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增資報告范文1
（一）節能減排政策落實情況
1、節能工作開展情況：
（一）是加大執法和監督力度，對重點用能單位進行檢查和用能審計工作。（二）是與統計部門聯合開展用能單位網上填報工作，從源頭上確保數字真實具體。（三）是與霍邱縣姚李鎮、曹廟鎮、洪集鎮、烏龍鎮簽訂秸桿收購協議，有效禁止焚燒，提高凱迪電廠的秸桿使用率。（四）是加大公共機構的節能工作開展，對空調、走廊燈、紙張等進行重點檢查。（五）是加大宣傳力度，提高全民節能意識，營造節能氛圍，多種形式、方法開展節能宣傳周工作。（六）是認真開展節能示范單位申報工作?？h中醫院、縣大別山職業學校獲省級節能示范單位稱號，積極向省市申報節能項目。目前我縣全面完成了市政府下達縣政府的節能目標任務。
2、減排工作開展情況：2015年1月23日縣政府下發了污染減排計劃《縣人民政府關于下達2015年主要污染物總量減排計劃的通知》（金政秘[2015]19號文），對減排計劃進行了分解，并在全縣環保大會上與各單位和有關鄉鎮簽訂了責任狀。環保局要求減排單位倒排工期，按序時進度建設施工?？h老城區污水處理廠在2014年11月30日已完成項目主體工程的建設，目前正在運行，同步進行竣工驗收監測工作、場地的平整和場區內部的綠化工作?？h斑竹園污水處理站已完成竣工驗收工作，現已穩定發揮減排效益。縣團結養殖合作社的污水處理項目實施方案已通過專家評審，現在正在組織施工。縣船沖養殖合作社、金鑫牧業都已完成竣工驗收，現已正常發揮減排效益。縣污水處理廠今年的管網建設任務已經完成，水量進一步提高，進水量平均達1.4萬噸/日，COD≥189毫克/升，出水濃度≤20毫克/升；氨氮進水濃度≥18毫克/升，出水濃度≤3毫克/升。
（二）秸稈禁燒和綜合利用政策落實情況
4月7日，全縣環保大會，明確嚴格落實秸稈禁燒三級網絡責任制，明晰網格化管理職責，將秸稈禁燒工作列入各鄉鎮、各單位年終目標考核內容，實行“一票否決”?？h政府還與縣凱迪生物電廠簽訂秸稈收購協議，加強秸稈還田等綜合利用。
2015年，我縣午季農作物種植面積10.8萬畝，秸稈產生量3.8萬噸，可收集秸稈量2.88萬噸，秸稈機械化全量還田8.6萬畝，其他途徑消化秸稈0.95萬噸，動用80馬力以上拖拉機112臺，聯合收割機88臺參加午季秸稈還田工作，午季禁燒投入人力200人次、財力105萬元。目前正在開展秋季秸稈禁燒工作。
（三）環境執法政策落實情況
按照省、市大檢查的要求，縣出臺了《關于印發縣環境保護大檢查的通知》。成立了以分管縣長為組長，縣相關部門負責同志為成員的縣環境保護大檢查領導小組，組織開展全縣環境保護大檢查工作。
按照大檢查要求，我縣排查各類工業園區和重點排污單位的污染防治設施運行是否正常、污染物是否達標排放、固體廢物和危險廢物處置是否符合規范要求以及是否存在環境風險隱患等情況；重點檢查生物質發電、化工、鋼鐵、制藥、電鍍、水泥等重點排污企業以及縣污水處理廠、生活垃圾處理場、礦山采選企業、危險廢物產生單位環境守法情況；排查建設項目環境影響評價制度和“三同時”制度執行情況；檢信重訪、群眾反映強烈、影響惡劣的環境案件，以及長期未得到徹底解決的突出環境問題等進行了大檢查，期間共檢查企業90多家，下發各類監察意見30余份。處罰3家，責令停產1家，限期整改11家。
各鄉鎮也成立了環境執法檢查領導組，制定方案，詳細排查。
（四）大氣、水、土壤污染治理政策落實情況
1、大氣污染防治工作。2015年，我縣大氣污染防治工作繼續有序深入推進，實行“條塊結合、以塊為主”網格化管理模式，環境空氣質量控制目標實行鄉鎮（園區）負責制，每一項重點治理任務在屬地管理，鄉鎮政府、園區管委負責的基礎上，確定一個縣直相關部門牽頭負責，完成情況納入縣政府年度目標考核。（一）是強化揚塵治理。強力推進建筑建造方式轉變，開展建筑工地、道路、物料堆場揚塵綜合整治。加強對縣城建成區內現有的6家建設工程工地的管理，通過落實施工現場封閉圍擋、道路硬化、材料堆放遮蓋、進出車輛沖洗、外掛密目網、建筑垃圾清運、車輛進出口視頻監控以及渣土運輸車輛密閉等措施，減少建筑施工揚塵污染。