的NGF降低到正常的36%，BDNF也會同時降低[8]。心理及物理應激能下降海馬BDNF mRNA水平，提示與應激相關的抑郁癥與海馬BDNF有密切關系。本實驗也發現：正常組大鼠海馬結構中，BDNF陽性細胞表達較強，廣泛分布于海馬的錐體細胞和齒狀回的顆粒細胞層，細胞排列密集，著色深，有的有較長的突起。而模型組BDNF陽性細胞數量顯著減少，且多數細胞呈空泡狀，胞漿著色較淺。正常組大鼠海馬神經元中可見較多的NGF免疫反應陽性顆粒，呈淺棕色，而模型組NGF 陽性細胞數顯著減少(P
本實驗結果還顯示：在給予針刺及氟西汀干預后，BDNF和NGF 陽性細胞數均較模型組顯著增加。針刺可以促進BDNF和NGF 表達，從而對海馬神經元的可塑性進行調節，這可能是針刺抗抑郁的分子機制之一。
抑郁癥屬中醫的“郁病”， 主要病機為肝郁氣滯、心脾兩虛和肝腎陰虛。其病位在腦，涉及肝、心等，故選擇百會、肝俞、心俞穴。百會屬督脈，督脈是人體諸陽經脈之總匯，對整個經脈系統有統帥作用，其主干行于脊里，向上行至項后風府進入腦內，上循巔頂，故督脈與腦、脊髓關系相當密切，歷代醫家素有“病變在腦，首取督脈”之說。百會為手足三陽經與督脈及足厥陰肝經之會，位居頭之巔頂，猶天之極星居北，為百脈聚會之處，是調補中氣、疏通腦絡、健腦寧神之要穴。心俞、肝俞為背俞穴，屬足太陽膀胱經，其主干從頭頂入里絡于腦，故和腦的關系極為密切，兩穴除了調理心脾、疏肝理氣之外，還可健腦安神，是治療神志病的要穴，三穴共奏解郁調神的功效。
參考文獻
[1]Duman R S， Malberg J， Thome J. Neural plasticity to stress and antidepressant treatment[J]. Biol Psychiatry， 1999， 46(9):1181.
[2] Kata L C， Lo D C. Neurotrophins and synaptic plasticity[J]. Annu Rev Neurosci， 1999， 22(2): 295.
[3]Willner P， Towell A， Sampson D， et al. Reduction of sucrose preference by chronic unpredictable mild stress and its restoration by a tricyclic antidepressant[J]. Psychopharmacology， 1987，93(3):358.
[4] 李忠仁.實驗針灸學[M].北京：中國中醫藥出版社，2003:329.
[5] Dequervain D J， Roozendaa I B， McGaugh J L. Stress and glucocorticoids impair retrieval of long term spatial memory[J]. Nature，1998，394(12):787.
[6] Arimatsu Y， Miyamoto M. Survivalpromoting effect of NGF on in vitro septohippocampal neurons with cholinergic and GABAergic phenotypes[J]. Brain Res Dev Brain Res， 1991， 58(2)：189.
螞蟻與大象范文3
Changes of nNOS positive neurons in hippocampus and memory consolidation after paradoxical sleep deprivation in rats
【Abstract】 AIM: To study the changes of memory processes and consolidation during paradoxical sleep in rats and to observe the alteration of neuronal nitric oxide synthase immunoreactivity (nNOSIR) neurons in hippocampus after paradoxical sleep deprivation. METHODS: Aradoxical sleep deprivation was performed using the "lower pot technique" The control groups (CC)， tank control groups（TC） and paradoxical sleep deprivation groups（PSD） were tested in Morris Water Maze. At the end of the experiment， the animals were sacrificed under chloral hydrate anesthesia (0.4 g/kg) by intraaortic perfusion of a fixative solution. Coronal sections were cut at 25 μm thickness on a freezing microtome and up to five series of adjacent sections were collected for nNOS immunohistochemical processing using streptavidinbiotinperoxidase complex technique (SABC technique). RESULTS: The memory consolidation in PSD 24 h， PSD 48 h and PSD 72 h rats declined significantly compared with that in TC 24， 48， 72 h as well as CC 24， 48， 72 h rats (P
【Keywords】 sleep; learning & memory; hippocampus;rat; nNOS
【摘要】 目的: 揭示記憶是否在異相睡眠中得到加強和鞏固，取消異相睡眠是否導致記憶維持能力下降及其下降的機制. 神經元性一氧化氮合酶（neuronal nitric oxide synthase， nNOS）是否參與記憶中樞海馬結構調節，剝奪異相睡眠（paradoxical sleep deprivation，PSD)是否改變它們在海馬的表達. 方法: ①采用小平臺法建立PSD大鼠動物模型. 應用Morris水迷宮測試系統檢測大鼠空間參考記憶獲得及維持的變化; ②海馬的nNOS免疫組化研究：PSD 24，48和72 h后，立即取腦、固定、行冰凍切片（片厚25 μm）、SABC法免疫組化染色、光鏡下進行觀察分析、攝像. 結果：①PSD可造成大鼠空間參考記憶維持能力的損傷； ②PSD組大鼠海馬中nNOS免疫反應陽性細胞在CA1，CA2，CA3，CA4及錐體細胞層、顆粒層、齒狀回稀疏，數目較相應的大平臺組（tank control groups， TC group）、正常飼養組（control groups， CC group）明顯減少(P
【關鍵詞】 睡眠；記憶；海馬；大鼠； 神經元性一氧化氮合酶
0引言
近年來人們對睡眠和學習記憶之間的關系進行了廣泛的研究，尤其是異相睡眠與學習記憶的關系是近年來神經科學研究的熱點問題. 以往大量研究集中在異相睡眠與記憶獲得的機制上，而異相睡眠與記憶維持的關系所見報道不多. 我們通過Morris水迷宮建立空間記憶獲得模型，用小平臺技術（flower pot technique）建立異相睡眠剝奪（paradoxical sleep deprivation，PSD)模型［1］. 應用空間記憶獲得后PSD的方法，觀察PSD后大鼠的記憶維持能力的改變，及其神經元性一氧化氮合酶（neuronal nitric oxide synthase， nNOS)在學習記憶中樞海馬表達的變化. 旨在探討異相睡眠與記憶維持的關系及其可能機制.
