前言：中文期刊網精心挑選了藥品微生物研究范文供你參考和學習，希望我們的參考范文能激發你的文章創作靈感，歡迎閱讀。
藥品微生物研究范文1
在藥品微生物限度檢驗工作中，由于受到藥物自身性質、操作環境的影響，因此誤差幾乎是不可避免的，其中單因素占百分之二十五，多因素占百分之七十五，因此加強檢驗環境管理，降低`差率的發生，是相關研究人員應該考慮的問題，本文將立足于藥品微生物限度檢驗的要求，深入研究影響藥品微生物限度檢驗的因素，以供相關從業人員借鑒學習。
1 培養基的影響與控制方法
培養基是藥品微生物限度檢驗的重要環節，因此會對藥品微生物限度檢驗結果產生一定的影響，如果培養基的質量不穩定，或者沒有按照使用條件進行配制與存放，都會導致藥品微生物限度檢驗的誤差，因此，為了確保藥品微生物限度檢驗的準確性，需要加強培養基的質量檢驗，在靈敏性與有效性上評估培養基的使用效果。
1.1 已知菌對照試驗
使用已知菌對照試驗，是對初購的培養基進行質量檢驗的重要方式，一方面，已知菌對照試驗，能夠直觀的檢測出培養基的靈敏度。其次，已知菌對照試驗的使用靈活，可以檢驗要求，使用不同的已知菌進行對照試驗，從而通過培養基的反應結果，測定培養基是否適合進行藥品微生物限度檢驗，減少藥品微生物限度檢驗誤差的產生。[1]
1.2 酸堿度測定
酸堿度測定也是減少培養基不良影響的重要方法，藥品微生物限度檢驗的項目非常多，這是因為不同的細菌適宜生長的環境有所差異，因此為了確保培養基能夠滿足藥品微生物限度檢驗的要求，必須對其進行酸堿度測驗，可以使用鹽酸來測驗培養基內的PH值，如果培養基的PH值顯示弱堿性，需要使用氫氧化鈉進行調節，才能確保培養基的使用效果。此外，相關工作人員在調節過程中，需要耐心的操作，逐漸加氫氧化鈉，以防止過量的情況發生。在進行培養基實驗之前，相關研究人員也應該測試培養基的酸堿度，以防培養基內的酸堿度低于藥品微生物限度檢驗最終要求。
1.3 制備后應該及時滅菌
此外，為了提高藥品微生物限度檢驗的準確性，相關研究人員應該按照相關規定，對培養基進行滅菌工作，以免影響到后續的微生物限度檢驗工作。許多研究人員為了方便，對所有的實驗對象都進行低溫處理，從而達到滅菌的效果，雖然低溫滅菌是一種高效的滅菌方式，并且在大多數的實驗中都適用，但還是由部分細菌在低溫時還能存活，因此研究人員應該在滅菌之前，先增加培養基內的酸堿度，然后用供試品稀釋，確保培養基內的細菌都能受損或者致死，在實驗之前，相關工作人員也應該使用高倍顯示鏡，來觀察培養基內的情況，確保培養基內的環境適合藥品微生物限度檢驗。[2]
2 設備的影響以及控制方法
在藥品微生物限度檢驗過程中，使用到的設備較多，包括溫度計、玻璃容器、培養箱、容量儀器，因此加強設備的管理，是減少藥品微生物限度檢驗的重要途徑。
2.1 計數誤差
計數誤差是藥品微生物限度檢驗誤差最常見的形式，造成這種現象，有主觀原因，也有客觀原因。主觀原因是相關研究人員的疏忽，或者違規操作造成的，在細菌鑒別的過程中，需要按照一定的流程進行操作，并且為確保實驗環境的純凈，需要事先對玻璃容器與容量容器進行消毒處理，確保容器內沒有抑菌物質，由于專業素質的不足，經常會發生實驗流程上的失誤，從而導致計量誤差，對藥品微生物限度檢驗結果產生了不良影響?？陀^原因是因為菌落生長小而密集，這在一定程度上給計數工作提出了一定的難度，同時，隨著培養時間的延長，菌落還會在邊緣生長，這些客觀原因都會導致計數誤差的產生。[3]
2.2 控制方法
為了方便微生物菌落的鑒別，可以通過增加稀釋液的方式，這樣不僅有利于菌落的計數，還有利于菌落的對照試驗。對于一些難以計數的菌落，相關研究人員可以適當的延長培養時間，從而增加細菌菌落，為了防止菌落沿著培養基的邊緣生長，可以加入TTC營養瓊脂，從而保證菌落與培養皿中的顆粒、沉淀物分開鑒別。
3 無菌室方面造成的誤差
藥品微生物限度檢驗通常在無菌室進行，一方面，是為了減少不可控因素的影響，提高藥品微生物限度檢驗的準確性。另一方面，無菌室內部的潔凈情況，還會直接影響到滅菌消毒的有效性，因此加強無菌室的檢查，能夠有效的減少藥品微生物限度檢驗中的誤差。
3.1 定期檢查無菌室的空氣質量是否達標
為了保證無菌室的潔凈性，通常都采用臭氧消毒器來消毒，雖然臭氧消毒器具有良好的消毒效果，但還是難以保證無菌室的空氣狀況，因此相關工作人員應該定期檢查無菌室的空氣情況。[4]
3.2 嚴格無菌操作
在藥品微生物限度檢驗操作之前，相關研究人員應該使用瓊脂培養基放置在工作面的周圍，并觀察培養基內的情況，如果培養基顯示無菌室的空氣質量不達標，應該立即停止實驗，待無菌室內部的情況滿足藥品微生物限度檢驗的要求。
4 結束語
綜上所述，要減少藥品微生物限度檢驗中的誤差，需要從培養基、設備、無菌室三個方面入手，并采取有效的控制方法，使藥品微生物限度檢驗安全、有序的進行。
參考文獻
[1]陳偉盛，關倩明，朱榮峰，等.藥品微生物限度檢查中微生物污染的鑒定和溯源分析[J].藥物分析雜志，2014，01：58-63.
[2]廖曉玲，張貞良，范積平，等.“《醫療機構制劑許可證》驗收標準”有關條款難點探討[J].中國藥房，2016，13：964-966.
