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微生物方法學研究范文1
關鍵詞：土壤微生物生態學；核酸探針雜交；梯度凝膠電泳；PCR
土壤中存在著極其豐富的微生物種類，它們在土壤生態系統中各自行使著獨特的功能。自1953年以來，分子生物學理論和技術取得了驚人的成就，許多分子生物學研究方法和理念被應用到微生物生態學研究中，為微生物生態學研究領域注入了新的活力，極大地推動了微生物分子生態學的發展。下面介紹近年主要的幾種研究方法：
一、標記核酸探針雜交技術
1.基本原理
以核酸分子雜交技術為核心，利用探針分析DNA序列及片段長度多態性。探針是能與特定核苷酸序列發生特異性互補的已知核酸片段，它可以是長探針（100～l000bp），可以是短核苷酸片段（10～50bp），也可以是從RNA制備DNA探針，斑點印跡和狹線印跡雜交等不同的方法。
2.應用
科學家應用核酸雜交方法研究了被燃油污染及不污染的土壤提取的細菌DNA，結果表明：被污染的土壤提取的細菌DNA中各種烴的降解基因的檢出率顯著高于不污染的樣品，且定量分析結果表明污染越嚴重，這種降解基因的含量越高，因而可以用該方法作為對土壤中燃油污染程度的評價。
3.原位熒光雜交技術
（1）基本原理。FISH是以熒光標記取代同位素標記的一種新的原位雜交方法。它檢測核苷酸序列是利用熒光標記的探針在細胞內與特異的互補核苷酸序列雜交，通過激發雜交探針的熒光來檢測信號。
（2）應用及其優缺點?？梢赃M行樣品的原位雜交，應用于環境定微生物種群鑒定、種群數量分析及其特異微生物跟蹤檢測，現已成為微生物分子生態學研究中的熱點技術，在土壤微生物分子生態學領域應用廣泛。FISH技術的應用受到環境樣品微生物的生理狀態的影響，芽孢、放線菌及休眠時期的細胞的細胞膜的通透性低，影響群落中部分種屬豐度的錯誤估計。
二、基于PCR技術的研究方法
PCR是一種聚合酶鏈式反應技術，主要特點是短時間內在實驗室條件下人為地控制并特異擴增目的基因或DN段，使研究的目的基因及其環境樣品中的微量微生物基因得到無限的擴增，為這些基因和微量微生物種群的研究提供了保證。
1.PCR-RFLP方法
（1）原理。PCR-RFLP法是將PCR引物中的一條加以熒光標記，其基本原理是用PCR擴增目的DNA，擴增產物再用特異性內切酶消化切割成不同大小片段，直接在凝膠電泳上分辨。
（2）應用?，F在很多研究人員利用16SrRNA來研究土壤微生物的多樣性。該技術還可以用來監測因環境改變而引起的微生物種群的變化。
2.PCR-SSCP方法
（1）原理。日本Orita等研究發現，單鏈DN段呈復雜的空間折疊構象，這種立體結構主要是由其內部堿基配對等分子內相互作用力來維持的。當有一個堿基發生改變時，會或多或少地影響其空間構象，使構象發生改變?？臻g構象有差異的單鏈DNA分子在聚丙烯酰胺凝膠中受排阻大小不同。因此，通過非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳，可以非常敏銳地將構象上有差異的分子分離開。
（2）應用。Sabine Peters等人用該法研究群落的演替和菌種的多樣性，并同傳統的培養方法比較指出PCR-SSCP方法避免了傳統培養的費時費力以及誤差大的干擾，適合對微生物群落結構和演替的分析。
三、DNA擴增片段梯度電泳檢測技術
1.變性梯度凝膠電泳
（1）基本原理。雙鏈DNA分子在一般的聚丙烯酰胺凝膠電泳時，其遷移行為決定于其分子大小和電荷。DGGE技術在一般的聚丙烯酰胺凝膠基礎上，加入了變性劑（尿素和甲酰胺）梯度，從而能夠把同樣長度但序列不同的DN段區分開來。
（2）應用。DGGE方法是應用最早也是最常用的單堿基突變篩查方法之一，自從1993年DGGE被引入微生物學以來，該技術被廣泛地用作分子工具比較微生物群落的多樣性以及監視種群動態。PCR-DGGE用于分析華盛頓州東部4種土壤細菌群落結構和多樣性，結果表明：管理和農學實踐對細菌群落結構的影響比年降水量更大。
2.溫度梯度凝膠電泳
（1）基本原理。溫度梯度凝膠電泳技術則是利用溫度梯度變性的原理，利用了不同分子在溫度改變下構象的差別進行分離。
微生物方法學研究范文2
關鍵詞：多潘立酮片；平皿法；驗證
微生物限度檢查法分為平皿法和薄膜過濾法。當供試品具有抑菌活性時，應消除抑菌活性后，再依法檢查，常用方法為：稀釋法、離心沉淀法、薄膜過濾法、中和法。
1 實驗條件
1.2 培養基
2.1 細菌、霉菌及酵母菌計數方法合格標準
在3次獨立的平行試驗中，稀釋劑對照組的菌回收率（稀釋劑對照組的平均菌落數占菌液組的平均菌落數的百分率）應不低于70%。若試驗組的菌回收率（試驗組的平均菌落數減去供試品對照組的平均菌落數的值占菌液組的平均菌落數的百分率）均不低于70%，照該供試液制備方法和計數法測定供試品的細菌、霉菌及酵母菌數。
2.2 控制菌檢查方法合格標準