1材料和方法
1.1材料
健康雄性Wistar大鼠45只，體質量（308±20）g ，由甘肅省醫學科學院提供. 連續學習訓練4 d結束后，立即用隨機數字表法將所有大鼠隨機分為3組(24 h組， 48 h組和72 h組)，每組15只. 每組再分為：PSD組，大平臺（tank control groups， TC）組；正常飼養組（control groups， CC group）. 每小組5只. nNOS多克隆抗體（Ab1參考效價1∶200），SABC試劑盒，DAB顯色試劑盒，PBS緩沖液等均購自武漢博士德公司.
1.2方法
1.2.1Morris水迷宮空間記憶動物模型的建立①水迷宮的組成：一直徑為150 cm的圓形水池，直徑10 cm、高15 cm的平臺，以及水迷宮測試系統. 為了增強迷宮與大鼠的色彩對比，水池內壁及平臺均漆成黑色. 實驗時，平臺隱藏在水下（低于水面2 cm），水溫保持在（20±2）℃. 水迷宮測試系統購自北京Genheart公司，由數碼攝錄機、A/D轉換卡及與其相連的計算機、相關軟件等組成; ②PSD箱的制作：大小30 cm×30 cm×30 cm ，中央放置一直徑為6.5 cm，高8 cm的平臺. 剝奪箱內注有水，水面低于平臺2 cm，水溫保持在（20±2）℃左右. 大鼠可以在平臺上自由攝取食物和水，但當進入異相睡眠時，由于骨骼肌的松弛使大鼠掉入水中而驚醒，造成PSD. TC組與PSD組的環境相同，只是平臺直徑為20 cm. CC組飼養在干燥鼠籠內； ③水迷宮空間學習記憶的訓練：訓練開始前，大鼠單個飼養以適應實驗室環境1 wk. 每日逐一給予適當抓摸以消除其恐懼感. 訓練在每日8:00～13:00間進行. 預先將迷宮任意分為4個象限. 平臺放入上述4個象限中隨機選擇的1個象限中（在訓練的4 d中位置一直保持不變），測量水溫和水面距平臺的高度達到實驗要求后，于池邊任意取一入水點，大鼠面向池壁入水，計算機自動跟蹤計時. 允許在120 s內找到平臺，找到后在平臺上保持15 s. 若在120 s內找不到，則將大鼠引導到平臺上并保持15 s. 每只大鼠在同一入水點連續訓練2次，以第1次訓練（trial 1）成績衡量空間記憶的獲得水平，第2次（trial 2）成績衡量空間工作記憶水平. 全部動物按照上述方法完成第1個入水點的訓練后繼續進行第2、第3及第4個入水點的訓練. 每次訓練結束后擦干大鼠身體，放入各自的鼠籠內并適當給予保暖. 連續4 d訓練期間，迷宮周圍的參照物（包括燈光、周圍的器物等）必須保持不變. 其中所有的PSD組、CC組及TC組在4 d訓練結束后立即分別放入睡眠剝奪箱、大平臺水箱和普通鼠籠，室溫控制在（22±2）℃，避免噪音，保持24 h光暗周期，每日7:00～19:00開燈照明. 24，48和72 h后，分別將24， 48和72 h組大鼠再次任意選取兩個入水點，每個點連續兩次尋找平臺，其結果用來衡量記憶的變化. 此時水下平臺所處的位置與訓練時相同.
1.2.2主要觀察指標①大鼠在迷宮中的游泳軌跡（track）；②潛伏期（latency， L），大鼠從入水到找到平臺的時間；③距離(distance， D)，大鼠從入水到找到平臺的游泳距離；④速度(velocity， V)；⑤平臺所在象限軌跡（時間）的分布(percentage of track or time in correct quarter， PQ)；⑥記憶得分(memory score， MS).
1.2.3nNOS免疫組化取腦連續冠狀冰凍切片（LEICA RM2135），片厚25 μm，切片入0.1 mol/L PBS液中，隔5取1撈片，4℃冰箱保存備用. 共4套分別采用SABC（streptavidinBiotinperoxidaseComplex）法進行nNOS的免疫組化染色. nNOS陽性細胞胞質呈棕黃色. 每片隨機選取5個高倍視野，記數陽性細胞數.
