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人生就像一場戲范文1
[關鍵詞]肝細胞生長因子；超長任意皮瓣；血管內皮細胞；存活率
[中圖分類號]R622[文獻標識碼]A[文章編號]1008-6455（2011）03-0430-04
Experimental study on effect of hepatocyte growth factor on the survival rate of random ultra-long skin flap on the rat back
WANG Jia-rui,LIU Da-en,NONG Qing-wen,LI Shun-tang,LIANG Kun-lan,LI Kai-tong
（Department of Burns and Plastic Surgery, the First Affiliated Hospital of Guangxi Medical University, Nanning 530021, Guangxi,China）
Abstract： ObjectiveTo investigate the angiogenesis function of hepatocyte growth factor (HGF) to random ultra-long skin flap on the rat back and its effect on the survival rate of the skin flap.MethodsMaking a 8.0cm×2.0cm animal model from a random ultra-long skin flap on the rat back, injected directly with 50ng/ml HGF solution, after 7 days observing the color of the skin flap, texture, capillary return, necrotic area, bleeding condition of the cut flap etc.; Calculating the survival area of the flap; After immunity staining, counting blood capillary with a 400 optical microscope. Making results through comparing the disparity between the before-experimental flap and that of after--experiment., And also comparing with the saline control group.ResultsComparing the survival rate (81.45%±2.74%) of the HGF skin flap with the control group (42.82%±7.03%), the differences are statistically significant (P 0.05); After experiment, the quantity of capillary of the experimental group and the control group are respectively （39.67±4.83) and (21.50±1.87), The difference between the two is of statistic significance (P
Key words: hepatocyte growth factor (HGF)；random ultra-long skin flap； vascular endothelial cells；survival