陰性菌對照組不得檢出該試驗菌。試驗組檢出試驗菌，按此供試液制備方法和控制菌檢查法進行供試品的該控制菌檢查。
2.3 菌液的制備
接種大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、白色念珠菌新鮮培養物用0.9% 無菌氯化鈉溶液制成50-100cfu/ml的菌懸液。接種黑曲霉的新鮮培養物用含0.05% （ml/ml）聚山梨酯80的0.9%無菌氯化納溶液制成50-100cfu的孢子懸液。
菌液制備后在室溫下放置，于2 小時內使用。菌液制備后在2～8℃保存，在24 小時內使用。
3 樣品制備
4.1.6實驗檢查結果：3次獨立的平行試驗中試驗組的菌回收率均大于70%，稀釋劑對照組的菌回收率也均大于70%，結果符合規定。
4.2 控制菌檢查法的驗證
控制菌檢查方法驗證用菌種：大腸埃希菌。
4.3 菌液制備：（同菌液的制備2.3）。
4.4 大腸埃希菌的驗證
4.4.1試驗組
取供試液10ml及50～100cfu大腸埃希菌1ml加入100ml膽鹽乳糖培養基中，混勻，按照《中國藥典》2010年版中國藥品檢驗標準操作規范中控制菌檢查方法驗證項下方法進行檢查。
4.4.2 陽性對照組
取50～100cfu試驗菌1ml加入100ml膽鹽乳糖培養基中，依試驗組項下方法進行大腸埃希菌檢查。
4.4.3 陰性對照組
取稀釋液10ml加入100ml膽鹽乳糖培養基中，依試驗組項下方法進行大腸埃希菌檢查。
4.4.4 實驗檢查結果：：試驗組均應能檢出該試驗菌，陽性對照組檢出試驗菌，陰性對照組無菌生長。結果符合規定。
5 結束語
試驗表明：多潘立酮片的細菌、霉菌及酵母菌的計數方法驗證結果符合規定，大腸埃希菌的方法驗證結果也符合規定。多潘立酮片的微生物限度方法學驗證結果符合規定，可以采用藥典中片劑的微生物限度方法檢查微生物限度。
參考文獻
微生物方法學研究范文3
全書分為綜述、玻璃酸的理化性質、生產工藝、分析檢驗、藥理作用和生理功能，在化妝品和保健品、給藥體系及眼科、關節疾病中的應用，預防術后粘連和對組織的修復作用以及其他共11章(66萬8千字)。
該書主要有以下幾個特點：
1 全面綜述了玻璃酸及其衍生物的研究與應用進展，內容豐富，范圍較廣，信息量大。并在“其他”一章中綜述了2003～2008年我國生化藥物研究的進展，為生化藥物的研究提供了大量的有關資料和國內外參考文獻。
2 除綜述外，其他內容包括理化性質、生產工藝、分析檢驗、藥理作用和生理功能以及應用等方面，均為編者和他們的同工作者在國內外雜志上發表的原始研究論文，因此殷實可靠。在有關疾病中的應用研究，大部分對實驗結果展開了討論，有的還進行了初步評價，對玻璃酸在有關疾病中的應用提供了理論基礎。
3 通過開創性的實驗研究，對玻璃酸的生產工藝、理化性質、分析檢驗提出了新工藝、新技術和新方法。例如：在生產工藝方面首創微生物發酵工業生產方法，國內率先研制成功眼科手術用和關節腔注射用的玻璃酸注射液；在分析檢驗方面，通過實驗建立了測定玻璃酸含量的凝膠色譜法，經過對比簡化了測定特性黏度的多點稀釋法，提出了一點法，使實驗操作簡化。經過方法學研究提出了應用較新的聯用技術――MALLS-SEC測定玻璃酸的相對分子質量(Mt)，有利于玻璃酸的質量控制和進一步應用研究。在應用方面，國內首創用于外科術后防粘連和燒傷治療等，拓寬了其應用范圍。
微生物方法學研究范文4
【摘要】
目的研究建立青皮、醋青皮飲片質量標準。方法采用高效液相色譜法測定青皮炮制品中4種成分。結果對青皮飲片的質量作了系統的研究，包括鑒別、檢查、含量測定等。結論該研究系統、規范，數據準確、可靠，方法穩定、簡單，可為國家制定青皮、醋青皮飲片質量標準提供科學依據。
【關鍵詞】 醋青皮； 橙皮苷； 辛弗林； N-甲基酪胺
青皮為橘Citrus reticulata Blanco及其栽培變種的幼果或未成熟的果皮，具有疏肝理氣、消積化滯的功效。用于治療肝氣郁滯之肝郁胸脅脹痛、乳房脹痛、寒疝疼痛、食積氣滯、胃脘脹痛及癥瘕積聚等。青皮中主要含有揮發油和黃酮類成分，其中揮發油中主要含有右旋檸檬烯、芳樟醇、月桂烯、α-蒎烯等；黃酮類成分中有橙皮苷、柚皮苷、柚皮蕓香苷等，另還含有辛弗林等成分。橙皮苷是青皮中的主要有效成分，辛弗林是青皮升壓的有效成分。目前對青皮飲片的質量標準研究未見有詳細報道。2005年版《中國藥典》僅收載了青皮藥材的薄層鑒別及高效液相法測定橙皮苷含量，但醋青皮飲片質量標準沒有規定。同時我們在按藥典法測定橙皮苷時，發現樣品中成分提取不夠完全，因此，對青皮飲片的質量作了系統的研究，并對HPLC法測定橙皮苷等進行了詳細的方法學研究，對藥典法進行了改進，以期為制定青皮、醋青皮飲片質量標準提供科學依據?，F報道如下。
1 材料
1.1 原材料購買個青皮，產地為浙江杭州、湖北宜昌、湖北及市售品；四花青皮，產地為四川、浙江、江西、福建，經鑒定為蕓香科植物橘Citrus reticulata Blanco及其栽培變種的干燥幼果或未成熟果實的果皮。