統計學處理：所有數據以x±s表示，連續4 d各點第1， 2次探索距離、記憶得分采用重復測量方差分析，其余數據采用單因素方差分析，均數兩兩比較行LSDt檢驗，方差不齊各組間的比較采用非參數檢驗，P
2結果
2.1大鼠Morris水迷宮空間學習記憶能力的測試隨著訓練次數的增加，大鼠空間學習記憶能力逐漸增強，連續4 d各點第1，2次探索距離、記憶得分有差異（Tab 1）；PSD 24，48和72 h后各入水點搜索平臺的結果也有差異（Tab 2）.表1連續4 d各點第1，2次探索距離、記憶得分的結果（略）表2剝奪異相睡眠24，48和72 h后探索距離、記憶得分的結果（略）
2.2海馬的nNOS免疫組化nNOS陽性細胞均為神經元，胞質和突起濃染，大部分集中于錐體細胞層和顆粒細胞層內或邊緣，胞體多為錐形或梭形 . PSD組大鼠海馬各亞區及齒狀回陽性細胞分布稀疏，數目較TC和CC組明顯減少(P
3討論
Morris水迷宮是英國心理學家Morris于20世紀80年代初設計并應用于學習記憶腦機制的研究［2］. 此后，該迷宮系統被廣泛運用在神經生物學領域的基礎和應用研究中，實驗動物主要是大鼠［2］.
我們參考Youngblood等［3］的設計方法，用每個入水點的第一次訓練成績來衡量空間參考記憶的獲得和保持水平，用第二次訓練成績來衡量空間工作記A: TC; B: PSD 24 h; C: PSD 48 h; D: PSD 72 h.
憶的水平. 大鼠的每個入水點第一次探索時，由于時間和空間的改變，不能與上一次探索之間形成順序性關系，大鼠只能依照環境的參照來確定水下平臺的位置. 其記憶屬性為參考記憶. 大鼠的每個入水點第二次探索時，與第一次探索在空間和時間上都存在連續性，大鼠可以根據剛剛獲得的信息找到水下平臺，其記憶屬性為工作記憶.
實驗結果發現，全部大鼠通過訓練后建立了不同程度的空間記憶. 從PSD組大鼠在同一時段其第一次探索游泳潛伏期、距離均大于其相應的TC組和CC組，記憶得分（MS）小于TC，CC組大鼠，其差異有顯著性（P
nNOS調節中樞神經系統中的NO的釋放，長時程增強（long term potentiation， LTP)的表達與NO的產生呈現正相關［4］. Vincent等［5］在研究中發現，NO可以調節Ach的釋放，NO釋放增多，Ach分泌也增多. 應用NOS抑制劑灌注腦組織可以使Ach基礎釋放量減少40%，而Ach與學習記憶及睡眠的周期密切相關. 另外，NO還參與突觸重塑的調節，NO的減少可使突觸重塑能力下降. LTP是神經可塑性和突觸傳遞的一種表現形式，被認為是學習記憶的細胞學基礎. 而突觸重塑是LTP的基礎［4，6］.
實驗中發現，PSD后PSD組與TC，CC組相比較，PSD組大鼠海馬中nNOS陽性神經元表達稀少，數量明顯低于TC和CC組. 因而可以推測：PSD可以造成海馬nNOS的表達減少，從而導致NO的產生減少，這可能是導致PSD造成大鼠空間學習記憶能力下降的原因之一.
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螞蟻與大象范文4
【關鍵詞】 抑郁癥；黃芩苷；神經營養素-3
【中圖分類號】R2855 【文獻標志碼】 A 【文章編號】1007-8517（2016）20-0013-03
抑郁癥是一種常見的精神性疾病。傳統的抑郁癥以及抗抑郁藥物研究多集中于單胺類神經遞質領域。近年來，越來越多的研究支持了抑郁癥的神經營養因子假說。神經營養因子是一類主要由星形膠質細胞產生的蛋白質分子，為神經元的生長、存活和功能完整性提供必須的支持作用。已有大量研究發現抑郁癥患者血清神經營養素（Neurotrophins， NT）-3水平顯著高于正常人[1]，提示NT-3可能參與了抑郁癥的發病過程，但兩者關系研究還較少。
在前期研究中，筆者采用連續注射皮質酮的方法建立了小鼠抑郁模型，并給予黃芩苷治療，發現黃芩苷可顯著逆轉皮質酮小鼠的抑郁樣行為，并上調海馬中腦源性神經營養因子（Brain derived neurotrophic factor，BDNF）的表達水平[2]，提示黃芩苷的抗抑郁作用可能與增強神經元營養與再生有關，但黃芩苷對NT-3的表達是否有影響尚不清楚。因此，本文主要研究了黃芩苷對小鼠海馬內NT-3表達水平的影響，期望以此解釋黃芩苷的神經保護以及抗抑郁機制。
1 材料與方法
11 藥品 黃芩苷（981%）購自南京澤朗醫藥科技有限公司，生產批號為ZL111024；皮質酮購自美國Sigma公司，生產批號為B130537；鹽酸氟西汀購自常州四藥制藥有限公司，生產批號為20100623No144。
