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音標學習計劃范文1
【摘要】 目的 對亞洲牛帶絳蟲成蟲延伸因子-1(elongation factor 1， EF-1)基因進行克隆、表達和免疫學初步研究。方法 將亞洲牛帶絳蟲成蟲EF-1克隆到原核表達質粒pET-28a(+)中，在大腸桿菌BL-21/DE3中用異丙硫代-β-D半乳糖苷誘導表達，表達產物通過十二烷基磺酸鈉－聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)進行鑒定，用鎳離子金屬螯合劑親和層析柱進行純化，用蛋白印跡法(Western blotting)進行免疫學分析。結果 PCR、雙酶切及DNA測序結果均表明重組質粒pET-28a(+)-EF-1構建成功。重組蛋白可被感染了亞洲牛帶絳蟲患者血清和豬血清識別，表明其具有免疫反應性。結論 亞洲牛帶絳蟲成蟲EF-1基因可在原核表達系統中獲得具有免疫學活性的表達，為進一步研究該蛋白的功能奠定了基礎。
【關鍵詞】 亞洲牛帶絳蟲；延伸因子-1；基因克?。辉吮磉_
ABSTRACT: Objective To clone and express the novel gene named elongation factor 1 (EF-1) of Taenia saginata asiatica in order to analyze the immunogenicity of the recombinant protein. Methods By screening the full length cDNA plasmid library， the coding region of EF-1 was amplified with PCR， and cloned into the prokaryotic expression vector pET-28a(+) and then expressed in E.coli BL21 with IPTG induction. The recombinant protein was detected by SDS-PAGE and purified by Ni-IDA affinity chromatography， and its immunogenicity was analyzed by Western blotting. Results PCR， double enzyme digestion and DNA sequencing confirmed that the recombinant expression plasmid was successfully constructed. Western blot analysis of EF-1 recombinant protein testified that the recombinant protein could be recognized by immunizing the serum of swine and patient， therefore indicating its immunogenicity. Conclusion A novel gene coding EF-1 of Taenia saginata asiatica was cloned and expressed successfully. The purified protein of EF-1 will be of importance for further research on the biological function of the gene.
KEY WORDS: Taenia saginata asiatica; elongation factor 1(EF-1); molecular cloning; prokaryotic expression
亞洲牛帶絳蟲(Taenia saginata asiatica)是近30年來發現的一種成蟲形態與牛帶絳蟲相似，而囊尾蚴卻與豬囊尾蚴相似并以豬作為中間宿主的人體帶絳蟲。2006年我們在前期研究的基礎上進一步系統地開展對亞洲牛帶絳蟲在分類地位、分子診斷和疫苗等方面的研究［1-4］，為制定預防人體帶絳蟲病策略提供依據。本研究從亞洲牛帶絳蟲成蟲cDNA質粒文庫中篩選出一個延伸因子-1(elongation factor 1， EF-1)的同源基因，構建了pET-28a(+)-EF-1原核表達載體，并對其原核表達產物進行了初步的免疫學研究，為進一步研究其生物學功能奠定基礎。
1 材料與方法
1.1 材料
1.1.1 血清來源
感染亞洲牛帶絳蟲豬血清由貴陽醫學院寄生蟲學教研室提供，患者血清采自亞洲牛帶絳蟲流行區貴州省都勻市米秀鄉，健康人血清由中山大學熱帶病重點實驗室提供。
1.1.2 文庫、質粒、菌株
蟲體標本采自亞洲牛帶絳蟲流行區貴州省都勻市米秀鄉，亞洲牛帶絳蟲成蟲全長cDNA質粒文庫的構建、EST測序及Unigene 分析與上海聯合基因有限公司合作完成。原核表達質粒pET-28a(+)和大腸桿菌BL-21/DE3由中山醫學院病原生物學實驗室保存。
1.1.3 主要試劑和工具酶
Ex Taq酶(含dNTP)、EcoRⅠ、XhoⅠ、T4 DNA連接酶及DNA標準(DL2000)均購自大連寶生物工程公司；異丙硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)購自美國Promega公司；Ni-IDA Agarose(cat No：69670)購自美國Novagen公司；蛋白分子量標準購自立陶宛MBI公司；DNA凝膠回收試劑盒、質粒純化試劑盒購自北京賽百盛基因公司；辣根過氧化物酶標記的山羊抗豬IgG二抗、DAB(3，3二氨基聯苯胺)顯色試劑盒均購自武漢博士德有限公司；PVDF膜購自Millipore公司；TMB顯色試劑盒購自美國BD公司；SDS、丙烯酰胺、亞甲叉雙丙烯酰胺、過硫酸胺、尿素等試劑均購自上海申友生物科技公司。