建立長效機制，及時跟進新開工項目，定期和突擊檢查揚塵防治措施落實情況。5個物料堆場落實了防風抑塵控塵措施。渣土運輸車輛嚴格實行密閉運輸，落實了沖洗保潔措施。縣城城區增加了道路灑水頻次，推行城區道路機械化清掃等低塵作業方式。（二）是整治餐飲油煙污染。2015年5月，縣十六屆人民政府第18次縣長辦公會議通過了縣市場監督管理局提出的城鎮餐飲油煙污染專項整治方案。下一步按照縣城先行、實事求是的原則，整治餐飲油煙污染，同時大排檔的抽油煙機也要考慮進去；對改造費用，財政實行以獎代補，逐一驗收，差額補貼；加強抽查核實，防止套取。在此基礎上，我縣擬于2015年進行餐飲業油煙污染專項整治的8家餐飲企業，已完成餐飲油煙凈化設施安裝和油煙廢氣達標排放工作。（三）是強力推進縣城生活燃煤鍋爐整治。城區8家生活燃煤小鍋爐已有1家拆除，7家改用多功能生物質燃料等清潔能源鍋爐。（四）是加強城鎮生態建設?？h編制了縣城總體規劃，強化了城市生態、綠地空間管控。持續推進了道路綠化、居住區綠化、立體空間綠化和城市周邊綠化。（五）是加強工業廢氣治理。金安不銹鋼鑄造有限公司對煤氣發生爐進行脫硫改造，使綜合脫硫效率達到90%，二氧化硫排放減少了23.1噸。（六）是加強礦山整治?？h陸續關閉了22家石料廠，對12家石料、石材企業開展揚塵整治，采取建設收塵設施、硬化廠區道路、料倉進行封閉、堆場進行覆蓋，廠區進行灑水抑塵等措施，有效控制了揚塵污染。
2、水污染防治工作。（1）加快《重點流域水污染防治規劃》項目實施，完成“十二五”規劃項目建設任務。加強項目環境監管，加大環境執法力度，確保已完工項目發揮環境效益。目前，我縣“十二五”期間規劃的11個項目已完成9個，在建的2個(祥堡生態農業科技開發有限公司養殖廢棄物綜合利用項目和縣麻埠鎮鮮花嶺街道飲用水源保護工程)。（2）加強梅山、響洪甸水庫庫區污染排查整治，嚴把建設項目環境準入關，全面開展庫區周邊工業污染企業排查和整治，嚴厲打擊飲用水水源保護區環境違法行為，堅決取締保護區的排污口，對于排放污染物的建設項目及保護區內違法建筑一律責令拆除或者關閉；杜絕水源保護區內違法網箱養殖、漁業養殖、農家樂等活動。目前，全縣集中式飲用水水源地水質全部達到了國家標準。(3）以保障群眾飲用水安全為首要任務，切實加強飲用水水源地保護。積極開展縣城區飲用水源地環境管理狀況評估和鄉鎮集中式飲用水源保護區的劃分（調整）工作，保護飲用水源水質，制定飲用水源安全保障措施。
3、土壤污染防治工作。我縣對土壤環境情況進行了調查摸底，為《省土壤環境保護與綜合治理方案》提供了基礎資料。下一步將結合相關土壤污染防治方案計劃以及“十三五”環境保護規劃編制工作，規劃編制土壤修復工程項目。
（五）存在的主要問題和工作打算
通過各部門的共同努力，我縣綜合污染防治工作取得了一定的成效，但仍然存在不同程度的問題：
1、環境保護宣傳需要進一步加強。宣傳重點是農村和鄉鎮領導干部，以及學校的宣傳教育，要經常開展宣傳進旅游區、進林區與進工業區等多種形式，進行針對性宣傳。
2、生態建設與環境保護需要進一步投入。生態建設與環境保護經費嚴重不足，特別是農村的生態環境保護歷史欠賬太多。我們應該抓住國家加大對大別山區加大投入的機遇，大力爭取資金和政策，同時整合農業、林業、水利、城建、環保等各方面的資金，優先解決突出的環境問題，并且建成一批適合我縣有山區特色的具有不同生態模式的村鎮。
3、環境監管監測設施需要進一步完善。縣環境監測能力亟待加強，重點是解決監測人員問題，完善我縣大氣和水環境質量監測網絡。
增資報告范文2
一、成立自查小組，傳達檢查方案
我社及時成立了由社主任劉x為組長、副主任劉x及各分社負責人為成員的新增貸款自查領導小組。認真學習新增貸款檢查方案，組織專人負責。
二、認真自查，真實反映
1、截止2011年8月28日，全社新增貸款xx萬元，其中農戶小額貸款新增xx萬元，中小企業貸款新增xx萬元，汽車按揭貸款新增xx萬元，其它個人生產消費貸款新增xx萬元。