[3]張新妹，胡昌勤，王淑蘭.歐洲藥典附錄2.6.12非無菌產品的微生物限度檢查之一（有活力的需氧菌總數的計數）[J].中國藥品標準，20
藥品微生物研究范文2
建立生物風險評估體系
王國治介紹說,病原微生物的生物制品生產與質控,其潛在的風險涉及到菌毒種的保藏運輸、生產過程、生產設備設施、動物效力評價、廢棄物處理以及生產人員的素質等多方面。在2009年新版GMP中盡管增加了質量風險管理與評估的內容,但其主要是針對制品質量風險進行評估,而忽略了生物安全的風險管理;現有的GMP條款對部分內容做了具體的規定,但缺乏系統性,如:在從業人員疫苗接種條款中要求“根據生產制品的生物安全評估結果,應對生產、維修、檢驗、動物飼養的操作人員、管理人員接種相應的疫苗并定期體檢”,但在生物制品GMP附錄中并無相應的生物安全評估規定。缺少生物安全風險評估,就無法分析可能存在的風險及風險產生的原因,因此就無法提出風險防范措施來保證安全生產。
王國治建議建立生物風險評估體系,評估內容至少應對病原微生物的生物制品生產與質控的潛在風險所涉及到的菌毒種的保藏運輸、生產過程、生產設備設施、動物效力評價、廢棄物處理等方面進行風險識別,并分析其產生原因,提出防范措施以及風險再評價。
明確病原微生物分類標準
2009年新版GMP未對病原微生物的分類進行明確規定,在現行GMP實施中,生物制品菌毒種的分類管理依然采用衛生部早期頒發的《中國醫學微生物菌種保藏管理方法》,將生物制品、菌苗、疫苗生產用各種減毒、弱毒菌種,分類為低致病性的四類菌毒種,而2010年版《中國藥典》參考衛生部的《人間病原微生物名錄》的分類標準,重新對生物制品生產用菌(毒)種進行了分類,目前,已將生物制品生產菌株中的結核桿菌、肉毒梭菌、腎綜合征出血熱病毒、森林腦炎病毒歸入第二類,其余滅活疫苗、組分疫苗、類毒素生產用菌(毒)種歸為第三類,已經批準的活疫苗與微生態活菌制劑的生產菌株為第四類。王國治認為,這意味著原生產滅活疫苗用的菌毒種的危害級別已經提高,其防護要求也應做相應提高。因而建議進一步對GMP內容進行修訂,明確病原微生物分類標準。
建立生物安全管理體系
王國治表示,GMP是藥品生產企業對藥品質量和生產進行控制和管理的基本要求,目的是確保持續、穩定地生產出適用于預定用途、符合注冊批準或規定要求和質量標準的藥品,并最大限度地減少藥品生產過程中污染、交叉污染以及混淆、差錯的風險,但它是以產品質量為中心,對涉及病原微生物生產與質量控制中的生物安全問題未能得以充分體現,其管理體系與文件制定未與國內相關生物安全法規標準相銜接,缺少生物安全的相關規定,如:涉及病原微生物生產企業的生物安全管理體系、針對不同病原微生物生產過程中的個人防護、在操作細則中明確實驗操作與使用儀器設備風險步驟與預防措施、意外事故的預案、涉及生物安全的演練、防盜防竊防丟失等生物安保措施、生物安全手冊的制定等內容。
“生產企業中涉及病原微生物的從業人員以生產與質量控制的專業人員為主,其對生物安全的知識了解較少,目前的生物安全培訓多局限于個人防護,隨著國家對生物安全的重視與生物安全研究的不斷深入,生物安全管理理念已寫入國家新生物安全的標準,并已得到實施?！蓖鯂握J為,“若從業人員不在原有普及的基礎上進行更新,將無法適應新標準的要求?！?/p>
藥品微生物研究范文3
［關鍵詞］生物測定；藥理；藥品
藥品是特殊商品，藥品質量直接關系到用藥者的安全和療效。藥品檢測方法和檢測水平隨著制藥工業的發展不斷改進提高。由于現代科學技術的發展，相鄰學科之間的相互滲透，分析化學的發展經歷了三次巨大的變革，使分析化學發展成為以儀器分析為主的現代分析化學。面對生命科學中復雜的分離分析任務，發展了色譜分析方法。結構分析、價態分析、晶體分析等方面的研究又促進了光譜分析的發展。以計算機應用為主要標志的信息時代的來臨，儀器分析迅速發展，為藥物檢測提供各種非常靈敏、準確而快速的分析方法［1］。生物測定受到了極大的挑戰，其發展前景令我們從事藥品生物測定工作者所關注。
1藥品生物的特點與業務范圍
1.1藥品生物測定的定義與特點藥品生物測定（簡稱生測）是利用藥品（或藥品中的有害雜質）對生物（或離體器官及組織）所引起的反應來測定藥品的含量或安全性的一種方法。
生測法的優點是測定的結果與醫療要求基本一致，能直接反映藥品的效果或毒副作用，這是其他物理學方法或化學方法所不能達到的。因此，目前各國藥典仍大都采用這一方法。
生測法的缺點是檢驗周期長，微生物有生長繁殖過程，動物有生理代謝過程，觀察分析時間一般在2~7天，有些試驗會更長。影響因素多，有生物差異性，也有系統操作誤差和環境條件等造成的影響。用品用具、動物質量、儀器設備都會對結果產生影響［2］。所以，以生測主檢的品種在中國藥典中逐版減少。
1.2藥品生物測定的業務范圍中國藥典是法定的藥品標準，它將藥品質量控制項目歸為四類：性狀、鑒別、檢查和含量。生測的業務主要涉及到中西藥品的檢查類和含量類。
其中作為藥品安全性檢查項目最多，包括：無菌、熱原、細菌內毒素、異常毒性、安全試驗、急性全身毒性、過敏物質、刺激性、溶血、降壓物質、微生物限度等。含量（或效價）測定包括：抗生素微生物檢定法，胰島素、硫酸魚精蛋白、縮宮素、卵泡刺激素、黃體生成素、升壓素等生物檢定法。
2藥品生物測定的現狀
由于現代化檢測儀器的廣泛應用，藥品生物測定的品種和范圍，方法和要求，也發生了很大變化。
2.1品種和范圍的變化抗生素的含量測定，最初大部分抗生素用微生物法測定含量。隨著制藥工業發展，提純方法不斷改進，有效組分更加明確，許多品種檢測方法不斷改為儀器測定和化學測定。例如：2000年版中國藥典收載約219個抗生素品種，其中有15個原料藥及其制劑從1995年版的化學法和微生物法改為高效液相色譜法（簡稱HPLC），使該法達到97種，微生物法僅有24個，其中9個品種是新增加的。有人預計本世紀初，HPLC法會發展成為中國藥典使用頻率最高的一種儀器分析法［3］。規定取消抗生素過期檢驗，抗生素微生物效價測定的業務工作量更是明顯減少。