1.2 炮制輔料米醋，恒立牌鎮江米醋，鎮江市潤州區恒運醬醋廠出品，總酸度為3.5%。
1.3 炮制品制備
1.3.1 藥典法炮制品制備取青皮片或絲，以每100 kg加醋15 kg的比例拌勻，悶透，置鍋內，炒至微黃色，取出，放涼。
1.3.2 本研究新法炮制品制備（中試樣品）
凈制：將個青皮、四花青皮挑去發霉、破瓣雜質等不合格藥材。
切制：將凈四花青皮藥材放入洗藥機內，用慢速洗2 min左右，放入筐內悶潤，其間再用水沖1～3次，悶1 h后切2 mm左右絲。
個青皮：取凈個青皮放洗藥機內慢速洗滌，取出放筐內悶潤4 h左右，其間用水沖3～4次，然后切2～3 mm厚片。
醋炒青皮：將個青皮片和四花青皮絲分別稱重，加15%米醋拌勻，悶7～10 min左右。四花青皮以投藥底鍋溫140℃左右炒10 min。個青皮以投藥底鍋溫145～150℃分別炒10 min左右，出鍋，陰涼處晾曬。以上樣品均放通風處陰干。
1.4 儀器及試劑
惠普1100單泵高效液相色譜儀，Waters600單泵高效液相色譜儀。橙皮苷、辛弗林、N-甲基酪胺（中國藥品生物制品檢定所提供），硅膠G（自制），甲醇為色譜純及分析純，其他試劑均為分析純。
2 方法與結果
2.1 青皮飲片性狀研究
2.1.1 青皮藥材
個青皮：呈類球形，直徑0.5～2 cm。表面灰綠色或黑綠色，微粗糙，有細密凹下的油室，頂端有稍凸起的柱基，基部有圓形果柄痕。質硬，斷面果皮黃白色或淡黃棕色，厚1～2 mm，外緣有油室1～2列。瓣囊8～10瓣，淡棕色。氣清香，味酸、苦、辛。
四花青皮：果皮剖成4裂片，裂片長橢圓形，長4～6 cm，厚1～2 mm。外表面灰綠色或黑綠色，密生多數油室；內表面類白色或黃白色，粗糙，附黃白色或黃棕色小筋絡。質稍硬，易折斷，斷面外緣有油室1～2列。氣香，味苦、辛。
2.1.2 青皮飲片性狀
生四花青皮絲：類半圓形薄片或成規則絲狀。表面黃白色或淡黃棕色，外緣有油室1～2列。外表面灰綠色或黑綠色。氣清香，味苦、辛。
生個青皮片：個青皮飲片多為直徑0.5～2 cm環形薄片，表面黃白色，外緣有油室1～2列，可見瓤囊，周邊灰綠色或黑綠色。氣清香，味酸苦、辛。
2.1.3 醋青皮形如青皮絲或片，色澤加深，微有醋氣。
2.2 粉末顯微特征
2.2.1 青皮飲片粉末淡灰棕色。中果皮薄壁組織眾多，細胞形狀不規則，壁稍增厚，有的作連珠狀。果皮表皮細胞表面觀多角形或類方形，垂周壁增厚，氣孔長圓形，直徑20～28 μm，副衛細胞5～7個；側面觀外被角質層，靠外方的徑向壁稍厚。草酸鈣方晶存在于近表皮的薄壁細胞中，呈多面形、菱形或方形，直徑8～28 μm，長24～32 μm。橙皮苷結晶棕黃色，呈半圓形、類圓或無定形團塊。螺紋、網紋導管細小。其中個青皮果皮表皮細胞壁較薄。
2.2.2 醋青皮與生品差異在于部分表皮細胞壁呈棕色。
顯微特征圖省略。
2.3 薄層鑒別取個青皮、四花青皮生品、炮制品粉末各0.3 g（大生產10批樣品），加甲醇10 ml，超聲20 min，濾過，取濾液5 ml，濃縮至約1 ml，作為供試品溶液。另取橙皮苷對照品，加甲醇制成飽和溶液，作為對照品溶液。吸取供試品溶液2 μl，對照品溶液10 μl，點于同一用0.5％氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以醋酸乙酯甲醇水（100∶17∶13）為展開劑，展至約3 cm，取出，晾干，再以甲苯－醋酸乙酯甲酸水（20∶10∶1∶1）的上層溶液為展開劑，展至約8 cm，取出，晾干，噴以三氯化鋁試液，至紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照品相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。見圖1～2。
2.4 檢查
2.4.1 水分測定
按2000年《中國藥典》附錄IX H53頁。測定青皮生品、炮制品結果見表1～2。
2.4.2 總灰分及酸不溶性灰分測定按2000年《中國藥典》附錄IX J54頁?？偦曳譁y定、酸不溶性灰分測定結果見表1～2。
2.4.3 浸出物測定
按2000年《中國藥典》附錄XA 63頁。測定結果見表1～2。表1 個、四花青皮生品中總灰分、酸不溶性灰分、水分、浸出物含量（略）表2 醋個、四花青皮中試品中總灰分、酸不溶性灰分、水分、浸出物含量測定（略）
2.4.4 重金屬及農藥殘留測定重金屬測定，農藥殘留量測定，微生物檢查由北京譜尼理化分析測試中心測試，方法略。結果見表3。表3 醋個、四花青皮中試品中重金屬、農藥殘留量、微生物測定（略）
2.5 含量測定橙皮苷測定方法見文獻［1］；辛弗林和N-甲基酪胺測定方法見文獻［2］。