2、1-8月新增貸款單筆超過500萬元的貸款僅一筆，為xxx有限公司于2011年x月xx日發放的800萬元，期限一年，借款方式為抵押，借款用途為購鋼材，符合其生產經營的范圍。
3、我社的所有新增貸款除農戶小額貸款以外，均按照“三個辦法一個指引”的要求進行操作，按借款人提供的資金用途要求等相關資料進行自主或受托支付，借款人的借款用途均符合其生產經營或消費的范圍。
4、我社年初進行企業評級授信時，就嚴格控制“兩高一剩”和落后產能企業的評級授信，截止目前，我社無“兩高一?！焙吐浜螽a能行業項目授信企業。
增資報告范文3
__鄉2015年促進農民增收工作在鄉黨委、政府的安排部署及縣級相關部門的支持下，精心組織，廣泛宣傳，認真落實，在今年上半年取得了明顯成效。按縣委、縣府辦公室《關于分解落實2015年促進農民增收工作目標任務的通知》（青委辦〔2015〕27號）精神，我鄉認真落實，開展了自我檢查，現將情況匯報如下：
截止2015年6月30日__鄉農民生產經營所得總額為1175.8萬元，農民人均純收入為3694元。按生產行業劃分，全鄉農村經濟總收入為1813.1萬元，其中：農業收入為901.2萬元（種植業收入832.6萬元、其他農業收入68.6萬元），林業收入87.4萬元，牧業收入482.6萬元，工業收入110.7萬元，建筑業收入58萬元，商飲業收入96.2萬元，服務業收入11.6萬元，其他收入65.4萬元，農業生產總費用為842.7萬元。到2015年上半年我鄉農民農村經濟凈收入為970.4萬元，農村外出務工勞務收入為205.4萬元。
今年上半年我鄉農民人均純收入完成2015年度目標任務的47.3﹪，到2015年底預計我鄉農民人均純收入將達到7860元，在__年的基礎上增長17.2﹪。
(一)高度重視，健全機構
為扎實推進我鄉促進農民增收工作，鄉黨委、政府把該項工作列入重要議事日程，多次召開會議研究此項工作。鄉上成立了以鄉長王萍為組長，駐村領導為副組長，鄉農業服務中心、財政所、村兩委為成員的__鄉促進農民增收工作領導小組。各村分別成立了以村黨支部書記為組長，相關村社干部為成員工作小組，具體各村促農增收工作的落實。明確分工，強化責任，確保2015年工作目標的完成。
（二）大力宣傳、積極發動
通過召開村民代表會議，黨員大會，開辟宣專欄，制作固定標語等形式，全力營造促農增收工作的氛圍。通過有效的宣傳，把黨的政策化作農民群眾的實際行動，增強了他們的積極性、創造性和主動性，有力地推動了促農增收工作的順利開展，營造了群眾積極參與的良好氛圍。
（三）科學規劃、強力推進
為了切實做好全鄉促進農民增收工作，根據各村實際發展情況制定了__鄉2015年促進農民增收工作實施方案。一是在種養業方面以保證我鄉原有的種養業優勢，大力發展以綠色山珍、有機茶葉、中藥材、林下魔芋為基礎的特色產業，在南溪村、五星村規劃建設有本地特色的農業科技示范片1500畝。二是在林業方面以加強核桃標準化管護為主，加快銀杏風景林建設，計劃實施第二輪退耕還林項目。三是加強農村基礎設施建設改善群眾生產生活條件，擴大政策性農業保險化解群眾生產風險，保障發展農業生產、增收致富。四是加強農村勞動力技能培訓，增加勞務輸出工資性收入。五是嚴格落實各項補貼政策，增加農民的財產性收入，加強精準扶貧力度，以貧困戶基礎建設、產業發展為中心，做到“村村有產業基地、戶戶有增收項目”。
（一）我鄉農業生產發展以傳統方式的種養業為主，結構單一，缺乏發展新動力。下一步將加快產業結構調整，大力加強林業中的銀杏、核桃等產業發展，加快茶葉管護與茶葉加
增資報告范文4
首先是資源浪費，高校固定資產和企業的固定資產有明顯的區別，高校固定資產一般來源于國家財政撥款，所以不直接產生經濟效益，使用過程中也不需要進行成本核算。現階段，因為很多高校都進行二級財務核算，這就造成了高校內部各個院系盲目的購置固定資產，不結合自己的實際需求，購置一些使用價值不高但非常昂貴的固定資產，造成資源的浪費；其次是賬實不符的問題，固定資產的數據處于不斷變化之中，其存放地點、使用人等項目隨時都可能變化，因此必須及時更新。但因為大多數高校不重視固定資產的盤存清查，資產數據無法第一時間更新，同時固定資產管理部門和高校財務部門之間溝通存在障礙，并未定期核對賬務，從而產生了很多“糊涂賬”；最后是管理問題，大多數高校依舊使用的單機管理軟件，這些管理軟件在多級分散管理模式下已經明顯的暴露出自身的局限性，固定資產管理方式的落后，管理軟件的不穩定等因素都導致了高校固定資產無法很好的保值增值。