皮瓣修復是創傷（燒傷）、整形外科常用的治療手段，傳統的任意皮瓣的長寬之比為（2.0～1.5）∶1，超過此比例皮瓣遠端常常會發生壞死導致手術失敗而需要再次手術，給病人及家屬帶來痛苦和經濟負擔。目前臨床上常用丹參注射液、低分子右旋糖酐及前列腺素E1、罌粟堿等通過疏通微循環方式或增加皮瓣血流量的方式來增加皮瓣血供，但臨床應用中發現均缺乏唯一特異性。因此，預防和治療皮瓣遠端的壞死一直是皮瓣修復創面研究的熱點及有待于解決的難點。研究表明[1]肝細胞生長因子（Hepatocyte growth factor，HGF)是繼血管內皮細胞生長因子(VEGF)和堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)后第三種能夠促新生血管生長因子。Taniyama等[2]在體內外試驗研究均表明其促進血管生成的活性比前兩者更強大。但既往對HGF的研究主要集中于在腫瘤組織中的表達及缺血性疾病的血管再生的研究，經查閱國內文獻，未見有關促進皮瓣血管生成的報道。本實驗通過免疫組化染色后計算毛細血管密度、觀察皮瓣存活面積，探討HGF對大鼠背部任意皮瓣血管生成的作用及對皮瓣存活率的影響，為尋找預防和治療皮瓣遠端壞死提供一種的新思路和新方法。
1材料和方法
1.1 實驗試劑及器械：健康標準成年S-D大鼠，體重300～350g、雌雄不限（廣西醫科大動物實驗中心提供）。肝細胞生長因子（美國PeproTech公司）,鼠抗人單克隆CD+34抗體MAB-0034（福州邁新生物技術開發技術有限公司），快捷型酶標羊抗鼠/兔IgG聚合物（福州邁新生物技術開發技術有限公司），DAB顯色試劑盒（上海藍基生物科技有限公司）。顯微鏡及病理圖像分析儀DMR+Q550（德國LEICA公司），實驗在廣西醫科大學動物實驗中心及一附院完成。
1.2 實驗方法
1.2.1HGF溶液的稀釋配制：啟用前離心，用Hanks液配制成2 000ng/ml的原液后分裝于10個分裝瓶中。加10%FBS溶液及Hanks液配制成50ng/ml貼上標簽，在-20℃冰箱保存備用。
1.2.2動物模型制備及實驗分組：健康標準成年S-D大鼠20只，體重300～350g，隨機分成A、B兩組，每組10只，A組：HGF；B組：生理鹽水組。10%水合氯醛（0.35ml/100g）腹腔注射麻醉，將動物俯臥位固定，背部用硫化鈉脫毛后溫水洗凈。于大鼠背正中掀起8.0cm×2.0cm任意皮瓣，其縱軸與大鼠脊柱平行，且以之為對稱軸，蒂位于雙側髂嵴連線上。在距離蒂部3.6cm、4.8cm、6.0cm處分別作為蒂部平行的直線，與順皮瓣長軸的三等分線相交于六點，這六點為注射位點[3]。切開皮膚及皮下，于筋膜淺層掀起皮瓣，結扎基底部活躍出血點。皮瓣掀起后即刻以1ml微量注射器于皮下進針，A組皮瓣下每一注射位點給予50ng/ml HGF溶液0.5ml，B組皮瓣下每一注射位點給予生理鹽水0.5ml。4-0絲線將皮瓣原位間斷縫合。術后切口涂四環素軟膏，單籠喂養。所有手術均由同一人完成。
1.3 檢測指標
1.3.1術后大體觀察：觀察動物術后的飲食、活動及創面愈合情況。
1.3.2皮瓣大體觀察，存活率的檢測：術后7天處死大鼠，皮瓣存活區與壞死區已明確。皮瓣壞死標準：皮膚顏色變黑、組織回縮、彈性差、質地變硬、切割組織不出血。用透明紙繪出皮瓣形狀及壞死皮瓣大小，將壞死區域涂成黑色，數碼相機拍照并輸入計算機，使用病理圖像分析儀DMR+Q550計算出壞死面積。存活面積=設計面積一壞死面積，按(存活面積/壞死面積)×100%計算出存活面積比。
1.3.3組織學觀察：術后7天，切取皮膚標本(在存活區，距存活與壞死交界處0.5cm)，10%甲醛固定，常規石蠟包埋，HE染色，光鏡200倍下觀察其組織學變化、毛細血管管腔情況。
1.3.4 免疫組織化學染色進行微血管分析：10%甲醛固定，常規石蠟包埋，切片；融蠟后用純二甲苯中浸泡；不同濃度酒精梯度水化后沖洗；3% H2O2甲醇溶液封閉內源性過氧物酶的活性后沖洗；檸檬酸組織抗原修復液工作液高壓抗原修復；滴加鼠抗人單克隆CD+34抗體MAB-0034后4℃恒溫箱過夜；37℃復溫后沖洗；滴加即用型IgG抗體-HRP多聚體，室溫下孵育后沖洗；滴加新鮮配置的DBA顯色劑，控制染色后自來水沖洗，終止顯色反應；蘇木素輕度復染后1%鹽酸酒精水化，自來水沖洗；PBS沖洗返藍；梯度酒精脫水，二甲苯透明后中性樹膠封片。所有切片均按照試劑盒的要求在相同條件下染色。鏡下隨機選取4個視野，以單個血管內皮細胞或成簇的血管內皮細胞作為一個毛細血管，單個高倍鏡視野下微血管的數目，取其平均值。測出每個高倍鏡視野面積，并計算單位面積下微血管數目(個/mm2)，作為評價微血管密度的指標。