1.1.4 引物合成和DNA測序
基因擴增引物和重組質粒DNA測序由Invitrogen上海生物技術有限公司合成。
1.2 方法
1.2.1 EF-1基因的識別
將獲得的亞洲牛帶絳蟲unigene進行Blastx分析，獲得編碼亞洲帶絳蟲成蟲延伸因子-1基因文庫質粒編號為T.a HC23-E9，GenBank登錄號為EF420501的同源基因；并通過瑞士生物信息學研究所的蛋白分析專家系統(ExPASY， ca.expasy.org/)預測其理化特性。
1.2.2 EF-1基因的擴增 根據已獲得的EF-1編碼序列，利用DNAClub和PCRdesign設計引物。上游引物：CTAGAATTCATGGAGTGTGCGTTGAAGTTC，帶EcoRⅠ酶切位點；下游引物：GGGCTCGAGTTACAATTTGTTGAAGGAAG，帶XhoⅠ酶切位點。以亞洲牛帶絳蟲成蟲cDNA文庫中EF-1基因的克隆質粒為模板，94 ℃預變性5 min后，熱循環參數為94 ℃ 1 min，57 ℃ 1 min，72 ℃ 1 min，共35個循環，最后72 ℃延伸10 min。PCR產物10 g/L瓊脂糖凝膠電泳回收。
1.2.3 重組原核表達質粒［pET-28a(+)-EF-1］的構建及鑒定
將PCR產物和原核表達質粒pET-28a(+)經EcoRⅠ、XhoⅠ雙酶切后回收，連接、轉化大腸桿菌BL-21/DE3感受態細胞，卡那霉素篩選陽性克隆。對陽性克隆提取質粒進行PCR、雙酶切和測序鑒定。
1.2.4 重組蛋白的表達
將確定能表達重組蛋白的單菌落接種于5 mL LB培養基中，過夜培養后1∶100轉接到1 000 mL培養基中，培養至A600約為0.6時加入IPTG至終濃度為1 mmol/L，28 ℃、250 r/min進行誘導。誘導4 h后離心收菌，用SDS-PAGE檢測蛋白質的表達。
1.2.5 菌體的裂解、重組蛋白可溶性判斷及待純化融合蛋白上清的制備
取單菌落接種于1 000 mL含卡那霉素的LB培養基中，37 ℃震蕩培養至A600為0.6時，加入IPTG使其終濃度為1 mmol/L，28 ℃震蕩培養4 h，4 ℃離心(6 000 g×10 min)，收集菌液，按文獻［5］的方法，每克菌(濕重)加入3 mL裂解緩沖液，重懸細菌沉淀，裂解液冰上超聲破碎(160 W，超聲1 s，停2 s，超聲5 min)，4 ℃ 13 000r/min離心20 min，收集上清和沉淀，分別取上清10 μL加入4×SDS上樣緩沖液和沉淀微量加1×SDS上樣緩沖液，煮沸5-10 min后行150 g/L SDS-PAGE判斷重組蛋白的可溶性。
1.2.6 尿素變性純化重組蛋白
在得到的包涵體(超聲后沉淀)中加入A液10 mL重懸，4 ℃ 12 000 r/min離心15 min，棄上清，重復2次，再用B液洗滌1次，4 ℃ 6 000 r/min離心15 min。將洗滌后的包涵體沉淀加入8 mol/L尿素(溶于基礎液)18 mL放置1 h左右，沉淀完全溶解，溶液清亮透明。采用透析法，逐步降低尿素濃度(8-6-5-4-3-2-1 mol/L PBS溶液)。
1.2.7 Western blotting檢測重組蛋白的免疫反應性
將純化的蛋白進行120 g/L SDS-PAGE電泳，使用電轉移儀于100 V冰浴轉印1.5 h，將蛋白轉移至PVDF膜上，將含預染蛋白Marker條帶剪下，PVDF膜轉入感染亞洲牛帶絳蟲豬和患者血清中(1∶100稀釋)，室溫孵育2 h，PBS洗滌3次，每次5 min。然后加入辣根過氧化物酶標記的山羊抗豬和抗人IgG(1∶2 000稀釋)，室溫孵育1 h，PBS洗滌3次，每次5 min，DAB顯色至出現目的條帶，超純水終止反應［6］。
2 結 果
2.1 生物信息學分析
該基因與細粒棘球絳蟲EF-1基因(登錄號為AAF641192.1)的氨基酸序列的一致性達87%，相似性達91%；全長988 bp，編碼區67-868，編碼269個氨基酸。理論分子質量和等電點分別是28 067.8 u和4.88［7］。
2.2 原核重組質粒的鑒定
將重組質粒進行PCR和雙酶切鑒定，產物進行10 g/L瓊脂糖凝膠電泳。結果顯示在500-1 000 bp之間有一清晰的條帶，與目的基因的大小基本相符，證明重組質粒構建成功(圖1)。
2.3 蛋白表達純化結果
將構建好的重組質粒轉化到E.Coli BL-21/DE3中表達，SDS-PAGE電泳分析結果如圖2中第4、5泳道所示，大約在34 ku左右處出現表達條帶，與目的蛋白分子量基本相符。通過破包涵體，將蛋白進行純化，結果如圖2中第6、7泳道所示，其位置與目的蛋白相符，證明目的蛋白純化成功。
2.4 Western blotting鑒定
感染亞洲牛帶絳蟲的豬血清以及感染亞洲牛帶絳蟲的患者血清對純化蛋白的Western blotting均顯示出清晰的條帶(圖3)。
3 討論
研究表明，EF-1是一種在細胞內普遍存在且大量表達的多聚體核糖體蛋白質，在基因表達、翻譯過程中起重要作用［8］。EF-1可能由α、β、γ、δ四個亞基組成，其中EF-1α屬于G蛋白家族，它和氨酰tRNA、GTP一起組成復合體，通過正確地識別mRNA上的密碼子和tRNA上的反密碼子，負責轉運氨酰tRNA 到80S核糖體，并具有低水平GTP酶的活性。EF-1β具有鳥苷酸交換活性，在EF-1α從核糖體離開并且構象由GDP形式變成GTP準備與新的AA-tRNA相互作用的過程中，需要EF-1β作為催化劑。EF-1γ常與EF-1β形成復合物，具有增加后者鳥苷酸交換的功能。至少在脊椎動物中，EF-1還有第四個亞基EF-1δ，尤其在其羧基端與EF-1β具有同源性，而在氨基端無同源性，表明它們可能具有不同的功能［9-10］。我們從亞洲牛帶絳蟲cDNA文庫中識別出了一個EF-1的全長編碼基因，其編碼的氨基酸序列與GenBank中細粒棘球絳蟲的EF-1基因 (登錄號為AAF64192.1)的氨基酸序列的一致性達87%，相似性達91%，推測其為亞洲牛帶絳蟲EF-1基因，并且含有完整的開放閱讀框，是一個全長cDNA序列。
