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色譜柱范文1
關鍵詞：色譜柱 維護與保養 高壓液相色譜 應用
0 引言
色譜作為一種分離技術與方法，自本世紀初起已經有100多年的歷史了，現在已經成為分析化學學科中的一個重要的分支。在人類進入新時代之際，人們面臨著在信息科學、生命科學、材料科學、環境科學等領域的快速發展的挑戰，在這些領域人才的需求成為國家高度發展的至關重要的因素。而色譜技術是生命科學、材料科學、環境科學必不可少的手段和工具。根據最近的統計在全世界各類分析儀器中氣象色譜儀和液相色譜儀的營銷總額占25%-30%。
科學技術的發展，使得色譜技術也得到進一步的發展，不斷有新的聯用的技術得到應用。生物醫學的發展，也不斷要求高靈敏和高選擇性的方法對研究的對象進行定性和定量的研究。
1 色譜柱的相關性質
1.1 色譜柱的定義：裝填有固定相用以分離混合組分的柱管。多為金屬或玻璃制作。有直管形、盤管形、U形管等形狀。
1.2 分類：色譜柱可分為填充柱和開管柱兩大類。液相色譜通常均采用填充柱。色譜柱的分離效果取決于所選擇的固定相，以及色譜柱的制備和操作條件。簡單而言：常見的分配住填料：碳十八柱（ODS/C18)、碳八柱（Octy了/C8）、碳六柱（Hexyl/C6）、碳四柱（Butyl/C4）、碳一注（Methyl/C1）、陰離子交換柱（SAX)、陽離子交換柱（SCX）、苯基柱（Phenyl）、氨基柱（Amino/NH2）、氰基柱（Cyano/CN/Nitrile）。常見的吸附柱填料：硅膠柱
色譜柱的選擇會直接影響混合物中組分的分離。舉例來講：對于填充柱而言，可選擇的固定相較多，柱容量較大，但是受柱長的限制，分離能力有限，主要應用于簡單化合物的分離。
2 色譜柱的維護與保養
2.1 色譜柱的維護。我們在使用新的色譜柱應該在我們自己的液相色譜儀上進行性能測試，即使用色譜柱附帶的檢驗報告上測試條件和樣品來測定該色譜柱的柱效。并且，在以后的使用中，應時常對色譜柱進行測試。而且在使用的過程中常常有堵塞的現象，造成這種現象的主要原因是①溶劑中的不溶物②樣品中的不溶物③泵進樣器等中的不溶物④柱內不溶物的形成等。如果當色譜柱堵塞以后我們可以對色譜柱進行修復，首先，使用含鹽緩沖液后（如離子對試劑）應用溶解性強的溶劑（如水）進行沖洗。其次，先斷開檢測器，然后用對來自樣品中的物質有強溶解性的溶劑進行沖洗，對于反相色譜柱，可使用甲醇、乙睛、四氫呋喃、氯仿、庚烷等，在此條件下，應避免溶劑的pH低于2或高于8。最后如果經過上述還是沒有修復，色譜柱壓力還是沒有下降，則要斷開檢測器，將色譜柱反方向放置，然后檢查柱壓，若壓力穩定下降，則保持色譜柱反方向連接，用低于0.5 ml/min 流速沖洗一小時。如果壓力不下降，則要看內置過濾器是否被堵塞，如果被堵塞應沖洗或更換，若進口端的填料發生堵塞，柱子將不可能被徹底恢復，只能通過去掉進口端的部分填料，重新填充進行有限的柱效恢復。而且修復的厚度是2-5mm。
2.2 色譜柱的保養。色譜柱在使用前，最好進行柱的性能測試，并將結果保存起來，作為今后評價柱性能變化的參考。但要注意：柱性能可能由于所使用的樣品、流動相、柱溫等條件的差異而有所不同；另外，在做柱性能測試時是按照色譜柱出廠報告中的條件進行(出廠測試所使用的條件是最佳條件)，只有這樣，測得的結果才有可比性。我們在對色譜柱使用前進行測試以后，我們要根據不同的情況對色譜柱進行保養：①反相色譜柱每天實驗后的保養：使用緩沖液或含鹽的流動相，實驗完成后應用10%的甲醇/水沖洗30分鐘，洗掉色譜柱中的鹽，再用甲醇沖洗30分鐘。注意：不能用純水沖洗柱子，應該在水中加入10%的甲醇，防止將填料沖塌陷。②長期保存色譜柱：如色譜柱要長時間保存，必須存于合適的溶劑下。對于反相柱可以儲存于純甲醇或乙腈中，正相柱可以儲存于嚴格脫水后的純正己烷中，離子交換柱可以儲存于水（含防腐劑疊氮化鈉或柳硫汞）中，并將購買新色譜柱時附送的堵頭堵上。儲存的溫度最好是室溫。
概括起來就是：①柱子在任何情況下不能碰撞、彎曲或強烈震動；②當柱子和色譜儀聯結時，閥件或管路一定要清洗干凈；③要注意流動相的脫氣；④避免使用高粘度的溶劑作為流動相；⑤進樣樣品要提純；⑥嚴格控制進樣量；⑦每天分析工作結束后，要清洗進樣閥中殘留的樣品；⑧每天分析測定結束后，都要用適當的溶劑來清洗柱；⑨若分析柱長期不使用，應用適當有機溶劑保存并封閉。
3 色譜柱的維護與保養在高壓液相色譜中的應用
高效液相色譜(HPLC)是20世紀60年代后期發展起來的分離分析技術，是現代分離測定的重要手段。問世以來，因其具有分離效能高、分析速度快、檢測靈敏度好、能分析高沸點但不能氣化的熱不穩定生理活性物質的特點而被廣泛應用于生物化學、藥物及臨床分析。高效液相色譜柱是消耗品，會隨使用時間或進樣的次數增加，出現色譜峰高降低，峰寬加大或出現肩峰，柱效下降。需要定期進行徹底清洗和再生，不同的色譜柱清洗方法各不相同比如：
色譜柱范文2
關鍵詞 親水作用色譜； 固定相； 羧基甜菜堿； 原子轉移自由基聚合
1 引 言
親水作用色譜（Hydrophilic interaction liquid chromatography，HILIC）作為一種分離強極性化合物的液相色譜模式，最早由Alpert于1990年提出[1]，其主要特征是使用極性固定相和水/水溶性有機溶劑（通常是乙腈）做流動相。作為HILIC分離的核心，HILIC固定相功能基的結構直接影響其對溶質的選擇性和分離效率。常見HILIC固定相可分為兩類，一類為小分子鍵合相，功能基為二醇基、氰基、氨基、酰胺基、半胱氨酸基、麥芽糖基[2]等的固定相； 另一類為聚合物鍵合相，功能基為聚琥珀酰亞胺[3]，聚磷酰膽堿[4]和聚磺酸基甜菜堿[5]的固定相。