12 動物 雄性ICR小鼠購自湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，18～22g。實驗開始前動物預先適應環境一周，可自由進食和飲水。環境溫度為（22±1）℃，每天12h光照（8：00-20：00）。動物實驗遵循河南中醫學院實驗動物倫理委員會規定進行。
13 動物模型 適應1周后，所有小鼠隨機分為5組（每組10只）：正常組、皮質酮模型組、黃芩苷組（劑量分別為10、20mg/kg）、陽性對照氟西汀組（劑量為20mg/kg）。除正常組外，其他組每天皮下注射皮質酮（40mg/kg），連續21d。黃芩苷和氟西汀混懸于生理鹽水中，于注射皮質酮前30min灌胃給藥，劑量為10ml/kg。
14 糖水實驗 末次給藥24h后，進行糖水實驗。所有小鼠均提前斷水斷糧24 h，每只小鼠置于單獨的籠子中，分別給予1瓶1%的蔗糖水和一瓶自來水，兩個瓶子隨機放置，24h后收取瓶子，量取小鼠的蔗糖水和自來水的攝入量，通過以下公式來計算糖水偏愛百分比：糖水偏愛百分比=糖水攝入量/（糖水攝入量+水攝入量）×100%。
15 強迫游泳實驗 糖水實驗24h后進行強迫游泳實驗。將小鼠放在一個垂直玻璃缸內（直徑15cm，高30cm），玻璃缸內水深10cm，溫度為24±1℃。每只小鼠游泳6min，用攝像機進行錄像，記錄每只小鼠的最后4min內的不動時間。
16 組織獲取 強迫游泳實驗24h后，摘眼球采血并脫頸椎處死小鼠，快速分離海馬組織，立即放入液氮中冷凍，隨后轉移至-80℃冰箱保存待測。
17 qPCR 冰凍的海馬組織中加入10倍體積Trizol試劑勻漿后，加入氯仿劇烈震蕩15s，靜置5min 后于12000g離心15min，取上層相加入等量異丙醇混勻，靜置10min 后于12000g 離心10min，棄上清。白色沉淀中加入1mL 75%乙醇洗滌，7500g 離心5min后棄上清，沉淀風干5min，加入40 μL DEPC水溶解，紫外分析儀測定OD260和OD280后等量稀釋模板RNA。采用M-MLV反轉錄試劑盒合成cDNA。采用qPCR試劑盒（染料法），加入相應引物后進行qPCR擴增，采用2-ΔΔCT法分析結果。引物序列：NT-3：上游引物5’-GCGAGACTGAATGA CCGAACT-3’；下游引物：5’- GCCACGGAGATAAGCAAGAAA-3’。內參β-actin：上游引物：5’-CCCATCTATGAGGGTTACGC-3’；下游引物：5’- TTTAATGTCACGCACGATTTC-3’。
18 統計學分析 采用SPSS200進行統計分析，數據以平均值加減標準差（x[TX-*3]±s）表示，單因素方差分析比較組間差異，P
2 結果
21 黃芩苷對小鼠抑郁樣行為的影響 如圖1和圖2所示，與正常組相比，模型組小鼠糖水偏愛百分比顯著下降（P
22 黃芩苷對海馬中NT-3水平的影響 如圖3所示，與正常組相比，模型組小鼠海馬中NT-3的mRNA表達水平顯著增高（P
3 討論
自抑郁癥的“神經營養因子假說”提出以來，有關抑郁癥的研究逐漸進入了神經營養因子領域。該假說認為，抑郁癥患者腦內神經營養因子功能的不足導致神經元突觸可塑性受損，進而導致大腦功能紊亂和抑郁癥的發生[3]。目前發現的神經營養因子主要有神經生長因子（Nerve growth factor，NGF）、BDNF、NT-3和NT-4等。其中BDNF是神經營養因子中含量最多的，也是研究最充分的。多種抗抑郁藥物可以通過增加腦內BDNF含量，促進神經元的存活，并提高突觸可塑性而發揮抗抑郁作用[4-5]。筆者在前期研究中發現了黃芩苷可上調海馬BDNF的表達發揮抗抑郁作用。其他眾多的研究，也發現了黃芩苷具有良好的神經保護效應，這提示黃芩苷的抗抑郁作用可能涉及調節神經營養因子以及對神經元的保護作用。
除了BDNF，NT-3也是一種重要的神經營養因子，在神經系統中廣泛分布[6]。與BDNF不同的是，BDNF在抑郁癥動物腦內的含量顯著減少，表明神經元缺乏足夠的營養支持而受到損傷，但NT-3在抑郁癥動物腦內卻大量增加，尤其在海馬內，表明這是動物機體應對神經損傷的一種有效補償措施，NT-3的增加有利于神經元的存活和功能修復[7-8]。NT-3通過Trk受體活化誘導突觸結構和功能的改變，對損傷的突觸進行修復，促進神經元分化并誘導軸突生長[9]。在臨床抑郁癥患者中，也發現了血清NT-3含量顯著高于正常人[10]。本研究中發現在皮質酮處理組的小鼠海馬內NT-3的mRNA表達水平顯著增高，表明長期的皮質酮注射導致海馬神經元受到損傷，NT-3代償性的大量表達促進神經元的修復。黃芩苷組小鼠海馬的NT-3表達顯著下降，提示黃芩苷通過發揮神經保護作用，對損傷的神經突觸作出一定的功能修復，從而恢復了NT-3的正常表達，這可能是黃芩苷抗抑郁機制之一。
