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1血液分析進展
血液分析是臨床常用的檢查方法,起初血液細胞計數方法是電容或光學方法,但是這種測試技術受干擾因素較多,因此50年代Culter發明的阻抗法,使細胞的計數精密度提高3~5倍,避免了繁重的目力計數,同時阻抗法的靈敏度和精確度程度較高,相對便宜,所以血細胞計數方法迅速被阻抗方法所取代。[1]我國首次使用血液測定的儀器是在1959年,由北京醫院引進瑞典生產的血細胞計數儀及血紅蛋白儀。直到1961年,張根福通過對進口儀器的剖析,生產出我國第一臺血細胞計數儀。[2]到目前為止,這種技術方興未艾,但這種檢測方法無法對細胞內部結構進行分析。由于計算機技術的不斷發展,70年代早期的血小板計數儀不能將血小板與紅細胞清晰分開,必須用富血小板血漿進行測定,但這種方法十分繁瑣,此后由于檢測技術進一步提高和浮動界標技術的應用,可用全血進行血小板測定。80年代以來,激光法引入了血細胞分析系統。激光不但具有單色光、穩定等優點,而且能射入細胞的內部,檢測核的形態和顆粒的情況,以此進行細胞分類。由于這些技術的應用,一些高檔儀器已可做白細胞的五部分類,如庫爾特公司的STKS和MAXA采用射頻、電阻抗和激光技術,光電公司的激光法Celltacs8108K型,東亞公司的NE系列采用射頻技術和電阻抗,SE-9000加用硫化氨基酸可檢測幼粒細胞,亞培公司的CD-3500和CD-3000采用電阻抗與激光結合,拜爾公司的TechniconH系列采用化學反應與激光技術結合原理進行五部分類測定。同時血液分析在八項分析的基礎上,還可進行紅細胞體積分布寬度、血小板平均體積、血小板壓積和血小板體積分布寬度測定,并且可將各細胞的分布直方圖打印出來,給貧血的類型及原因提供相關的信息。[3]90年代設計生產了專用的網織紅細胞計數儀。80年代Tanke等就用流式細胞儀進行網織紅細胞計數,此方法提高了網織紅細胞計數的精密度。由于流式細胞儀在臨床實驗室中很少使用,為此以拜爾為首的大公司設計了專門可進行網織紅細胞計數的血液分析儀,方便了臨床使用。由東亞公司設計生產的R-2000、R-3000網織紅細胞儀還可根據網織紅細胞的熒光強度,將其分成低、中、高熒光強度網織紅細胞,其中幼稚網織紅細胞顯示強的熒光,而成熟網織紅細胞顯示低的熒光。[4]全自動血液分析儀的生產,從標本混勻、吸樣、稀釋、分配、測定及打印結果,全部自動完成,不僅節省人力、減少繁瑣勞動,且由于避免了手工吸樣,大大增加了測定結果的精密度。在涂片方面,自我涂片染色制劑生產和設備的應用,消除涂片染色手工操作,每小時可制120涂片檢查,以及血液分析儀根據血細胞比容,血液涂片自動調整,可得到最佳的血涂片。進入當代后,現代高端自動化系統全自動血液分析儀、網織紅細胞分析儀系統,自動染色涂片,用條形碼閱讀器和條碼識別,可以輕松地將分析功能試驗室和全自動裝配生產線結合在一起。使用儀器后可根據經營的指示將有用的信息,如樣品的現狀和涂片制備,在屏幕上可以顯示,如果需要可以打印出來。隨著我國經濟、科技的不斷發展,在中國的臨床血液檢驗分析,必將獲得更大的發展。
2血栓與止血實驗診斷迅速在全國展開