二、新時期高校固定資產的管理途徑
1.做好采購驗收
高校固定資產的管理部門應該深入開展可行性研究與調查分析，避免出現重復購置盲目購置的問題，避免購置一些價值不高、無法保值的固定資產。高校方面應該建立固定資產集中采購與招標管理領導小組，對固定資產招標、采購的整個流程實施全方位的監管，確保采購資產的質量，避免資金的浪費，保證固定資產質量與采購資金之間的平衡。另外還應做好驗收管理，確保采購回的固定資產符合質量標準，堅決防止暗箱操作或腐敗問題的發生。
2.完善核算方法
其一應該引入權責發生制，固定資產一直以來都是高校重要的資源，因此我們必須對固定資產從采購、使用、報廢整個流程進行科學的確認、計量，因此我們在對固定資產的核算過程中應引入權責發生制；其二是高校固定資產計提折舊，我們知道固定資產無論使用與否，其都會隨著時間的推移而發生損耗，自身價值也會逐漸降低，為了客觀的反映這種情況我們必須對固定資產計提折舊。這樣一來不但能夠建立與高校資金循環相符合的補償機制，同時還可以實現高校固定資產的價值管理與形態管理相統一。隨著社會主義市場經濟的發展和我國高等教育事業的發展，作為市場經濟中的重要組成部分，高校也應該進行投入與產出的計算，計提固定資產折舊能夠按照固定資產的不同種類來考慮有形損耗與無形損耗，從而幫助我們選擇正確的核算方法。
3.加強計劃管理
一方面是實施經費預算指標控制，高校固定資產的預算編制工作必須要站在全局的高度，結合高校自身發展目標以及固定資產的存量情況，科學的制定購置預算，做好固定資產使用效益的可行性分析，確保實現統一管理，避免固定資產閑置而導致資源的浪費；另一方面是要做好固定資產統籌管理調度，合理使用目前已有的固定資產資源，不斷提升固定資產的綜合利用率。要努力打破高校內各院系、各部門、各專業的限制，結合不同學科專業的具體教學教研任務，將相近的實驗室做好分類、重組，建成跨專業、跨學科的綜合實驗室，最終實現資源貢獻，也別是對于一些比較貴重的實驗教學設備以及實驗室，應該盡可能減少其空閑時間，讓其使用價值充分發揮出來。
4.盤活存量資產
要切實轉變現階段高校固定資產由各個部門所分散占用的局面，集中統一進行安排，避免固定資產的空置率，充分發揮出高校固定資產的價值，不斷優化各院系各部門的資源配置，從而實現全校固定資產的共享，確保固定資產的保值增值。
另一方面要堅持做好日常清查。為了確保高校固定資產的真實性，應該定期對所有的固定資產展開清查工作，每一年要至少進行一次全面的盤點，重點清查固定資產帳表、賬物是否相符，賬目是否規范。同時還要做好固定資產審計監督工作，高校固定資產屬于國有資產的一部分，固定資產的安全和完整直接影響著其自身價值的發揮，關系到高校的發展。所以只有同時做好固定資產的審計工作才能保證其保值增值。
增資報告范文5
新浪財經訊，北京時間10月9日下午消息瑞信今日《全球財富報告2013》。報告預測，亞太區在未來5年將實現8.4%的財富增速，并從2017年起取代北美洲成為全球最富裕的地區。屆時，全球財富將增長93萬億美元，中國將貢獻近50%。
《全球財富報告2013》指出，全球家庭財富總值由2012年年中上升4.9%（按當期幣值計算）至2013年年中的241萬億美元。受美國樓價回升和股市興旺帶動，北美洲的家庭財富上漲11.9%至78.9萬億美元，取代亞太區和歐洲成為全球最富裕的地區。由于期內日圓兌美元貶值22%，日本的家庭財富以美元計算下跌20.5%，至22.6萬億美元，拖累亞太區財富總值減少3.7%，至73.9萬億美元。然而，亞太區（除日本以外）在2013年年中繼續錄得6.2%的穩定財富增長，至51.3萬億美元。
瑞信私人銀行及財富管理部亞太區首席投資總監范卓云女士說：“亞太區仍然是全球經濟增長和創富動力的主要來源，占全球家庭財富31%，并涵蓋全球新興中產消費階級人口的61%，增長潛力巨大。”
