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作者：金恩望 周凌云 卜登攀 孫鵬 姜雅慧 李發弟 單位：中國農業科學院北京畜牧獸醫研究所 甘肅農業大學動物科學技術學院
1體外產氣法的原理
體外產氣法的主要理念是通過體外產氣裝置模擬瘤胃發酵。體外產氣系統有發酵裝置、恒溫晃動裝置、氣體量或壓力測定裝置和微生物培養液組成。發酵裝置一般是注射器、血清管或玻璃瓶；恒溫晃動裝置一般是恒溫培養箱或恒溫水浴搖床；氣體量或壓力測定裝置一般是在發酵裝置上標定刻度或是壓力傳感器；微生物培養液是瘤胃液與人工唾液按一定比例配合的混合液。飼料的消化率不同，在限定時間內不同發酵階段的產氣量與產氣率不同。飼料發酵體系在恒溫厭氧的密閉空間內產生氣體進而導致密閉空間的壓力變化。體外產氣法即利用飼料底物在體外產氣系統中分解代謝產生的CO2、CH4等氣體后引起反應空間體積或壓力變化，通過定量這種體積或壓力的變化來定量發酵產生氣體量和產氣速率，并測定底物降解后的殘余量和發酵產物生成量等，實現對飼料營養價值的評價。體外產氣法測得的有機物質消化率與在反芻動物活體內測定的結果呈高度正相關（Menke等，1979）。當體外利用緩沖瘤胃液消化飼料時，碳水化合物會降解成短鏈脂肪酸（SCFA）、氣體和微生物的細胞成分。碳水化合物在降解為乙酸、丙酸、丁酸的過程中產生氣體，主要包括CO2、CH4和H2。產氣量取決于底物發酵和揮發性脂肪酸產量及其摩爾比例（Davies等，2000），與碳水化合物相比，蛋白質降解時的產氣量要低（Wolin等，1960），脂肪的產氣量可以忽略不計。
2體外產氣法在動物營養中的應用
2．1體外產氣法在評價飼料營養價值方面的應用體外產氣法的一個最重要、最原始的應用是評價反芻動物飼料的消化率和能值（Krishnamoorthy等，2005）。體外產氣系統能有效評價營養物質的利用率，通過飼料降解過程中的產氣量能較精確地評定飼料在動物體內的消化率（Sallam等，2007）。Huhtanen等（2008a）用自動體外產氣法預測15種牧草青貯中性洗滌纖維的可消化性和潛在可消化中性洗滌纖維的一級有效消化率，結果表明可以用一個含6個參數的復雜的產氣動態模型評價一級消化率。Kazemi等（2009）用體外產氣法和半體內法評價假高粱、鉀豬毛菜和田旋花等野生牧草的營養價值，結果表明假高粱與其他野生牧草相比具有較高的營養價值。Murillo等（2011）用體外產氣法評價了放牧閹牛日糧營養價值隨季節性的變化規律，結果表明體外產氣量是評價放牧牛日糧營養價值的一個很好的指標。利用體外產氣法能對飼料可溶解部分和不可溶解部分的消化動態提供有用的數據，越來越多的研究者采用體外產氣法對非傳統飼料資源進行營養價值評價。Songsak等（2005）用體外產氣法評價了椰子樹、棕櫚樹等熱帶飼料的營養價值，預測這些非牧草高纖維的熱帶飼料在瘤胃中會有較高的發酵活性。Sallam等（2007）用體外產氣法預測稻草、亞麻子秸稈、甘蔗渣和埃及車軸草等飼料，瘤胃可發酵有機物質比例、產氣動態、代謝能、凈能和有機物質消化率，得出不同粗飼料碳水化合物的發酵能力具有很大的差別。Razligi等（2011）用體外產氣法研究高壓滅菌30和60min對紅花籽凈能的影響，結果表明，從節省時間和能量的觀點講，高壓滅菌30min對增加紅花籽凈能有較好的效果。為了降低畜牧業生產的成本，大量的農業副產品如棉籽殼、稻殼和甜菜渣等也用來飼喂反芻動物，這些農業副產品的營養價值可以通過體外產氣法進行評定。Aghsaghali等（2011）用體外產氣法評價干番茄皮渣的營養價值，試驗結果表明，番茄皮渣可以作為一種有價值的副產品應用于反芻動物飼料中。Akin－femi等（2009）用體外產氣法評價了5種尼日利亞農業副產品飼料的營養價值，結果表明體外產氣法能用于評價熱帶農業副產品的營養價值和區別它們的潛在可消化性和代謝能值，并證明了這些農業副產品具有成為反芻動物日糧的潛力。