參考文獻
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螞蟻與大象范文5
【摘要】
目的 研究LY294002靶向抑制PI3K/Akt信號通路對線粒體激活因子（Smac）基因的表達及胃癌細胞凋亡的影響。 方法 將PI3K/Akt信號通路的靶向抑制劑LY294002加入胃癌細胞株SGC7901，四甲基偶氮唑藍法測定細胞增殖，DNA ladder檢測細胞凋亡，原位細胞凋亡檢測技術檢測細胞凋亡，流式細胞儀檢測細胞周期，免疫組織化學檢測Smac的表達。 結果 LY294002致細胞存活率下降，且與時間、濃度呈正相關。在DNA電泳圖上，對照組呈規則的基因組斷裂條帶，其亮度與藥物作用時間呈正相關。流式細胞結果顯示LY2940002處理后在細胞周期G1期前出現明顯的凋亡峰，作用12 h時，細胞凋亡達58.7%。Smac在胃癌細胞中僅在胞質中呈陰性或弱陽性表達；LY294002作用后，細胞質中出現棕黃色顆粒狀濃染。 結論 PI3K/Akt信號通路、Smac基因與胃癌細胞的凋亡關系密切。
【關鍵詞】 1磷脂酰肌醇子激酶； 線粒體蛋白質類； 胃腫瘤； 腫瘤細胞， 培養的； 細胞凋亡
胃癌是我國最常見的惡性腫瘤之一，發病率和死亡率均較高，其異常的細胞凋亡和增殖在胃癌的形成和進展中具有重要意義。近年研究發現，半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(Caspase)的線粒體激活因子(second mitochondriaderived activator of caspases，Smac)是一種從線粒體內釋放到細胞質中的重要凋亡調節蛋白，能增加Caspase3活性，促進細胞凋亡[1]。筆者擬通過LY294002靶向抑制胃癌細胞SGC7901來探討PI3K/Akt信號通路、Smac基因與胃癌細胞的凋亡關系。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 細胞株 胃癌細胞系SGC7901由本實驗室傳代培養，含10%小牛血清(美國SIGMA公司)的RPMI 1640培養基，在37 ℃培養箱中培養，2～3 d更換培養基1次
1.1.2 實驗試劑 Smac多克隆抗體(美國Santa Cruz公司)；PI3K抑制劑LY294002（美國Promega公司）；流式細胞儀（Coulter，Epicus ELITE，ESP，美國)。
1.2 方法
1.2.1 LY294002溶液的配置 按照配制說明書先將 LY294002干粉5 mg充分溶解于二甲基亞砜（dimethyl sulfoxide，DMSO）溶液325 μL中，配制成50 mmol/L的LY294002溶液，移入-20 ℃冰箱儲存，用前稀釋成所需的濃度。
1.2.2 四甲基偶氮唑藍（MTT）法檢測細胞生長活性 選擇對數生長期細胞，接種于96孔培養板，另設不加細胞的培養液為對照組。實驗組分別給予終濃度為10，30，50 μmol/L的LY294002（DMSO≤0.05%），對照組加入同等濃度的DMSO，每孔設3個復孔。再培養4，8，12 h，每孔分別加入5 g/L的MTT 10 μL。加DMSO 100 μL，振蕩。用酶標儀在波長490 nm處測每孔光吸收值（D），重復3次。計算：
細胞存活率（%）=D試驗組/D對照組×100%。
根據MTT結果選擇出干預濃度和時間。
1.2.3 DNA Ladder檢測 收集各組細胞，用PBS重懸，加入細胞裂解液(1%NP40，20 mmol/L EDTA，50 mmol/L Tris)400 μL，反應10 min，離心收集上清，加入十二烷基硫酸鈉(SDS)至1%濃度，加入RNA酶在56 ℃作用1 h，加入蛋白酶K 37 ℃處理過夜，乙醇沉淀DNA，TE溶解DNA，1%瓊脂糖凝膠電泳，紫外燈下觀察并拍照。
1.2.4 原位細胞凋亡檢測技術（TUNEL）檢測細胞凋亡 將細胞接種在放有蓋玻片的6孔板內，取對數生長期細胞。待細胞長滿后，給予終濃度為10，30，50 μmol/L的LY294002（DMSO≤0.05%），分別培養4，8，12 h后，取出蓋玻片，用4%多聚甲醛溶液固定，并與阻斷劑室溫孵育30 min。PBS洗片，與通透液在冰浴中孵育2 min。滴加TUNEL反應混合溶液50 μL，在濕盒中37 ℃孵育。加入轉化劑(POD)50 μL，在37 ℃濕盒中孵育30 min。加入DAB底物溶液50～100 μL，封片，在光鏡下分析結果：