通過生物信息學分析，該蛋白的理論分子質量為28 067.8 u，而質粒pET-28a(+)的載體標簽序列的分子質量為6 ku，所以重組蛋白的分子質量大約應為34 ku。圖2的4泳道顯示的重組蛋白條帶與預期的大小是一致的，并且條帶很濃，但從該圖的5泳道看出上清沒有表達，說明該蛋白是以包涵體的形式表達，通過尿素變性純化重組蛋白，得到了條帶很濃的純化蛋白(圖2第7泳道)。本研究為包涵體蛋白的純化積累了經驗，同時還證實了重組蛋白在純化后具有免疫反應性，獲得了具有免疫活性的重組蛋白，為進一步研究其生物學功能以及在診斷尤其是疫苗研究方面的作用奠定了基礎。
參考文獻
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音標學習計劃范文2
【關鍵詞】 非小細胞肺癌
【Abstract】 AIM: To investigate the correlation between the expression of transforming growth factor beta (TGFβ) and the angiogenesis in nonsmall cell lung cancer (NSCLC). METHODS: MVC and expression of TGFβ1 in 50 carcinomatous specimens and expression of TGFβ1 in 35 paracarcinomatous specimens from the same 50 cases with NSCLC were detected by SP immunohistochemistry. RESULTS: Active angiogenesis in NSCLC was detected and it was related with NSCLC progression and lymph node metastasis， but not related with histological types. Significant difference of the expression of TGFβ1 was found between stage Ⅰ and Ⅱ (P
【Keywords】 NSCLC; TGFβ; angiogenesis; immunohistochemistry
【摘要】 目的：研究血管生成與轉化生長因子β（TGFβ）在非小細胞肺癌（NSCLC）的表達及其相互關系. 方法：通過應用SP免疫組化方法檢測50例NSCLC組織內微血管計數（MVC）及50例NSCLC組織和35例癌旁組織中TGFβ1的表達. 結果：NSCLC癌組織中存在活躍的血管生成，血管生成與病變分期進展和淋巴結轉移有關，與組織分型無關. TGFβ1陽性表達在NSCLC的I期與II期及I期與III期之間有顯著意義（P
【關鍵詞】 非小細胞肺癌；轉化生長因子β；血管生成；免疫組織化學
0引言
腫瘤的血管生成（angiogenesis）與腫瘤的發生、發展和轉移的全過程密切相關. 肺癌細胞通過合成、分泌血管生成因子調節腫瘤組織的血管生成從而影響肺癌的發生、發展和轉移，其中的轉化生長因子β(transforming growth factorβ， TGFβ)在原發性肺癌的表達、生物學作用及其與血管生成的關系為人們所關注. 為進一步了解其在非小細胞肺癌（nonsmall cell lung cancer， NSCLC）的進展和轉移中的表達及與血管生成的關系，我們采用免疫組化的方法對TGFβ1在非小細胞肺癌及癌旁組織中的表達及其與腫瘤血管生成的關系進行了觀察.
1材料和方法
1.1材料
199801/200012經手術切除的NSCLC標本50(男35，女15)例， 年齡33～85（平均58士9）歲. 其中35例含癌旁組織. 鱗癌29例，腺癌21例（包括肺泡細胞癌3例）. TNM I期18例，II期20例，III期12例. 有肺門、縱隔淋巴結轉移32例，無淋巴結轉移18例. 兔抗人多克隆TGFβ1抗體，濃度1∶60（武漢博士德生物技術公司）；鼠抗人VIII因子相關抗原抗體，濃度1∶100（北京中山生物技術有限公司）；鏈霉菌抗生物素蛋白過氧化酶免疫組化染色超敏試劑盒（福州邁新生物技術開發公司）等.
1.2方法
石蠟標本切成5 μm厚度切片，脫水、透明、中性樹膠封片. 嚴格按照產品說明書進行SP免疫組化染色. 取已知含有待檢抗原的切片作為陽性對照，用PBS緩沖液代替第一抗體同上方法染色作為陰性對照. TGFβ1表達以每張切片不少于3個視野中的細胞內棕黃色顆粒狀染色，且著色明顯高于背景或背景不著色而細胞著色者為陽性表達. 按染色強度（未著色、弱、中、強）及染色陽性細胞的百分數（0%，1%～25%，26%~50%，>50%），分別積分為0，1，2，3，兩項分數之和為0～2分者計為染色（-），3～6分者計為染色（＋）. 以癌旁間質細胞中出現同上染色顆粒為癌旁組織陽性表達. 微血管計數（microvessel count， MVC）按照Fontanini（J Pathol， 1995;177:57）的方法，用抗FVIIIRA mAB標記血管內皮細胞，可見呈棕色或棕黃色染色的血管內皮細胞，先在低倍鏡（4×15）下觀察確定微血管數量最多的部位，再在高倍鏡（10×15）下，以與周圍細胞和結締組織成分明顯區別的任何一個棕色染色的內皮細胞、或細胞叢為一個血管，只要結構不相連，其分支結構也計作一個血管計數. 腫瘤內硬化區及與腫瘤交界處軟組織內的微血管，有厚的平滑肌及管腔直徑大于8個紅細胞的血管除外. 在高倍鏡下分別計數3個視野內取其平均值即為該例的平均MVC.