1.4 統計學處理：數據均用(x±s)表示，采用SPSS16.0統計軟件進行分析。兩組間比較采用完全隨機兩樣本均數比較t檢驗，兩組數據經正態檢驗。
2結果
2.1術后大體觀察：大鼠到實驗結束均存活，飲食、排便正常，沒有術后感染、化膿、體液滲出等不良反應。
2.2皮瓣大體觀察：存活率的檢測 A、B兩組皮瓣遠端均出現不同程度的皮膚顏色變黑、質地變硬、切割組織不出血，出現明顯的壞死跡象。A組皮瓣成活區域皮膚的顏色、彈性及質地與正常皮膚組織更相似，壞死區域面積比B組少。A、B兩組皮瓣成活面積分別為(81.45%±2.74%)、(42.82%±7.03%)，兩組間皮瓣存活率差異有統計學意義(t=16.192，P=0.000)。
2.3組織學觀察：術后7天，A、B兩組大鼠皮瓣均有毛細血管腔出現，真皮層內有大量的血管內皮細胞。A組管腔數量明顯多于B組，且管腔的結構好，管腔壁變薄富有彈性，管腔內可見紅細胞。B組雖然有大量內皮細胞存活，但呈現無序排列，紅細胞沉積較少（如圖1～3）。
2.4免疫組織化學染色分析：術前及術后7天兩組大鼠背部皮瓣CD+34免疫組織化學染色計算毛細血管的平均密度：A組分別為12.70±1.35、39.67±4.83；B組分別為12.31±1.22，21.50±1.87。實驗前A組、B組差異無統計學意義(t=0.667，P=0.513)，實驗后A組、B組差異有統計學意義(t=11.100，P=0.000)，A組實驗后與實驗前差異有統計學意(t=16.253,t=0.000)，B組實驗后與實驗前差異有統計學意義(t=13.992，t=0.000)。（如圖4～6）。
3討論
3.1 HGF是Michal Lopoulos等[4-5]在部分肝被切除后的大鼠血漿中發現能夠刺激肝細胞DNA合成的多肽因子，后經提取純化并命名的一種具有多功能的間質源性細胞因子。它是由分子量75kD的重鏈(亦稱α鏈)和分子量30kD的輕鏈(亦稱β鏈)通過二硫鍵構成的二聚體。其主要來源于肝臟枯否氏細胞、內皮細胞、成纖維細胞、貯脂細胞、肺臟內皮細胞以及惡性腫瘤細胞。
3.2 任意皮瓣移植后，其血運主要靠蒂部的不知名的血管、真皮下血管網、筋膜血管網等周圍血管束的側支供血，同時皮瓣遠端的毛細血管的快速形成對預防及治療遠端缺血也起重要的作用[6]。新生血管的形成是一個非常復雜的過程，首先血管擴張及通透性增加，后經過血管基底膜酶解，血管內皮細胞活化、增殖、遷移、血管腔形成，周邊細胞及平滑肌細胞的作用等多個步驟協調有序地完成，最后形成新生血管網。國內外在心臟缺血性動物模型的研究[7-8]均表明HGF能夠促進缺血性心肌的微小血管再生，增加內皮細胞的數量及心肌的血流量。等[9]在體外培養牛的視網膜血管內皮細胞實驗也證明HGF能夠促進血管內皮細胞的增生和移行，且呈劑量依賴關系，當加入HGF質量濃度為100ng/ml時達到最大促血管內皮細胞增生和移行效果。其機制可能為：
3.2.1 HGF通過其受體c-met直接作用于血管內皮細胞，刺激血管內皮細胞移行、增生、生長、產生蛋白酶、促進組織侵襲和機化，內皮細胞在細胞外基質間隙擴散,伸出胞漿芽并延長,使毛細血管樣的導管形成。Nakamura等[10]在于大鼠血管的平滑肌細胞和內皮細胞中的局部發現了HGF/c-Met系統。唐博[11]等有研究表明HGF通過促使血管內皮細胞超微結構的改變，線粒體和粗面內質網增多，常染色質增多。能有效地促進血管內皮細胞的有絲分裂過程，細胞周期中S期、G2／M 期細胞增多，尤其能促使細胞進入M期，這些都說明HGF是一種強的有絲分裂原。
