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超聲診斷學教程范文1
關鍵詞：規范化；產前超聲檢查；胎兒畸形
Abstract：Objective To study the standardization of fetal ultrasound clinical value. Methods 13162 cases of middle-late pregnant women to normalize prenatal ultrasound， for screening and diagnosis of fetal abnormalities. Results 13162 cases of pregnant women， confirmed by induced labor or after the birth of 249 cases with diagnosis coincidence rate 98%， 5 cases of misdiagnosis， missed diagnosis cases mainly for small malformation and defect. Conclusion The standardization of prenatal ultrasound has important value for diagnosis of fetal abnormalities， maximum limit detection of fetal malformation， judgment of prognosis and eugenics has important clinical significance.
Key words：Standardization； Prenatal ultrasonic examination； Fetal abnormalities
隨著超聲技術的迅速發展， 超聲檢查目前已經成為產前診斷胎兒畸形的重要手段之一，對我院行產前超聲檢查的孕婦均采用規范化連續順序追蹤超聲法檢測胎兒， 現將經我院2010～2013年產前超聲診斷并經引產或產后證實的先天性胎兒畸形診斷結果報道如下：
1資料與方法
1.1一般資料 2010～2013年我院的產前超聲檢查中晚期孕婦共13162例，其中單胎13116例，雙胎46例，檢出胎兒畸形249例，占1.9%，孕周12～39w，平均26w，孕婦年齡18～40歲，平均29歲，本組均已引產或分娩證實。
1.2儀器與方法 使用飛利浦HD-9及GE VolusonE8 彩色多普勒超聲診斷儀， 探頭頻率3.5～5.0MHz。受檢者取仰臥位， 首先檢查胎兒數目及評估胎兒宮內生長發育情況，然后經腹對胎兒多方位、多切面掃查。檢查順序分別頭顱、唇面部、脊柱、胸腔、腹部、四肢，對胎兒按順序追蹤掃查胎兒各系統臟器有無發育異常，孕早中期要求得以下切面：胎兒縱切面顯示鼻骨、脊柱及表面皮膚；頸項矢狀切面顯示頸項透明層，觀察有無頸項透明層增厚；顱腦切面顯示顱骨、大腦鐮、側腦室、脈絡叢，觀察顱骨完整性及顱骨骨化程度；胸部切面：觀察胎心搏動、四腔心位置，觀察有無膈疝表現；腹部切面：顯示胃泡、臍帶腹壁入口，觀察前腹壁完整性；膀胱切面：顯示膀胱充盈、兩側臍動脈；上肢切面：顯示雙上肢、雙手，觀察有無缺失及異常；下肢切面：顯示雙下肢、雙足，觀察有無缺失及異常。22～24w要求得以下標準切面：丘腦水平橫切面，側腦室水平橫切面，小腦水平橫切面，鼻唇冠狀切面，眼球水平橫切面，顏面正中矢狀切面，四腔心切面，左室流出道切面，右室流出道切面，3VT平面，腹部標準切面，雙腎水平切面或矢狀切面，臍孔水平橫切面，膀胱臍動脈水平切面，膈肌冠狀切面，脊柱矢狀切面，左、右側肱骨長軸切面，左、右側尺橈骨長軸切面，左、右手切面，左、右側股骨長軸切面，左、右側脛腓骨長軸切面，左、右足切面，。如發現有一處畸形，詳查其他系統有無畸形。測量羊水深度； 觀察胎盤情況，臍帶胎盤附著處，宮頸內口矢狀切面，臍動脈血流頻譜等。
2結果
13162例孕婦超聲檢出胎兒畸形249例，均經引產或產后證實，診斷符合98%，漏診5例，分別是尿道下裂，外生殖器發育不良，后腹膜神經母細胞瘤，先天性膽道閉鎖、單純腭裂，見表1。
3討論
目前，產前超聲已廣泛應用于產科檢查，其具有診斷準確率高、安全性高、可重復性操作等特點[1]。中晚孕系統檢查多采用二維超聲與三維超聲立體成像技術相結合，使產前超聲診斷更及時準確，對早期發現胎兒畸形，降低畸形兒的出生，提高我國人口素質有重要意義[2]。同時，也有助于達到優生優育的目的[3]。本院自實施規范化產前超聲檢查以來，共檢出胎兒畸形249例均經引產或分娩后證實。