統計學處理: 數據以x±s表示，采用SPSS 11.0軟件進行統計分析，多組間均數比較采用方差分析，兩兩組間比較采用最小顯著差法；兩組間均數比較采用t檢驗，方差不齊時采用非參數檢驗；計數資料采用χ2
檢驗；等級資料采用等級資料秩和檢驗.
2結果
2.1NSCLC組織中的微血管生成NSCLC患者50例的平均MVC為（16.0±4.7）/HP，鱗癌、腺癌的平均MVC值分別為(15.5±4.2)，(17.1±5.7)/HP，二者無統計學差異（P＞0.05）；癌組織與癌旁組織比較有顯著統計學意義（P
2.2TGFβ1在NSCLC組織中的分布在50例NSCLC中30例可檢測到TGFβ1表達（Fig 2），陽性表達產物主要分布于癌細胞的胞質內（Fig 2A，B）；癌旁組織中檢測到的TGFβ1蛋白表達主要分布于間質細胞胞質內和極少數吞噬細胞胞質內（Fig 2C，D）. 癌組織TGFβ1陽性率高于癌旁組織（P
3討論
腫瘤的發生、發展和轉移伴隨著新生血管的形成［1］. 腫瘤組織內MVC反映了新生血管生成的強度. 本結果表明NSCLC中存在活躍的血管生成，與癌旁組織比較有統計學差異（P
NSCLC細胞由于其異常的生物代謝，可通過合成、分泌血管生成因子和血管生成抑制因子調節腫瘤組織的血管生成［4］. 體外實驗表明TGFβ通過對VEGF的旁分泌調節作用促進內皮細胞的長入和毛細血管腔的形成，因此促進血管內皮細胞的生長而發揮了促腫瘤血管生成作用［5］.
參考文獻
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音標學習計劃范文3
【關鍵詞】 顱腦損傷/分型;急性期;血炎性細胞因子/外周血
腦外傷患者急性期常伴有外周血炎性細胞因子表達變化[1-2],不同分型腦外傷患者上述指標表達也有明顯差異。筆者檢測了89例不同分型腦外傷患者急性期外周各血炎性細胞因子,現報告如下。
1 資料和方法
1.1 一般資料 選擇2007年1月至2009年5月在盤錦市第二人民醫院神經外科住院治療的腦外傷患者,納入標準:①發病后6 h內來本院首診。②年齡≥18歲。排除標準:①合并有其他嚴重軀體性疾病患者。②腦卒中史及再發腦外傷患者。③腦外傷后有嚴重的視覺和聽覺障礙表現。④有精神疾病或精神疾病家族史。⑤初中以下文化程度。腦外傷患者入選89例,男53例,女36例,年齡22～75,平均(45.80±7.44)歲。全部入選對象根據入院時GCS評分分為2組:輕型顱腦損傷組(GCS評分13~15分,55例),中、重型顱腦損傷組(GCS評分≤12分,34例)。
1.2 方法
1.2.1 格拉斯哥昏迷評分及血清炎性因子測定方法 ①格拉斯哥昏迷評分(GCS)包括運動、語言和睜眼3大部分指標,將3部分得分相加,即得到GCS評分,得分越低代表病情越重,評分時間在入院后6 h內進行。②血清炎性因子測定 入選患者均于入院1 d和7 d清晨空腹抽靜脈血6 ml,立即離心分離上清液,置-70℃冰箱保存,成批量統一檢測血清、TNF-α、IL-1、IL-6和IL-8含量。測定血清IL-1、IL-6和IL-8含量采用ELISA法,試劑盒由深圳晶美生物工程有限公司提供;測定TNF-α用放射免疫法,試劑盒由北京東亞生物技術研究所提供。
1.2.2 統計學方法 采用SPSS 10.0分析軟件對收集到的數據進行處理,觀察和統計數據用均數±標準差(x±s)表示,用t檢驗進行組間顯著性分析。
2 結果
不同分型腦外傷患者急性期外周血清炎性細胞因子變化比較見表1。
表1
不同分型腦外傷患者急性期外周血清炎性細胞因子變化比較(μg/L,x±s)
分組TNF-αIL-1
第1天第7天第1天第7天
輕型腦外傷組(n=55)1.06±0.09a1.03±0.10b0.17±0.02a0.26±0.04b
中、重型腦外傷組(n=34)1.15±0.121.31±0.170.24±0.030.38±0.06
作者單位:124000盤錦市第二人民醫院神經外科
分組IL-6
IL-8
第1天第7天第1天第7天
輕型腦外傷組(n=55)0.10±0.02a0.29±0.04a0.12±0.03b0.31±0.04b
中、重型腦外傷組(n=34)0.14±0.030.31±0.070.18±0.050.49±0.06
注:與中、重型腦外傷組比較:aP
3 討論