藥品注射劑的熱源檢查。1942年美國首先將家兔法收入藥典，相繼世界各國藥典均規定用該法。中國藥典從1953年開始收載。自1973年以來，鱟試劑被證明是一種檢測細菌內毒素（熱原）存在的靈敏試劑。用鱟試劑要比家兔試驗迅速、經濟，所需樣品量少，操作過程工作量小，每天可進行許多樣品檢測。1980年美國藥典20版首載“細菌內毒素檢查法”，1985年USP21版收載5種注射用水及40種放射性藥品。1991年11月執行的USP22版第五增補版公布了185種藥品刪除家兔法，用細菌內毒素檢查法代替。1995年USP23版注射劑的熱源項幾乎都被細菌內毒素檢查法代替［4］。
我國從20世紀70年代開始研究制備鱟試劑，1988年衛生部頒布細菌內毒素檢查法，1993年中國藥典第二增補本收載該法，但未涉及任何品種，1995年中國藥典二部正式收載，并規定了注射用水、氯化鈉注射液和二十多種放射性藥品并刪除熱源檢查，以內毒素代替。2000年版中國藥典進一步擴大到68種。預計2005年版中國藥典還要繼續增加品種，熱源項都將被內毒素代替。動物試驗改為生化試驗。
2.2實驗動物生測離不開實驗動物，在實驗中，為了減少生物差異，提高動物反應敏感性，以最少的動物達到最滿意的結果。國家非常重視實驗動物，1988年國務院頒布了《實驗動物管理條件》，對實驗動物的飼管、管理、使用等做出了明確規定，實行達標認證制度，嚴格管理。按微生物控制程度把實驗動物分為四級：普通動物、清潔動物、無特殊病原體動物和無菌動物［5］。一般動物實驗必須達到清潔動物標準，種系清楚，不雜亂，無規定指出的疾病。動物級別越高，飼養管理條件越嚴，設施投資越大。實驗動物是實驗研究的活試劑，既要有純度，也要有數量，背景明確，來源清楚，符合要求才能使用。（隨著藥品純度的提高，凡是有準確的化學和物理方法或細胞學方法能取代動物實驗，進行藥品和生物制品質量檢測，應盡量采用，以減少動物的使用。）
2.3藥品生物測定在方法上的改進與變化為了縮短操作時間，減少實驗誤差，近年來生測方面也研制并投入使用了部分儀器設備，如：抗生素抑菌圈測定儀、微機熱原測溫儀、集菌儀、細菌數測定儀等，減輕了工作強度，提高了工作效率，檢測結果更加準確可靠。
3藥品生物測定的發展趨勢
生測作為經典方法沿用至今，表明它有其他方法不能替代的特點，在藥品檢驗中發揮了重要作用。不少老產品改為其他方法控制質量，也會不斷有新產品離不開生測法，我們應當充分發揮它的優點，盡量克服它的不足，開拓新的業務范圍。
3.1微生物限度檢查工作量大為了控制藥品染菌限度，1975年美國藥典19版首載微生物限度檢查，1980年英國藥典收載，我國在1990年由衛生部頒布了藥品衛生標準及檢驗方法，1995年版中國藥典正式收載［6］。2000年版中國藥典按劑型規定了微生物限度標準，執行范圍除注射劑和中藥飲片外幾乎包括中西藥的所有制劑和原料。該項檢查成為藥典品種適用最多的檢查
項目，占當前地市級藥品檢驗所生測室業務工作量的80%以上。在這項檢查中，有大量的業務技術需要我們進一步研究，改進試驗條件，使數據準確，探討快速檢測的新方法。藥包材的檢查，國家藥監局已經試行標準，業務范圍將更加擴大，這是我們進一步做好工作，努力探討研究的新領域。
3.2藥品生物測定在中藥開發中的作用我國是中藥王國，2000年版中國藥典一部共收載920種，其中中成藥398種。有含量測定的157種，僅占總數的17%，中藥成分多，雜質和干擾物質很多。復方制劑，尤其大復方制劑專屬性的檢出處方中所含藥材很困難，有大量的研究工作需要做。中成藥中的雜質如重金屬、殘留農藥等達到一定水平會產生毒副作用，影響藥物安全性［7］。要讓中藥制劑打進國際市場，我們在檢查類的控制項目和含量類的方法探討方面有大量工作要做，生物測定可以在毒理、藥理方面進行研究、探討，逐步完善質量控制標準，提高制劑質量發揮更大的作用。
3.3新藥研制開發與安全性評價新藥研制開發是多學科合作的系統工程。在獲得一個具有生物活性的化合物后，研究開發組織者要在生物醫學領域進行藥物評價研究，首先必須組織藥理學、毒理學、病理學、獸醫學、遺傳學、生物化學、藥代動力學方面的專家進行合作研究，按藥物非臨床研究管理規范GLP進行管理。組織藥理、毒理（包括一般毒理和特殊毒理）、病理、藥代動力學和毒代動力學、藥物分析、臨床化學、實驗動物、生物統計、質量保證等部門有關人員進行討論，分階段
做出評價［8］。生測在這方面可以參加開發研究或進行技術指導。
藥物動力學研究，通常需要從動物體液或組織器官勻漿中分離、鑒定和檢測代謝后的原粉及其他代謝產物。但是，將服藥動物按指定時間間隔處死，測定隨時間變化的血藥濃度，不僅動物用量大，而且常因動物個體差異無法得到可靠結果，也無法在同一動物重復實驗確證。處死動物的代謝產物也只能反映被處死時的結果，無法了解藥物代謝的全過程。有學者報道，采用微透析取樣技術，可在活的動物不同部位重復取樣，用微柱液相色譜［9］或毛細管電泳［10］進行分析，測定藥物的吸收、分布、代謝和排泄情況［11］。
自動進取樣裝置和計算機工作站應用于藥理實驗的探討，使藥品生物測定趨向微量、靈敏、專屬、簡便、快速和自動化的方向發展。
綜上所述，藥品生物測定是藥物分析的重要組成部分，是不可缺的檢測專業，現代儀器的大量使用，不僅不會影響其發展，而是如虎添翼，讓藥品生物測定展示出新的前景。
［參考文獻］
1倪坤義，田頌九，丁麗霞.21世紀藥物分析學的發展趨勢.中國藥學雜志，2000，35（12）：798.