2．2體外產氣法在預測CH4方面的應用1991年美國環保局對全球CH4排放源和排放量進行了初步估測，結果表明反芻動物CH4排放量占CH4排放總量的15％～25％（李華偉，2008），是全球溫室效應的重要來源。瘤胃發酵能量損失主要來源于CH4的排放，有2％～15％的飼料能量以CH4的形式被損耗（華金玲等，2007），因此對瘤胃中CH4進行調控、預測CH4產量是很有必要的。體外產氣法可以用來估算或測定日糧降解過程中CH4產生量，快速篩選日糧，評估并制定瘤胃中CH4緩釋策略以提高反芻動物生產性能（Bhatta等，2007）。Villa等（2011）用產氣法評價多年生黑麥草和2種紅三葉草的3個不同收割時期的體外瘤胃發酵CH4產量，結果表明CH4產量的降低與牧草發酵程度的下降有關。在反芻動物營養中簡單、準確地預測CH4產量并建立CH4產生模型對任何飼喂模式都是很重要的（Blummel等，2005）。Getachew等（2005b）對全混合日糧進行發酵時，結果發現體外產氣法測定的CH4產量和公式推測值相似，且飼喂高粗日糧的反芻動物的CH4產生量可以通過體外產氣法預測。李華偉（2008）用體外產氣法與六氟化硫示蹤法兩種方法測定內蒙古白絨山羊CH4產生量，并據此建立的回歸方程為：y＝0．684x＋9．798（R2＝0．840），結果表明完全可以通過體外產氣法估測放牧絨山羊的CH4產生量。Geough等（2011）用體外產氣法定量幾種青貯飼料發酵產生的CH4產量和總產氣量，并對這些飼料的化學成分進行回歸分析以評估變量之間的關系，得出每單位飼料發酵CH4產量變異的96％是由體外有機物質消化率、中性洗滌纖維和灰分所導致的。顯然，體外產氣法作為一種相對廉價的方法，能大規模地測定CH4排放和評判抑制CH4產生的策略。
2．3體外產氣法在預測自由采食量方面的應用反芻動物的生產性能主要取決于動物所采食飼料的質和量，主要反映在動物自由采食量和飼料在瘤胃內的消化率（Getachew等，2005a）。反芻動物對粗飼料利用的主要限制是自由采食量，因此準確地預測自由采食量對現代飼料評價系統是很重要的（Yearsley等，2001）。體外產氣法可以用于預測干物質采食量，許多研究者已經報道體外產氣量與干物質采食量之間存在很強的相關性（Chenost等，1997；Pashaei等，2010）。中性洗滌纖維比整體粗飼料的發酵產氣量與自由采食量的相關性要高（82％和75％）（Getachew等，1998），所以用中性洗滌纖維的產氣量預測采食量更為準確。通過建立數學模型預測采食量也是一種很好的方式。體外產氣法導出的動態參數能較好地預測羊的采食量（Rodrigues等，2002）。Hetta等（2007）通過體外產氣法建立干樣和濕樣青貯料發酵的預測青貯料干物質采食量的模型，建議用產氣法估測采食量時用青貯干樣進行發酵。Kamalak等（2005）用體外產氣法預測成年羊對幾種牧草的干物質采食量及其消化率，結果表明所有時間點的產氣量和產氣常數與干物質采食量或干物質消化率顯著相關（P＜0．001），說明體外產氣法在預測干物質采食量和干物質消化率方面具有很好的潛力。#p#分頁標題#e#
2．4體外產氣法在評價飼料組合效應方面的應用反芻動物日糧配比時凈能或代謝能值一般是通過其所包含各種飼料原料能值求和計算得來的，這種計算基于“各種飼料原料與其他原料配合飼喂時凈能或代謝能值不變”的假設成立，但這種假設并不一定正確（Robinson等，2009）。盧德勛（2000）對組合效應做了明確的定義，日糧的組合效應實質上是指來自不同飼料源的營養性物質、非營養性物質及抗營養物質之間互作的整體效應。近幾年來反芻動物飼料組合效應的研究成為熱點。Kiran等（2007）通過產氣法評價日糧時指出飼料間的組合效應發生在發酵12h以內。Robinson等（2009）用體外產氣法測定4種飼料的兩兩組合在發酵72h內的多個時間點的組合效應以確定這些組合在相同的時間是否有相同的組合效應。Nasser等（2009）用體外產氣法研究了未處理或生物學處理的亞麻稻草和埃及車軸草之間的組合效應，當未處理和生物學處理過的亞麻稻草與干草混合發酵時均對產氣量表現出正的組合效應，因此可以通過與埃及車軸草等優質牧草混合發酵來提高亞麻稻草的降解率，而不必經過生物學處理。由此可見，體外產氣法可以用于反芻動物粗飼料組合效應的評價。