隨著汽車交通時代的提前到來和交通事故急劇增多,顱腦外傷也成了日常生活中的常見病和多發病。炎性反應是該病患者重要的病理生理過程,腦組織損傷后也有類似外周器官的免疫激活,釋放大量免疫調節物質,導致了創傷后粘附分子表達、細胞滲透、炎性表現均顯著增強。一般認為[1-2],急性顱腦損傷后外周血清炎性細胞因子變化主要來自于腫瘤壞死因子(TNF-α)和白細胞介素(IL)-1、6和8的大量增加,促進炎性細胞的聚集和激活,增強嗜中性粒細胞及單核細胞的粘附作用,導致腦血管結構和血腦屏障的破壞,從而進一步加劇了顱腦損害。本研究以血清TNF-α、IL-1、IL-6和IL-8為測試指標,選擇了89例腦外傷患者為觀察對象,并根據急性期格拉斯哥昏迷評分分組,觀察不同病情腦外傷患者住院后第1天和第7天外周各血炎性細胞因子表達,結果表明中、重型腦外傷組第1天和第7天血清TNF-α、IL-1、IL-6和IL-8濃度均明顯高于輕型顱腦損傷患者。一些文獻[3-4]解釋這些表現常與腦外傷后腦組織水腫高峰期一致,傷后1周內血清TNF-α、IL-1、IL-6和IL-8高水平表達提示腦損傷程度嚴重和預后差,而上述指標持續不降則說明繼發性腦損傷改變加劇,這些現象提示炎性細胞因子在腦外傷后繼發性腦損害經過中扮演重要角色。
鑒于不同分型腦外傷患者急性期常出現不同程外周血炎性細胞因子表達,后者還常被作為判斷腦損傷程度和預后的重要參考指標,同時抑制或減少顱腦損傷后炎性細胞因子的含量,還可作為治療中、重型顱腦損傷患者的可靠方法。因此監測顱腦損傷后患者血清中TNF-α、IL-1、IL-6和IL-8濃度指標較為重要,對于臨床診斷、預后判斷以及指導顱腦損傷各時相遏制炎性反應干預治療,提高顱腦損傷救治水平都具有十分重要的意義。
參 考 文 獻
[1] 高玉松,袁紹紀,劉正義,等.顱腦損傷程度與血清中IL-6、TNF-α含量水平的關系.中國實用醫藥,2006,1(1):18-20.
[2] 杜笥鳳,吳挺前,王豐,等.急性顱腦損傷患者IL-1β、TNF-α含量變化與預后的關系.中國臨床神經科學,2006,14(3):307-308.
音標學習計劃范文4
隨著義務教育化學課程標準（2011版）的頒布，滬教版九年級化學教材也隨之進行了改版，教材原先的編排體系、結構等發生了相應的一系列變化。這也引發了九年級化學教師研讀新課標、解讀新變化的浪潮，激起了進一步進行課堂教學改革的浪潮。細數新教材的種種變化，均與新課標的理念更為貼切，其中實驗部分尤為明顯。
一、新課標中實驗部分的變化
1. “課程性質”中增加了“加強化學實驗教學，發展學生的科學探究能力”內容，更加突出了化學的特點和實驗的地位與作用。
“課程內容”部分在“科學探究”主題中增加了“完成基礎的學生實驗”這一二級主題，不僅明確提出“教師應結合具體的教學內容和學習實際，積極創造條件，組織學生開展化學實驗活動”，而且還明確規定應安排和組織學生至少完成8項實驗。
2. “課程目標”部分的“過程與方法”目標中，將“能提出問題，進行初步的探究活動”改成了“能進行簡單的探究活動，增進對科學探究的體驗”。
“課程內容”中“有關科學探究學習的實例”部分，刪去了難度較大的活動探究案例。并刪去了部分“活動與探究建議”的內容，降低一些實驗的要求。
3. “課程內容”部分的“學習基本的實驗技能”中，增加了“化學實驗應高度關注安全問題，避免環境污染”，強化了“實驗安全”和實驗中的“環境保護”意識。
4. “課程內容”部分的“科學探究”功能得以強化，內容和目標要求更為具體和明確?！鞍l展科學探究能力”中，對5處內容在表述上進行了修訂，刪除了1處內容，使得科學探究要素的語言表述更具有科學性、針對性和實用性。
二、新教材中發生的相應變化
1. 將八項學生基本實驗編排到教材相應章節中，這是在教學實踐層面上的最大變化。這樣的編排方式將學生實驗與教學內容更為有機地結合在一起，引導學生自己動手做實驗，親身經歷、感受實驗和探究過程，這在化學教學中具有不可替代的意義和價值。
2. 部分知識或實驗活動要求下降。如原教材上冊第34頁的活動與探究中，要求根據實驗記錄木炭、鐵絲、蠟燭在氧氣中燃燒的實驗現象。而新教材中則在正文部分詳細描述了幾個實驗的原理和現象，表2-1中要求填寫的實驗現象和結論只是作為驗證出現。
再如原教材44頁對于二氧化碳的實驗室制法只有一句簡單的描述以及文字表達式，而新教材43頁中則以活動與探究為載體，提供了實驗室制備、檢驗二氧化碳的實驗裝置圖，更是在正文部分詳細描述了實驗現象、原理，提供了制備、檢驗的文字表達式；新教材中刪去了第6章“活動與探究”欄目“水、蔗糖溶液、食鹽水溶液的凝固點測定”實驗。
3. 課本多處增加了有關實驗安全和環保要求的文字。
三、關于實驗教學的建議
在新課標和新教材的變化中，有三方面與實驗相關的內容最值得引起我們關注：一是強化了學生的實驗探究；二是降低了實驗探究活動的難度，力求保證各類不同學校都有條件去開展并完成課本實驗；三是對實驗的描述和解釋更為詳細、真實并增加了人文關懷因素。