2張治錟.抗生素藥品檢驗.北京：人民衛生出版社，1991，12-20.
3田頌九，丁麗霞，田潔.國內外藥典中質量標準的發展趨勢簡述.中國藥學雜志，1999，34（11）：781.
4吳偉洪.鱟與鱟試驗法論文匯編（三）.廈門鱟試劑廠，1996，18.
5施新猷.醫學實驗動物學.西安：陜西科學技術出版社，1989，32.
6馬緒榮，蘇德模.藥品微生物學檢驗手冊.北京：科學出版社，2000，59.
7李真，龔培力，曾繁典.藥物雜質及其對安全性的影響.中國臨床藥學雜志，2001，17（6）：452.
8劉昌孝.美國新藥研究開展與藥物安全性評價研究概況.中國藥學雜志，1999，34（11）：785.
9ChenAQ,LunteCE.Microdialysissamplingcoupledon-linetofastmicroboreliquidchromatography.JChromatogr,1995,691（1-2）:29.
藥品微生物研究范文4
關鍵詞：微生物學;教學改革;制藥工程專業
中圖分類號：G642.0 文獻標志碼：A 文章編號：1674-9324（2016）42-0128-02
一、目前存在的問題
我校制藥工程專業將專業定位成工程類，開設了較多工程類的課程，對微生物學這門課程不夠重視;該課程設置為專業選修課、考查課;缺少實踐環節;缺少專業特色。使學生走進“制藥工程只需要面對制藥的儀器設備，知道制藥的工藝就可以了，微生物學對我們專業沒用”的誤區。導致學生學習微生物學的動力和興趣都不高。因此，有必要對制藥工程專業微生物學的教學內容、教學方法等方面進行改革和思考，幫助學生走出誤區。
目前關于制藥工程專業的微生物學教學的探討相對較少，僅從教材和實驗教學有少量探討。因此結合銅仁學院制藥工程專業教學課時較少，缺少實踐部分教學安排，考核方式為考查等課程設置中出現的問題，課題組從教學內容、教學方式、教學手段、考核方式等方面對該專業微生物學課程教學進行了有益的探索，為促進制藥工程專業微生物學教學的完善，為培養應用型人才奠定堅實的基礎。
二、選擇教材和教學內容
1.教材選定。教材選擇方面充分考慮銅仁學院制藥工程人才培養方案的設置，突破原有的一門課程一本教材的固有觀念。選擇滿足既要基礎知識又要專業應用相關知識的專業需求的教材。但目前尚無專門針對制藥工程專業的微生物教材。因此，初步確定教材選用黃秀梨主編的《微生物學》與沈關心主編的《微生物學與免疫學》。
2.教學內容選定。（1）理論教學內容。教學內容選擇主要從幫助學生建立系統的微生物學概念，以及聯系藥物的生產實際，理解微生物與藥物及藥物生產的關系兩個方面著手考慮。黃秀梨主編的《微生物學》的內容作為微生物學基礎知識部分，幫助學生建立有菌、無菌、什么菌的概念和意識;掌握微生物生長和繁殖、代謝，微生物控制、菌種保藏等制藥工程專業密切相關的微生物基本知識。沈關心主編的《微生物學與免疫學》的內容作為微生物在制藥專業中應用的知識，幫助學生了解藥物生產過程中微生物的影響和處理方式、微生物藥物的重要地位、研究步驟、生產過程;了解常見的病原微生物等。結合專業特點深入介紹微生物在制藥中的應用對制藥過程的影響;有害微生物的控制;抗生素的制備及應用;微生物其他產物在制藥中的應用;藥品的微生物學質量控制;藥品的微生物學質量控制等微生物在制藥應用的相關知識。（2）實踐教學內容。銅仁學院制藥工程專業也同其他大多數高校的制藥工程專業一樣忽略了微生物學在制藥工程中的重要性，課程中未設置實驗課程。為幫助學生掌握微生物學的基本實驗機能，增加了實驗課，主要包括培養基制備、接種、培養，自然界純種微生物分離，細菌檢查及其生理生化反應，菌種保藏等以微生物控制為基礎的實驗課程。使學生掌握微生物研究與應用的基本技術，培養學生發現問題、獨立思考與創新思維能力，增加學生就業面。
三、合理的教學方法
在教學過程中，同時針對不同的內容，采取不同的教學方法?？傮w思路為基于學生已有的知識，以微生物在制藥工程中應用的實例為主線引導學生主動學習書本知識。讓學生感受到微生物在自己專業中是如何應用，引起學生對微生物學的興趣，再講解基本原理等重點和難點。
1.探討式。借鑒慕課的教學方式，學習之前先提出問題或案例，要求學生課前進行學習，課堂上分組就問題或案例用微生物學知識進行討論討論。例如抗生素頭孢的生產，在課前首先提出分組查閱頭孢的生產過程、生產菌株，產生的機理，生產過程中微生物需要如何控制，如何確定藥品的質量等內容，再回到課堂就自己查閱到的知識與同學交流、探討。以此活躍課堂氣氛、引起學生濃厚的興趣。對于學生不懂的知識，充分利用學生已有的知識逐步引導學生理解，取得了很好的教學效果。
2.研究式。教學過程中注意將最新的研究引入到教學中，豐富和更新教學內容，提高教學效果。通過建立以科研輔助教學，以教學促進科研的互補的模式。引導學生培養科研思維、學習科學研究方法。鼓勵有興趣的學生參加教師的科研項目，參與鍛煉動手操作，發現問題、解決問題的能力，提高學生的科研素質。
3.自學式。對于內容相對簡單，學生容易理解，并且有較多獲得渠道的部分章節選擇由學生自學，利用少量的課堂時間，讓學生上講臺講解自己學習的知識。既可以促進學生自主學習的興趣，同時還能鍛煉學生表達能力、語言組織能力，幫助學生克服怯場或膽小的問題，提高學生的自信。
四、多樣化教學手段
根據微生物學的特點，在教學過程中借用現代化手段，幫助學生理解。將文字、圖片、動畫、視頻、聲音等手段將內容簡潔、直觀地展現在學生面前。節約時間的同時進一步提高學生學習興趣。
五、考核
通過教學內容的選擇，教學方法的搭配雖然能在一定程度上提高學生學習興趣，促進學生自主學習;但尚不足幫助學生合理分配學習壓力。需要通過合理設置考核方式、考核內容，將學習壓力分散到學期的各個時段?？己朔譃槠綍r考核與期末考核兩部分，比例為平時考核50%;期末考核50%。平時考核中包括4次課堂考核占50%，平時作業，課堂討論，課堂講解，考勤、平時回答問題分別占10%;期末考核包括期末筆試和實驗考核分別占70%和30%。實驗考核通過期末操作考核體現。可提高學生對實驗的重視。
藥品微生物研究范文5
【關鍵詞】 苯甲醇輔料； 微生物限度； 薄膜過濾法； 方法學驗證
【Abstract】 Objective：To establish a method of microbial limit test for pharmaceutical excipient benzyl alcohol and make a applicability test for this method.Method：The test method was carried out according to the raw material and pharmaceutical excipient’s requirements in volume Ⅳ of Chinese Pharmacopoeia 2015.The membrane filtration method was applied to the tests for total viable aerobic count，total combined yeasts and molds count detection and specified bacteria.The bacteria，fungi or yeasts count method for microbial limit test was validated as described above for each of the microorganism tested.And the method for specified bacteria test was also validated.Result：The results showed that the recovery ratios of all the tested strains were in accordance with the acceptance criteria of the pharmacopoeia and the method for specified bacteria test was reliable.Conclusion：The method is suitable for the microbial limit test of pharmaceutical excipient benzyl alcohol.