含兩性甜菜堿型配基的固定相，功能基同時含有兩種相反電荷，結構新穎，在20世紀80年代作為兩性離子固定相進入色譜領域[6]。在HILIC領域，普遍應用的是含硫代甜菜堿功能基和含磷酰膽堿功能基兩性離子的商品柱，在蛋白組學、藥物分析、糖類化合物的分離中得到了廣泛應用[7～9]。據報道，在溶液pH值3.0～8.0范圍內，這2種兩性離子功能基表面改性的色譜固定相的ζ電勢均為負值，相當于色譜固定相表面被負離子修飾而帶負電荷[10，11]。相比較而言，在此pH值范圍內，羧基甜菜堿兩性離子改性的色譜固定相的表面帶正電荷[12]。羧基甜菜堿兩性離子固定相在色譜領域最早報道是Elefterov等 [13]用賴氨酸類羧基甜菜堿兩性離子固定相分離金屬離子； Colman等[14]在硅膠基質C18整體柱表面鍵合羧基甜菜堿改性涂層，應用在離子色譜中，有效分離無機陰離子； Violeta等[15]使用交聯羧基甜菜堿型兩性離子固定相，選擇性分離無機鹽溶液中多種二，三價的重金屬離子。而羧基甜菜堿型功能單體在親水作用色譜領域中罕有報道。
表面引發原子轉移自由基聚合（Surfaceinitiated atom transfer radical polymerization， SIATRP）技術是近年發展起來的一種新型聚合技術，可在基材表面形成高密度聚合物分子鏈[16]，且兼具活性聚合和接枝鏈長可控等優點[17]，在色譜固定相的制備方面也得到廣泛應用。Pan等[18]通過SIATRP技術制備將2甲基丙烯酸3（2，4，5三羥基3氨基6羥甲基四氫吡喃）聚合物鏈接枝在硅膠微球表面，形成殼層結構，可提供更多結合位點，有效固定植物凝聚素且提高了負載量； Takuya等[19]通過SIATRP技術將N異丙基丙烯酰胺接枝在聚苯乙烯整體柱上，與接枝N異丙基丙烯酰胺的空心毛細管柱相比，在水溶液環境中更有效地分離地塞米松，可的松等生物活性溶質。
本研究使用甲基丙烯酰氧乙基二甲基乙酸銨（CBMA）作為功能單體，采用SIATRP技術，以硅膠為基質，在鍵合引發劑的硅膠表面進行聚合反應，通過改變功能單體的加入量，制備了接枝量不同的SilicaCBMA親水作用色譜固定相。使用有機酸類化合物作為探針，研究了流動相pH值、鹽濃度、水含量等因素對溶質在SilicaCBMA固定相上保留的影響，建立了蘆丁片中維生素C含量的HILIC測定方法。
2 實驗部分
2.1 儀器與試劑
島津LC20AT（SPDM20A 二極管陣列檢測器）高效液相色譜儀（日本島津公司）； PE Frontier 紅外光譜儀（美國珀金埃爾默公司）； Bruker Avance 400 MHz核磁共振儀（瑞士Bruker公司）； KQ3200E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）； BS224S型電子天平（德國賽多利斯科學儀器有限公司）； V77192US型高壓氣動泵（德國柏林諾爾公司）； Vario EL Ⅲ型元素分析儀（德國Elementar 公司）硅膠（粒徑：10 μm，平均孔徑： 10 nm，蘇州納微科技有限公司）； 氯乙酸鈉、甲基丙烯酸二甲氨基乙酯（DMAEMA）、2，2′聯二吡啶（Bpy）、溴化亞銅（CuBr）、三乙胺（TEA）、2溴異丁酰溴、苯甲酸、對甲苯磺酸、阿魏酸、肉桂酸、維生素C（分析純，阿拉丁試劑（上海）有限公司）； 乙腈（ACN，色譜級，美國Sigma公司）； 甲酸銨（分析純，廣州化學試劑廠）； 四氫呋喃（THF，加入金屬鈉回流6 h，干燥備用）、甲苯（加入金屬鈉回流6 h，干燥備用）、濃氨水、甲醇（分析純，天津市大茂化學試廠）； 復方蘆丁片（國藥準字：H31021092； 上海朝暉藥業有限公司）。
2.2 實驗方法
2.2.1 甲基丙烯酰氧乙基二甲基乙酸銨功能單體的制備 功能單體參照文獻[20]制備。將5.505 g氯乙酸鈉以適量的去離子水溶解，用NaOH調節至pH 7.0，置于恒壓滴液漏斗中。將7.704 g DMAEMA以少量去x子水溶解后置于250 mL三口圓底燒瓶中，全程通N2保護，50℃時開始滴加氯乙酸鈉溶液，約10 min滴完，升溫到60℃反應3 h。反應完畢，向圓底燒瓶加入乙醇，振搖后抽濾，將濾餅溶解在甲醇中，重結晶，得到甲基丙烯酰氧乙基二甲基乙酸銨（CBMA）功能單體，共計4.429 g，產率67.5%，見圖1。
2.2.2 用SIATRP技術制備SilicaCBMA固定相 稱取0.5 g CBMA功能單體溶于70 mL甲醇中，置于100 mL圓底燒瓶。將3.0 g溴代硅膠（參照文獻[21]制備）、 0.166 g CuBr、 0.362 g 2，2′聯吡啶置于200 mL圓底燒瓶中，將兩個燒瓶密封充氮氣30 min后，溶解CBMA的甲醇溶液轉移至含溴代硅膠圓底燒瓶中，在N2保護下， 60℃反應24 h，反應結束后抽濾，將濾餅依次用大量0.1 mol/L EDTA2Na溶液、甲醇、丙酮洗滌多次，60℃真空干燥過夜，即得SilicaCBMA固定相，反應步驟見圖2。
2.2.3 色譜柱的填充 稱取2.0 g上述合成的固定相，以甲醇為勻漿液和頂替液，超聲分散均勻后，在40 MPa壓力下裝入不銹鋼柱管（150 mm × 4.6 mm I.D.）中。
2.2.4 液相色V條件 流動相為乙腈甲酸銨溶液（9∶1， V/V），甲酸銨溶液濃度10 mmol/L，pH=4.0，流動相流速1.0 mL/min； 柱溫25℃； 進樣體積20 μL； 檢測波長為254 和355 nm。
3 結果與討論
3.1 單體的表征
