前言：中文期刊網精心挑選了保健室的秘密范文供你參考和學習，希望我們的參考范文能激發你的文章創作靈感，歡迎閱讀。
保健室的秘密范文1
一、保密措施是判斷商業秘密存在的外在標志
在商業秘密案件中，現行法律、法規及相關規章均規定，權利人或經權利人授權的使用人是否采取保密措施，是其商業秘密能否成立的判斷標準。如《中華人民共和國反不正當競爭法》第十條第五款規定，本條所稱的商業秘密，是指不為公眾所知悉、能為權利人帶來經濟利益、具有實用性并經權利人采取保密措施的技術信息和經營信息?！吨腥A人民共和國刑法》第二百一十九條第五款規定，本條所稱商業秘密，是指不為公眾所知悉，能為權利人帶來經濟利益，具有實用性并經權利人采取保密措施的技術信息和經營信息。國家工商行政管理局《關于禁止侵犯商業秘密行為的若干規定》第二條規定，本規定所稱商業秘密，是指不為公眾所知悉、能為權利人帶來經濟利益、具有實用性并經權利人采取保密措施的技術信息和經營信息。本規定所稱權利人采取保密措施，包括訂立保密協議，建立保密制度及采取其他合理的保密措施。國家工商行政管理局工商公字（1998）第109號《關于商業秘密構成要件問題的答復》中規定，權利人采取保密措施，包括口頭或書面的保密協議、對商業秘密權利人的職工或與商業秘密權利人有業務關系的他人提出保密要求等合理措施。只要權利人提出了保密要求，商業秘密權利人的職工或與商業秘密權利人有業務關系的他人知道或應該知道存在商業秘密，即為權利人采取了合理的保密措施，職工就對權利人承擔保密義務。
如果說商業秘密的其他構成要件諸如新穎性、實用性等更多地屬于內在技術特質的話，那保密措施則構成商業秘密存在的外在標志，它如同一個容器，為商業秘密提供了存放的空間。其他構成要件諸如新穎性、實用性等內在技術特質再強，如果沒有保密措施所體現出來的管理性，所謂商業秘密依然不能得到確認和保護。在司法實踐中，商業秘密的內在技術特質往往非依法律所能直接認定，也非審判人員專業知識所能直接把握，其認定更多也更主要地依賴專門機構，但是作為商業秘密外在標志的保密措施，則可以據法律規定予以直接審查其是否成立，在這方面審判人員可以充分發揮所長。如果商業秘密的外在標志經審查后不能在法律上得到認定，即便具備其他構成要件，所謂商業秘密也是皮之不存，毛將焉附。商業秘密的這一特殊的外在標志決定了司法審查的工作前提和重點。
二、保密措施的合理性應以最低限度的法律性為邊界
司法實踐中，在適用前述法律及相關規定以判明是否采取保密措施時，由于前述規定的籠統與含糊，缺乏可操作性，給商業秘密外在標志的認定帶來較大的困難。比如，權利人向義務人提出保密要求能不能構成保密措施？是不是還要具備其他的相應條件？如果還需其他條件，那各條件間是并列關系還是遞進關系？即是具備其一即可還是需同時具備其他或全部條件？這些問題恰恰是司法實踐中最常遇見又最亟需解決的，卻很難簡單地適用前述規定作出判斷。歸結為一點就是，保密措施的制定要不要達到合理程度以及怎樣才算是合理程度？目前的問題是，現有法律、法規及相關規定中，關于商業秘密中的保密措施的規定，或是不詳，或是要求過低，或沒有厘清保密措施間的關系，由于沒有涉及到合理性的問題及其判斷標準，審判實踐中出現不少認定上的困難。如《中華人民共和國反不正當競爭法》和《中華人民共和國刑法》中，對商業秘密的認定僅規定經權利人采取保密措施，卻沒有規定其具體內容。國家工商行政管理局工商公字（1998）第109號《關于商業秘密構成要件問題的答復》中，關于保密措施的規定僅僅是權利人提出保密要求，標準顯然過低?！秶夜ど绦姓芾砭株P于禁止侵犯商業秘密行為的若干規定》雖然提出了保密措施的具體內容，卻沒有進一步說明其間的關系，是適用其一即可認定還是適用全部方可認定，均無下文。由于上述規定中存在的種種操作上的缺陷，司法實踐中對是否采取保密措施的認定往往不一，直接影響了案件的審理質量。