【Key words】 Pharmaceutical excipient benzyl alcohol； Microbial limit test； Membrane filtration method； Method validation
First-author’s address：Jiangxi Institute for Drug Control，Nanchang 330029，China
doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2017.04.013
微生物z查作為藥品安全的重要指標，其標準制定也隨著藥品產業的發展及對藥品質量高要求的需求而不斷提高。2015年版《中國藥典》對微生物限度檢查法做了較大的修訂，新版藥典將2010年版藥典附錄中的Ⅺ J微生物限度檢查法拆分為三個部分，分別為微生物計數法、控制菌檢查法和微生物限度標準[1]。其中檢驗所用實驗菌液、檢驗方法、培養基、培養溫度等都做了不同程度的更改。新版藥典更加關注生產過程中的微生物控制，在藥品生產、儲藏和流通各個環節中，藥品生產企業均應嚴格遵循GMP的指導原則。制劑、原料及輔料、中藥提取物及中藥飲片的微生物限度與2010年版《中國藥典》比較給出了具體的限度標準。本文按照2015年版《中國藥典》的操作要求及指導原則，對苯甲醇藥用輔料微生物限度檢查法進行研究及適用性實驗，以確定出適宜、有效的檢查方法[2]。苯甲醇也稱芐醇，英文名Benzyl alcohol，是最簡單的含有苯基的脂肪醇，苯甲醇為無顏色透明液體，有微弱的芳香氣味，稍溶于水，易溶于乙醇、乙醚、氯仿等有機溶劑[3-4]。苯甲醇用途廣泛，主要應用于環氧樹脂及涂料領域，也廣泛應用于日化、食品、醫藥等領域。近年來隨著相關行業的發展，國內外對苯甲醇的需求量不斷增加，2011年醫藥領域苯甲醇的消費量約為1200 t。由于其具有麻醉、鎮痛的功效，苯甲醇在制劑中用作防腐劑和局部止痛劑，但因不良反應較大，嬰兒使用時有過致死案例，目前主要用作防腐劑。
1 儀器與材料
1.1 儀器 BKQP-50L型高壓蒸汽滅菌器（濟南博鑫生物技術有限公司）；M1-211A微波爐（美的集團有限公司）；XP-S電子天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）；SW-CJ-2D凈化工作臺（蘇州凈化有限公司）；Heal Force-900C 生物安全柜（上海力申科學儀器有限公司）；HWS-250恒溫恒濕實驗箱（天津市萊玻特瑞儀器設備有限公司）；3758CN低溫培養箱（賽默飛世爾科技中國有限公司）；HH.S21-6電熱恒溫水浴鍋（上海博訊實業有限公司）；ZW-2008智能集菌儀（溫州維科生物實驗設備有限公司）；薄膜過濾器（浙江泰林生物技術股份有限公司）。
1.2 主要試劑 苯甲醇，批號：20151201、20151202、20151203三個批次，由江西阿爾法高科藥業有限公司提供；培養基有：胰酪大豆胨液體培養基，批號160119；胰酪大豆胨瓊脂培養基，批號160128；沙氏葡萄糖瓊脂培養基，批號160119；沙氏葡萄糖液體培養基，批號151222；腸道菌增菌液體培養基，批號：160203；紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂培養基，批號160614；麥康凱液體培養基，批號160511；麥康凱瓊脂培養基，批號160511；甘露醇氯化鈉瓊脂培養基，批號151124；溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養基，批號151102，以上培養基均來源于北京陸橋技術有限責任公司。實驗菌種有：枯草芽孢桿菌[CMCC（B） 63501]、金黃色葡萄球菌[CMCC（B） 26003]、銅綠假單胞菌[CMCC（B） 10104]、大腸埃希菌[CMCC（B） 44102]、白色念珠菌[CMCC（F） 98001]、黑曲霉[CMCC（F） 98003]，以上菌種均購自中國藥品生物制品檢定所。
1.3 驗證方法
1.3.1 實驗菌株菌液制備 將金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、銅綠假單胞菌、大腸埃希菌的胰酪大豆胨液體培養基置35 ℃培養24 h，分別取以上新鮮培養物各1 mL，用0.9%無菌氯化鈉溶液10倍稀釋至10-3～10-7，做活菌計數備用。將白色念珠菌的沙氏葡萄糖液體培養基置25 ℃培養2 d，取新鮮培養物1 mL，用0.9%無菌氯化鈉溶液10倍稀釋至10-2～10-4，做活菌計數備用。將黑曲霉的沙氏葡萄糖瓊脂培養基置25 ℃培養7 d，加5 mL 0.9%無菌氯化鈉溶液將黑曲霉孢子洗脫，吸取出孢子懸液1 mL，用0.9%無菌氯化鈉溶液適量稀釋，用標準比濁管比濁，其濁度與標準比濁管相比后，取1 mL稀釋后的孢子懸液，用0.9%無菌氯化鈉溶液10倍稀釋至10-2～10-4，做活菌計數備用。
1.3.2 供試液制備 取供試品10 mL，置無菌錐形瓶中，用pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液稀釋至100 mL，混勻，作為1∶10供試液，備用。
1.3.3 細菌、霉菌及酵母菌數計數適用性實驗