3.2.2 HGF可通過誘導VEGF的表達而促進的血管內皮細胞的生成、生長和轉移，且二者具有協同作用。HGF可通過PI3激酶通路誘導VEGF的分泌和表達，從而間接促進血管的生成[12]。由此，羅泊濤等[13]在研究鼻咽癌中HGF和VEGF的表達意義的結果時提出了通過抑制HGF靶分子表達和活性來抑制腫瘤細胞中VEGF的表達，從而抑制腫瘤血管生成，達到抑制腫瘤生長和轉移的目的設想。
3.2.3 HGF可促進血管內皮細胞的發生、生存和再生，抑制細胞凋亡。周一軍等[14]通過HGF抑制糖基化終產物誘導在體外培養人臍靜脈內皮細胞研究結果表明：HGF可顯著降低內皮細胞凋亡率，抗凋亡的bcl-2基因表達明顯升高，而促凋亡Bax基因表達無明顯變化,caspase-3活性顯著降低。Gopalkr Ishnapilla等[15]研究發現在高糖環境下HGF能夠抑制內皮細胞的程序性死亡，促進血管內皮細胞再修復。
3.3 本實驗采用直接皮下局部注射質量濃度為50ng/ml，每只大鼠注射總量為150ng，術后7天皮瓣存活率HGF組（81.45%±2.74%）高于生理鹽水組的（42.82%±7.03%），減少皮瓣移植后遠端的壞死；免疫組化染色計算毛細血管密度HGF組（39.67±4.83）高于生理鹽水對照組（21.50±1.87），促進了皮瓣血管的生成。以上證據提示HGF可促使皮瓣血管內皮細胞再生、增生和新生血管的形成，減少皮瓣遠端的壞死，提高皮瓣的成活率。其機制可能為HGF直接作用于血管內皮細胞，刺激血管內皮細胞移行、增生、生長、產生蛋白酶、促進組織侵襲和機化，內皮細胞在細胞外基質間隙擴散,伸出胞漿芽并延長,使毛細血管樣的導管形成，具體的機制有待于進一步的研究。
3.4 本實驗結果顯示：HGF通過促進皮瓣內血管再生、新生血管形成，提高皮瓣的成存活率，具有一定的應用前景。但該研究還處在初始階段，取得的資料及經驗還不多，如HGF的劑量、效應時間、在體內易被蛋白酶分解、半衰期短、局部一次使用生物學效應不能充分發揮和遠期安全性、分化的機制及新生血管的穩定性缺乏足夠的認識，許多實際問題有待進一步研究。
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人生就像一場戲范文2
人的一生就像一場戲，你的一生掌握在你的手上，不管人生的命運是怎樣的，都是你自己在掌控你的一生。
人生就像小學生在課堂上舉手發言一樣，不論是有沒有都要去爭取，才會有結果。
你是生活上的主角，命運由你來控制的，小主角，你是怎樣掌控你的人生的，不如，給我們講講吧。
知行小學六年級：王思怡
人生就像一場戲范文3
人生就像一場戲，
戲中的你我好比小丑，
偽裝自己的心靈。
如果人生是塵埃，
那人生沒有夢想，
自己也飄忽不定，
你也成為歲月的塵埃。
假如世界是由夢想組成的，
那你的夢想又會是什么，
夢想就像天空的繁星點點，
閃爍著自己的青想，
成長中的你我他誰會一樣，
不一樣的夢想無需掩飾，
讓自己的內心發揮出光芒，
讓世界見證自己的奇跡。
沉迷在自己的情感中，
無需再為這種而苦惱，
只是你沒有看到自己的內心，
解開心房展現自我，
讓自己的心靈飛躍，
人生就像一場戲范文4
——題記
有一種生活在冰雪中的花
人們叫她雪蓮花
清純的花瓣
書寫著純潔
冰冷的環境
詮釋著她
堅強不屈的品格
她就像一朵雪蓮花，清純而高雅。雖然幼小的身心飽受命運的折磨，卻懂得在蒼天對自己的考驗中不斷完善自己，能夠在痛苦中成長。
可憐她，一次次的被命運捉弄；
可憐她，小小年紀，就挑起了沉重的擔子；
更可憐的是，14歲，她失去了她親愛的父親！
她傷心過、痛苦過、失落過。上天跟她開了一個玩笑——一個并不好笑的玩笑。整整兩天，她沒有來學校，我打電話給她時，她的聲音是沙啞的，大概是哭的。
難得她，沒有在命運面前屈服；
難得她，沒有被肩上的擔子壓倒；
更難得的是，在失去慈父的痛苦中，她以堅強的意志站了起來！
是的，她難過，但她并沒有放棄自己。她仍舊開朗，仍舊活潑，她爽朗的笑聲仍舊縈繞在同學們的耳際?？墒?，從那笑聲中，我分明聽到了辛酸，從她稚氣的眼睛中，我分明看到了成熟。我明白，她的心好苦，但是她不想讓同學們覺得自己很可憐，她不想在同學們面前掉眼淚。她長大了，稚氣未脫的身軀中有一顆已長大的心，所以，她懂得了忍，她懂得了隱藏自己的痛苦，只是一個人默默地承受......