2.5.1 高效液相色譜條件色譜柱：填料為Kromasil-C18，5 μm，4.6 mm×250 mm（北京分析儀器廠填裝）；橙皮苷 流動相：甲醇-水-醋酸乙酯（35∶61∶2）；柱溫35℃；檢測波長284 nm；流速1.0 ml/min。
辛弗林N-甲基酪胺 流動相：甲醇-水-十二 烷基硫酸鈉（55∶45∶0.1）；檢測波長275 nm；流速1.0 ml/min。
2.5.2 對照品溶液的制備橙皮苷 精密稱取橙皮苷對照品2.57 mg，置于25 ml容量瓶中。精密量取3 ml置10 ml容量瓶中，50%甲醇定容，備用。
辛弗林、N甲基酪胺 取對照品適量，加30%甲醇，配成辛弗林、N-甲基酪胺濃度均為0.02 mg/ml，備用。
2.5.3 供試品溶液制備橙皮苷 ：取不同產地，不同品種青皮樣品粉末(過80目)約30 mg，精密稱定，置50 ml錐形瓶中，精密加甲醇25 ml，超聲處理30 min。放冷，過濾，精密量取續濾液3 ml，置于10 ml容量瓶中，50%甲醇稀釋至刻度，搖勻，用微膜（0.45 μm）濾過。測量不同產地青皮生品、炮制品中橙皮苷的含量。
辛弗林、N-甲基酪胺 ：取樣品約0.1 g，精密稱定。準確加30%的甲醇溶液25 ml，稱定，超聲30 min，補至原重，混勻，過濾（0.45 μm），取續濾液即得。
2.5.4 測定
分別精密吸取上述對照品溶液與供試品溶液各20 μl注入液相色譜儀，測定峰面積，計算含量，測定結果見表4～5。表4 中試青皮生飲片中各成分的含量（略）
表5 中試醋青皮中各成分的含量（略）
3 討論
青皮炮制前后在飲片性狀和粉末顯微特征方面的主要區別在于，炮制后醋青皮飲片色澤加深，呈微黃色，有焦斑，并微有醋香。炮制后醋青皮粉末顏色較生品加深，呈灰棕褐色，部分表皮細胞壁呈棕色。
四花青皮與個青皮飲片差異在于，個青皮飲片可見瓤囊（心皮室隔組織）；顯微鏡觀察粉末個青皮果皮表皮細胞壁較薄。
四個成分含量測定表明，青皮醋制品中揮發油比生品下降10%左右，其它成分，生制品含量基本變化不大。
本研究新建立的兩個成分含測方法，具簡便、準確、重復性好的特點，可為制定青皮、醋青皮質量標準提供依據。
參考文獻
微生物方法學研究范文5
【關鍵詞】 檢驗醫學;醫學實驗室;認可
檢驗醫學[1] (Laboratory Medicine)是現代實驗室科學技術與臨床在高層次上的結合,是一門多學科交叉,相互滲透的新興學科,目前正朝著高理論、高科技、高水平方向發展。在全球一體化的背景下,中國檢驗醫學必須加速前進的步伐,衛生部臨床檢驗中心主任申子瑜說,最重要的是加強管理和發展技術,管理要實現標準化和規范化。
2003年2月,ISO了ISO15189《醫學實驗室質量和能力的專用要求》,成為醫學實驗室認可的專用準則, “醫學實驗室”在ISO 15189國際標準中的定義為:以為診斷、預防、治療人體疾病或評估人體健康提供信息為目的,對來自人體的材料進行生物學、微生物學、免疫學、化學、血液免疫學、血液學、生物物理學、細胞學、病理學或其他檢驗的實驗室。
1 實驗室認可對檢驗醫學的推進作用
ISO15189對醫學實驗室的定義,從技術和管理要求兩大方面提出了要求。在技術方面,對人員、設備、設施等要素以及檢驗程序和結果報告等要點做出了規定;在管理上,描述了實驗室組織和管理、質量管理、服務意識要素等方面的要求。本院的各級醫學實驗室(臨床實驗室)也就是檢驗科都應按照ISO15189所要求的去執行。
1.1 技術方面
1.1.1 人員的變化 ISO15189對檢驗工作者有了更高的要求,檢驗工作不僅僅是接受標本發出報告這樣簡單的內容,還要對患者的診斷、治療起的重要作用,顯示出從醫學檢驗到檢驗醫學上對工作人員的要求的變化。這就要求檢驗科有高素質的人才。2003年10月,中國醫師協會檢驗醫師分會的正式成立標志著檢驗醫師的誕生。檢驗醫師是檢驗與臨床的橋梁,既懂臨床又懂檢驗的醫師才是適應現代醫學發展要求的人才。檢驗醫師會更密切接近健康和亞健康狀況人群,通過對人體營養物質代謝現場檢驗途經,對人們保健、預防、康復做出保健營養方面的指導。
1.1.2 新的儀器及新的技術的應用 當前,臨床醫學對于檢驗數據的依賴越來越強,檢驗醫學的發展是臨床快速診斷的重要保障。全實驗室自動化(total laboratory automation, TLA),大大提高了工作的效率,節省了工作時間,縮短了結果報告的時間。實驗向快速、簡便的方向發展,尤其以床邊檢測大大方便了患者。分子生物學技術(基因克隆技術、生物芯片、飛行質譜)免疫標記技術,生物傳感器,流式細胞術等技術的應用也給檢驗醫學帶來了新的方向,為學科的發展提供機遇。
1.2 管理方面
1.2.1 科室正確的組織和管理是科室良性慣性運行的重要保證 科室的管理要求科主任必須在檢驗科建設中起帶頭作用,在日常工作、學科建設、人才培養上不斷的進步,創新,而且新醫改提出把工作重點從治病救人向預防疾病轉移,這樣檢驗醫學、體外診斷的重要性就越發凸顯,這樣就對實驗室的管理提出了更高的要求,貫徹ISO15189有助于檢驗科達到這些要求。