細胞凋亡指數=凋亡細胞數倒置顯微鏡計數200個細胞
1.2.5 流式細胞儀檢測 調整待測細胞的密度。設置對照組及觀察組。收集細胞，70％冷乙醇固定24 h，10 μg/mL RNaseA 37 ℃溫育30 min后，加碘化丙啶(PI)使其終濃度達20 μg/mL，暗處作用＞0.5 h。
1.2.6 胃癌細胞SGC7901 Smac表達的檢測 將細胞接種在放有蓋玻片的6孔板內，當蓋玻片面上的細胞長至70%～80%融合時，加入終濃度為50 μmol/L的LY294002，不加藥物作為對照組，培養4，8，12 h，小心取出長有細胞的蓋玻片，4 ℃冷丙醇固定，按試劑說明行SP法免疫組織化學染色，用PBS代替一抗作為陰性對照片。采用Gatalica等的半定量積分法計算[5]。
1.3 統計學處理 數據以x±s表示，采用SPSS 11.5統計軟件，2組間各指標均數的比較采用t檢驗，多組間指標的比較均采用單因素方差分析（OneWay ANOVA）、LSDt和SNKq檢驗。計數資料比較采用卡方檢驗。P
2 結果
2.1 MTT法檢測胃癌細胞增殖 隨著不同濃度LY294002作用時間延長，細胞的存活率呈逐漸下降趨勢(P
表1 四甲基偶氮唑藍比色法檢測細胞存活率（略）
Tab 1 Cell viability of SGC7901 cells after exposure of LY294002(10～50 μmol/L) for 4，8，12 h
同一濃度LY294002干預不同時間相比較，#：P
2.2 胃癌細胞凋亡結果
2.2.1 DNA Ladder結果 對照組呈規則的基因組斷裂條帶，50 μmol/L的LY294002作用4，8，12 h后，均可見180～200 bp的梯型條帶，其亮度與藥物作用時間呈正相關。隨著LY294002作用濃度增加，胃癌細胞凋亡增加（圖1）。
2.2.2 TUNEL檢測結果 50 μmol/L LY294002作用4，8，12 h，細胞的凋亡指數上升，且在同一時間點上，隨著干預濃度增加，細胞凋亡指數升高；在同一濃度點上，隨著作用時間延長，細胞凋亡指數升高（表2，圖2）。
M：maker；1：對照組；24：LY294002作用4，8，12 h.
圖1 DNA Ladder 電泳圖（略）
Fig 1 DNA Ladder
表2 TUNEL法檢測細胞凋亡指數（略）
Tab 2 Cell apoptotic index of SGC7901 cells after exposure of LY294002(10～50 μmol/L) for 4，8，12 h
不同濃度LY294002干預相同時間相比較，#：P
2.3 胃癌細胞增殖周期改變 同一濃度LY2940002處理SGC7901細胞不同時間，在細胞周期G1期前出現明顯的凋亡峰，50 μmol/L LY294002處理8 h時，凋亡細胞就達33.7%；12 h時，凋亡細胞達58.7%（圖3）。
2.4 LY294002對Smac蛋白表達的影響 Smac蛋白表達于細胞質內，呈淡黃色或棕黃色分布，在胃癌細胞中僅在胞質中呈陰性或弱陽性表達(χ2=36.246，P
表3 同一濃度LY294002作用不同時間后Smac蛋白表達變化（略）
Tab 3 The expression of protein Smac after exposure of LY294002(10～50 μmol/L) for 4，8，12 h
箭頭所指為陽性細胞. A：對照組；B～D：10 μmol/L作用4，8，12，隨作用時間延長，陽性細胞粒增加h；E～G：30 μmol/L作用4，8，12 h，陽性細胞粒與作用時間成正比；H～J：50 μmol/L 作用4，8，12 h，作用時間越長，凋亡細胞越多.
圖2 TUNEL法檢測胃癌細胞凋亡（略）
Fig 2 TUNEL analysis
AP：凋亡細胞；A：對照組；B～D：LY294002 50μmol/L作用4，8，12 h.
圖3 流式細胞檢測不同濃度LY294002干預SGC7901細胞凋亡（略）
Fig 3 Flow cytometry analysis about apoptosis
箭頭所指為陽性細胞. A：4 h；B：8 h；C：12 h，作用時間延長，細胞質著色增加.