面對以上變化，如何在課堂上突出“實驗為主”的科學探究，如何在教學中提高學生的創新能力，如何貼近初中生的認知水平緊扣教學要求進行授課已經必然成為當下教學的重點。筆者認為可以從以下幾個方面予以關注。
1. 注重演示實驗與強化學生實驗并舉
隨著新課程改革的不斷深入，各校教學硬件設施與實驗室條件的有效改善，使得學生分組實驗成為可能，并且越來越被重視。因此，教師應指導學生親自動手體驗化學實驗的樂趣，培養學生基本的化學實驗技能，這也是學習化學和進行探究活動的基本保證。
2. 充分釋放實驗的探究效應，力求科學探究能力的可持續發展
以化學實驗作為探究性學習的途徑，就必須變“驗證性實驗”為“探究性實驗”，恢復化學實驗探究性的本來面貌。通過對課程標準（2011版）的學習，教師應根據實際情況，對探究要素和難度做適當的調整，讓所有學生都能參與探究，讓更多的學生獲得真實的科學探究體驗。充分發揮化學實驗的探究功能，要不斷研究開發適合于探究性學習的化學實驗，要注意從生產、生活實際中挖掘素材設計實驗方案，因為來源于生產生活實際的實驗探究性強，能極大程度的調動學生探究的主動性，使學生產生強烈的探究欲望。同時，教師要引導學生學會學科聯系與滲透，將其他學科的科學探究與化學科學探究融合起來，形成科學探究學習的合力。
3. 增強實驗教學的趣味性，創設生活化實驗情境
偉大的科學家愛因斯坦說過：“興趣是最好的老師”，初中化學教學更是如此。在日常教學中教師要通過一些有趣味性的實驗來進行探究活動，培養學生學習化學的興趣，尤其是學生能親自動手的學生實驗的趣味性，使學生養成自由開放式的追問風氣。
在校學生接觸社會的機會有限，通過實驗讓學生了解化學在實際生產生活中的作用，可以提高學生發現問題的能力和產生解決問題的迫切欲望。例如在進行關于“燃燒條件”的學習時，從實驗室酒精燈的熄滅、燃燒木柴要把木柴架空、液化氣灶及煤爐都留有通風口等學生非常熟悉的實驗情景出發，引導學生思考，發現問題。另外，實驗的生活化還體現在實驗用品上，使用一些生活中的物品，如在粉塵爆炸實驗中利用金屬易拉罐和小眼藥瓶，測pH選擇生活中的一些物質等，這樣的代用品實驗雖然不多，但它能啟發學生在生活中隨時利用生活中的物品進行一些簡單的實驗探索。
4. 滲透安全環保理念，培養良好學科習慣
音標學習計劃范文5
結果乳腺癌組COX-2、VEGF-C表達的陽性率及表達程度均高于纖維腺瘤組(P
【關鍵詞】 乳腺癌;環氧化酶-2;血管內皮生長因子C;淋巴結轉移
ABSTRACT: ObjectiveTo detect the expression of cyclooxygenase-2 (COX-2) and vascular endothelial growth factor C (VEGF-C) in breast cancer and get further understanding of the correlation between these two indexes and lymph node metastasis of breast cancer.MethodsImmunohistochemical SP method was adopted in detecting COX-2 and VEGF-C protein expression in 60 cases of invasive ductal carcinoma and 15 cases of breast fibroadenoma.ResultsThe positive rate and expression level of COX-2 and VEGF-C in breast cancer were higher than those in fibroadenoma group (P
KEY WORDS: breast cancer;cyclooxygenase-2; vascular endothelial growth factor C; lymph node metastasis
乳腺癌是全世界范圍內女性最常見的惡性腫瘤之一。經淋巴道轉移是乳腺癌最常見的轉移途徑，淋巴結受累程度是決定乳腺癌分期及選擇治療方案、判斷預后的關鍵因素之一。檢測與淋巴結轉移有關因素的表達對乳腺癌轉移和預后有一定預測價值。環氧化酶-2(cyclooxygenase-2， COX-2)是花生四烯酸合成前列腺素的限速酶，在乳腺癌、胃腸道腫瘤等多種腫瘤中呈過度表達。研究發現，COX-2可能通過上調血管內皮生長因子C(vascular endothelial growth factor C， VEGF-C)的表達而參與腫瘤新生血管的形成，利用抗VEGF及其受體的特異性單克隆抗體，可阻斷VEGF誘發的血管及淋巴管內皮細胞的信號傳導，抑制腫瘤血管、淋巴管的形成和經血液及淋巴道轉移。本研究通過檢測乳腺癌組織中COX-2及VEGF-C表達，探討其與淋巴結轉移的關系。