1.2.2 質量管理 質量是科室的生命。ISO15189文件的核心是醫學實驗室全面質量管理體系,強調醫學檢驗的分析前、中、后全過程的管理。適當的標本收集與運送以保證分析前質量控制;如何從臨床那里獲得患者資料、病情變化、治療方案,保證分析后的質量評估,并對臨床的診治工作提出建議是檢驗醫學的重要內容[2]。尤其是分析前的質控,數據顯示2006 年國外醫院實驗室出現錯誤結果,分析前產生的誤差占總誤差的46%～68.2%。ISO15189 中有很好的流程管理方法,可以做好與臨床醫師、護士的溝通,減少誤差,確保結果的準確。
1.2.3 服務意識 一生從事檢驗醫學研究的法國著名學者克洛德•貝爾納[3] (Claude Bernard)說過:醫學只有依靠實驗分析這條唯一的道路,才能認識現象的確定性。第四屆中國檢驗醫師大會上也提出“檢驗與臨床結合是檢驗醫學發展的必由之路”。檢驗科不再是微不足道的輔助科室,臨床檢驗的各項數據都為臨床診斷治療提供了可靠的依據。隨著分子生物診斷的應用,越來越多的檢測成為臨床診斷的“金標準”,2009年的H1NI甲流病毒出現后,用病毒分離鑒定及核酸診斷技術成為確診甲流金標法。檢驗醫學越來越來越凸顯起在臨床上的作用,向ISO15189所描述的“以為診斷、預防、治療人體疾病或評估人體健康提供信息為目的”更好的為患者服務,同時也為健康人群的體檢做出正確的評估。
循證檢驗醫學就是按照循證醫學“以當前最好的證據為基礎”的原則,用臨床流行病學的方法學規范檢驗醫學的研究設計和文獻評價、用當前最好的檢測技術和質量控制體系對檢測結果進行嚴格的質量控制和評價,其任務是向臨床醫師提供反映患者真實情況的證據[4]。叢玉隆也提到:“組合不合理是老百姓看病難、看病貴的突出問題。所以要對實驗項目方法學研究、臨床意義探討,與臨床共同尋求、制訂最有效、最合理、最經濟的檢驗項目組合”。要發展循證檢驗醫學,檢驗工作者要更多的關注檢驗方法的評估,檢驗與臨床的溝通以及檢驗結果對健康的影響,更好的為患者和臨床服務。
2 醫學實驗室認可的必要性
在ISO/IEC 17011:2004《合格評定-對認可合格評定機構的認可機構的通用要求》中對認可給出了最新的定義:“正式表明合格評定機構具備實施特定合格評定工作的能力的第三方證明”。2005年6月,中國實驗室國家認可委員會(CNAL)消息,《醫學實驗室-質量和能力的專用要求》(ISO15189)認可活動已被納入《國際實驗室認可合作組織相互承認協議》(ILAC-MRA)中,這就是說我國的臨床實驗室如果采用ISO15189實施質量和能力的管理,并且能夠通過CNAL的認可,就表明的我國的醫學實驗室和國外的醫學實驗室在管理上處在同一水平,而且能被國際認可。
醫學實驗室認可是實驗室認可發展的必然結果,是檢驗醫學進步的標志。醫學實驗室認可也是社會發展、進步的必然趨勢,醫學實驗室的質量、能力和安全直接影響社會的穩定與和諧。醫學實驗室是疾病診斷和防治的技術平臺,其對疾病防控的意義不可估量。醫學實驗室認可是全球化進程的結果,經認可的醫學實驗室可以進行結果互認,避免了對患者的重復檢測。
3 醫學實驗室認可的發展
3.1 首個國家認可機構 1947 年,第一個國家實驗室認可機構澳大利亞國家檢測機構協會 (NATA), 英國、美國、新西蘭、中國等相繼成立了國家實驗室認可機構;1999 年 12 月, ISO 和 IEC 共同發表了 ISO/ IEC17025 《檢測和校準實驗室能力的通用要求》作為《實驗室認可準則》,包括醫學實驗室在內的各行業的實驗室開始了實驗室的認可工作;2003 年 2 月, ISO 又了 ISO15189 《醫學實驗室質量和能力的專用要求》,成為醫學實驗室認可的專用準則。
3.2 我國的概況 2006年3月31日,中國合格評定國家認可委員會(CNAS)在京成立,可以對醫學實驗室認可工作。CNAL 從 2004 年 7 月 1 日 起開始受理依據 ISO15189 的認可申請,總醫院( 301 醫院)臨床檢驗科經過 3 年多的積極準備, 2005年6月通過了由CNAL組織的專家現場評審,成為我國第一家依據ISO15189為準則申請認可的醫學實驗室。ISO15189已經轉化為我國的國家標準GB/T22576,將于2010年2月正式開始實施,ISO15189轉化為國家標準將是《醫學實驗室質量和能力的專用要求》在中國推行的一次里程碑。
4 結論
我國的醫學實驗室眾多,彼此之間的技術能力和經濟能力差距大,地區間發展不平衡。在我國現階段,實施強制認可的條件還不完全具備。但是沒有能力和條件進行認可的實驗室,也要按照ISO15189的要求去執行,促進檢驗醫學的良好發展。
參 考 文 獻
[1] 苑鳳君.檢驗醫學與臨床醫學緊密結合的重要性和必要性. 中華現代臨床醫學雜志,2004,2(8b).
[2] 叢玉隆,朱士俊. 檢驗醫學面臨的挑戰與學科建設和管理.
