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勵志感人故事范文1
【摘要】
目的 探討并優化人臍帶間充質干細胞(hUCMSCs)體外獲取及培養增殖的方法并鑒定；誘導其向成骨細胞和脂肪細胞分化，為其進一步應用奠定基礎。方法 用酶消化法分離培養hUCMSCs，通過傳代培養、擴增，倒置光學顯微鏡及原子力顯微鏡下觀察細胞形態；MTT法檢測細胞增殖曲線，流式細胞儀檢測免疫表型；體外向成骨、脂肪方向誘導分化，并通過特異性染色鑒定其分化能力。結果 采用酶消化法能有效分離純化hUCMSCs。接種24h，貼壁細胞形態多為長梭型、多邊形或成纖維細胞樣形態，大小均一。P3、P7代細胞的生長曲線基本一致，增殖能力強。流式細胞儀分析，第3代細胞強烈表達CD29、CD44、CD105，不表達CD34、CD45和HLADR。經成骨誘導分化后4周，堿性磷酸酶染色呈強陽性，茜素紅染色可見明顯鈣結節；經成脂誘導3周，油紅O染色呈陽性，有明顯的脂滴出現。結論 本實驗建立了一套體外穩定培養擴增hUCMSCs的方法。所培養的細胞成分單一、擴增迅速、生物學形狀穩定，并能使其在體外誘導向成骨細胞和脂肪細胞分化，有望成為組織工程較為理想的種子細胞。
【關鍵詞】 臍帶；間充質干細胞；分化；成骨細胞；脂肪細胞
ABSTRACT: Objective To establish an optimized method to isolate， culture and identify human umbilical cord mesenchymal stem cells (hUCMSCs) in vitro and induce their osteogenic and adipogenic differentiation. Methods The hUCMSCs were isolated from human umbilical cord by digestion with collagenase. After serial subcultivation in vitro， the stem cells were passaged. Morphologic appearance of hUCMSCs was observed under an optical microscope and atomic force microscope. The proliferation rate was measured by MTT assay. Cell cycle and surface antigens were measured by flow cytometry. The osteogenic and adipogenic differentiation was tested and evaluated by specific staining methods. Results The isolation of hUCMSCs by digestion with collagenase was efficient. After seeded for 24 hours， the adherent cells showed spindle shape and fibroblast celllike shape and the size of hUCMSCs was homogeneous. The similar growth curves of passage 3 and 7 exhibited a great potential for proliferation. Flow cytometry analysis revealed that CD29， CD44 and CD105 were highly expressed on the surface of passages 3 cells， but the expression was negative for CD34， CD45 and HLADR. After culture in inducing medium， the cells were successfully induced into osteogenic and