亞太區：中國財富增幅最高，日本財富因日圓貶值而錄得最大跌幅
《全球財富報告2013》發現，由2012年年中至2013年年中，全球家庭財富總值增長4.9%，即11.3萬億美元（按當期幣值計算），至241萬億美元，而成人平均資產凈值則由去年的49，990美元增至51，600美元的紀錄高位。北美洲自2005年以來首次成為全球最富裕的地區，家庭財富增長11.9%（即8.4萬億美元）至78.9萬億美元（見表1）。雖然今年的經濟環境持續帶來挑戰，但歐洲的家庭財富增長5.5萬億美元，增幅為7.7%。由于股市不斷上升，到2013年年中，歐元區的成人平均財富已收復之前12個月的巨大跌幅超過一半。
由于期內日圓兌美元貶值22%，日本成為亞太區內唯一家庭財富下跌（按當期美元幣值計算）的國家。日本家庭財富下跌20.5%，即5.8萬億美元，導致亞太區財富總值下跌3.7%，至73.9萬億美元。然而，亞太區（不包括日本）的財富繼續錄得6.2%的穩定增長，于2013年年中達51.3萬億美元。在過去一年，美國、中國和德國是全球財富的三大增長來源。中國的家庭財富增長6.7%至22.2萬億美元，成人平均財富為22，230美元，為全球第三高，僅次于美國和日本。
在中國，由于儲蓄率偏高和金融機構的發展相對完善，中國家庭資產中的金融資產比重（46%）高于其他主要的新興市場國家。雖然中國家庭債務水準相對偏低，成人平均債務為1，400美元，相當于總資產的6%，但個人負債近年來一直迅速增長，于2012-13年度升幅達20%。相對于世界和其它新興市場，中國的整體財富不均情況仍屬溫和，中國42%的成年人口擁有10，000美元以上的財富，高于全球平均水平為31%。然而，隨著企業家、專業人士及投資者的財富不斷增加，財富不均情況在近年一直擴大。
未來財富大勢：亞太區財富將按年增長8.4%，到2018年達110萬億美元
報告預測，全球財富在未來五年將上升39%，到2018年達334萬億美元，年增長率為6.7%。預測期內全球財富將增長93萬億美元，其中新興市場占29%，而中國占近50%。在強勁的經濟增長支持下，預期亞太區在未來五年將繼續是全球最大的新增財富來源地，家庭財富由現時的74萬億美元，按年增長8.4%至2018年的110萬億美元，增幅達49%，即36萬億美元（見圖1）。亞太區占全球財富的百分比估計將由2013年的31%增至2018年的33%。預期亞太區將由2017年起取代北美洲成為全球最富裕的地區。
在國家層面，預期美國將繼續錄得最高的財富總值，到2018年將迫近100萬億美元。日本有望繼續成為全球排行第二的富有國家，直至大概于2016年被中國取而代之。預測中國的家庭財富將增長62%，至2018年的35.9萬億美元，即按年增長10.1%，而在全球財富的占比將由2013年的9.2%上升至10.8%。
預測亞太區百萬富翁在未來五年將增長75%
報告估計，全球的百萬富翁數目到2018年可能超過4，700萬，較2013年增長50%，即按近1，600萬。預期美國新增的百萬富翁最多，為數達540萬名。新興經濟體的百萬富翁數目到2018年將仍然遠低于美國（1，860萬）或歐洲（1，500萬），但預期增幅將超越先進國家。于未來五年，百萬富翁數目增幅最高的國家預計是中國、南韓、馬來西亞、印度和香港，分別為+88%、+79%、+76%、+66%及+63%（見表3）。根據預測，日本在未來五年的百萬富翁將增加85%，原因是日本政府推行刺激景氣政策，而預期結構性改革將改善日本的中期財富增長前景。
報告預測，亞太區的百萬富翁總數將增加75%至2018年的1，150萬，而北美洲和歐洲的增幅分別為41%和47%。到2018年，亞太區將占全球百萬富翁總數的24%，由目前的21%上升。在亞太區，中國將是新增百萬富翁的主要來源，到2018年的百萬富翁數目預計達210萬。
財富金字塔上層