超聲檢查有其局限性，不能篩查出所有胎兒畸形，有些細微畸形和晚孕臨產胎位活動受限的小部位畸形不易被發現，本研究中5例漏診病例分別為：分別是尿道下裂，外生殖器發育不良，后腹膜神經母細胞瘤，先天性膽道閉鎖、單純腭裂。
實施規范化產前超聲檢查，在孕早中期可篩查出露腦、無腦、脊柱裂、腹裂、臍膨出、胸外心及單心室等嚴重胎兒畸形，而且孕早中期是胎兒肢體第1 次掃查的最佳時期，四肢長骨，手腕部及足部的形態和姿勢均可顯示，而且在該孕周胎兒雙手處于伸展狀態，便于觀察手指的形態和數目。動態對稱觀察雙側上、下肢及手腕、雙足的長度、排列、形態及其活動，有利于發現肢體或長骨的缺失、短縮、形態異常及活動受限。孕5～6個月中孕期因羊水量相對較多， 襯托好， 胎兒畸形診斷的敏感性較高，可以檢查出顏面部、心臟、肺、肝、腎、腸、四肢等異常。而到了妊娠晚期由于羊水量減少，胎兒相對較大，胎兒的活動減慢，一些肢體部位容易被遮擋不易判斷[4，5]。
隨著超聲醫學的不斷發展壯大，多數畸形兒能在孕中期得到準確診斷。因此，規范化產前超聲診斷對降低畸形兒出生率、提高人口素質、減少醫患糾紛有著重要意義。
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【關鍵詞】脫氫酶：制備：純化：活性檢測：藥物篩選
doi：10.3969j.issn.1004-7484（x.2013.10.654文章編號：1004-7484（2013-10-6104-02
生物體內的化學反應稱為新陳代謝，簡稱代謝。生命的特征之一是不斷地進行新陳代謝，包括物質代謝和能量代謝。雖然生物體內的代謝條件十分溫和，但所有代謝都進行得極為順利和迅速，因為它們幾乎都是在生物催化劑（biocatalyst的催化作用下進行的。迄今為止，人們已經發現了兩類生物催化劑：酶與核酶。酶（enzyme是由活細胞合成的、具有催化作用的蛋白質。核酶（ribozyme是由活細胞合成的、具有催化作用的核酸。
根據酶促反應的性質可將酶分為六大類：氧化還原酶類、轉移酶類、水解酶類、裂解酶類、異構酶類和合成酶類。其中，氧化還原酶類是催化氧化還原反應的酶，又可分為氧化酶和脫氫酶兩類。[1]脫氫酶類即需要輔酶Ⅰ（NA+或輔酶Ⅱ（NAP+作為受氫體，催化底物氫化脫氫反應的酶。
AH2+NA（P+A+NA（PH+H+
脫氫酶（dehydrogenase是廣泛存在于生物體內的一類代謝關鍵酶，在生物體內的氧化產能、解毒等生理活動中[1]起重要作用，是已知酶中種類最多的一類。如糖代謝過程中的3-磷酸甘油醛脫氫酶、乳酸脫氫酶（糖酵解途徑[2]，丙酮酸脫氫酶、二氫硫辛酸脫氫酶、異檸檬酸脫氫酶、α-酮戊二酸脫氫酶、琥珀酸脫氫酶、蘋果酸脫氫酶（有氧氧化途徑，6-磷酸葡萄糖脫氫酶（磷酸戊糖途徑等；脂肪代謝過程中的3-磷酸甘油脫氫酶、脂酰CoA脫氫酶、β-羥脂酰CoA脫氫酶、β-羥丁酸脫氫酶等；氨基酸代謝過程中的L-谷氨酸脫氫酶以及酒精代謝過程中的乙醇脫氫酶、乙醛脫氫酶等。[1]目前，國內外不少學者對其進行了相關研究，本文將對其制備純化、活性檢測方法及在藥物篩選中的應用進行介紹。
1脫氫酶的制備純化
現在采用的純化方法都是以脫氫酶與雜蛋白在理化性質和穩定性上的差別以及脫氫酶的生物學特性為依據。[3]①溶解度不同：有機溶劑沉淀法、鹽析法、共沉淀法、選擇性沉淀法、等電點沉淀法及雙水相分離法。②根據酶和底物、輔助因子以及抑制劑間具有專一親和作用特點的親和分離法等。③根據電學性質、解離性質：吸附層析法、離子交換層析法、電泳法及聚焦層析法等。④根據分子大小的差別：凝膠過濾層析法、超濾法及超離心法等。⑤按穩定性不同：酸堿變性、法熱變性法、表面活性劑變性法等。通常先運用非特異、低分辨率的操作單元，如沉淀、超濾和吸附等，這一階段的主要目的是盡快縮小樣品體積，提高產物濃度，除去最主要的雜質；然后是高分辨率的操作單元，如具有高效選擇性的離子交換色譜和親和層析，而將凝膠過濾層析這類分離規模小、分離速度慢的單元放在最后。
武愛民等[4]采用弱陰離子樹脂EAE-52和藍色瓊脂糖凝膠FF層析對枯草芽孢桿菌產生的胞外二氫硫辛酰胺脫氫酶的粗酶液進行2步純化，得到電泳純的二氫硫辛酰胺脫氫酶，純化倍數為59.7，收率為46.9%。
夏玉鳳等[5]以玉米黃化苗為生物材料，將其搗碎后，通過差速離心獲得線粒體，使用超聲波將其破碎，用2%TritonX-100溶膜，超速離心，硫酸銨沉淀，EAE-C32層析純化琥珀酸脫氫酶，純化倍數為12倍。電泳圖譜顯示一條帶。