血栓與止血是新興的一門學科,臨床各科幾乎無一不涉及血栓與止血問題,在發達國家,血栓與止血的檢驗已作為常規,廣泛應用于臨床,隨著我國臨床檢驗技術的進步,國內近幾年也有較快的發展。近年來,生物化學,細胞生物學和血管內皮細胞形態的分子生物學對內皮細胞調節血栓與止血及血管內皮細胞粘附蛋白功能的研究,[5]揭示了血管內皮細胞在血栓與止血和動脈粥樣硬化炎癥的病理生理過程中起著重要作用。[6]對血小板功能(血小板糖蛋白和凝血功能,花生四烯酸,血小板活化因子,血小板代謝及調節功能)的研究,有助于預防和治療血栓形成,而且對新藥物的開發具有重要價值的作用。[7]血液凝血反應是以麥克法蘭的凝血級聯理論為根本,但近年來修訂和補充了很多內容。如多組分子作為一個單位來研究其輔助因子的蛋白酶凝血反應,澄清了許多復雜酶的結構和功能,更新了觀念。另一個積極的反應是凝血蛋白酶激活反饋,例如加速和擴大在反應的凝血和負反饋調節作用、活化凝血的作用,更深刻地揭示凝固行為。[8]經典的內源性和外源性凝血之間的內在聯系通路的激活不斷發現,并不能簡單地理解為凝血機制外源性和內源性的兩種系統。止血與血栓實驗質控在我國剛剛起步,有作者對分析前質量控制進行了系統的研究,探討了各種因子在不同條件下的穩定性。凝血因子Ⅷ最不穩定,在32℃保存24小時,因子活性只為原活性的5%,活性喪失了95%,在4℃保存24小時,因子活性只為原活性的30%,活性喪失了70%。最穩定的凝血因子為Ⅻ因子,在32℃保存24小時,活性無任何變化。蛋白C分別在-20℃、4℃、20℃、32℃保存24小時,其活性分別為原活性的87%、80%、56%和42%。而纖溶酶原則隨保存溫度的增高和時間延長纖溶活性增加。這些資料對于質量控制方法的建立提供了重要的依據。
3流式細胞術在我國的發展和臨床應用
1969年VanDilla及其同事在LosAlamos,NM發明第一臺熒光檢測細胞計,隨后1975年Kohler等提出單克隆抗體技術,為細胞研究提供大量的特異免疫試劑,促進了流式細胞術的發展。流式細胞術是一種在液流系統中,快速測定單個細胞或細胞器的生物學性質,并把特定的細胞或細胞器從群體中加以分類收集的技術。[9]其特點是通過快速測定庫爾特電阻、熒光、光散射和光吸收來定量測定細胞DNA含量、細胞體積、蛋白質含量、酶活性、細胞膜受體和表面抗原等許多重要參數。[10]根據這些參數將不同性質的細胞分開,以獲得供生物學和醫學研究用的純細胞群體。我國在80年代初引進了第一臺流式細胞儀。隨著科技的不斷進步,各種性能完善、操作簡便的流式細胞儀相繼問世,而新的熒光試劑不斷發現使檢測費用日益降低,從而使流式細胞術逐步運用于臨床,成為常規實驗診斷的重要手段,使臨床診斷水平和實驗技術得到了很大的提高。李云蓮將其用于胸腹水、腦脊液細胞的分析均取得滿意的結果,馬俊龍等應用尿流式細胞儀分析尿中紅細胞形態變化可鑒別血尿的來源。除此之外,目前我國的流式細胞術臨床主要應用于HIV免疫分型,CD4絕對計數;白血病和淋巴瘤的免疫分型;腫瘤的細胞周期和倍體分析;網織紅細胞和干細胞計數;細胞移植的交叉配型和免疫狀態監測[11];殘量白血病細胞檢查;HLA-B27檢查;血小板功能及相關疾病等。流式細胞術的廣泛應用,對我國檢驗醫學的提高起到了重要作用。
4小結
臨床實驗室的檢驗服務正處在一個技術變革的轉軌時期,現代科學技術的發展對實驗室的影響將會在21世紀繼續存在。許多臨床醫學的進步都是在實驗室技術創新的基礎上發展起來的。臨床實驗中心的自動化技術會得到繼續發展,未來更多的常規實驗室檢查將會通過POCT和家庭自我檢查的方式來完成。臨床中心實驗室將更多地集中于高精尖的臨床實驗診斷。實驗室自動化技術的發展和臨床檢驗服務方式的轉變影響到實驗室對技術人員的需求,也會導致各項臨床實驗成本的降低。臨床實驗室測試服務處在在技術變化的過渡時期,現代科學和技術實驗室的21世紀的發展將繼續存在。許多臨床實驗室的進步是基于技術創新的發展?,F代科學技術可以提高效率,改善醫療服務質量。不過,精度高新技術是否可以迅速應用于臨床實驗室,也取決于其成本較昂貴,如果該項技術比較昂貴的話,則還取決于消費者的支付意愿。臨床中心實驗室將更多地側重于先進的臨床實驗室診斷。實驗室自動化技術開發和臨床試驗服務,改變了影響實驗室技術人員的需求,將導致臨床試驗費用的降低。