報告估計，全球有98，700名個人資產凈值超過5，000萬美元的超高凈值人士，當中33，900人的個人資產值最少達1億美元，而3，100人的資產值超過5億美元。北美洲在地區排行榜占前列位置，共有48，000名超高凈值人士（49%），美國則以45，650名超高凈值人士，大幅拋離其他國家（見表4）。歐洲有24，800名超高凈值人士（25%），而亞太區則有21，790名超高凈值人士（22%）。中國以5，830名超高凈值人士（占全球總數5.9%）排名第二，僅次于美國。
按成人平均財富計算，澳大利亞和新加坡是亞太區內最富裕的國家
按成人平均財富計算，瑞士仍然是全球最富裕的國家，其于2013年的成人平均財富為513，000美元，其次為澳大利亞（403，000美元）及挪威（380，000美元）（見表5）。在亞太區，按成人平均財富計算，澳大利亞和新加坡（282，000美元）是最富裕的國家，而日本則因日圓大幅貶值而跌出十大。值得注意的是，澳大利亞的成人平均財富中位數219，500美元為全球最高，拋離瑞士（95，916美元）和挪威（92，859美元）。
財富流動性
增資報告范文6
【關鍵詞】 nf-κb；核糖核酸類，反義；肌細胞，平滑肌
effect of antisense rna of nf-κb on proliferation of vascular smooth muscle cells in spontaneously hypertensive rats/hu rong，hong huashan，xu changsheng，wu kegui//chinese journal of cardiovascular rehabilitation medicine,2009,18(2):116
abstract：objective:to investigate the effect of antisense rna of nf-κb on proliferation of vascular smooth muscle cells（vsmcs） in spontaneously hypertensive rats（shr） promoted by thrombin.methods:after pretreated with the 50moi recombinant adenovirus expressing antisense rna of nf-κb for 48h and 100μmol/l pdtc （nf-κb special inhibitor）for 1h， vsmcs proliferation induced by 0.5u/ml thrombin was investigated.the proliferation rate of vsmcs was determined with both wst-1 metabolic activity and 3h-tdr incorporation efficiency.results:the pretreatment of recombinant adenovirus expressing nf-κ b antisense rna obviously inhibit vsmcs proliferation induced by thrombin (p<0.01) at the rate of >30%, which was similar to the inhibition of vsmcs proliferation by nf- κ b special inhibitor pdtc with no statistical difference between two group(p>0.05).conclusion:the recombinant adenovirus expressing nf-κ b antisense rna may effectively inhibit vsmcs proliferation induced by thrombin,is similar to the nf- κb special inhibitor,may be applied to successive basic research and clinical interference treatment.