3.1.1 功能單體的核磁表征 1HNMR（D2O， 400 MHz） δ： 6.00 （d， H， a）； 5.61 （d， H， b）； 1.78 （t， 3H， c）； 4.47 （t， 2H， d）； 3.95 （t， 2H， e）； 3.16 （s， 6H， f）。目標產物的結構式如下，其特征位移化學峰與文獻[20]相符。
3.1.2 功能單體的紅外表征 FTIR （KBr）如圖3所示， 338203 cm1處為OH 的伸縮振動吸收峰； 1713.79 cm1處為酯羰基的伸縮振動峰； 1134.50 cm1處為酯 COC的伸縮振動峰； 原料 ClCH2COONa 在 769.96 cm1處的CCl 伸縮振動峰消失； 915.34 cm1處的吸收峰是羧基甜菜堿中R3N+的吸收峰，證明ClCH2COONa 與 DMAEMA 進行了季銨化反應。在1382.03和1610.07 cm1處出現了COO對稱伸縮振動峰和COO不對稱伸縮振動峰，與文獻[20]相符。
3.2 不同接枝量的SilicaCBMA固定相制備及表征
合成3種不同CBMA單體接枝量的SilicaCBMA固定相， 研究接枝聚合物接枝量對固定相性能的影響。在SIATRP反應中，通過改變單體加入量、聚合時間、引發劑濃度等條件，可以控制聚合物鏈長。本實驗選擇保持引發劑濃度、聚合時間等其它條件不變，只改變單體的濃度，按照催化劑、配體與單體的物質的量比分別為1∶2∶1、1∶2∶2、1∶2∶4制備得到了CBMA單體接枝量不同的固定相SilicaCBMA 1、SilicaCBMA 2和SilicaCBMA 3。
式（1）[22]中， Cp是接枝聚合后增加的碳百分含量； Cp（calcd.）是單體分子中碳的理論百分含量； Ci 是固定引發劑后增加的碳含量； Ci（calcd.）是引發劑單元分子中碳的理論百分含量； A 是硅膠的比表面積。
利用元素分析對制備的3種SilicaCBMA固定相進行表征，由式（1）計算CBMA功能單體接枝量，結果見表1，接枝CBMA單體后的SilicaCBMA固定相與溴代硅膠相比，C， H和N 3種元素的含量明顯增加，表明CBMA單體已經成功接枝在硅膠表面，且接枝聚合物的鏈長隨初始單體濃度的增加而增長[23]。
3.3 SilicaCBMA固定相接枝量對柱效的影響
以有機酸類化合物為探針化合物，在流動相pH=6的條件下，研究CBMA功能單體接枝量對分離性能的影響。隨著CBMA單體的接枝量增大，溶質的保留時間延長。這是因為在實驗條件下，SilicaCBMA固定相帶正電荷[12]，且表面正電荷密度隨兩性單體的接枝量增加而增大[24]，酸性溶質電離帶負電荷，所以溶質的保留時間隨單體的接枝量增加而延長。但接枝量過大時，溶質與固定相作用力增加會導致峰形變差，結果見圖4。
3.4 pH值對溶質保留的影響
在流動相pH值4.0～8.0的范圍內考察有機酸類化合物的保留情況。由圖5可見，酸性溶質保留時間都隨著甲酸銨溶液pH值增大而延長，且在3種SilicaCBMA固定相上保留規律相同。這是因為在甲酸銨溶液pH值從4.0增至8.0的過程中，SilicaCBMA固定相功能基電離程度變大[25]，酸性溶質電離且極性也變大[26]，二者間的靜電作用增強使得溶質保留增強。
3.5 鹽濃度對溶質保留的影響
在甲酸銨溶液濃度10～250 mmol/L的范圍內考察了有機酸類化合物的分離情況。由圖6可見，隨著甲酸銨溶液濃度的提高，5種溶質保留時間都隨之降低，且在3種不同接枝量的SilicaCBMA固定相上保留規律相同。這是因為，固定相表面帶正電荷，酸性溶質電離帶負電荷，兩者之間存在離子交換作用，溶質保留隨流動相鹽濃度提高而減弱符合離子交換色譜的特征[27]。
3.6 水含量對溶質保留的影響
在流動相pH=5.0條件下改變流動相水含量（5%～30%），同時保持流動相中甲酸銨總濃度為10 mmol/L不變，探測水含量對有機酸類化合物保留的影響。
由圖7可見，流動相中乙腈與甲酸銨溶液的體積比從95∶5到70∶30，隨著流動相強洗脫劑水含量的增加，酸性溶質保留都減弱，這是典型的親水作用色譜特征，可見酸性溶質在此SilicaCBMA柱子上的保留是離子交換作用與親水作用共同作用的混合模式[28]。
3.7 復方蘆丁片中維生素C、蘆丁含量的測定
復方蘆丁片主要含有蘆丁和維生素C兩種成分，用于高血壓腦病、腦出血、視網膜出血等癥狀的輔助治療[29]。本研究采用自合成的SilicaCBMA親水色譜固定相測定復方蘆丁片中維生素C、蘆丁的含量。
3.7.1 性范圍的測定 稱取適量維生素C、蘆丁對照品，分別用50 %甲醇定容為10～250 mg/L的對照品系列溶液。取上述對照品系列溶液，分別按照2.2.4節進樣并平行測定3次，以質量濃度（mg/L）為橫坐標，峰面積為縱坐標繪制標準曲線，維生素C標準曲線方程y=4196.5x + 106，相關系數r=0.9991， 線性范圍為10～200 mg/L； 蘆丁標準曲線方程y=33096.0x-17120，相關系數r= 0.9994，線性范圍為20～120 mg/L。結果表明，維生素C、蘆丁對照品溶液的質量濃度與峰面積呈良好的線性關系。
3.7.2 重復性實驗 維生素C、蘆丁供試品溶液的制備：取復方蘆丁片5片，研細，精密稱取相當于1片的質量，置于100 mL容量瓶中，加適量50%甲醇超聲溶解后，再用50%甲醇定容，用45 μm微孔濾膜過濾。分別準確移取5 mL濾液于5個50 mL容量瓶中，用50%甲醇定容，作為供試品溶液。
測得5份供試品溶液中維生素C含量為55.5 mg，RSD為1.5%； 蘆丁的含量為40.3 mg，RSD為1.8%，表明本方法測定蘆丁片中維生素C、蘆丁含量的重復性良好。
3.7.3 加標回收實驗 取3.7.2節的2份供試品溶液，分別加入濃度不同的3組維生素C、蘆丁對照品溶液，每組平行測定3次，計算加標回收率，結果見表2。
4 結 論