筆者認為，保密措施體現了權利人為有效保護商業秘密免受侵犯所付出的努力，理所當然地構成商業秘密的要件之一。對權利人制定的保密措施，當然不能要求做到萬無一失，但起碼也不應是空紙一張，只是擺個樣子，而缺少實際的落實。權利人所采取的保密措施，應當具有一定的合理性。關于保密措施應具有合理性，最高人民法院以前曾在有關司法解釋中曾作過相應的規定，如《審理科技糾紛案件的若干問題的規定》第51條規定，非專利技術成果應該具備的管理性條件為，擁有者采取了適當保密措施。這一解釋反映出司法機關對保密措施程度已經有所認識，只不過這種認識仍需進一步深化。
當然，保密措施合理性的程度差異往往因人而異，因角度不同而異，因利益沖突而異，在權利人與義務人之間并沒有一個統一的價值評判標準，也不可能形成這樣一個統一的價值評判標準。對于權利人來說，保密措施合理性的門檻自然是越低越好，門檻越低，付出的成本就越小，行為就越經濟。但是，低到什么程度才是最經濟的合理行為呢？筆者認為，要使對這個問題的度量具有可操作性，必須將其納入到法律的軌道上來。權利人所采取保密措施，僅是一種客觀事實，客觀事實與法律事實還不是一回事。當事人感覺到的客觀事實之所以與法律事實尚有一段距離，就是因為只有通過一定的方式，客觀事實才能轉變成法律事實。保密措施這個客觀事實要想轉變成法律事實，就必須符合法律的基本要件，在法律上獲得最低限度的確認。也就是說，評判保密措施是否具有合理性，只有將其上升至最低限度的法律性，獲得起碼的法律支撐，保密措施才談得上具有合理性。因此，權利人所采取的保密措施，其合理性的門檻再低，也不能低于法律能夠給予確認的最低標準，低于這個標準，保密措施的合理性就很可能因為難以在法律上得到確認而無法成立，此時保密措施的所謂合理性不過是權利人單方意愿的表示罷了。只有達到了法律性的最邊界處，所采取的保密措施才能既體現出權利人保護商業秘密的主觀努力，同時又由于在法律上獲得最低程度的確定而具有合理性。因此，任何合理性說到底都是最低限度的法律性，不將合理性奠基在最低限度的法律性之上，所謂的合理性就會因為無法得到確認而沒有實際意義。
三、保密協議作為保密措施合理性判斷標準的可行性
保密措施有多種表現形式，如保密制度、劃定密級、知悉范圍、保密設施、保密協議等等。根據保密措施合理性應具有最低限度的法律性的觀點，筆者認為，在諸多的保密措施中，保密協議最符合關于保密措施合理性這一標準，其他保密措施如保密制度、保密設施等均難以單獨或共同構成保密措施合理性的法律標準，或者在依法評判時要冒相當大的不確定的風險。
首先，任何保密措施都是針對人的，只有將保密措施落實在人身上，才能有效防止泄密。與其他的保密措施相比，保密協議針對的是特定的具體的人，不僅最大程度地體現了保密過程中人的因素，而且將權利人與義務人有機地結合在一起，強烈反映出權利人的保密意愿和具體落實，鮮明體現出雙方的意志，這些特點都是其他的保密措施所不能及的，在保密意愿、保密力度及約束力方面顯然不及保密協議。
其次，保密協議處在法律性的最邊界，因此最易獲得法律的確認。將保密義務以書面形式予以界定，不僅明確劃分出其間的權利義務范圍，更重要的是，這種劃分也獲得了法律上的最低同時也是最基本的承認，隨時可以行使的舉證權保證了權利人采取的保密措施獲得了法律上的合理性。而其他的保密措施，由于更多地反映的是權利人的單方意志，在法律上的可操作性差，獲得合理性確認的風險很大。因為任何保密措施的合理性的主張，一旦納入到法律范圍，一定程度上就脫離了其原來的客觀屬性，只能依照法律的規定予以確認。在這個確認過程中，有一些不符合法律要求的方面不可避免地要被剝離，從而大大削弱了其合理性的法律證明力。其他保密措施在法律上的最大難題是，往往都是單方舉證，如果對方予以否認，很難證明該措施是在商業秘密出現之初即已制定，即不能排除后來彌補的可能性，這在刑事案件中表現得尤其突出，因為在刑事案件中對證據的審查更嚴格。如筆者辦理的安徽首例侵犯商業秘密罪案，由于權利人未與義務人簽訂過保密協議，結果只舉出保密制度、保密要求等證據，證明其已采取過一定的保密措施，由于被告人對此予以否認，認為系事后所補，且證人證言與權利存在利害關系，由于權利人無法舉出排他性證據，其提出的已采取了合理保密措施的證明顯然就很勉強。