2．5體外產氣法在人和其他單胃動物營養中的應用體外產氣法多用于反芻動物研究，但是也能用于人和其他單胃動物食物營養價值的評價和后腸消化及發酵的預測（Williams等，2005）。后腸道微生物菌群對單胃動物和人的健康都有重要的影響，對微生物發酵有益的刺激是提高豬腸道健康的一個途徑（Williams等，2001）。Williams等（2001）提議用體外產氣法評價單胃動物飼料成分的發酵特性的可能性。Rink等（2011）用改進的體外產氣法研究添加甜菜堿對豬糞基質微生物的發酵活性，結果表明了改進的體外產氣法是評價碳水化合物與蛋白質組合體外發酵特性的一種經濟、快速和可靠的方法，同時也說明了飼料添加劑對豬腸道微生物發酵過程有促進作用。
3體外產氣法中產氣數學模型的應用
反芻動物對粗飼料的利用主要是靠瘤胃微生物的降解作用，掌握粗飼料降解特征，并依據降解特征來評價粗飼料品質和在反芻動物營養中飼料在瘤胃中發酵模式是非常重要的。體外產氣法可以通過詳細描述產氣動力學研究飼料不同成分的降解特性（Krishnamoorthy等，2005）。不同化學成分發酵產氣的速率能反映瘤胃微生物的生長和對飼料的利用程度。通過記錄不同時間點的產氣量，形成產氣量的動態變化曲線，分析動態數據來評價不同飼料組成的發酵程度和預測飼料消化率（隋美霞，2009）。飼料發酵的動力學參數主要與飼料中可溶、不可溶但能降解和不能降解部分的相對比例有關，可以由發酵產氣量和緩沖液緩沖短鏈脂肪酸所釋放的氣體量計算得到。體外累積產氣的測定給瘤胃液中飼料動態消化提供了有價值的信息。數學模型是描述和解釋體外產氣動力學必要的工具，隨著體外產氣法的不斷完善和發展，許多應用于體外產氣法的數學模型相繼被提出，主要包括指數模型和S型模型兩種（France等，2000）。rskova等（1979）建立了可以用體外產氣法動力學描述的指數模型：Y＝b（l－e－ct），其中，Y表示t時間點的產氣量；b表示潛在產氣量；c表示產氣速率。McDonald等（1981）在指數模型基礎上提出了與尼龍袋法估測降解率相近的新指數模型：P＝a＋b（l－e－ct），其中，P表示培養t時間點的產氣量；a表示速溶物質；b表示不溶可發酵物質；c表示b的產氣常數。邏輯斯蒂模型和岡珀茨模型都是經典生長模型，基于產氣率受流通的微生物量和底物水平影響的假說，Schofield等（1994）首次用邏輯斯蒂模型和岡珀茨模型研究體外產氣動力學；岡珀茨模型具有較好的擬合度，然而，邏輯斯蒂模型具有正的截距，預測產氣量時將產生模型所固有的誤差。米氏模型多用來描述酶學動力學，Groot等（1996）第一次用米氏模型描述體外產氣動力學；米氏模型沒有固定拐點和能表現出較寬范圍曲線形狀。一些研究者報道米氏模型能降低均方根而表現出較高的擬合度（Calabrò等，2005；Huhtanen等，2008b）。Groot等（1996）建立了“三段”模型來區分飼料中可溶、不可溶但能降解和不能降解的部分。從理論上來講，此模型能夠提供很有用的數據，但該模型的利用需要大量時間點的產氣數據支撐。Wang等（2011）在邏輯斯蒂模型的基礎上引入一個形狀參數，建立具有更靈活函數功能的邏輯斯蒂———指數模型，并通過與6個單池模型和4個雙池模型比較評價邏輯斯蒂———指數模型的性能，結果表明邏輯斯蒂———指數模型能夠代替其他模型描述產氣曲線。
4小結
體外產氣法能為飼料營養價值評價提供重要的信息，在飼料營養價值評價和發酵動力學研究方面的應用體現出了其在反芻動物營養研究中許多新領域的潛在應用價值。作為一種體外模擬技術，體外產氣法的試驗環境與動物實際生理狀況有一定的差異，結合化學成分分析法等其他方法能起到更好的效果。不同實驗室所采用的技術細節、發酵底物和產氣裝置等都不太一致，所以不同實驗室之間數據的變異性有待于進一步探討。