本研究采用SIATRP技術， 將CBMA接枝到硅膠表面， 通過控制反應條件，得到了CBMA不同接枝量的SilicaCBMA固定相，此固定相可有效分離有機酸類化合物。對酸性溶質而言，溶質在固定相上的保留隨鍵合量增大而增強。酸性溶質在固定相上的保留是親水作用和離子交換作用共同起作用的混合模式。溶質的保留隨流動相鹽濃度增大而減弱，隨流動相pH值增大而增強，符合離子交換色譜的特征； 溶質的保留隨流動相中水含量提高而減弱，表現出親水作用色譜的保留特征。將所得固定相應用于蘆丁藥品中維生素C、蘆丁含量的測定，操作方法簡單，線性關系、精密度良好，為強極性樣品的分離提供了新方法。
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色譜柱范文3
關鍵詞：氣相色譜； 白酒分析； 溫度； 汽化進樣； 柱上進樣； 柱效； 分析時間
Abstract：Gas chromatograph is the important apparatus to analyze microconstiments in liquor and it is classified intopacked column gas chromatograph and capillary column gas dm）matOgmph.The temperature-control accuracy of gaschrDmatO聊h，mode of entry of liquor samples from vaporizing chamber after vaporization to chrDmato舯phic column，DNP chromatographic column efficiency，and liquor analysis time length etc.are the factors influencing the accuracy ofthe data in the analysis ofliquor microconstituents by gas chromatograph.（Tran.by YUE Yang）Key words：gas chromatograph；liquor analysis；temperature；vaporizing sample坷ection；column sample injection；column efficiency；analysis time length
氣相色譜儀器是分析白酒中微量成分的重要設備，絕大多數酒廠都有該設備，白酒氣相色譜儀器分為填充柱色譜儀和毛細柱色譜儀。用填充柱色譜儀可分析出白酒中的16種骨架組分，基本能滿足勾兌和質量監控需求。本文簡單介紹填充柱氣相色譜儀器性能對白酒檢測數據準確性的影響。
1 填充柱氣相色譜儀控溫溫度誤差
填充柱氣相色譜儀用DNP色譜柱檢測白酒時，汽化室和檢測器的溫度須加熱到140～150℃，柱箱溫度須加熱到90～105 cc，溫度的穩定性將直接影響色譜圖基線平直，從而影響數據的準確性。目前填充柱色譜儀控溫方式有兩種。
1.1 “手動電位器+按鈕開關”數字控溫
設定和顯示溫度須經常旋動電位器和轉換按鈕開關，時間長了或氣候潮濕時容易接觸不良，引起控溫不準，溫度波動大等故障；無超溫保護，如控溫部分出故障溫度超過設定值，容易引發安全事故。如果溫度誤差波動在±2℃以上，將造成色譜基線波動，帶來2%一4%檢測數據的誤差。
1.2電腦控溫
電腦控溫溫度誤差波動很小，不會帶來檢測數據誤差。有超溫保護，如控溫部分出故障，溫度超過設定值，將自動斷開加熱裝置，保護色譜儀，不會引發安全事故。
2 酒樣進入色譜柱方式
2.1 汽化進樣
酒樣進入汽化室汽化后，通過不銹鋼襯管，再進入色譜柱，由于死體積太大，色譜峰扁矮，半峰高寬度大，乙醇拖尾峰太長，甲醇與乙醇、乙醇與乙酸乙酯分離差，不銹鋼襯管在150℃汽化室中易吸附組分等因素，檢測出的數據不穩定。
2.2柱上進樣
酒樣直接進入汽化室中的色譜柱汽化，無死體積且不吸附組分，甲醇與乙醇、乙醇與乙酸乙酯分離得相對較好，測出的數據穩定。
3 DNP填充色譜柱效及填充柱氣相色譜儀系統效能
3.1 DNP填充色譜柱效
在所需檢測各組分分離得相對較好的情況下，最后一個峰的保留時間越短，色譜峰就越高，各組分半峰高寬度越窄，DNP填充色譜柱效越高，最低檢出的微量成分就越低。
3.2填充柱氣相色譜儀系統效能
①在柱溫、汽化室、檢測器溫度，載氣、氫氣、空氣流速，DNP填充色譜柱、酒樣進入色譜柱方式一定的條件下。②在所需檢測各組分分離得相對較好的情況下。最后一個峰的保留時間越短，色譜峰就越高，各組分半峰高寬度越窄，最低檢出的微量成分就越低，色譜儀系統效能也越高。色譜儀系統效能主要受DNP填充色譜柱效、酒樣進入色譜柱方式影響。
4 白酒微量成分最低檢出含量與半峰高寬度關系
4.1 色譜專業術語
①峰保留時問：每一個白酒微量成分對應一個色譜峰，從進樣到色譜峰頂時間為該峰的保留時間（詳見圖1）。
②色譜峰面積：色譜峰曲線與基線圍成的面積，為該峰的峰面積。峰面積越大，和該峰對應的白酒微量成分的含量越高。該峰面積計算誤差的大小，由該峰與相鄰峰是否分開決定，峰完全分離時面積計算誤差最小。
⑧酒樣分析時間：在甲醇與乙醇、乙醇與乙酸乙酯分離得相對較好的條件分析時間（即己酸乙酯保留時間）越短，色譜峰就越高，
各組分半峰高寬度越窄，最低檢出的微量成分就越低。
④白酒微量成分色譜峰的半峰高寬度（以圖l為例）：每一個白酒微量成分對應一個色譜峰，從基線到峰頂的一半高度處，色譜峰的寬度為該峰的半峰高寬度Wh（見圖1中的己酸乙酯峰）。
4.2填充柱色譜儀檢測白酒微量成分