圖4 LY294002對Smac蛋白表達的影響(×400)（略）
Fig 4 The effect of LY294002 on the expression of protein Smac(×400)
3 討論
3.1 PI3K/Akt信號通路與腫瘤 細胞通過各種通路所形成的復雜的網絡來傳遞各種增殖和凋亡信號。其中，PI3K/Akt信號通路在多種人類腫瘤中表達失調，調節腫瘤細胞的增殖和凋亡，并與腫瘤的血管形成和侵襲轉移也密切相關，因此影響患者的預后，同時也為腫瘤的治療提供了新的靶點。PI3K/Akt信號通路在胃腸道腫瘤的發生、發展中起關鍵作用。
3.2 PI3K抑制劑 目前PI3K的抑制劑只有LY294002和Wortmannin，它們是結構明顯不同的復合物，工作濃度差異較大。盡管LY294002的工作濃度是Wortmannin的500倍，但由于其在溶液中較Wortmannin穩定性強，因此其作為PI3K的選擇性抑制劑更有應用前景，已廣泛用于細胞生物學研究[2]。研究表明，LY294002能夠競爭性地抑制PI3K亞基中的ATP結合位點，進而抑制胃癌細胞的增殖，但同時它不抑制PKC、PKA、MAPK、EGFR等磷酸激酶的表達[35]。本研究結果顯示，LY294002致細胞存活率下降，且與時間、濃度呈正相關，能有效抑制胃癌細胞的增殖，促進胃癌細胞的凋亡，這可能為腫瘤靶向藥物的開發提供一條新的思路。
3.3 LY294002、PI3K/Akt信號通路與細胞 研究認為，在PI3K/Akt信號通路中，PI3K通過調節亞基中的SH2區域和受體接觸，導致催化亞基的異構性激活。隨著PI3K的激活，PIP3和含有PH區域的蛋白結合，導致這些蛋白構像的改變[6]。磷酸化結合的PH區域存在于大多數的蛋白中，它對于活化了的PI3K的轉化是很重要的，可促進其下游分子Akt/PKB的磷酸化。隨著其第308位上的蘇氨酸位點和第473位的絲氨酸位點的磷酸化，可最大限度地激活Akt。活化的Akt通過磷酸化作用激活或抑制其下游靶蛋白，進而調節細胞的增殖、凋亡[78]。本研究顯示，作為PI3K/Akt信號通路中PI3K的靶向抑制劑，LY294002可導致細胞存活率下降，且與時間、濃度呈正相關，這與上述相關研究結果相符。
3.4 Smac蛋白與胃癌細胞 Smac是近年新發現的一種從線粒體內釋放到細胞質中的重要凋亡調節蛋白，是除細胞色素C外被認識的第二種線粒體促凋亡蛋白，能通過增強Caspase3活性，促進細胞凋亡[9]。本研究發現，Smac在細胞質表達與細胞凋亡的程度明顯相關，隨著凋亡增加，其表達增多，陽性率增強?？梢?，LY294002作用后，胃癌細胞Smac蛋白表達上調。筆者認為，LY294002作用于胃癌細胞，啟動了細胞的凋亡程序，而這可能就包括了Smac蛋白的表達，從而進一步啟動凋亡，促進凋亡進程。目前研究表明，Smac蛋白可通過兩種途徑促進凋亡，即對Caspase3的蛋白水解作用和增強成熟Caspase3的酶催化活性，故筆者推測Smac蛋白可能通過上述作用促進胃癌細胞凋亡，這可能為調控胃癌細胞凋亡提供一個新的途徑。
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螞蟻與大象范文6
（0.24 mg/ml）和等量（0.125 ml/kg）生理鹽水（5 min注射完畢）。5 min后，靜脈注射依托咪酯0.3 mg/kg（1 min注射完畢），觀察并記錄有無肌陣攣發生及肌陣攣的嚴重程度。結果：右美托咪定組和咪達唑侖組分別經靜脈預先注射0.5μg/kg和0.03 mg/kg后，再給予依托咪酯誘導時肌陣攣的發生率分別為5%和7.5%，而對照組肌陣攣的發生率為55%，差異有統計學意義（P
【關鍵詞】 右美托咪定； 咪達唑侖； 依托咪酯； 麻醉； 全身； 肌陣攣
依托咪酯是一種超短時效的非巴比妥類催眠性靜脈，具有麻醉效能強，起效快、誘導平穩、舒適、對呼吸、循環影響輕微等優點，尤其適用于休克、心功能很差、高齡等患者的全麻誘導。但在誘導時，有10%～65.5%的患者在肢體等部位出現肌陣攣，嚴重者類似抽搐，肌張力顯著增強[1]。雖然依托咪酯引起的肌痙攣在大多數患者中是短暫的，但這種現象對于伴有高血壓、動脈瘤、冠心病等患者極為不利。本研究旨在觀察右美托咪定和咪達唑侖分別預先靜脈注射對依托咪酯靜脈全身麻醉誘導時肌陣攣的影響?，F報告如下。
1 資料與方法
1.1 一般資料 本研究經筆者醫院倫理和道德委員會批準，患者及家屬知情并簽署同意書。選擇120例ASAⅠ～Ⅱ級，年齡18～55歲，體重49～67 kg，體質量指數20～30 kg/m2，擬全麻下行婦科手術的住院患者，按照隨機數字表法將患者隨機分為對照組、右美托咪定組和咪達唑侖組，每組各40例。剔除標準包括近期服用鎮靜及阿片類藥物，神經系統疾病，體質量低于標準體質量80%或高于標準體質量120%。三組患者ASA分級、年齡、身高、體重和手術時間差異無統計學意義（P>0.05），見表1。