author′s address：department of cardiology，union hospital，fujian medical university，fuzhou，fujian，350001,china
key words：nf-kappa b;ribonueleases,antisense; myocytes,smooth muscle
血管平滑肌細胞（vsmcs）的增殖、向內膜下遷移、分泌細胞外基質等在血管增殖性疾病的發病中起重要作用。體內可以引起細胞增殖的因素很多，各種有絲分裂原可通過不同的信號傳導系統產生細胞增殖反應，單純抑制某種特定的因子并不能完全抑制病灶形成。因此，阻斷調節細胞增殖、分化、遷移等最終共同通路的關鍵基因成為有效防止血管增殖性疾病的研究方向。核因子-κb（nf-κb）是調節細胞基因轉錄的關鍵因子之一，調控幾十種生長因子、細胞因子、粘附因子、趨化因子等靶基因的表達[1]。因此，許多學者認為調控nf-κb的活性是一個理想的治療靶點?；蛑委熓菑幕蛩礁淖兗毎牟±頎顟B而達到治愈疾病的目的，具有一次治療長期有效的優點，克服現有藥物療法的缺點，實現“生理性治療”[2]。反義rna是一類能與特異性mrna互補的小分子質量的、可擴散的dna轉錄物，它能夠從翻譯水平、轉錄水平和核酸復制水平上高度特異性地抑制靶基因表達。反義核酸技術的意義在于僅干擾靶基因功能，對基因組其它基因的結構無影響，而且方法簡便。本研究試圖在細胞水平探討以腺病毒為載體，nf-κb反義核酸治療對vsmc增殖的影響，為其在整體動物的水平治療經皮冠狀動脈介入治療（pci）術后再狹窄和動脈粥樣硬化（as）奠定基礎。
1 資料與方法
1.1 一般資料
實驗所用的自發性高血壓大鼠（shr）購自北京維通利華有限公司［二級動物合格證號：scxk(京)2003-0003］。表達nf-κb反義rna重組腺病毒載體－pad/cmv/269和空載體pad/cmv系本實驗室構建保存[3]；凝血酶、吡咯烷二硫氨基甲酸鹽（pdtc）（sigma公司）1；氚-胸腺嘧啶核苷（3h-tdr，中國原子能科學研究院）；測定細胞活性的wst-1試劑盒（德國boehringer mannheim公司）；陽離子脂質體（lipofectamine）tm 2000轉染試劑（invitrogen公司）。
1.2 實驗方法
1.2.1 vsmcs的培養與鑒定[4]:以組織貼塊法培養vsmcs。取清潔級三月齡雄性shr大鼠，無菌操作分離其胸主動脈，剪碎后加入含15%胎牛血清（fbs）的dmem培養液（含100 ku/l青霉素，100mg/l鏈霉素），5%co2、37℃二氧化碳培養箱靜置培養。實驗選用3～5代細胞。用光鏡和免疫細胞化學法鑒定。
1.2.2 重組腺病毒的制備、滴度測定及鑒定[3]:paci酶切使重組腺病毒質粒pad/cmv/269線性化，紫外分光光度計測定質粒的純度及濃度。按lipofectaminetm 2000轉染試劑盒操作說明，用脂質法轉染培養好的293單層細胞，進行細胞內包裝，形成并釋放完整的腺病毒顆粒。包裝后的腺病毒用空斑法測定滴度，操作按virapowertm adenoviral expression system 試劑盒說明書。重組腺病毒用聚合酶鏈式反應（pcr）方法進行驗證，按dna提取試劑盒操作說明。
1.2.3 實驗分組:實驗選用3-5代的培養vsmcs，用0.125％胰酶消化后，以2×104個/孔或5×103個/孔，均勻接種于24孔或96孔培養板上，待細胞貼壁生長至70%～80％匯合時，吸棄原培養液，換用無血清或0.2％血清的dmem培養液，繼續培養24h，使vsmcs處于g0/g1期，再進行后續干預實驗。將培養細胞分為5組：①空白對照組：加入無血清dmem液；②空載體組：加入50多重感染（moi） ad/cmv感染vsmcs；③凝血酶組：加入終濃度為0.5u/ml凝血酶；④pdtc組：先加入終濃度為100μmol/l的pdtc預處理1h，再加入終濃度為0.5u/ml凝血酶；⑤反義rna預處理組：先加入50moi 重組ad/cmv/269感染vsmcs后48h，再加入終濃度為0.5u/ml凝血酶。按實驗要求細胞繼續培養至加刺激因素凝血酶后24h，測定細胞增殖率。每組復3孔取均值。重復4次。