adipogenic lineages. These cells were highly positive for alkaline phosphate staining and also showed mineralization presented with von kossa staining after 4 weeks culture induction of osteogenic differentiation. Furthermore， liquid vacuoles were detected by oil red O staining after 3 weeks culture induction of adipogenic differentiation. Conclusion An in vitro method for isolation and purification of hUCMSCs from human umbilical cord has been established. The cultured cells were composed of only undifferentiated cells and their biological properties were stable. The hUCMSCs are expected to be a new type of stem cells of tissue engineering.
KEY WORDS: umbilical cord; mesenchymal stem cells (MSCs); differentiation; osteocyte; adipocyte
人臍帶間充質干細胞(human umbilical cord mesenchymal stem cells， hUCMSCs)是一類具有自我更新、增殖和多向分化潛能的干細胞，具有來源豐富，易于采集、保存和運輸，無異體排斥，避免倫理爭議等諸多優點。大量研究表明，hUCMSCs具有多向分化潛能，在體內外可以分化為骨細胞、軟骨細胞、肝細胞、心肌細胞、骨骼肌細胞以及神經元細胞等[1]。因此，其在組織工程、造血干細胞移植以及基因治療等領域具有廣闊的應用前景，成為干細胞研究的熱點。本研究探討hUCMSCs的體外分離、 純化、擴增以及定向分化條件，為hUCMSCs在組織工程中的進一步應用提供理論依據和技術支持。
1 材料與方法
1.1 材料
Ⅱ型膠原酶(GIBCO，美國)；DMEM/F12培養基(HYCLONE，美國)；胎牛血清(HYCLONE，美國)；地塞米松、吲哚美辛、胰島素、β甘油磷酸鈉和抗壞血酸(Sigma，美國)。恒溫恒濕培養箱(SHELLAB，美國)；倒置相差顯微鏡(Olympus，日本)；原子力顯微鏡(THERMO，美國)；流式細胞儀(Becton Dickinson，美國)；恒溫搖床(哈爾濱市東明醫療儀器廠)；超凈工作臺(蘇州凈化設備廠)；培養瓶、培養皿、離心管(Corning，美國)。
1.2 方法
1.2.1 hUCMSCs的分離與培養
從手術臺取正常足月產健康嬰兒臍帶組織(根據醫院規定并經家屬同意)，浸泡于DMEM中。超凈臺內取出臍帶，DHanks平衡液充分洗滌殘留的血液，去除臍靜脈、臍動脈及臍帶外膜，剝離Wharton膠，并將其剪碎至1mm×1mm×1mm大小組織塊。將組織塊移至1g/L的膠原酶Ⅱ中，加入少許DMEM，在37℃恒溫震蕩儀內消化，直至Wharton膠全部消化。將含細胞的消化液吸入無菌離心管，以30倍體積的DMEM反復吹打稀釋，1500r/min離心10min，棄上清液，用含150mL/L FBS的DMEM/F12的培養基清洗，使細胞懸液均勻分布，轉移至普通培養瓶中，在37℃、50mL/L CO2培養箱內培養。細胞貼壁后，第3天首次半量換液，棄去未貼壁細胞，以后每3～4d換液1次。倒置相差顯微鏡下觀察。細胞達80%融合后，用1.25g/L的胰酶消化，按1∶2～1∶3的比例傳代，續擴增培養。
1.2.2 細胞生長曲線的繪制
分別取P3、P7代對數期生長的hUCMSCs，胰酶消化，用含150mL/L胎牛血清的DMEM/F12懸浮，以4×104/mL的細胞密度接種于96孔培養板中，每孔200μL，每孔培養液的量均為1mL，從培養的次日起每天每組定時消化3孔行MTT法檢測，酶標儀(BioRad，Model 550)讀取490nm吸光度(A)值，繪制細胞生長曲線。