對于填充柱色譜儀（一般柱箱溫度恒定）檢測白酒微量成分，在含量（面積）一定，甲醇與乙醇、乙醇與乙酸乙酯分離得相對較好的條件下，己酸乙酯峰頂時間越短，色譜峰就越高，半峰高寬度wn值越小，白酒微成分最低檢出含量也就越低。白酒微量成分最低檢出含量公式如下。
5 結論
色譜柱范文4
[關鍵詞]水中苯胺 頂空進樣 毛細柱氣相色譜法
中圖分類號：TN919.8 文獻標識碼：A 文章編號：1009-914X（2016）01-0298-01
苯胺，無色或微黃色油狀液體，有強烈氣味。微溶于水，溶于乙醇、乙醚、苯。主要用于染料、醫藥、橡膠、樹脂、香料等的合成。苯胺的毒作用因形成的高鐵血紅蛋白所致，造成組織缺氧，引起中樞神經系統、心血管系統和其它臟器損害。苯胺已列入環境優先監測污染物，是重要的水環境質量指標之一。目前水中苯胺的檢測方法主要包括有N-（1-萘基） 乙二胺偶氮光度法[1]、液相色譜法[2]和GB/T5750―2006《生活飲用水標準檢驗方法》[3]中的氣相色譜法。光度法過程較繁瑣，后者方法中前處理步驟復雜，耗時長，并且使用的是比較落后的填充柱分離手段，所以不能適用現階段發展的需要。本實驗采用頂空自動進樣器，毛細管柱進行分離，對檢測方法進行了優化。
1、實驗部分
1.1方法原理
在密閉的頂空瓶內，水樣中的苯胺從液相逸入液上空間的氣相中。在一定的溫度下，苯胺在氣、液兩相間達到動態平衡，此時它們在氣相中的濃度和在液相中的濃度成正比。取液上氣相樣品進行色譜分析。
1.2主要儀器與試劑
Agilent7890A氣相色譜儀（具FID檢測器）；AgilentG1888自動頂空進樣器
色譜柱為HP-5 石英毛細管柱30？m？320？？m？0.25？m；
苯胺標準儲備液：濃度為100mg/L；純水：二次蒸餾水（或購買市售純凈水）；氫氧化鈉：分析純。
1.3頂空進樣器條件
頂空瓶加熱溫度：75℃；進樣針溫度：105℃；傳輸線溫度：150℃；頂空進樣時間：0.10min；壓力化時間：1.0min；頂空瓶加熱時間：20.0min；載氣壓力：15.0psi。
1.4氣相色譜分析條件：
柱箱溫度：柱箱起始溫度45℃，保持1.0min，以20℃/min到120℃，保持2.0min；進樣口溫度：200℃；柱流量：1.0mL/min；進樣方式：分流進樣，分流比為1：1。
1.6樣品的分析
在頂空樣品瓶中，緩慢注入10？mL水樣，加入5.0？g NaOH，蓋上硅橡膠墊和鋁蓋，用封口工具加封，放入到頂空進樣儀中待測定。
2、結果與討論
2.1定性分析
按頂空進樣器條件和色譜條件分析標準樣品，譜圖見圖1。
2.2標準曲線及方法檢出限
標準曲線采用5點法，用蒸餾水稀釋標準儲備溶液配制成20、50、100、200、500？g/L標準濃度系列。每瓶中各加入5.0gNaOH 加蓋壓緊搖勻至NaOH完全溶解，放入自動頂空進樣器內，設定加熱平衡溫度和平衡時間等頂空前處理條件及氣相色譜分析條件，對標準溶液濃度系列進行分析，以各組分質量濃度為橫坐標，相應目標化合物峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，見圖2。結果表明，在20～500？g/L范圍內苯胺響應值和濃度有良好的線性關系。
本實驗按連續分析7個接近于檢出限濃度的實驗室空白加標樣品，計算其標準偏差S。方法檢出限按照MDL=S×t（n-1，0.99）計算。其中：t（n-1，0.99）為置信度為99%、自由度為n-1的t值；n為重復分析的樣品數[4]。計算出苯胺的方法檢出限，檢出限為13？g/L。經實驗證明方法檢出限能滿足《地表水環境質量標準》（GB3838-2002）[5]中規定的特定項目標準限值的要求。
2.3精密度和加標回收率試驗
向空白水樣中分別加入苯胺的標準儲備溶液，配置成低濃度（50？g/L）、高濃度（200？g/L）的標準溶液，加堿后進行加標回收率和精密度試驗，結果見表1。由表1可知，該方法的平均回收率為92.5%～116%，RSD 為5.8%～7.2%
3、結論
本實驗建立了測定水中苯胺的頂空/氣相色譜法檢測條件，分析時間縮短，分析過程大幅度簡化，方法檢出限降到13？g/L、線性相關性、加標回收率和精密度經證明可以滿足環境監測地表水分析的要求，具有廣闊的應用前景。
參考文獻
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色譜柱范文5
SymbolmA@ m），流動相為0.02%TFA乙腈（80∶20，V/V） ，流速1.0 mL/min，波長307 nm。本方法在1～700 mg/L 濃度范圍內與峰面積呈良好的線性關系（r＝0.9999）；定量限（S/N＝10）及檢出限（S/N＝3）分別為450和100
SymbolmA@ g/L；平均加標回收率為101.7%；RSD為0.7%；日內及日間精密度均小于0.7%。表明本方法靈敏度高，測定結果準確，重復性好，可用于2去氧葡萄糖樣品的準確定量分析。
[KH*3/4D][H]關鍵詞 [HS]2去氧葡萄糖； 柱前衍生； 反相高效液相色譜法； 對氨基苯甲酸乙酯
[HT][HK]
[FQ（32,X,DY－W][CD15] 20110701收稿；20111123接受
本文系海洋公益性行業科研專項經費基金 （No.201005020），福建省科技重大專項經費基金 （No.省略 [HT]
1 引 言
2去氧葡萄糖（2Deoxyglucose，2DG）是多種天然抗生素及抗腫瘤藥物的藥效成分，具有抗腫瘤、抗病毒、抗菌、抗衰老、止血及鎮痛等\[1,2\]多種生理藥理效應，在醫藥、食品、化妝品及科學研究領域\[3,4\]具有廣闊的應用前景。建立2DG的快速定量方法，對糖生物學與糖醫學等科學研究及應用具有重要意義。