1.2.4 vsmcs增殖的測定方法:wst-1代謝活性測定[4]：取3～5代vsmcs以5×103個/孔均勻接種于96孔培養板上，培養至70%～80％匯合時，換用0.2％血清的dmem培養液，繼續培養24h，使vsmcs處于g0/g1期。在上述各干預因素刺激至規定時間后加入即用型wst-1溶液，10μl/孔，繼續置37℃ 5％co2培養箱孵育90 min。取出培養板，置振蕩器上充分振蕩（300 r/min）1min，在酶標儀450/630nm雙波長處檢測光密度（od）值，即wst-1檢測值。每次實驗均設一個（復3孔）空白對照孔（以dmem培養液代替細胞），對照孔吸光值應<0.01。dna合成率測定：3～5代vsmcs以2×104個/孔，均勻接種于24孔培養板上，在上述干預因素加入時，同時加入1微居里/ml的3h-tdr，共育至相應時間后，吸棄培養液，0.125％胰酶消化細胞，收集細胞于0.45μm的微孔濾膜（預先用10％三氯醋酸濕潤）上，負壓抽濾，用生理鹽水和10％三氯醋酸沖洗濾膜，室溫涼干后置入液體閃爍杯中，加入3ml閃爍液［二甲苯+0.5%二苯基噁唑（ppo）+0.04%對苯撐苯唑基（popop）］，靜置過夜后，在液體閃爍計數器上進行放射性強度的測定。
1.3 統計學處理
實驗結果用數據和圖表表示，測定值以均數±標準差(±s)。采用spss 10.0統計軟件包分析。組間比較采用多樣本均數的單因素方差分析檢驗。p<0.05為差異有顯著性。
2 結 果
2.1 nf-κb反義rna重組腺病毒感染vsmcs對vsmc wst-1代謝活性的影響
凝血酶＋反義rna組和凝血酶＋pdtc組的wst-1的od值均比凝血酶組明顯減少（p<0.01），反義rna組與pdtc組之間不存在顯著差異（p>0.05）。50moi nf-κb反義rna和100μmol/l pdtc對0.5u/ml凝血酶誘導的vsmc wst-1代謝活性增加的抑制率分別為35.64％和36.32％，較之凝血酶組顯著減少（p<0.01），見表1，圖1。
2.2 nf-κb反義rna重組腺病毒感染vsmcs對vsmc 3h-tdr摻入率的影響
凝血酶＋反義rna組和凝血酶＋pdtc組的3h-tdr摻入率均比凝血酶組明顯減少（p<0.01），反義rna組與dptc組之間不存在顯著差異（p>0.05）。50moi nf-κb反義rna和100μmol/l pdtc對0.5u/ml凝血酶誘導vsmc 3h-tdr摻入率增加的抑制率分別為45.22％和49.62％，較之凝血酶組顯著減少（p<0.01），見表1，圖2。表1 不同組wst-1測定的代謝活性和氚胸腺嘧啶核苷（3h-tdr）摻入率(n=4)
3 討 論
許多能夠抑制vsmc增殖的藥物，無論是在基礎研究還是臨床實驗中，均已被證明具有防治動脈硬化及pci術后再狹窄的作用。但由于藥物治療的效果尚不十分理想，以及必須堅持長期用藥給病人心理上造成了巨大的困擾，尋找更加有效和方便可靠的治療方法便成為心血管病研究的熱點。盡管基因治療目前尚不十分成熟，但在這一領域中所取得的成就已引起眾多學者的關注。
凝血酶是一種重要的血管活性物質，除凝血作用外，晚近也證明它還能促進vsmc的增殖和遷移；促進血管壁非細胞成分的累積和新生內膜形成和釋放炎癥反應因子等作用，其功能多由細胞表面的凝血酶受體基因介導[5]。nf-κb是調節細胞基因轉錄的關鍵因子之一，新近研究發現vsmc中存在著nf-κb通路，且是vsmc增殖必經的激活通路。本系列實驗的先前研究結果顯示凝血酶能夠激活vsmc的nf-κb，使其從細胞漿轉位至細胞核，而且凝血酶引起的vsmc增殖與nf-κb途徑相關聯[6]。nf-κb可能是vsmc增殖的細胞內信號轉導的共同通路。國內、外已有利用反義核酸技術抑制凝血酶受體表達來阻斷凝血酶作用，從而抑制vsmc增殖的報道[7～9]，但利用反義表達載體、反義核酸技術抑制nf-κb的生成，從而達到抑制凝血酶誘導vsmc增殖的目的至今尚未見相關報道。
本研究利用前文[3]構建的nf-κb反義rna腺病毒表達載體，轉染293細胞，獲得高滴度腺病毒上清，再感染vsmc，觀察nf-κb反義rna對凝血酶引起的細胞增殖的作用。結果顯示，該載體能在vsmc內表達出nf-κb反義rna，顯著抑制了凝血酶誘導的vsmc增殖，顯示出該反義表達載體在心血管細胞增殖性疾病的基因治療的研究中具有良好的適用性。
基因治療是從根本上針對發病環節的一種治療手段，靶向性更明顯，具有一次治療長期有效的優點。本實驗結果證實，在同等條件下，nf-κb反義rna對vsmc增殖的抑制率＞30％，即具有生物學效應，且與nf-κb特異性阻斷劑pdtc的抑制作用相仿，為今后進一步的基礎研究和臨床干預治療奠定了基礎。值得注意的是，nf-κb在維持機體的防御功能和細胞生死平衡方面，起著極其重要的作用，完全地、持續地阻斷nf-κb激活有可能導致免疫缺陷和正常細胞的凋亡[10,11]。因此，如何進一步提高反義核酸技術的穩定性、有效性、安全性，尚待進一步的研究。
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