1.2.3 細胞表型的測定
用流式細胞儀對第3代MSCs表面特異性抗原進行檢測。2.5g/L胰蛋白酶消化待檢細胞，PBS洗滌3次，制成1×106/mL的細胞懸液。將待檢細胞樣品分為每管0.1mL，加入各類待測一抗，4℃孵育30min，加入熒光標記的二抗，4℃孵育30min，最后用100mL/L甲醛溶液固定細胞，用流式細胞儀測定各類抗原的陽性率。
1.2.4 體外多向誘導分化
以生長良好的第3代細胞為實驗細胞。細胞經消化后調節密度為2×104個/mL，分別接種入12孔培養板和預置蓋玻片的6孔培養板，24h后細胞完全貼壁，更換分化誘導培養基并分別設對照組。向成骨細胞誘導分化：以成骨誘導培養基培養(DMEM/F12培養基，100mL/L FBS、10-8mol/L地塞米松、10mmol/L β甘油磷酸鈉和50mg/L抗壞血酸)，每3～4d全量換液1次，培養至第4周時行堿性磷酸酶鈣鈷法染色、鈣茜素紅染色。向脂肪細胞誘導分化：以成脂肪誘導培養基培養(DMEM/F12培養基，100mL/L FBS、地塞米松1μmol/L、胰島素5u/mL、吲哚美辛0.5μmol/L)，每3～4d全量換液1次，培養至第21天時作油紅“O”染色。
1.3 統計學方法
應用SPSS13.0統計學軟件進行統計學分析。采用兩因素的方差分析，P
2 結果
2.1 細胞形態學及生長特點
倒置顯微鏡下觀察，原代接種24h即可見有少量細胞貼壁，外觀呈紡錘形和多角形，并可見細胞核。培養至7d可見細胞數量開始增多，細胞形態為長而扁平的梭形，為典型的成纖維細胞形態(圖1A)。培養至10d左右細胞匯合達到90%左右，細胞呈極性排列，集落呈漩渦狀(圖1B)。這時按1∶2傳代，細胞傳代后，貼壁速度增快，生長迅速；48h后，貼壁的細胞間可見有細胞集落形成，細胞大多呈長梭形，細胞核較大，數量也逐漸增多；3d后首次換液，5～7d左右細胞便鋪滿瓶底，融合成片，細胞排列較整齊，分布較均勻，生長較一致，雜細胞相對已較少可再次傳代。原子力顯微鏡下可見，培養早期的MSCs多呈長梭形，細胞質與細胞核邊界清晰，細胞體積很大，細胞長度超過100μm，細胞向四周延伸出數量不等的偽足樣突起。對其局部結構觀察發現，細胞邊緣有較多的偽足，兩端有魚尾狀或樹枝狀骨架，其形態較復雜(圖2)。
2.2 hUCMSCs的生長曲線
hUCMSCs生長曲線呈S形，接種后第0～1天為潛伏適應期，從第2天起細胞開始增殖并進入對數生長期，第5天達到高峰，以后進入平臺期。根據生長曲線可知hUCMSCs的群體倍增時間為26h(圖3)。增殖曲線顯示，P3、P7組間差異無統計學意義(P>0.05)，說明本實驗中P3、P7代細胞增殖速率無明顯差異。
2.3 細胞免疫表型分析
經流式細胞儀檢測，hUCMSCs均一地高表達間質細胞標志CD29、CD44、CD105，不表達造血系標志CD34、CD45和人白細胞抗原HLADR(圖4)。CD29為整合素家族中最重要的成員，是介導細胞與細胞外基質粘附作用的主要因子，參與細胞增殖、分化、凋亡等多種活動。CD44是分布極為廣泛的細胞表面跨膜糖蛋白，其正常功能是作為受體識別透明質酸(HA)和膠原蛋白Ⅰ、Ⅳ等，主要參與細胞細胞，細胞基質之間的特異性粘連過程。CD34和CD45是造血干細胞陽性標記，HLADR為MHCⅡ類分子，其陰性表達說明細胞具有弱免疫原性，有利于異基因移植。本實驗結果表明，臍帶來源的MSCs與骨髓、臍血等其他組織來源的MSCs流式檢測表型一致。
2.4 體外誘導分化檢測
2.4.1 hUCMSCs成骨誘導的形態變化及功能鑒定
成骨誘導5d左右，細胞形態逐漸由長梭形變為方形、鱗片形、三角形或多角形等。高倍鏡下可見細胞質內含顆粒樣物質。第8天時，細胞外基質分泌增多，胞質中及胞質外均可見較多細小黑色顆粒，胞核顏色較淡，胞質色變深。3周時細胞生長密集，中央可見類似結節狀的結構，部分細胞呈現層疊樣生長。4周時可見局部由棕黑色細胞外基質沉積。
堿性磷酸酶染色可見，經誘導后的大多數細胞胞質中有淺棕色至棕黑色細小顆粒或大片狀黑色沉淀，顯示強陽性，符合成骨細胞的特征(圖5)。茜素紅染色后鏡下可見細胞密集處有紅色的沉著物，呈團樣并向四周放射，中心顏色明顯加深 (圖6)。說明hUCMSCs在體外具有向成骨細胞分化的潛能。