2DG的檢測方法有離子色譜法和柱前衍生高效液相色譜法\[5,6\]。前者方便、準確，但通用性不佳；后者不僅測定結果準確，還可以克服其缺點。文獻\[6\]曾采用對氨基苯甲酸乙酯（pAminobenzoic ethyl ester，ABEE）衍生化法分離分析2去氧葡萄糖，但所采用的色譜柱是耐堿性的C18柱，流動相為pH 9.0的硼酸鉀緩沖液，這對常用的C18柱（pH＝2.0～8.0）幾乎不適用。本研究采用0.02%三氟乙酸（pH 2.65）乙腈為流動相，適用于幾乎所有C18柱，并以等度洗脫代替梯度洗脫，縮短分析時間；文獻\[7～9\]報道過的ABEE衍生化法所用的糖濃度都較高（25.6 mmol/L），未見采用低濃度糖溶液衍生化的方法。本研究建立的低濃度（2 mmol/L）糖溶液衍生化的方法，為低濃度糖溶液的衍生化提供了參考。本研究采用柱前衍生反相高效液相色譜法同時分離分析2去氧葡萄糖和葡萄糖，方法具有通用性廣、分析時間短、靈敏度高、測定結果準確、穩定性好等優點。2 實驗部分
2.1 儀器與試劑
Alliance 2695高效液相色譜儀（配2996二極管陣列檢測器）, 3100單級四極桿液質聯用儀; MicroMass LCT PremierTM XE高分辨質譜儀（美國Waters公司）；Bruker VERTEX70 紅外光譜儀; Bruker400 核磁共振儀（德國Bruker公司）。
2DG（自制）；葡萄糖（中國藥品生物制品檢定所）；鼠李糖（99%），阿拉伯糖（98%），對氨基苯甲酸乙酯（99%），氰基硼氫化鈉（95%）均購自Aladdin公司；三氟乙酸、甲醇、乙腈（色譜純，Tedia 公司）；冰醋酸（分析純，西隴化工股份有限公司）；超純水（電阻率≥18.2 MΩ?cm，自制）。
2.2 色譜及質譜條件
色譜條件：Hypersil ODS2 （250 mm×4.6 mm，5
SymbolmA@ m）；柱溫：25 ℃；進樣體積：10
SymbolmA@ L；流動相： 0.02%TFA乙腈（20∶80，V/V）；流速：1.0 mL/min；檢測波長：307 nm。
質譜條件：電噴霧離子源（ESI）；電離電壓（毛細管電壓）3.5 kV；一級錐孔電壓35 V；二級錐孔電壓3.0 V；六級桿透鏡電壓0.1 V；源溫度（Source temperature）120 ℃；脫溶劑溫度350 ℃；脫溶劑氮氣流速500 L/h；錐孔氮氣流速50 L/h；高、低質量數分辨率均為15；質譜掃描范圍m/z 100～400。
2.3 樣品處理
準確稱取2DG樣品25 mg，用超純水溶解定容25 mL， 搖勻后取出1.0 mL定容，依次加入1.0 mL 0.15 mol/L ABEE甲醇溶液、1.0 mL 0.08 mol/L NaBH3CN甲醇溶液和50
SymbolmA@ L冰醋酸，于85 ℃水浴中反應1.5 h，取出放冷至室溫，用超純水定容至25 mL，溶液經0.45
SymbolmA@ m濾膜過濾后直接進樣，進樣量10
SymbolmA@ L。3 結果與討論
3.1 2DG的結構確證
自制的2DG經紫外掃描發現, 在195 nm處有很弱的紫外吸收；紅外光譜（KBr壓片法）：3412，3353，3258 （υOH），2925（υCH），1461，1411，1366（δCH），1119，1082，1009（υCO）；核磁共振（400 MHz，DMSO）氫譜：6.51 （1H，d，CHO），4.78 （2H，m，OH），4.61 （1H，m，OH），4.46 （1H，m，OH），3.66～3.42 （2H，m，CH2（OH）），3.33 （1H, m, CH），3.01 （1H，m，CH（OH）），2.91 （1H，m，CH（OH）），1.89～1.25 （2H，m，CH2）；碳譜：13C1（93.38），13C2（76.78），13C3（71.60），13C4（70.79），13C5（61.26），13C6（41.25）；高分辨質譜顯示的準分子離子峰m/z 187.0582 \[M＋Na\]＋ 與2DG結構分子量相符。以上數據可以確證2DG的結構。
3.2 衍生化條件的優化
衍生化時間、溫度及衍生化試劑與單糖的摩爾比均會影響衍生化反應產率（圖1）。本實驗確定衍生化反應的最佳條件為反應時間： 1.5 h； 反應溫度：85 ℃；ABEE與2DG/Glu的摩爾比為25∶1。衍生化反應式見圖2。
圖1 反應時間（a）、反應溫度（b）和衍生化試劑（ABEE）與2DG/Glu的摩爾比例（c）對衍生化反應產率的影響
Fig．1 Effects of reaction time（a）, reaction temperature（b）and molar ratio of paminobenzoic ethylester （ABEE） to 2deoxyglucose/glucose （2DG/Glu）（c）on derivative reactions
（）2DG； （）Glu．[HT][）]
分 析 化 學第40卷
第5期尤小云等： 柱前衍生反相高效液相色譜法測定2去氧葡萄糖的含量
圖2 2DG和ABEE衍生化的反應式
Fig．2 Reaction course of 2DG with paminobenzoic ethyl ester[HT][）]
3.3 LCMS結果
按2.3節處理樣品，將2DG和Glu混合，進行柱前衍生化反應，反應產物在2.2節的色譜及質譜條件下進行LCMS分析，得到的色譜與質譜圖如圖3所示。其中，圖3B中a及b分別為圖3A峰1及峰2的全掃描質譜圖。圖3Ba的基峰質荷比為330，與Glu衍生化產物的加氫分子離子峰（\[Glu＋ABEE＋H\]＋）的質荷比一致；圖3Bb的基峰質荷比為314，與2DG衍生化產物的加氫分子離子峰（\[2DG＋ABEE＋H\]＋）的質荷比一致。此結果表明：2DG及Glu與衍生化試劑ABEE的反應是按照（圖2）所推斷的1:1進行的，2DG和Glu的衍生化產物與H＋結合，產生穩定的準分子離子峰m/z 314和330。LCMS總離子流圖（圖3A）同時顯示，衍生化試劑在單糖衍生產物之后出峰，無需萃取除去，不會干擾2DG及Glu的測定，簡化了衍生化步驟。