微生物方法學研究范文6
【關鍵詞】 廣藿香油；藿香油；綜述
廣藿香油又稱百秋李油，是從唇形科刺蕊草屬植物廣藿香Pogostemon cablin(Blanco)Benth.中提取的揮發油，是廣藿香的主要藥用成分。藿香油是從唇形科藿香屬植物(土)藿香Agastache rugosa (Fisch.et Meyer)O.ktze中提取的揮發油，是常見的天然香料。兩者來源不同，但目前在應用上有人不加以區分。這一做法是否合理？兩者是否可以混用？為此，筆者將從歷史沿革、成分研究、藥理研究和安全性研究進行簡要綜述，以期為廣藿香油及藿香油的合理運用提供依據。
1 歷史沿革
目前，廣藿香油與藿香油出現混用的狀況與歷史上廣藿香與(土)藿香的混用有很大關系，因此，有必要弄清楚中藥材發展史上廣藿香與藿香的關系。中醫處方中的藿香，均以藿香名之，更未明確規定其品種[1-2]。一般認為，廣藿香和(土)藿香是中藥材藿香的2個不同品種。自宋金元以來，本草著作中記載的藿香均為廣藿香，而明代以來一些本草著作中記載的藿香則為(土)藿香[3]。有學者則認為廣藿香與(土)藿香混用是因為地方用藥習慣不同而混淆藥名[4]。目前，廣藿香多以其揮發油或全草配合其他中草藥組成復方使用。從歷年版《中華人民共和國藥典》(以下簡稱“《藥典》”)收載情況來看，只有1977版《藥典》同時收載(土)藿香和廣藿香[5]，以后各版《藥典》均只收載廣藿香，而2005版《藥典》更是將廣藿香油列入植物油脂和提取物項下單獨收載[6]。由此可見，廣藿香才是藥用藿香的正品。實際上，藿香在我國歷史上最初并非作為藥物，而是作為香料為人們所應用[3]。直至現代，廣藿香油和藿香油作為天然香料亦受到國內外香精香料研究工作者的重視。為進一步開發廣藿香油和藿香油，必須對兩者加以深入研究。
2 成分研究
2.1 廣藿香油
對廣藿香油成分的研究分析開展較早，且隨著氣相色譜(GC)、氣-質聯用(GC-MS)技術的普及，揮發油的分析越發簡便。張氏等[7]運用GC-MS法從廣藿香揮發油中分出了55個成分，鑒定了其中24個，其中廣藿香醇含量達31.86%。王氏等[8]運用GC-MS從高產廣藿香揮發油中分出64個化學成分，并鑒定了其中31個，其中廣藿香醇含量為31.66%，廣藿香酮含量為23.58%。
隨著研究的不斷深入，研究者們分別對不同產地、不同采收期的廣藿香揮發油進行了研究。羅氏等[9]運用GC-MS聯用技術比較了不同產地、不同采收期的廣藿香揮發油的主要成分含量，并根據揮發油成分的不同，將不同產地的廣藿香分為2個化學型，即廣藿香酮型和廣藿香醇型。在廣藿香揮發油質量控制方面也有相關報道，魏氏等[10]通過GC-MS法對不同采集期石牌廣藿香及其他產地的廣藿香揮發油進行比較分析，建立了石牌廣藿香揮發油的指紋圖譜。
以上文獻及大量相關的研究表明，廣藿香油的主要成分有2個，分別是廣藿香醇(Pachouli alcohol)和廣藿香酮(Pogostone)。兩者在廣藿香揮發油中的相對含量按品種和產地不同有一定的差異。其結構式如下：
2.2 藿香油
目前國內對藿香油的研究較少，而國外對藿香屬植物的揮發油成分研究較多。Fujita等[11]對日本境內的藿香進行研究，發現在大阪、兵庫縣附近生長的藿香A.rugosa var.hypoleuca Kudo的揮發油成分主要為甲基胡椒酚(Estragole，占總量的90%)，在北海道采集的藿香A.rugosa var. methyleugenolifera Fujita揮發油的主要成分則為丁香酚甲醚(占總量的80%以上)。王氏等[12]采用GC-MS聯用技術，分別對采自湖北巴東縣、河南鄭州郊區與河南欒川縣的藿香A.rugosa揮發油進行研究，發現產自巴東及鄭州的藿香揮發油主要成分均為甲基胡椒酚，而產自欒川的藿香揮發油主要成分則為丁香酚甲醚。通過研讀國內外關于藿香揮發油研究的文獻，可以認為，絕大多數藿香揮發油的主要成分均為甲基胡椒酚。其結構式見圖3。
3 藥理研究
3.1 廣藿香油
國內對廣藿香油的藥理研究較為廣泛，趙氏等[13]研究了廣藿香油對二甲苯致小鼠耳廓腫脹的影響和對醋酸引起扭體實驗的影響，研究了廣藿香油的抗炎、鎮痛作用。有學者研究認為，藿膽丸中廣藿香油具有抗炎、抗過敏的作用[14-15]。蘇氏等[16]對11種真菌和5種細菌進行了體外抗菌實驗，結果表明，廣藿香油對黃曲霉和黑曲霉的抑制能力較差，但對新型隱球菌、球毛殼霉和短柄帚霉的生長抑制比較顯著，其最低抑菌濃度(MIC)低于0.11 mL/L，預示其具有治療艾滋病患者(AIDS)并發隱球菌感染及新型隱球菌引起的肺炎、慢性腦膜炎的前景；對能感染身體任何部位的白色念珠菌的抑制能力也比較好(MIC為0.14 mL/L)；而對小孢子菌的抑制有助于治療表皮癬菌病。