2.4.2 hUCMSCs成脂誘導的形態變化及功能鑒定
成脂誘導5d左右，細胞形態逐漸由長梭形變為短梭形；在誘導約14d時細胞變為橢圓形、圓形；21d時胞質內可見脂滴形成，油紅“O”染色呈強陽性(圖7)。說明hUCMSCs在體外具有向脂肪細胞分化的潛能。
3 討 論
間充質干細胞(mesenchymal stem cells， MSCs)是一類具有顯著的自我更新和多向分化能力的細胞，他來源豐富，主要有骨髓、臍血、臍帶、全身結締組織和器官間質[24]。目前骨髓是實驗和臨床研究中MSCs的主要來源，但存在自身局限性。骨髓每106個細胞中含有1～10個干細胞，并且成人骨髓源MSCs的細胞數量及增殖分化潛能隨供者年齡的增大而下降，病毒感染率較高，且供者MSC的采集須行骨髓穿刺術，來源受到限制[2]。臍血MSCs來源充足但MSCs分離效率低，限制了其在組織工程和細胞治療中的廣泛應用[5]。因此，有必要尋求組織工程種子細胞新的來源。
近年來，國內外學者對hUCMSCs進行研究并取得了一定成果。有研究表明，臍帶中富含干細胞，平均每厘米臍帶組織中含有4×105個[6]，遠遠高于骨髓中的含量。臍帶間充質干細胞有望取代骨髓間充質干細胞成為組織工程中更為理想的種子細胞。因為其除具有取材方便、來源廣、數量充足、增殖能力強、長期傳代表型及增值能力不改變、分泌具有合適構成的細胞外基質等特點外，還具有以下優點：①采集臍帶對產婦和新生兒沒有任何危害及損傷；②干/祖細胞更原始，有更強的增殖分化能力；③免疫細胞較為幼稚，功能活性低，免疫功能不夠成熟，處于一種緘默狀態，不會觸發免疫反應及引起移植物抗宿主??；④不會有腫瘤細胞、病毒和病原微生物的感染及傳播幾率也相對較低；⑤不涉及社會、倫理及法律方面的更多爭議。
目前分離hUCMSCs的方法主要有酶消化法和組織塊培養法。因為組織塊培養法的原代培養時間為12～15d，培養時間較長，而采用膠原酶消化法可快速獲得大量貼壁生長的MSCs，且操作簡便易行，可更好地保持細胞活力，大大縮短了原代培養時間。因此，國內外大都采用酶消化法。袁源等[7]用1g/L的膠原酶Ⅳ，37℃持續攪拌消化30min，隨即用1g/L的胰酶37℃持續攪拌消化30min；侯克東等[8]則是采用0.75g/L的膠原酶Ⅰ，在37℃磁力攪拌器作用下消化10～14h；PEREIRA等[9]采用3g/L的膠原酶Ⅰ，37℃磁力攪拌器作用下消化3h。文獻報道通過膠原酶與透明質酸酶混合使用能夠降低消化液的粘附及縮短消化時間，其中膠原酶Ⅱ消化能力較其他類型的膠原酶要強[1]。
本實驗采用1g/L膠原酶Ⅱ，于37℃恒溫震蕩儀內消化分離人臍帶MSCs，消化至Wharton膠全部消化，時間4～6h不等。消化過程中加適量的DMEM。消化完畢后采用100目的細胞篩過濾，離心后收集細胞接種于培養瓶。消化采用此種方法所培養的細胞在體外成集落樣生長，細胞生長性狀穩定，增殖速度快，貼壁時間短，貼壁細胞成活率高。
目前尚未明確hUCMSCs的特異性抗原標志，通常以細胞形態、流式細胞檢測結果、多向分化潛能作為判斷標準[10]。本研究分離純化得到的臍帶間充質干細胞具有貼壁生長的特性，形態類似成纖維細胞，流式細胞儀檢測高表達間質細胞標志CD29、CD44、CD105，不表達造血系標志CD34、CD45和人白細胞抗原HLADR。經成骨和成脂誘導培養基誘導后，通過ALP染色以及茜素紅染色證實分化為成骨細胞，通過油紅O染色證實分化為脂肪細胞。因此，根據目前比較廣泛的可被大多數研究者接受的鑒定標準，我們從人臍帶中獲取的這些細胞即是間充質干細胞。
綜上所述，本實驗建立了一套體外穩定培養擴增人臍帶間充質干細胞的方法，所培養的細胞成分單一、擴增迅速、生物學性狀穩定，并能使其在體外誘導向成骨細胞和脂肪細胞分化，為其進一步應用于組織工程和細胞治療提供了實驗依據。
參考文獻
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勵志感人故事范文2
經市委、市政府研究同意，提高已故離休干部的無工作配偶的生活困難補助費標準?，F將有關事項通知如下：
1.補助標準：
已故離休干部配偶有子女無工資收入的每人每月生活困難補助標準提高到130元；配偶無子女又無工資收入的，每人每月生活困難補助標準提高到170元。