圖3 2DG及Glu衍生物的LC/MS色譜圖（A）及質譜圖Ba和Bb
Fig．3 Chromatograms of LC/MS （A） and mass spectra （Ba and Bb）of 2DG and Glu derivatives
1. Glu（m/z 330）；2. 2DG（m/z 314）； Ba. 峰1的質譜圖（Mass spectra of peak 1）； Bb. 峰2的質譜圖（Mass spectra of peak 2）。[HT][）]
圖4 4種單糖衍生物的色譜圖
Fig．4 Chromatograms of four derivatized monosaccharides
1. Glu衍生物（Glucose derivative）； 2. 阿拉伯糖衍生物（Arabinose derivative）； 3. 鼠李糖衍生物（Rhamnose derivative）； 4. 2DG衍生物（2DG derivative）； 5. 對氨基苯甲酸乙酯（pAminobenzoic ethyl ester）。[HT][）]
3.4 方法專屬性
考察常見單糖對2DG測定結果的影響。將鼠李糖、葡萄糖及阿拉伯糖與2DG混合，按最適的衍生條件與ABEE衍生后，在2.2節的色譜條件下進行HPLC分析。2DG的回收率為103.1%；RSD為0.9%。4種單糖衍生物的色譜圖如圖4所示，表明在其它單糖存在的情況下，不會影響2DG的定性及定量分析。
3.5 線性關系、檢出限及定量限
按2.3節配制濃度分別為1, 10, 20, 40, 100, 200, 300, 400, 500, 600和700 mg/L的樣品溶液，進樣量均為10
SymbolmA@ L，峰面積（y）對進樣濃度（x）的線性回歸方程為y＝54533x＋26685，相關系數r＝0.9999，線性范圍為1～700 mg/L。逐級稀釋樣品溶液，當信噪比（S/N）為3時，確定其檢出限為100
SymbolmA@ g/L；信噪比（S/N）為10時，確定其定量限為450
SymbolmA@ g/L。
3.6 日內及日間精密度、重復性和穩定性
按2.3節配制的低、中、高濃度的樣品溶液，測定其日內及日間精密度，結果見表1。3種濃度的日內
[FQ（82。20，Y－WZ][H”][HJ*4]表1 2DG衍生物的日內及日間精密度
Table 1 Interday and intraday precision of 2DGderivative
[HT6][BG（][BHDFG4,WK12，WK14W]2DG衍生物的濃度
Concentration of 2DG
derivative（mg/L）RSD（%）日內Interday日間Intraday
320.70.6400.10.4480.10.5[BHDFG1*2,WKZQ0W] [BG）W][HT][HJ]
和日間RSD均小于0.7%，日內和日間精密度良好。
配制3個不同濃度的2DG溶液，按2.3節進行衍生化反應（n＝3），測得平均含量為102.0%，RSD為0.4%，表明方法的重復性良好。樣品溶液于25 ℃放置，分別在0, 1, 2, 4, 6, 8, 10, 12和24 h進樣，考察衍生產物穩定性，9個時間段峰面積的RSD為0.3%，表明樣品在24 h內穩定性良好。
3.7 實際樣品的檢測結果
對2DG樣品進行3種不同濃度水平的加標回收實驗（n＝3），結果見表2。平均回收率為101.7%；RSD為0.7%，說明本方法的檢測結果準確度良好。實際樣品的檢測結果見表3。
[KH*4D][H”][HJ*4]表2 2DG樣品的加標回收率
Table 2 Average recovery of 2DG sample
[HT6][BG（][BHDFG4,WK7\.4W]加入量Added（mg）
測得量Obtained
（mg, n＝3）
回收率
Recovery
（%, n＝3）RSD（%）10.1610.34101.8
12.7013.00102.4 0.74
15.2415.34100.9 [BG）F][HT][HJ]
[][H”][HJ*4]表3 樣品分析及結果
Table 3 Analytical results of samples
[HT6][BG（][BHDFG4,WK8,WK20W]組分
Component
（%）
樣品 SamplesS1S2S3S42DG97.3598.6497.1097.9997.23Glu1.291.362.422.012.56[BG）F][HT][HJ]
結果表明， 本方法可同時測定2去氧葡萄糖和葡萄糖含量，敏度高、線性范圍寬以及穩定性好。
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Detection of 2Deoxyglucose by Precolumn Derivation Reversed
Phase High Performance Liquid Chromatography
YOU XiaoYun1,2, HONG BiHong*2,4, XIE QuanLing2, YI RuiZao1,2, XU RuiAn1,3
1（Institute of Molecular Medicine, Huaqiao University, Quanzhou 362021, China）