1.3.3.1 實驗組 （1）需氧菌計數：取上述1∶10供試液1 mL，置薄膜過濾器中，采用薄膜過濾法，每筒用pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液300 mL分3次沖洗，在最后一次沖洗液中加入不大于100 cfu的實驗菌（金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌、黑曲霉），濾干，轉移濾膜菌面朝上貼于胰酪大豆胨瓊脂平板上，實驗平板置35 ℃培養箱培養。金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、銅綠假單胞菌培養3 d，白色念珠菌、黑曲霉分別培養5 d，逐日觀察平板生長情況。（2）霉菌和酵母菌計數：取上述供試液10 mL，置薄膜過濾器中，采用薄膜過濾法，每筒用pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液300 mL分3次沖洗，在最后一次沖洗液中加入不大于100 cfu的實驗菌（白色念珠菌、黑曲霉），濾干，轉移濾膜菌面朝上貼于沙氏葡萄糖瓊脂平板上，實驗平板置25 ℃培養箱培養5 d，逐日觀察平板生長情況。
1.3.3.2 供試品對照組 取上述1：10供試液，以稀釋液代替菌液，同實驗組操作，測定供試品本底菌落數。
1.3.3.3 菌液對照組 取相應稀釋液替代供試液，同實驗組操作加入實驗菌液并進行微生物回收實驗。
1.3.3.4 判斷標準 計數方法適用性實驗中，實驗組菌落數減去供試品對照組菌落數的值與菌液對照組菌落數的比值應在0.5～2范圍內。
1.3.4 控制菌檢查方法的適用性實驗
1.3.4.1 金黃色葡萄球菌檢查 實驗組：取上述1∶10供試液10 mL，置薄膜過濾器中，采用薄膜過濾，用pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液300 mL分3次沖洗，加入不大于100 cfu金黃色葡萄球菌實驗菌（將實驗菌加入最后一次沖洗液中），取膜置于100 mL胰酪大豆胨液體培養基中，35 ℃培養24 h，取上述培養物劃線接種于甘露醇氯化鈉瓊脂培養基平板上，35 ℃培養72 h，觀察平板生長情況。陰性對照組：取稀釋液10 mL替代1∶10供試液，照金黃色葡萄球菌檢查法操作。
1.3.4.2 銅綠假單胞菌檢查法 實驗組：取上述1∶10供試液10 mL，置薄膜過濾器中，采用薄膜過濾，用pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液300 mL分3次沖洗，加入不大于100 cfu銅綠假單胞菌實驗菌（將實驗菌加入最后一次沖洗液中），取膜置于100 mL胰酪大豆胨液體培養基中，35 ℃培養24 h，取上述培養物劃線接種于溴化十六烷基三甲銨瓊脂培養基平板上，35 ℃培養72 h，觀察平板生長情況。陰性對照組：取稀釋液10 mL替代1∶10供試液，照銅綠假單胞菌檢查法操作。
1.3.4.3 大腸埃希菌檢查法 實驗組：取上述1∶10供試液10 mL，置薄膜過濾器中，采用薄膜過濾法，每筒用pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液300 mL分3次沖洗，濾干，取膜置于100 mL胰酪大豆胨液體培養基中，同時加入不大于100 cfu的大腸埃希菌液，35 ℃培養24 h，取上述培養物1 mL接種至100 mL麥康凱液體培養基中，42 ℃培養24 h。取麥康凱液體培養物劃線接種于麥康凱瓊脂平板上，35 ℃培養48 h。取麥康凱瓊脂平板上菌落劃線接種于營養瓊脂平板進行分離純化，經純化后的培養物，接種至含5 mL MUG培養基的試管內，培養，于5、24 h在366 nm紫外線下觀察，同時用未接種的MUG培B基作本底對照。觀察后，沿管壁加入數滴靛基質試液，觀察MUG培養基顏色變化。陰性對照組：取稀釋液10 mL替代1∶10供試液，照大腸埃希菌檢查法操作。
1.3.4.4 耐膽鹽革蘭陰性菌檢查法 實驗組：將上述1：10供試液置于25 ℃預培養2 h。取上述預培養供試液10 mL（2份），置薄膜過濾器中，采用薄膜過濾法，每筒用pH 7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液300 mL分3次沖洗，分別加入不大于100 cfu的大腸埃希菌液和不大于100 cfu的銅綠假單胞菌液（將實驗菌液加入最后一次沖洗液中），取膜置于100 mL腸道菌增菌液體培養基中，35 ℃培養箱中培養48 h后，上述培養物劃線接種于紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂平板上，置35 ℃培養24 h，觀察平板生長情況。若紫紅膽鹽葡萄糖瓊脂平板上有菌落生長，代表檢出耐膽鹽革蘭陰性菌。陰性對照組：取稀釋液10 mL替代1∶10供試液，照耐膽鹽革蘭陰性菌檢查法操作。
2 結果
2.1 需氧菌、霉菌及酵母菌計數方法適用性實驗結論 在三次獨立的需氧菌計數方法適用性實驗中，5種菌株的回收比值均在0.5～2.0范圍內，符合藥典規定。因此可照此方法測定苯甲醇的需氧菌總數。在三次獨立的霉菌和酵母菌計數方法適用性實驗中，白色念珠菌和黑曲霉的回收比值均在0.5～2.0范圍內，符合藥典規定。因此可照此方法測定苯甲醇的霉菌和酵母菌總數。見表1。
2.2 控制菌檢查方法學適用性實驗結論 在進行金黃色葡萄球菌檢查、銅綠假單胞菌檢查、大腸埃希菌檢查和耐膽鹽革蘭陰性菌檢查四種控制菌的適用性實驗中，實驗組均檢出陽性實驗菌，陰性對照組無菌生長。因此，可照此方法進行苯甲醇的控制菌檢查。見表2～5。
3 討論
與2010年版藥典相比，2015年版藥典在微生物控制方面做了很大幅度的改變。新版藥典將“方法驗證”改為了“方法適用性”，適用性是把實驗條件、供試品等因素作為一個整體來評價，更為完整科學。新版藥典中的培養體系也有變化，首先是培養基的改變，需氧菌計數所使用的培養基為胰酪大豆胨瓊脂培養基[5-9]，霉菌和酵母菌計數使用沙氏葡萄糖瓊脂培養基。培養溫度也做出了適當的調整，需氧菌計數培養溫度由35～37 ℃調整為30～35 ℃，霉菌和酵母計數培養溫度由25～28 ℃變為20～25 ℃。測試菌株也發生了改變，采用金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌和銅綠假單胞菌三株菌進行方法適用性實驗，其中銅綠假單胞菌替換了2010版藥典中的大腸埃希菌。而且需氧菌計數的適用性實驗中，需要使用5種菌株，相較于2010版藥典的3菌株增加了白色念珠菌和黑曲霉[10-11]。此外，計數回收方法中增加了新的檢測方法-MPN法，可作為平板計數法和薄膜過濾法不適用時的補充。