2.補助時間：
自1994年10月起改按上述標準執行。
勵志感人故事范文3
曲院長知道何晶是自己女兒是電視劇《產科醫生》的第7集，《產科醫生》是由東陽市花兒影視文化有限公司出品，該劇由李小平執導、張作民編劇，佟麗婭、王耀慶、徐百卉、鞏崢、張小磊、施京明、朱銳、錢潔等人主演的現代時尚醫療職場電視劇。
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該劇是一部醫療行業劇，行業劇是指拿掉人物生存的背景，“行業劇”的使命有其特性，要做到首先體現行業性，然后是角色的個性，最后抵達整體的人性描述，在這些層面上講，《產科醫生》的完成度非常高，表現出了行業的專業性，角色豐富的個性，還有人性——人性中最好的部分。
這是一部充滿人文情懷的作品。當下許多80后、90后的年輕人已陸續為人父母，他們都會面臨生育孩子的難題，在與醫生打交道的時候也會碰到各種麻煩。這部劇不僅為年輕人普及了生育知識，也為他們提供了幫助。此外，劇中還體現了醫生之間真實的職場關系，傳遞了正能量與勵志的情懷。我相信這部劇必將創造新一輪的社會熱點話題。
（來源：文章屋網 ）
勵志感人故事范文4
關鍵詞：移動互聯網；勵志微動畫；創作策略研究
一、移動互聯網語境下的微動畫特征
（一）移動互聯網孕育“微”藝術
移動互聯網的發展使人們的生活方式發生巨大改變，社會進入以草根為代表的全民傳播時代，微博、微信、微小說、微電影等眾多“微藝術”應運而生，作為被大眾熟悉的藝術形式，“微動畫”也緊跟時代步伐，在“微藝術”叢生的年代，展現出特有的藝術特征。
（二）微動畫的藝術特征
微動畫是互聯網“微時代”催生下的產物，具有傳統動畫的基本屬性，但是與傳動動畫動輒幾十集的概念相比，微動畫時長一般控制在3分鐘左右，可以用“短小精悍”來形容。由于時效性的限制，“微動畫”發展初期主要關注的是新聞焦點和世俗百態方面的題材。隨著時間的推移，一個小品、一個事件點、一種短期的變化、狀態都會成為微動畫未來的選擇方向。微動畫的創作形式也越來越個性化，常常能夠顛覆現有的創作形式和表現手法，結構語言也愈發豐富，比喻、暗示、反襯等修辭手法層出不窮，所以，微動畫不再是孩子的專屬，成人也逐漸加入動畫觀眾的行列中來。
二、勵志微動畫創作的現實意義與價值
現階段，勵志微動畫借助網絡傳播的便捷性，以成長、治愈為題材，結合中國傳統文化的元素和風貌，不僅發揮了積極的教育作用，同時體現其文化傳播價值。勵志微動畫在經濟領域同樣有很好的表現，比如科教短片、藝術宣傳片、微動畫廣告的運用等，通過不同題材的開發，引發文化經濟效應，將文化資源轉化為經濟資源，帶動整個行業經濟的發展，所以勵志微動畫的傳播無論對社會文化還是經濟的發展都具有重要的意義。
三、移動互聯網語境下的勵志微動畫創作策略
（一）勵志微動畫的題材來源
1.經典IP故事改編
微動畫的創作離不開優秀故事的支撐，創作者在篩選和整理內容時，可以從積累了大量粉絲的經典IP中汲取靈感。人類幾千年的文化長河中，有數不盡的歷史題材值得挖掘。一般來說，勵志IP題材的整理分為兩種，一是適當保留部分歷史真實事件，對其進行梳理和改編。比如：迪士尼采用中國花木蘭的經典IP形象創作了天馬行空的《花木蘭》電影。二是對童話、寓言故事等勵志IP直接進行藝術加工，強化勵志微動畫的傳播效果。
2.原創IP題材設計
2016年由皮克斯動畫工作室出品的動畫藝術短片《鷸》，總時長約5分多鐘，講述了小鷸鳥在覓食過程中，克服內心恐懼，積極面對大自然，努力適應大自然的感人故事。整個動畫從角色形象到情節設計均是原創，其優秀的創作讓低齡兒童至成人觀眾都能夠喜歡和接受。2018年，蘋果公司推出動畫廣告片《ShareYourGifts》，中文名《分享你的天賦》，時長接近3分鐘，講述了女主人公性格內斂，不敢將自己的天賦展示給大眾，讓自己的才華沒有體現應用的價值，在偶然的機會下，唯一的愛犬將窗戶打開，使美好的天賦設計圖散落在眾人面前，女主終于放下自己的畏懼和防備，將手稿展示給大眾，最終，女主在受到眾人的肯定中收獲了最大的快樂。本片旨在呼吁更多有才華的人敞開心扉，通過自己讓這個世界變得更加溫馨和快樂。本片的整個構思也是圍繞了蘋果公司的要求進行了原創，個性化特征明顯，給人帶來耳目一新的視聽體驗。
（二）三幕劇結構在情節設計中的運用
1.三幕劇結構理論