1.2 麻醉方法 所有患者均不用術前藥，入室后，建立靜脈通路，持續輸注乳酸鈉林格液，速率為10 ml/（kg·h）。常規監測心電圖、無創血壓、脈搏血氧飽和度。右美托咪定組、咪達唑侖組和對照組患者分別靜注右美托咪定0.5 μg/kg（4 μg/ml）、咪達唑侖0.03 mg/kg（0.24 mg/ml）和等量（0.125 ml/kg）生理鹽水（5 min注射完畢）。5 min后，靜脈注射0.3 mg/kg的依托咪酯（1 min注射完畢），靜脈注射依托咪酯后觀察并記錄有無肌陣攣發生，并記錄肌陣攣的嚴重程度。肌陣攣的分級[2]：0級為無肌陣攣發生；1級為輕度肌陣攣，肢體某一部分微小的運動，如一個手指或肩膀的運動；2級為中度肌陣攣，2塊不同的肌肉或肌肉群的輕微運動，如臉或腿；3級為重度，2塊或者更多肌肉的強烈的攣縮，如肢體的快速外展。記錄完畢后，三組均靜脈注射芬太尼4 μg/kg、羅庫溴銨0.6 mg/kg，充分肌松后行氣管插管，接麻醉機間歇正壓通氣，設定潮氣量6～8 ml/kg，呼吸頻率8～12次/min。術后訪視有無惡心嘔吐、瘙癢、呼吸抑制的發生。
1.3 統計學處理 采用SPSS 17.0統計軟件處理數據。計量資料以（x±s）表示；組間比較采用單因素方差分析，計數資料采用 字2檢驗。P
2 結果
2.1 三組患者肌陣攣發生的程度 右美托咪定組與咪達唑侖組比較，差異無統計學意義（P>0.05）；兩組輕度、中度肌陣攣的發生例數明顯低于對照組，差異有統計學意義（P
3 討論
依托咪酯作為臨床常用的靜脈，其注射引起的肌陣攣可導致患者血鉀改變、眼壓升高以及術后肌肉困乏甚至肌痛等不良后果[3]。依托咪酯引起的肌陣攣與腦電圖上的癲癇樣放電無關，但具體機制尚不清楚[4-5]。Doenicke等[4]提出可能是由于脊髓水平被抑制或是由于大腦皮質被抑制而皮下結構脫抑制所致。王新華等[6]認為，依托咪酯可能與腦內黑質、紋狀體等部位的內源性多巴胺競爭與多巴胺受體結合，產生競爭性抑制作用，從而引起類似于內源性多巴胺減少的癥狀，表現為肌陣攣。
Khalil等[2]報道以 5μg/kg阿芬太尼預處理可使依托咪酯誘導時肌陣攣的發生率降至25%。Hueter等[3]報道在女性患者中，以舒芬太尼0.3 μg/kg預處理，在依托咪酯誘導時未觀察到肌陣攣的發生。Stockham[7]等報道以100 μg/kg、250 μg/kg、500 μg/kg的芬太尼預處理可使依托咪酯誘導時肌陣攣的發生率分別下降至33%、13%和0，同時呼吸抑制的發生增大，分別增至87%、90% 和100%。上述研究表明，芬太尼、阿芬太尼、舒芬太尼均可減少依托咪酯誘導時的肌陣攣，但這些措施適合于長時間手術。對于短小手術，這些措施可能引起呼吸抑制、蘇醒延遲、術后惡心嘔吐等并發癥。Schwarzkopf等[8]學者報道，用咪達唑侖預處理可以減輕依托咪酯誘導引起的肌陣攣現象。本組資料顯示，對照組肌陣攣發生率為55%，而咪達唑侖組和右美托咪定組肌陣攣發生率分別為7.5%和5%，表明以右美托咪定0.5μg/kg和咪達唑侖0.03 mg/kg預處理都可明顯降低依托咪酯誘導時肌陣攣的發生率，且兩者預處理的效果相當。
右美托咪定是美托咪啶的右旋立體異構體和活性成分。右美托咪定是高度選擇性的α2激動劑，與腎上腺素受體的親和力是可樂定的8倍（α2∶α1=1600∶1）。其半衰期也較可樂定短，分布半衰期大約為6 min，消除半衰期大約為2 h，藥代動力學方面的可預測性更強。α2腎上腺素受體見于突觸前、突觸后部位的中樞神經系統、外周神經和自主神經節中。對交感神經末梢內突觸前α2受體的刺激可抑制去甲腎上腺素的釋放。α2激動劑對中樞神經系統內突觸后受體的激活可抑制交感神經活性，降低血壓和心率，引起鎮靜作用，而激動劑與脊髓內的α2腎上腺素受體的結合可引起鎮痛作用[9]，右美托咪定減輕肌陣攣的作用可能與其鎮靜和鎮痛作用有關。右美托咪啶可穩定圍術期血流動力學，并降低氧耗、二氧化碳的產生和能量的消耗，減少麻醉劑和阿片類藥物的用量，已經被廣泛用于麻醉領域[10-11]。
綜上所述，筆者認為，以右美托咪定0.5 μg/kg和咪達唑侖0.03 mg/kg預處理均可有效降低依托咪酯誘導時肌陣攣的發生，且無呼吸抑制、惡心、嘔吐等并發癥的發生；鑒于右美托咪定在輔助麻醉方面具備有效的鎮靜、鎮痛，減少麻醉劑用量、穩定血流動力學、無呼吸抑制等特點，更適合聯合依托咪酯作為麻醉誘導用藥。
參考文獻
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[4] Doenicke A W，Roizen M F，Kugler J，et al. Reducing myoclonus afrer etomidare[J]. Anesthesiology，1999，90（6）：113-119.
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