控制菌檢查方面，新版藥典控制菌檢查法除梭菌和白色念珠菌外，其余檢查指標在預培養和增菌培養這一步驟中都統一使用了胰酪大豆胨液體培養基，大大方便了實驗操作。新版藥典新增了耐膽鹽革蘭陰性菌的檢查，替代了《中國藥典》2010年版的大腸菌群的檢查。在各控制菌項下，生化實驗和“應進行分離、純化及適宜的鑒定實驗”改為“采用其他適宜方法進一步鑒定”，檢測方法更加靈活多變，實驗室可以根據自身情況靈活選擇適宜的方法，調高檢驗效率和結果可靠性[12-14]。
藥用輔料是藥品重要的組成部分，它們的質量關系到所有藥品的安全性[15-16]。與原版藥典相比，2015年版藥典對原料及輔料的微生物限度控制更加嚴格規范[17-18]?！吨袊幍洹?010年版附錄ⅪJ微生物限度檢查法中對“原料及輔料”的微生物限度的描述為“參照相應制劑的微生物限度標準執行”[19]。而《中國藥典》2015年版四部1107非無菌藥品微生物限度標準中，第5點明確規定了“非無菌藥用原料及輔料的微生物限度標準”[20]。其中，需氧菌總數限度為103 cfu/g或cfu/mL，霉菌和酵母菌總數限度為102 cfu/g或cfu/mL?？刂凭醋鼋y一規定，需要根據原輔料及其制劑的特性和用途、制劑的生產工藝等因素檢查具有潛在危害的微生物[17-18]。由于苯甲醇為藥用輔料，考慮在醫藥領域中苯甲醇主要作為防腐劑、局部止痛及藥物溶劑作用，實驗設計控制菌檢查大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌和耐膽鹽革蘭陰性菌檢查。
苯甲醇作為防腐劑廣泛應用于藥品制劑中，為更好的控制本產品的質量，本研究建立了其微生物檢查方法，并對方法適用性進行了研究。由于苯甲醇作為防腐劑具有一定的抗菌作用，采用平皿法進行需氧菌總數計數適用性實驗時，發現本品對實驗菌株具有較強的抑制能力，回收率比值達不到要求。為消除苯甲醇的抑菌干擾，本文采用薄膜過濾法進行菌落計數檢查和控制菌檢查，保證實驗結果的準確性和科學性，從而保證臨床用藥安全有效。
參考文獻
[1]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（四部）[S].中國醫藥科技出版社，2015：140-153.
[2]孫占松.國內苯甲醇生產及應用分析[J].精細與專用化學品，2012，20（12）：12-14.
[3]呂秋軍，曹萍.藥用輔料的不良反應及其安全性管理[J].藥物不良反應雜志，2010，12（6）：410-414.
[4]廖彬，劉雁鳴，龍海燕，等.氣相色譜法測定藥用輔料苯甲醇的有關物質[J].中國藥師，2015，18（8）：1315-1319.
[5]楊曉莉，李輝，馬英英，等.《中國藥典》2015年版非無菌產品微生物限度檢查：控制菌檢查法解讀與對策[J].中國藥師，2016，19（4）：748-752.
[6]楊曉莉，李輝，馬英英，等.中國藥典2015年版非無菌產品微生物限度檢查：微生物計數法解讀[J].藥物分析雜志，2016，36（6）：1101-1107.
[7]馮震，范一靈，楊美成.《中華人民共和國藥典（2015年版）》（四部）中微生物檢驗相關通則的增、修訂情況介紹[J].上海醫藥，2016，37（7）：11-15.
[8]唐菱，侯曉軍，周劍，等.硫酸新霉素凝膠微生物限度檢查方法的適用性試驗[J].中國抗生素雜志，2016，41（9）：680-683.
[9]吳朝陽.淺談注射劑中抑菌劑引起的不良反應[J].中國醫學工程，2012，20（3）：180.
[10]姚靜.藥用輔料應用指南[S].中國醫藥科技出版社，2011：157-159.
[11]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）[S].中國醫藥科技出版社，2010：附錄107-116.
[12] The United States Pharmacopoeial Convention.United States Pharmacopoeia35th Edition （USP35） and National Formulary30th Edition（NF30）[S].The United States by United Book Press，Inc，Baltimore，MD，2012：1713-1715.
[13] The Council of Europe and Council DE L’ Euerope.European Pharmacopoeia7th Edition（EP7.0）[S].Acid-free paper by Druckerei C.H.Beck，Nordlingen，2011：1469-1470.
[14] Japanese Pharmacopoeial committee.Japanese Pharmacopoeia16th Edition（JP16）[S].The Minister of Health，Labor and Welfare，2011：432-433.
[15]_明生，高天蕙.藥劑輔料大全（第二版）[M].成都：四川科學技術出版社，2006：1088-1089.
[16]周國斌.中國藥品檢驗標準（操作規程）[S].中國醫藥科技出版社，2010：附錄310-325.
[17]宋永熙，趙煒鐳.注射用添加劑引起藥物不良反應事件原因與對策[J].藥事管理，2010，45（5）：396-398.
[18]李雪.藥品在微生物限度檢驗中的誤差影響因素[J].藥物研究，2016，11（3）：12-14.
[19]張海燕，鄔偉魁，宋民憲，等.《中國藥典》2010年版藥用輔料標準探討[J].中國實驗方劑學雜志，2011，17（11）：289-291.