在抗細菌實驗中，除大腸桿菌外對4種細菌都較為敏感，表明廣藿香油具有較強的抗菌活性。劉氏等[17]對以廣藿香油為主要成分的藿香正氣水進行的藥理研究表明，廣藿香油對豚鼠離體十二指腸自動收縮及對組胺、乙酰膽堿(Ach)、氯化鋇所致的回腸收縮均有良好的抑制作用，也能對抗垂體后葉素引起的子宮平滑肌收縮。國外對廣藿香油的研究也散見于相關文獻。Osawa等[18]報道，廣藿香油可抑制放線桿菌屬、梭桿菌屬、噬二氧化碳細胞菌屬、?？暇寮邦悧U菌屬等多種牙周病菌。Pattnaik S等[19]發現，廣藿香油對20種細菌和12種真菌具有抑制作用。Wei A等[20]報道廣藿香油中的百秋李醇具有顯著的抗氧化活性。Yang Y等[21]研究發現廣藿香油具有止吐作用。
3.2 藿香油
國內比較少見對藿香油的單獨研究。Shin S等[22]對藿香油及其中的主要成分Estragole進行了相關研究，發現藿香油及甲基胡椒酚都對真菌表現出明顯的抑制作用；另一項研究則發現，甲基胡椒酚對念珠菌有抑制作用。Friedman M等[23]在一項抗菌物質篩選實驗中發現，甲基胡椒酚對空腸彎曲桿菌、大腸桿菌、單核細胞增多性李司忒(氏)菌和沙門氏菌都表現出明顯的抑制作用。
3.3 廣藿香油與藿香油抗菌作用比較
楊氏等[24-25]通過研究廣藿香油與藿香油對16種皮膚細菌的體外抑制作用發現，藿香油抗菌作用很弱，干燥棒桿菌、固著微球菌和莫拉氏菌3種最敏感的菌種在油濃度高達1500 μL/L時仍表現出與對照組細菌幾乎相同的生長速度和菌落特征；而廣藿香油在藥物培養基小于400 μL/L時仍可完全抑制16種供試菌當中的13種。結果更顯示，廣藿香揮發油在某種濃度下能抑制異源或負責菌的生長繁殖，而不破壞正常微生物的生態平衡。在另一項研究廣藿香油與藿香油對12種皮膚癬菌和條件致病真菌的體外抑制作用中，發現2種油都可以選擇性地完全抑制皮膚癬菌的生長繁殖，而對條件致病菌的生長繁殖幾乎沒有影響，其中廣藿香油表現出對皮膚癬菌很好的特異選擇性抑制作用(MIC為50～400 μL/L)。而藿香油對皮膚癬菌抑制作用較弱(MIC為700～1000 μL/L)。
4 安全性研究
4.1 廣藿香油安全性研究
迄今尚未發現廣藿香油或其主要成分廣藿香酮及廣藿香醇的相關安全性研究報道。2005版《藥典》并未明確規定其用量，只是要求按具體處方量添加[7]。在常用的藿香正氣制劑中，包括藿香正氣口服液、藿香正氣水、藿香正氣軟膠囊，在2005版《藥典》中均以廣藿香油替代[26]。
4.2 藿香油安全性研究
目前，國內關于藿香油安全性研究的報道多為翻譯或參考國外資料。國外報道較多的主要為藿香油中主要成分Estragole的安全性數據。在致癌性研究中顯示，長期飼服甲基胡椒酚或皮下注射、腹腔內注射甲基胡椒酚均證實其具有致癌性，且多為肝臟腫瘤；研究還發現，甲基胡椒酚的1-羥基代謝物具有更強的致肝癌性[27-28]。在致突變性研究中顯示，Ames試驗中對大多數菌株均有致突變性[29-30]。其他研究發現，甲基胡椒酚的代謝產物(1-羥基甲基胡椒酚等)可在體內及體外形成肝臟DNA加合物[31-32]。在藥物動力學及藥物代謝學研究中則發現，甲基胡椒酚的代謝途徑有2種：一種是以CO2為最終代謝產物排泄；另一種是以1-羥基甲基胡椒酚為最終代謝產物排泄[33-34]。兩種代謝途徑同時存在，并與給藥劑量有關。
5 小結
上述研究表明，廣藿香油與藿香油來源于同科不同屬植物的提取物，化學成分和藥理作用明顯不一樣。廣藿香油主要含廣藿香醇及廣藿香酮(總量占40%以上)，不含甲基胡椒酚，具有抗炎、抗過敏、提高免疫、抗菌、鎮痛、抗痙攣、抗氧化、止吐等作用，且無不良反應報道，在中成藥中大量應用；藿香油主要含甲基胡椒酚(占80%以上)，不含廣藿香醇及廣藿香酮，雖有抗菌作用，但遜于廣藿香油；具有抗菌、解痙、鎮靜及升高白細胞的作用，但存在致癌和致突變的安全性問題，目前未見在藥品中應用。特別值得關注的是，廣藿香和藿香在中藥處方中曾有混用的歷史，現在仍在混用；而廣藿香油及藿香油應用范圍涵蓋了藥品、食品、香料等領域，在使用過程中必須對兩者的安全性加以考慮，區分運用。目前，國內常用廣藿香油替代廣藿香和藿香用于中成藥生產，而非用藿香油替代廣藿香和藿香，正是基于藥效和安全性的考慮。
參考文獻
[1] 黃兆勝.中藥學[M].北京：人民衛生出版社，2004.187－188.
[2] 謝 鳴.方劑學[M].北京：人民衛生出版社，2004.368－370.
[3] 郝近大，謝宗萬.藿香藥用品種的延續與發展[J].中藥材，1994，(8)：40－41.
[4] 張廣秋.對中藥名稱規范化問題的探討[J].天津藥學，2003，(4)：35－36.
[5] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京：人民衛生出版社，1977.65，666.
[6] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[M].北京：化學工業出版社，2005.272.