李洪山等[6]采用差速離心法、硫酸銨分級沉淀，EAE纖維素和半瓊脂糖柱層析方法，從早生植物梭梭體內分離出純化104倍的蘋果酸脫氫酶。龔韌等[7]以豬心肌為原料，采用組織破碎、二度硫酸銨鹽析、EAE Sepharose F.F.離子交換層析、Phenyl Sepharose 6F.F.疏水層析及Sephadex G-75 Fine凝膠過濾等方法進行分離純化，蘋果酸脫氫酶比酶活達1212.97Umg，純化倍數達122.64倍，酶活力收率為53.64%。
asayoshi T[8]等用含1%Triton X-100的緩沖液從F.saccharophilum的膜蛋白提取，先用陰離子交換柱EAE-Sephrose CL-6B和陽離子交換柱C-Sephrose CL-6B分離，再用Sephacryl S-300凝膠過濾層析，得到了純化倍數為277的純葡萄糖3-脫氫酶，收率達到32%。
6-磷酸葡萄糖酸脫氫酶（6-PGAase在自然界中分布很廣，據文獻報道，已從植物、哺乳動物肝臟等中純化出6-PGAase[9]。莫宏春等[10]將枯草芽孢桿菌通過超聲破壁，（NH42SO4分段鹽析，EAE-Sepharose FF離子交換層析，Blue-Sepharose CL-6B親和層析，Sephadex G-200凝膠過濾等純化步驟，分離出6-磷酸葡萄糖脫氫酶。
谷氨酸脫氫酶（glutamate dehydrogenase，GH是生物體內谷氨酸生物合成的一種重要酶，自20世紀60年代以來已經有不同來源的GH得到分離純化和研究。[11]朱鴻等[12]以鴨肝為原料，采用丙酮脫脂、重金屬離子沉淀、硫酸銨分級沉淀、EAE-Sepharose離子交換層析和Sephacryl S-200凝膠層析方法，分離純化得到谷氨酸脫氫酶。
乙醇脫氫酶（AH能夠催化乙醇氧化生成乙醛。.C.adhusudhan等[13]采用硫酸銨及雙水相法共同沉淀蛋白質來純化AH。N.A.Willoughby等[14]采用膨脹床金屬親和層析來純化AH。Chuanul hidayat等[15]使用染料―亞氨基二酸做配體，純化AH。
2脫氫酶的活性檢測
脫氫酶由活的生物體所產生，是一種氧化還原酶，在生物細胞內催化有機物氧化脫氫，并將其傳遞給最終受氫體。它能夠催化氫從被氧化的物體（基質AH上轉移到另一個物體（受氫體B上：AH+BA+BH，即酶促有機物質脫氫的作用。因此，脫氫酶活性可以通過加入人工受氫體，采用分光光度法、熒光法、同位素法和電化學法等測定方法進行檢測。
通常用于檢測脫氫酶活性的人工受氫體包括TTC（2，3，5-氯化三苯基四氮唑[16]、刃天青[17]以及INT（碘硝基四唑紫[18]等，其中研究和應用最廣的是TTC。
姚莉麗等[19]采用可見分光光度法（利用2，4-二硝基苯肼和丙酮酸作用，生成丙酮酸二硝基苯腙，在堿性溶液中呈棕色，最大吸收波長為520nm檢測了乳酸脫氫酶的活性。
陳立華等[20]采用紫外分光光度法測定了紅細胞葡萄糖-6-磷酸脫氫酶活性。紫外分光光度法測定G-6-P酶活性，采用測定NAPH生成量的吸光度變化量來反映酶活性高低，是一種酶活性的動力學檢測方法，故可對G-6-P活性定量測定。
曹偉峰等[21]用定量熒光法檢測新生兒篩查濾紙干血斑標本葡萄糖-6-磷酸脫氫酶G6P活性。
陳麗麗等[22]應用PCR技術擴增出了納豆芽孢桿菌谷氨酸脫氫酶編碼基因，構建表達載體對其進行體外表達，并采用分光光度法對表達的蛋白谷氨酸脫氫酶酶活性進行了分析。
3脫氫酶在藥物篩選中的應用
在當代藥物開發過程中，發現和選擇合適的藥物靶點是藥物開的第一步，也是藥物篩選及藥物定向合成的關鍵因素之一。[23]而酶是一類重要的藥物靶點。
隨著細胞及分子生物學的發展，新技術方法越來越多地用于新靶點建立和藥物篩選研究，高通量篩選是20世紀80年代后期形成的尋找新藥的高新技術，是以藥物作用靶點為主要對象的細胞和分子水平的篩選模型，作為一種高度集成化的分析方式，芯片技術在藥物的高通量篩選中具有巨大的優勢，如酶芯片，其理論基礎之一便是對酶活性的影響，如在以酶抑制劑為篩選目標篩選時，可采用酶活性作為指標，說明藥物的作用，[24]可將酶芯片應用于酶抑制作用的篩選。
脫氫酶作為種類最多的一類代謝關鍵酶，雖然其在藥物篩選方面仍處于起步階段，但隨著各種脫氫酶與疾病密切關系的闡明，在不遠的未來，其一定會成為藥物發現中的重要武器。
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