藥品微生物研究范文6
論文摘要：隨著科技發展和人們生活水平的提高，食品安全和衛生已經成為人們關注的焦點。近年來國際衛生組織非常關注食品微生物污染問題，食品微生物檢驗成為了食品質量安全控制方面的重要技術之一，對控制微生物引起的食源性疾病具有重要作用。本文從分析食品微生物檢驗應注意的問題入手，來探討食品微生物檢驗的內容和技術，為食品微生物檢驗技術的發展做出貢獻。
一、食品微生物檢驗應注意的問題
1、操作人員的選用和操作要求
實驗室應當聘請具有一定微生物學資質的人來操作，并且要經過考核合格后方能上崗。要求其具有較熟練的操作技能，強烈的質量意識，并且嚴格遵守無菌操作規程，減少人為因素帶來的困擾。
操作要求：(1)操作人員牢記無菌觀念，整個過程要求無菌操作，嚴格按照 GB／T4789食品微生物檢驗標準進行操作。(2)用無菌工具無菌操作取樣。(3)按照 GB／T4789標準方法進行數據處理，得出實驗結果。
2、設施設備的放置環境
實驗室應當具有適宜微生物檢驗進行的設施設備條件，包括檢測設施及輔助設施，并且要特別注意特殊的設備要在特殊的環境下放置和操作。
3、各種設備及藥品的正確配置
(1)培養箱、水浴鍋 、于熱滅菌箱和高壓滅菌鍋的安裝要求：①在首次安裝時要校對溫度的穩定性和一致性。②記錄以上設施其溫度穩定性達到平衡時所需要的時間。③要求定期對以上設備進行清潔和消毒。④最好是使用感應器來對運轉循環情況進行控制和監控。
(2)藥品配置：①培養基采用高壓濕熱滅菌法，121℃滅菌15分鐘。②部分培養基如膽硫乳培養基則需采用煮沸滅菌法。③對于熱敏感的培養基采用膜過濾法。
4、樣品的采集、運輸和保存
采集具有代表性的樣品，并且樣品采集必須在無菌操作下進行，以防止樣品受到外源性污染和細菌的生長。采樣用具及包裝物必須是滅菌的。在樣品的運輸和保存過程中應避免日光照射，防止外來物的污染。采樣后，應將樣品在接近原有貯存溫度條件下盡快送往實驗室檢驗。運輸時應保持樣品完整。一般不應超過3小時。如不能及時運送，應在接近原有貯存溫度條件下貯存。
二、食品微生物檢驗內容和技術
食品微生物檢驗的內容有以下幾類 ：
1、對食品污染程度指示菌的檢驗。(1)細菌總數又被稱為菌落總數，指食品及生活飲用水檢樣經過處理，在一定條件下經過培養后，所得 1g或1mc檢樣中所含細菌菌落個數，是判斷食品及生活飲用水被污染程度的重要指標。(2)大腸菌群系指一群在37℃培養24h后能發酵乳糖、產配、產氣、需氧或兼性厭氧的革蘭氏染色陰性無芽孢桿菌。其主要來源于人和牲畜的糞便，所以研究中經常采用糞便污染指標菌來評價生活飲用水及食品的衛生質量。
2、對食品中致病菌的檢測。在GB4789食品微生物學檢驗標準中，已明確規定某些微生物的數量，所以我們除要檢測食品污染程度指示菌，如菌落總數、大腸菌群(MPN)的測定外，還有致病菌如金黃色葡萄球菌、沙門氏菌和志賀氏菌等。
食品微生物檢驗的技術
多年以來，對食品微生物的檢測，通常采用瓊脂平板培養法，共需2—3d才能完成。近幾年各國的許多機構和學者都致力于快速檢測技術和方法的研究，已改進和開發了一些快速的檢測技術和方法，提高了食品微生物檢驗的高效性、準確性和可靠性，其中新方法有以下幾種。
1、采用電阻抗法。其原理是細菌在培養基內生長繁殖的過程中，將會使培養基中的火分電惰性物質如碳水化合物、蛋白質和脂類等，代謝為具有電活性的小分子物質，其能增加培養基的導電性，從而使阻抗發生變化，所以我們可以通過檢測培養基的電阻抗變化情況來判定細菌在培養基中的生長繁殖特性，即可檢測出相應的細菌。該法已用于霉菌、大腸桿菌等細菌的檢測。
2、采用快速酶觸反應及代謝產物的檢測。細菌在生長繁殖過程中可合成和釋放某些特異性的酶，所以根據其特性來選用相對應的底物和指示劑，并記錄反應的結果。如美國3MPetiffilmTM微生物測試片可分別快速測定細菌總數、金黃色葡萄球菌等。
3、采用分子生物學技術。其又包括兩種技術：(1)核酸探針技術。根據堿基互補的原則，用特定的方法測定標記物。(2)聚合酶鏈式反應 (PCR)技術。其原理為通過加熱使雙鏈 DNA經裂解成兩條單鏈，成為引物和 DNA聚合酶的模板；然后降低溫度，使寡聚核苷酸引物與 DNA分子上的互補序列退火。一般情況下退火溫度越高，擴增特異性越好。
4、采用免疫學方法檢測細菌抗原和抗體的技術。其有三種技術：(1)熒光抗體檢測技術 (IFA)，包括直接法和間接法。直接熒光抗體檢測法是在檢樣上直接滴加已知特異性熒光標記的抗血清，經洗滌后在熒光顯微鏡下觀察結果。間接法是在檢樣上滴加已知細菌特異性抗血清，待作用后經洗滌，再加入熒光標記的抗體后在熒光顯微鏡下觀察結果。(2)免疫酶技術 (EIA)，其是將抗原、抗體特異性反應和酶的高效催化作用原理結合，是一種新穎且實用的免疫學分析技術。通過共價結合將酶與抗原或抗體結合，形成酶標抗原或抗體，或通過免疫方法使酶與抗酶抗體結合，形成酶抗體復合物。(3)免疫磁珠分離法 (IMS)，即應用抗體包被的免疫磁珠，用一個磁場裝置收集鐵珠。
5、采用儀器法。(1)微型全自動熒光酶標分析儀(Mini—VIDAS)，其主要采用具有優異的敏感性和特異性的酶聯熒光技術(ELFA)，所測的熒光與抗體中抗原的含量成正比。(2)全自動微生物分析系統 (Vietk—AMS)。其可以同時對60-~480個樣品進行分析，并且鑒定時間只需 2～3h，這是效率非常高的一個檢驗系統，并且也是今后食品微生物檢驗技術發展的一個方向。
三、總結
總而言之，我們在對食品微生物檢驗時要遵守職業道德，嚴謹科學態度，注意各個環節來確保微生物檢驗數據的準確性，為食品衛生和安全提供可靠的依據。并且隨著現代技術的發展，今后食品微生物檢驗技術的發展方向會是：(1)采用快速和大批量的檢驗方法，來提高檢驗效率；(2)形成標準化的實驗條件；(3)提高和保證檢驗的精度和靈敏度。
參考文獻：
[1] 張潔梅.食品微生物檢驗技術的研究進展[J].現代食品科技，2005，21，(2):221-222.