悉德菲爾德的“三幕劇結構”，即建置—對抗—結局，基本上任何一部優秀的動畫都能完美嵌套這個模型。三幕劇的第一幕為建置，或稱開端，需要表明故事的主要人物和周圍的情境。在第一幕結尾處要設置一個情節點，將故事的發展帶入另一個方向。第二幕為對抗，是故事的主體部分，在劇本中為主要人物設定預期目標，為這一目標設置障礙，就產生了沖突，第二幕的結尾處同樣需要設置情節點把故事引入結局部分。第三幕為結局，是所有故事的終結，故事需要一個有力的結尾使人認同并求得完整。這是線性的劇本結構模式，可以歸納為：一系列互為關聯的事情、情節或事件按線性安排，最后導致一個戲劇性的結局。
2.三幕劇理論的具體實踐
蘋果圣誕節微廣告《分享你的天賦》參照了皮克斯動畫的慣用手法，通過三幕劇結構來發展劇情。第一幕開端，動畫交代了臨近圣誕節，一個寒冬的夜晚，寵物狗陪伴者女主角在房間里用蘋果電腦進行創意構思，將觀眾的視線帶入女主角的身上，這是故事的開端。第二幕中斷部分，以女主角內斂的性格為矛盾沖突點，一方面發自內心的沉浸在創意的喜悅中，一方面因為懼怕展示天賦的個性而壓抑自己，通過做面包、霧氣眼鏡等情節就可以明顯體現。第三幕通過寵物狗的幫助，意外地打破了內心的禁錮，女主角同樣收獲了被認可的喜悅，結局并不是故事的結束，而是意味著矛盾的解決。其中兩個情節點分別是：第一次創意圖稿正要飄出之際被女主角快速阻止并牢牢地鎖在綠色的盒子里，第二次寵物狗意外打開窗戶使創意圖稿飛出窗外，這兩個情節點都推動了情節朝著另一個方向發展。動畫短片《鷸》的情節發展同樣適用于三幕劇結構。
（三）美術設計符合大眾審美
優秀的故事劇本離不開個性化的美術設計，在整個動畫篇幅中，美術風格決定了動畫的成敗，其中角色是動畫的靈魂，而美術風格既要彰顯個性，又不能完全脫離大眾的審美。以皮克斯短片動畫《鷸》為例，整個場景采用了照相寫實的手法，客觀展現了海洋和沙灘環境的真實面貌，其中的鷸鳥和寄居蟹的設計采用寫實和擬人化的表現手法，既客觀地展示了主角的造型特征，在表情、動作的設計上又充分的塑造了個性突出的人物性格，加上紀錄片式的主客觀敘事手法，讓短片充滿活靈活現的童趣氛圍，讓觀者無論年齡、職業都能夠為之動容、喜愛。對于時間3分鐘以內的微動畫來說，場景美術設計風格應該與角色保持一致，但場景元素的羅列應該盡量簡潔、有序，不適合太過煩瑣，并且空間的轉換盡量控制在一兩個場景之內，元素的過分堆積會虛弱主體的表演，弱化情節的發展。
（四）視聽語言的創新設計
不同于長篇動畫復雜的鏡頭設計，微動畫的情節描述應該更多以客觀鏡頭、長鏡頭為主，鏡頭語言總體趨于平和，不適宜采用動接動的鏡頭手法。景別受手機屏幕的限制，大全景中的細節不容易被展現，過快的鏡頭也會給大全景的細節刻畫造成創作中的浪費，營造出混亂的視覺效果，所以微動畫適宜全景、中景和特寫的鏡頭組接方式，如廣告微動畫《分享你的天賦》的創作中，大多數鏡頭都是通過全景來客觀記錄主角的生活，結合少量的中景和特寫來描繪主角的動作及心理變化，全程沒有對話和旁白，配合舒緩的音樂，充分詮釋了清新、唯美、溫馨的圣誕氛圍，而《鷸》則采用長鏡頭和近距離特寫相結合，甚至創新式的采用微距攝影的手法，給觀眾耳目一新的視聽感受。
勵志感人故事范文5
陽光保險集團是國內七大保險集團之一是由中國石化、南方航空、中國鋁業、中國外運長航、粵電力等大型企業集團于2005年發起組建。在成立短短六年的時間內，無論品牌建設、還是公司業績，都實現了迅速成長。
據悉，2011年陽光保險在品牌建設過程中，與中央電視臺大型綜藝欄目《我要上春晚》合作，成功簽約冠名該欄目。在經歷了一年全方位的營銷傳播之后，企業理念與欄目理念已相互融合，搭建起一個讓平民百姓實現心中夢想的舞臺。在2012新的一年里，陽光保險面臨的主要任務是把握時機，再度擴大品牌的影響力，與央視欄目建立更加緊密合作。資源的調配，廣告投放時機的把握，以及爭取更好的投放環境，都在整個執行過程中得到各方的全力配合，希望最終能夠達到預期的廣告與宣傳效果。
春晚概念：樹立品質企業的公眾形象
繼成功續約并獨家冠名2012年《我要上春晚》之后，陽光保險集團品牌宣傳再推創新之舉，已成功與央視《我要上春晚》推出的草根明星旭日陽剛（王旭、劉剛）、西單女孩任月麗、大衣哥朱之文、呼啦圈女孩金琳琳、豫劇紅孩兒鄧鳴賀一起簽約，集體代言陽光品牌，新廣告片目前正在央視和鳳凰衛視等媒體投放。