2（The Third Institute of Oceanography State Oceanic Administration, Xiamen 361005, China）
3（Xiamen Key Lab of Marine & Gene Engineering Drugs & Engineering Research Center of Molecular Medicine,
Ministry of Education, Xiamen 361021, China）
4（Department of Materials Science and Technology, College of Chemistry and Chemical Engineering,
Xiamen University, Xiamen 361005, China）
Abstract A method was developed for the determination of 2deoxyglucose（2DG）by reversed phase high performance liquid chromatography （RPHPLC） after precolumn derivated with paminobenzoic ethyl ester （ABEE）. The results showed that the optimum derivation conditions were as follows: reaction temperature was 85 ℃, reaction time was 1.5 h and molar ratio of derivative reagent （ABEE） to monosaccharide （2DG/Glu） was 25∶1. The derivative was analyzed on a Hypersil ODS 2 （250 mm×4.6 mm，5
SymbolmA@ m） column with a mixture of acetonitrile to 0.02% trifluoroacetic acid （TFA） （2∶80, V/V） as the mobile phase, at the flow rate of 1.0 mL/min and the detection wavelength at 307 nm. This method has a good linearity at the concentration from 1 mg/L to 700 mg/L （r＝0.9999）.The limit of detection was 100
SymbolmA@ g/L while the quantitative limit was 450
SymbolmA@ g/L. The average recovery of 2DG was 101.7% and the relative standard deviation （RSD） was 0.7%. The interday and intraday precision were both less than 0.7%，This method is of high sensitivity , precision and repetition, indicating that it is suitable for precise quantitative determination of 2DG.
Keywords 2Deoxyglucose; Precolumn derivatization; Reversed phase high performance liquid chromatography; pAminobenzoic ethyl ester
（Received 1 July 2011; accepted 23 November 2011）
《光譜分析儀器使用與維護》（化學分析工程師實用技術叢書，ISBN 9787122093233）
色譜柱范文6
關鍵詞：液相色譜串聯質譜； 違禁藥物； 多殘留檢測； 豬尿
引言
隨著畜牧業生產中獸藥及促生長劑的廣泛使用，動物性食品中獸藥殘留問題日益成為關注的焦點。農業部2號公告中明確規定禁止用于食品動物和不得在動物性食品中檢出的藥物有種，目前，對這些違禁藥物殘留的分析檢測需采用多種分析方法，開展動物性食品中違禁藥物高通量分析方法研究具有重要意義。
采用液相色譜串聯質譜（LMM）分析檢測畜禽肉、水產品、雞蛋及牛奶基質中幾十種獸藥殘留和環境水及土壤中多類獸藥殘留的報道較多，但有關多類禁用藥物多殘留檢測的報道較少。王培龍等報道了分子印跡固相萃取GM法測定豬尿中種β受體激動劑。本研究有別于傳統的液液（固）萃取前處理，采用真空冷凍干燥技術，建立了豬尿中克倫特羅等β受體激動劑類、激素類、硝基咪唑類和鎮靜劑類等農業部2號公告中22種違禁藥物及萊克多巴胺的多類多殘留分析檢測方法。本方法簡單、靈敏、可靠，各項技術指標滿足動物性食品中禁用藥物殘留高通量檢測及確證的要求。2實驗部分
2儀器與試劑
Agilent 2高效液相色譜系統（美國安捷倫公司）；API 三重四極桿質譜儀（美國應用生物系統公司）；Anpel M固相萃取小柱（6 mg， mL，上海安普科學儀器有限公司）；真空冷凍干燥機（德國hyracont Elektronic Gmb公司）。
對照品（中國獸醫藥品監察所，中國藥品生物制品檢定所，美國igma公司及德國r Ehrenstorfer Gmb公司），甲醇、乙腈及甲酸（色譜純，美國isher cientific公司），其它試劑為分析純。