1材料與方法
1.1標本來源收集西安交通大學醫學院第一附屬醫院2006年3月～2007年5月間手術切除的乳腺非特異性浸潤性導管癌標本60例為研究對象，其中有腋淋巴結轉移的30例，無腋淋巴結轉移的30例;腫塊長徑≤2cm 23例，>2cm且≤5cm 30例，>5cm 7例。按WHO乳腺浸潤性導管癌病理學分級標準，Ⅰ級19例，Ⅱ級18例，Ⅲ級23例。所有患者均為女性，年齡29～70歲，平均(45.21±8.23)歲，術前均未接受放療、化療等其他治療，未合并其他系統惡性腫瘤，均行乳腺癌改良根治術，清除淋巴結數目均大于10枚。取門診乳腺纖維腺瘤手術標本15例作為對照。
1.2主要試劑鼠抗人COX-2、VEGF-C單克隆抗體及SP試劑盒均購自中山生物技術有限公司。
1.3檢測方法采用鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶免疫組織化學染色方法(SP法)，操作在室溫下進行。切片常規脫蠟脫水，微波抗原修復，3mL/L雙氧水孵育，正常山羊血清室溫孵育30min;分別滴加鼠抗人COX-2、VEGF-C單克隆抗體50μL，4℃過夜;滴加生物素標記二抗40～50μL，37℃孵育15min;滴加辣根酶標記鏈霉卵白素工作液，37℃孵育15min;DAB顯色，蘇木素復染，酒精脫水，樹膠封片。每批免疫組化染色均采用PBS稀釋液代替一抗作為陰性對照，用已知陽性的結腸組織切片作陽性對照。
1.4結果判斷結果判定標準根據SHIMIZU法[1]改良而成：顯微鏡下細胞質顯示棕黃色顆粒視為陽性著色。結合著色范圍和著色強度，對圖片進行半定量處理。①著色范圍積分：在顯微鏡下(×200)隨機選取5個視野，以陽性染色細胞占視野中所有細胞的百分比均值作為著色范圍：≤1%為0分，2%～20%為1分，21%～50%為2分，≥51%為3分。②著色強度積分：無著色為0分，淺著色為1分，深著色為2分。上述兩項積分相乘之積為范圍強度積分：≤1.9為陰性(-)，2～2.9為弱陽性(+)，3～3.9為陽性()，≥4為強陽性()。
1.5統計學處理應用SPSS16.0統計分析軟件行統計學處理。數值均以均數±標準差(±s)表示，計數資料比較使用χ2檢驗或Fisher確切概率法，計量資料使用t檢驗，采用Spearman法進行相關分析。P
2結果
2.1COX-2蛋白的表達情況
2.1.1兩組COX-2蛋白陽性表達率的比較
COX-2主要表達于乳腺癌癌細胞的胞質中，呈淡黃色或棕黃色顆粒，細胞膜及細胞核未見染色。60例乳腺癌組織中，COX-2的陽性率為73.3%(44/60)，明顯高于對照組的20.0%(3/15)，差異具有統計學意義(χ2=14.590，P
2.1.3COX-2蛋白表達程度的比較乳腺癌組COX-2蛋白表達程度明顯高于對照組(P
2.2VEGF-C蛋白的表達情況
2.2.1兩組VEGF-C蛋白陽性表達率的比較VEGF-C主要表達于乳腺癌癌細胞的胞質中，呈淡黃色或棕黃色顆粒，細胞膜及細胞核未見染色。乳腺癌組VEGF-C表達陽性率為71.7%(43/60)，明顯高于對照組的13.3%(2/15)，差異具有統計學意義(P
2.2.2VEGF-C表達與乳腺癌淋巴結轉移的關系乳腺癌淋巴結轉移組VEGF-C表達的陽性率明顯高于淋巴結無轉移組，差異有統計學意義(P
2.2.3VEGF-C蛋白表達程度的比較
乳腺癌組VEGF-C蛋白的表達程度明顯高于對照組，差異具有統計學意義(P
2.3乳腺癌中COX-2與VEGF-C蛋白聯合表達的分析
2.3.1COX-2與VEGF-C蛋白表達的關系經Spearman相關分析，乳腺癌組COX-2與VEGF-C表達呈正相關關系(r=0.582)。
2.3.2COX-2與VEGF-C聯合表達與乳腺癌淋巴結轉移的關系
COX-2及VEGF-C均陽性組淋巴轉移發生率(76.7%)明顯高于COX-2及VEGF-C均陰性組(6.7%)，差異有統計學意義(χ2=6.481，P
3討論
COX是一種膜結合型的含有血紅素的蛋白，是催化花生四烯酸(arachidonic acid， AA)轉化成為前列腺素(prostaglandin， PG)和血栓素(thromboxane， TX)的限速酶[2]。目前已識別出COX的3種同工酶：COX-1、COX-2和COX-3。COX-2是誘導型酶，正常生理狀態下在大多數組織中表達極低或不表達，但是它可以被許多刺激因素所誘導而發生高表達，因而可作為對包括腫瘤在內的多種疾病進行治療性干預的良好靶點。COX-2已被報道表達于包括胰腺癌、肺癌、乳腺癌等在內的多種惡性腫瘤中，而應用COX-2抑制劑有助于腫瘤的預防和治療，而研究COX-2與惡性腫瘤的關系具有重要的臨床意義[3]。