當本刊記者問到如何想到與《我要上春晚》欄目“牽手”時，陽光保險集團品牌宣傳部總經理張杰這樣講到，“首先，品牌發展到一定階段尋求突破就必須與一個大的平臺合作，央視這個平臺是獨一無二的；其次，春晚具備大眾基礎，每年都是一次社會事件；第三，我們看到了央視打造綜藝欄目的決心，這個決心是對欄目品質和資源的有力保障；最后，陽光保險與欄目合作更能將資源與營銷結合，避免單純硬廣在落地營銷支持方面的不足。”值得提出的是，在選擇代言人的過程中，與春晚草根明星結合，不但能最好地宣傳陽光保險對央視《我要上春晚》欄目的冠名，而且廣告片投放內容與欄目做到順勢融合，巧妙地實現了借力打力的整合傳播。
據張杰介紹，“2012年陽光的品牌和廣告片要上一個新臺階，我們一直在思考代言人的使用問題，這也是品牌發展到一定階段的一個必要問題。而代言人的選擇一定是個重點，用誰、怎么用才能為品牌帶來持續穩定的正面效應則成為關鍵。陽光保險契合合作欄目主題，最終決定邀請這六位代言人拍攝廣告片。”選用通過《我要上春晚》這個舞臺走上央視春晚的草根明星作為代言，對于企業近兩年的品牌傳播主線起到了貫通升華作用。一方面更加深入地將企業品牌與“春晚”概念綁定，另一方面通過個例凸顯“為13億中國人的夢想保駕護航”的企業愿景，樹立企業關愛大眾的公眾形象。
陽光保險其實更看重的是草根明星的感人故事和成長背景，沒有太多的品牌符號貼在他們身上。選六位草根明星群體代言，打破了保險行業甚至其他行業的慣例，勢必會形成強大的新聞傳播熱點。其六人的選擇，具備共性的東西，比如對于夢想不斷追求，面對生活積極樂觀，夢想成真的勵志故事等等。他們代表的是普通百姓，他們是夢想與希望的代言人。而作為保險企業，其本質是為社會分擔風雨，共享陽光，讓每一個人擁有夢想和希望，企業使命和代言人特質不謀而合。
代言廣告片通過講述“陽光”帶給六位草根明星命運的變化，講述他們堅持夢想最終成功的感人故事，樹立陽光關愛的品牌形象。廣告片首次播出被安排在除夕之夜央視春晚開場前倒三位置，借央視春晚這個黃金時間、黃金事件、黃金舞臺，驚艷亮相。大年初一，@張杰陽光在他自己的微博上六位春晚明星代言陽光保險的廣告片，短時間被廣泛轉發，評論上百條，代言新聞的微博轉發更是達到了800多條，引起了很大的社會關注。
草根明星：撐起品牌的厚重感與使命感
眾所周知，這六位明星中旭日陽剛、西單女孩任月麗和呼啦圈女孩金琳琳是2010年從《我要上春晚》欄目脫穎而出，登上2011年央視春晚舞臺；大衣哥朱之文和豫劇紅孩兒鄧鳴賀是2011年《我要上春晚》欄目中的人氣王，已成功登上2012央視春晚，人氣和知名度一路攀高。
通過闡述陽光帶給草根的人生變化，感人至深，能很好展示陽光的關愛力量！選用草根明星群體作為代言人，大眾的熟悉度和共鳴感很強，勢必會快速形成價值認同，傳播效果也將得到提升，從而最終提升企業正面的品牌形象。代言人代表的是普通大眾，是最廣大的社會力量，足以撐起品牌的厚重感與使命感。
此外，陽光保險借《我要上春晚》平臺全方位展示企業形象，還形成線上線下配合，其有效提升了品牌知名度和在行業內的影響力，同時陽光品牌進入第一梯隊，得到廣告界關注，先后獲得“中國最佳品牌建設案例大獎”、“中國廣告主長城獎?營銷傳播金獎”等多個獎項。有力帶動了全系統的營銷，全國客戶活動開展踴躍，極大提升了品牌美譽度和活躍度。
陽光保險集團作為一支行業內新銳力量，公司品牌、企業文化、公司業績、公益及員工關愛等工作已全面鋪開，張杰坦言，“企業的存在價值取決于對社會的貢獻，陽光保險將永遠致力于樹立擁有高度社會責任感的金融企業形象?！?/p>
正如中國傳媒大學廣告研究所所長杜國清所言，陽光保險的整體營銷傳播戰略是有的放矢且效果顯著的。從它的營銷傳播實踐來看，體現了品牌定位、品牌精神，還有產品服務、創意表現，這幾個方面與高端媒體和精品欄目的高度契合，實現了創新，實現了最終的有效傳播。
品牌營銷:更重視企業社會責任建設
在品牌建設方面，除了硬廣投入，陽光保險集團歷來高度重視企業社會責任建設，在公益方面表現異為突出,付出了很多人力物力，做了很多扎實的工作。為使公益力量持續不斷釋放，2009年3月5日成立“陽光保險青年志愿者協會”，2010年5月注冊成立“陽光保險愛心基金會”，現如今志愿者人數已達到5000人，從一個側面展現出企業在公益方面的雄厚實力和堅定決心。
勵志感人故事范文6