其實，人生就好像一場戲，而每一場戲都在演繹著一種人生。生命是如此的復雜，讓人捉摸不透，卻又是如此的美麗?，F在的她，就像一朵正在綻放的雪蓮花，堅強、純潔，用微笑去迎接她花樣的年華。
有一種信念
叫做堅強
無論是在平原
還是高山
都激勵著人
勇往直前；
有一種感情
叫做感動
無論是在天堂
還是人間
都訴說著
人性的偉大；
無論是在海角
還是天涯
我都將祝福她
人生就像一場戲范文5
那是一場悲哀，沒有后來，沒有結果。
楓葉零落，再美再紅再繁茂，也終推不過點綴大地的義務；也終要和枝干分開。“落紅不是無情物，化作春泥更護花”。失去了意味著得到嗎？誰能告訴我，失去了友情又得到了什么？失去了信任又得到了什么？逢場作戲，人生便是這么悲哀。流逝的時光，不能再重新開頭；失去的真情，不能再重新開頭。那注定是一場悲哀，友情的欺騙，我無可奈何。笑看世間，坎坎坷坷，浮現的只有無奈，嘲弄。
時間可以改變一切。
四季交替，時間在變化，景色在變化，友情的質量也在發生改變。朋友間的密度發生改變，體積不變，質量自然保不住。時間沖淡了一切，過去的過去，曾經的曾經，只有埋藏在心底慢慢回憶。
時間改變了一個人，它快的讓人頭昏眼眩，變得讓人目瞪口呆，笑得讓人心煩意亂。無奈啊無奈，誰也無法阻止時間。人生又何嘗不是無奈二字！
轉眼間，時間變了，生活變了。由每日的幸福生活變成了厭倦。每日漫無目的的等待、等待。心里空蕩蕩的，恨時間，時間覺得委屈；恨友情，心里隱隱有些不忍。
人生就像一場戲范文6
初三下學期就這樣平淡地結束，這意味著我們要永遠告別陪伴我三年的學校，告別三年來朝夕相處的同學。而迎接我們的是一個未知的世界。
在以前總是聽父母說珍惜美好青春，時間不等人之類的話，心里總是不以為然，。到了現在，我才深深的體會到時光如水的含義。夜里無人，四周一片寂靜，學校的一幕幕經常會浮現在我的的眼前。錦州軍訓、五里河運動會、沃爾瑪崗位體驗、參觀海城少管所……這一切還向剛剛發生過那樣清晰。但是已經離我們很遙遠了。過去的用換不回再回來，正如張老師說的一樣，不會有人兩次同時踏入同一條河里。能留給我們的也僅僅是回憶。每當回憶起那些和我一起哭、一起笑過的同學，那一件件學校中發生的小事，再想到這些永遠也不會再回來，不禁讓我為之落淚。
人生就像一場游戲。游戲又何嘗不能組成一個人生。游戲，走出了一個童年；游戲，走出了一個未知；游戲，迎來了一個青春；游戲，迎來了一個深邃。游戲中，我們漸漸長大從“少年不知愁滋味，為賦新詞強說愁”到“而今識盡愁滋味，欲說還休，欲說還休”；從“少年不識何游戲”為尋快樂就游戲”到“難尋快樂味，為了游戲而游戲”人生就是一個偌大的游戲場？是人在游戲，還是游戲在游戲人？我們將要踏上新的征途。我們要突圍，成為游戲的主宰。
高中生或即將開始，對將要來到的高中，我常常有一種恐懼，不只是拒絕自己成長，還是對未知事物的一種擔心。