VEGF又名血管通透因子或血管調理素，具有促進細胞有絲分裂，防止內皮細胞凋亡、誘導血管生成、增加微血管通透性等作用。VEGF-C具有誘導淋巴管生成及血管生成的雙重作用。研究證實，多種人類腫瘤組織如乳腺癌、前列腺癌、肺癌、大腸癌等中VEGF-C表達均增高，且VEGF-C表達上調與這些腫瘤的淋巴結轉移密切相關，因而，VEGF-C已成為研究腫瘤生長及淋巴轉移的新途徑。
本實驗檢測了60例乳腺癌及15例乳腺纖維腺瘤中COX-2及VEGF-C的表達，二者在乳腺癌組織中表達率及表達程度均明顯高于乳腺纖維腺瘤(P
關于COX-2和VEGF-C的表達與乳腺癌淋巴結轉移的關系，DENKERT等[4]研究發現，乳腺癌組織中COX-2的表達與淋巴結轉移相關;亦有文獻顯示，VEGF-C通過促進淋巴管內皮細胞增生，使淋巴管數目增多，增大瘤細胞與淋巴管內皮的接觸面積與淋巴管的通透性，改變淋巴管內皮黏附特性或表面趨化因子的表達，從而促進腫瘤轉移[5]。本研究結果表明，COX-2與VEGF-C表達與乳腺癌淋巴結轉移相關，淋巴結轉移組COX-2及VEGF-C表達率明顯高于淋巴結無轉移組(P
研究表明，COX-2可通過上調VEGF-C的表達誘導淋巴管內皮細胞增殖，從而促進胚胎及腫瘤中淋巴管的生成及淋巴網絡的形成，最終導致腫瘤細胞經淋巴轉移[6]。COX-2可以通過EP1/SRC/HER-2/NEu途徑促進VEGF-C的高表達，從而促進淋巴管的形成[7]。實驗已證明，COX-2基因敲除的小鼠比野生型小鼠瘤體內血管密度低30%[8]，體外COX-2基因轉染或高表達的腫瘤細胞對凋亡的抵抗能力、血管形成因子的生成能力、轉移能力及促血管內皮細胞遷移能力均增強，而且與腫瘤生長及血管生成有關的多種因子表達都明顯增強[9]，而COX-2抑制劑則可抑制VEGF的表達，降低微血管密度[10]。
本研究結果顯示，COX-2陽性表達組中VEGF-C的表達率明顯高于COX-2陰性組;COX-2與VEGF-C在乳腺癌中的表達呈正相關，且COX-2及VEGF-C聯合表達與乳腺癌淋巴結轉移有關，即COX-2及VEGF-C均陽性組淋巴轉移發生率明顯高于COX-2及VEGF-C均陰性組。提示COX-2及VEGF-C在乳腺癌淋巴結轉移過程中可能有一定的協同作用，VEGF可能是COX-2影響淋巴結轉移的一個重要介質，COX-2通過調節VEGF而參與了促進乳腺癌的發展和轉歸。聯合檢測COX-2與VEGF-C在乳腺癌中的表達有助于判斷乳腺癌的發展狀態并制定合理的治療方案。
參考文獻
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音標學習計劃范文6
一、時間安排
1、每天的四個“1小時保障”
每天保障做一小時的語文或數學作業;
每天保障一小時的無負擔課外閱讀;
每天保障一小時的英語自學;
每天保障一小時的戶外活動或運動。
2、計劃與非計劃
如無特殊情況，每天必須完成以上計劃;
每天的計劃在得到“保障”的前提下，可靈活自由安排;
如果因外出旅游、回鄉下度假等意外安排，可臨時不予執行;
可以偶爾睡懶覺，但不要影響當日計劃的實施。
二、學習計劃
1、不參加語文、數學的培優，不請家教，相關課程自己獨立完成。
2、語文課程計劃
7月份完成暑假作業，8月中旬前檢查、改正，查漏補缺;
把自己的藏書系統再讀一遍，重點讀歷史、百科知識大全、漫畫、中外名著導讀等叢書;
假期可以自己買三本自己喜歡的任何書籍;
把以前稍顯薄弱的閱讀題的規范回答、錯別字系統復習。
3、數學課程計劃
7月份完成暑假作業，8月中旬前檢查、改正，查漏補缺;
假期完成五年級《奧數提高班》的自學，基本掌握其要領，有選擇性挑選典型題目做。
自己注意計算細心化的糾正。
4、英語課程計劃
英語學習能力和成績一般，要重點加強學習興趣和能力的培養;
把三年級和四年級的學校課本系統復習一遍，每天堅持聽劍橋英語的磁帶，時間不限;
假期把以前記得的英語單詞都記在小本子上，分類匯總;
若有興趣、有機會，可以把語音和音標接觸、鞏固一下，盡量保證發音標準。
三、活動安排
1、隨父母至少省內出去旅游一次，爭取省外旅游去一次;
2、至少去鄉下親戚家2次，體驗生活，其中爺爺家族親戚去一次，外公家族親戚去一次;
3、每天保障一小時的戶外活動或運動，散步、溜冰、找小朋友玩等，要注意安全;
4、每兩天至少幫家里做一件家務事(10分鐘以上)，洗衣服、擇菜、簡單做飯等;
5、一個人嘗試獨立在家呆1-2天;邀請同學或者小朋友在家玩若干次，并獨立招待;
6、每周玩電腦2小時左右，重點加強打字能力的提高;