[7] 張 強，李章萬，朱江粵.廣藿香揮發油成分的分析[J].華西藥學雜志， 1996，(4)：249－250.
[8] 王俊華，符 紅.廣藿香揮發油化學成分氣質聯用技術分析[J].時珍國醫國藥，2000，(7)：579－580.
[9] 羅集鵬，劉玉萍，馮毅凡，等.廣藿香的兩個化學型及產地與采收期對其揮發油成分的影響[J].藥學學報，2003，(4)：307－310.
[10] 魏 剛，李 薇，徐鴻華.GC-MS建立石牌廣藿香揮發油指紋圖譜方法學研究[J].中成藥，2003，(2)：91－95.
[11] Fujita SH， Fujita Y. Miscellaneous contributions to the essential oil of the plants from various territories XXXIII： Essential oil of Agastache rugosa O. Kuntze[J]. Yakugaku Zasshi， 1973，93(12)：1679－1681.
[12] 王冬梅，楊得坡，王發松，等.藿香揮發油化學成分的分析及其化學生態型的探討[J].中草藥，2005，(9)：1302－1303.
[13] 趙書策，賈 強，廖富林.廣藿香提取物的抗炎、鎮痛藥理研究[J].中成藥，2007，29(2)：285－287.
[14] 冼彥芳，索 娟，黃曉丹，等.精制藿膽方及拆方抗炎藥理作用研究[J].中國實驗方劑學雜志，2007，13(4)：54－56.
[15] 索 娟，冼彥芳，黃曉丹，等.精制藿膽方抗過敏藥理作用研究[J].中國實驗方劑學雜志，2007，13(9)：47－49.
[16] 蘇鏡娛.廣藿香精油化學成分分析與抗菌活性研究(Ⅰ)[J].中草藥， 2001，32(3)：204－205.
[17] 劉中煜，袁美娟，聶正慧，等.藿香正氣水解痙、鎮痛和抗菌作用實驗觀察[J].中草藥，1984，15(12)：15－18.
[18] Osawa K， Matsumoto T， Maruyama T， et al. Studies of the antibacterial activity of plant extracts and their constituents against periodontopathic bacteria[J]. Bull Tokyo Dent Coll，1990，
31(1)：17－21.
[19] Pattnaik S， Subramanyam VR， Kole C. Antibacterial and antifungal activity of ten essential oils in vitro[J]. Microbios，1996，86(349)：237－246.
[20] Wei A， Shibamoto T. Antioxidant activities and volatile constituents of various essential oils[J]. J Agric Food Chem，
2007，55(5)：1737－1742.
[21] Yang Y， Kinoshita K， Koyama K， et al. Anti-emetic principles of Pogostemon cablin(Blanco) Benth[J]. Phytomedicine，1999， 6(2)：89－93.
[22] Shin S， Pyun MS. Anti-Candida effects of estragole in combination with ketoconazole or amphotericin B[J]. Phytother Res，2004，18(10)：827－830.
[23] Friedman M， Henika PR， Mandrell RE. Bactericidal activities of plant essential oils and some of their isolated constituents against Campylobacter jejuni， Escherichia coli， Listeria monocytogenes， and Salmonella enterica[J]. Food Prot，2002，65(10)：1545－1560.
[24] 楊得坡，ChaumontJean-Pierre，MilletJolle.藿香和廣藿香揮發油對皮膚癬菌和條件致病真菌的抑制作用[J].中國藥學雜志，2000，(1)：9－11.
[25] 楊得坡，Jean-Pierre Chaumont，Joёlle Millet.藿香和廣藿香揮發油的抗皮膚細菌活性與化學成分的研究[J].微生物學雜志，1998，(4)：1－4，16.
[26] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(一部)[S].北京：化學工業出版社，2005.660－663.
[27] Drinkwater NR， Miller EC， Miller JA， et al. Hepatocarcinogenicity of estragole (1-allyl-4-methoxybenzene) and 1'-hydroxyestragole in the mouse and mutagenicity of 1'-acetoxyestragole in bacteria[J]. J Natl Cancer Inst，1976，57(6)：1323－1331.
[28] Miller EC， Swanson AB， Phillips DH， et al. Structure-activity studies of the carcinogenicities in the mouse and rat of some naturally occurring and synthetic alkenylbenzene derivatives related to safrole and estragole[J]. Cancer Res，1983，43(3)：1124－1134.
[29] To LP， Hunt TP， Andersen ME. Mutagenicity of trans-anethole， estragole， eugenol， and safrole in the Ames Salmonella typhimurium assay[J]. Bull Environ Contam Toxicol，1982，28(6)：647－654.
[30] Swanson AB， Chambliss DD. The mutagenicities of safrole， estragole， eugenol， trans-anethole， and some of their known or possible metabolites for Salmonella typhimurium mutants[J]. Mutat Res，1979，60(2)：143－153.
[31] Wiseman RW， Miller EC， Miller JA， et al. Structure-activity studies of the hepatocarcinogenicities of alkenylbenzene derivatives related to estragole and safrole on administration to preweanling male C57BL/6J x C3H/HeJ F1 mice[J]. Cancer Res， 1987，47(9)：2275－2283.
[32] Wiseman RW， Fennell TR， Miller JA， et al. Further characterization of the DNA adducts formed by electrophilic esters of the hepatocarcinogens 1'-hydroxysafrole and 1’- hydroxyestragole in vitro and in mouse liver in vivo， including new adducts at C-8 and N-7 of guanine residues[J]. Cancer Res， 1985，45(7)：3096－3105.
[33] Anthony A， Caldwell J， Hutt AJ， et al. Metabolism of estragole in rat and mouse and influence of dose size on excretion of the proximate carcinogen 1'-hydroxyestragole[J]. Food Chem Toxicol，