“獲得首屆最佳‘狗狗影帝’雙料提名的是——Uggie!”好萊塢《每日犬報》奇思妙想，為影視作品中的明星小狗開設了“金項圈”評比獎。《藝術家》的女演員佩內洛普·安·米勒作為揭曉嘉賓，與Uggie一起出席了提名儀式。提名中，Uggie憑借《藝術家》和《大象的眼淚》獨占兩席，當米勒把話筒舉到它面前詢問“感言”時，Uggie以一聲中氣十足的“汪——汪汪”表達激動。
其他入圍的還有《愛的初學者》中的Cosmo、《抗癌的我》中的Denve r以及《青少年》中的Hummer和《雨果的秘密》中的德國杜賓犬Blackie。
楊嘉松在北京寵物領養日唱響“希望”
2月5日下午的愚公移山livehouse，沒有往日搖滾樂的狂歡，屋里和屋外仿佛都灑滿了溫暖的陽光。第四屆北京寵物領養日活動在這里舉行。
十三月唱片的民謠歌手楊嘉松也應邀參加了此次活動，并上臺演唱了《我希望我的希望不再只是希望》。近一個月來，有網友將楊嘉松的這首歌和無數流浪動物的照片制作成了一段感人的視頻，在網上得到熱烈響應。楊嘉松，不僅僅是一個民謠歌手，更是收留了15只貓和一只狗的好主人，他還為自己的愛貓創作了好聽的歌并收錄在新專輯中。
策劃本次北京領養日活動的志愿者表示：我們共同的心愿，就是讓每一只流浪動物進入家庭，讓每一只貓貓狗狗都有人疼愛。
歐美寵物新時尚狗狗變身“老虎和斑馬”
近日，美國和英國正流行一股新的熱潮，寵物狗狗被打扮成各種古怪的形狀。富有想象力的狗狗美容師狗狗打造成各種造型，從龍和雞到海盜與足球。獲獎的英國美容師蘇維文受到老虎和斑馬的啟發，將貴賓犬威洛和佛洛德打造成了“老虎”和“斑馬”。
沙發保護劑毒死狗 趴著玩了一會兒就被熏死
據英國媒體1月14日報道，英國格拉斯哥市一只十周大的寵物狗因為肺部吸進噴霧狀沙發保護劑而死亡。經調查，這種惹禍的沙發噴劑早在去年就在英國停止銷售，但至今仍能在1 50多家零售店里發現它們的蹤影。
據悉，斯坦西購買的沙發保護劑里含有一種叫做庚烷的化學物質，有麻醉和刺激作用，長期接觸會致人神經衰弱，喪失意識，對胃部和皮膚也有損傷。目前斯坦西購買的同種品牌沙發保護劑在英國已全部下架處理。
公司送斗牛犬林俊杰過年不孤單
外表帥氣的林俊杰，私下愛狗成癡，去年6月才遭逢愛犬過世，讓他傷心了好幾個月，但他仍很喜歡狗，還想再養狗，日前唱片公司得知消息后，主動送上一只法國斗牛犬，讓他又驚又喜，直說“太可愛了”。之所以想養，林俊杰想了想，笑說“感情上比較有寄托，且狗不會背叛主人”。
斗牛犬看來笨笨的，非常需要人照顧，激發出JJ的愛心與責任感。但有之前Eusha病逝令人難過不舍的經驗，難道不會怕養狗?林俊杰坦言“會害怕，但實在太喜歡狗了，因此愿意承受愛狗的這一切”。
日本男子因毆打小狗面臨監禁
據日本新華僑報網2月6日消息，近日，日本一名男子因毆打自己的小狗，造成小狗腦部和肝臟損傷。日本神奈川縣警方以違反《動物保護法》的罪名，將這名53歲無業男子虐待寵物的案件移交給了檢察院。這名男子可能很快面臨牢獄之災。
1月3日凌晨，該男子在川崎市川崎區的一家酒吧內，對飼養的小狗拳打腳踢，造成小狗腦部和肝臟嚴重損傷。男子虐待小狗時將酒吧的柜臺弄得污穢不堪，酒吧店員隨后撥打110報警。該男子向警方供稱：“我只是想教育一下小狗?！毙」肥窃撃凶?011年末花20萬日元在寵物商店購買的，現在已經被送往動物醫院治療。
公犬疑因主人訓斥傷自尊跳樓 曾多次獲比賽冠軍
它叫威勝，是一條德國羅威納犬，血統純正，年少揚名，曾四次獲得全國性犬類比賽冠軍，曾經有人出價十幾萬元購買，平日性格溫順，也很聽話。但一日上午，剛滿十一個月的它，突然從距離地面二十多米高的陽臺上，飛身躍下，不幸身亡。
狗主人游女士說，威勝是只公犬，事發前幾分鐘曾與一只母犬大聲對吠，被訓斥了幾句。她很疑惑，威勝智商很高并且訓練有素，為何能克服恐高的天性跳樓?
《陪伴》
一部以狗狗為題材的電影，描述了發生在一只導盲犬、導盲犬訓練師小佐、導盲犬寄養小主人以及失明女子星野真之間的感人故事。小佐因同事自殺而立志成為造福社會的訓練師，寄養導盲犬的四口之家正面臨父母離異，因為舞臺意外而失明的女主唱星野沉浸在不得不放棄唱歌的悲傷中，如此三個同時面對人生困境的人，因為毛盲犬的牽連而產生了奇妙的化學作用，譜寫了一段感人肺腑的勵志真情。
孔琳推薦：日式慣有的催淚彈，盡管這樣題材的片子多的數不勝數，但是我們還是次次淚眼連連。
白狗的華爾茲