保健室的秘密范文2
能夠拍成電影、搬上熒幕的，都是詹姆斯?邦德最風光的功勞，其實007一年到頭來并不總是如此風光，比如這個最新接到的任務。根據中情局的最新情報，來自歐洲某大國R國的間諜已經瞄準了代號為“XPS”的高度機密資料。而邦德接到的任務是保護此機密文件。
硬盤中總有一些需要被保護的文件，本文就是使用跟007相同的方法將這些文件進行嚴密保護，以防被破壞。被保護文件及代號：
1.個人及工作的重要資料(My documents)
2.系統分區重要文件(參見2008年22期83頁《C盤根目錄文件解析》)
3.Ghost備份文件(GHO文件)
4.郵件數據文件(客戶端存放)等。
一重保護：
改頭換面――擴展名修改
首先007將機密文件進行了包裝，讓間諜無法識別出。
使用矮人DOS工具箱之類的工具，進入DOS命令，輸入GHO文件所在盤符，比如e：然后回車。輸入“cd ghost”回車，再輸入“ren system.gho system.xxx”回車，ren命令的作用是重命名文件。
二重保護：
建立基地――專用分區存放
007在一個人煙稀少的地區建立專用基地，用來保護XPS。
使用一個專門分區存放備份，進行磁盤整理時只要忽略這個分區即可。分區的劃分使用磁盤管理組件。
右擊桌面“我的電腦”選擇“管理”，打開計算機管理窗口依次展開“存儲磁盤管理”。右擊右側窗格的D:選擇“刪除邏輯驅動器”，分區刪除后再次重建分區，按提示創建一個大小為3GB（一般XP備份這個容量即可）FAT32分區，盤符為D:。剩余空間創建另一個分區，把前面轉移文件拷回該分區即可。
三重保護：
隱形倉庫――建立隱藏目錄
這樣即使R國間諜闖入基地，也找不到XPS的藏身之處。
建立一個完全隱藏的目錄用于存放文件，這個目錄病毒無法訪問也無法刪除。啟動命令提示符，輸入“md d:\...\”，在D:創建隱藏目錄“…\”。現在打開D:，并不能看到上述創建目錄，但是這個目錄確實存在。目錄查看可以在命令提示符輸入“dir /x d:”，此時可以看到一個名為“e2e2~1”的目錄，這就是隱藏目錄（見圖1）。
四重保護：
最新驗證――設置訪問權限
007給倉庫用上了最新的驗證技術。
為了更好保護備份，成功備份后用“convert d: /fs:ntfs”將分區無損轉化為NTFS分區。這樣可以使用權限更好保護備份文件的安全。比如，可以啟動命令提示符輸入“cacls d: /d:cfan”，設置當前用戶CFAN無法訪問D:。即使有人知道進入該目錄的方法，也由于權限不足無法打開。
終極保護：
反探測裝備――刪除分區盤符
最終，007將整個基地都裝上了反探測裝備，再也不用擔心暴露了。
保健室的秘密范文3
關鍵詞：MOOC；保密史及保密制度；課程設計
基金項目：哈爾濱工程大學2013年度教育教學改革研究項目（JG2013YB24），“基于現代教育技術的教學模式的改革與實踐”
中國分類號：G423
一、背景
隨著高校生師比的不斷增高，計算機網絡的不斷發展，慕課在2008年在美國誕生并席卷全球。其中的教育平臺先驅網站Coursera推出僅前4個月注冊學生人數就超過100萬人。據統計，近年來在Coursera登記參加一門以上的網絡課程學生人數不斷增長，變化曲線如圖1[1]所示。
圖1參加至少一門網絡課堂學生人數
在這一趨勢下，我國各高校結合自有優勢開展了慕課課堂的相關實踐和研究工作。本文將MOOC與保密史及保密制度專業選修課程相結合[1]。近年來，保密的重要性已經不容忽視，自“棱鏡門”事件后，保密工作也成為各項工作的前提。學好保密史及保密制度對每個國家保密學院學生尤其重要。作為一個新興課程，該課程的課程設計、教學模式等方面并不是十分完善。一個是新課程模式，一個是新的課程，因此，筆者希望將這兩個“新”有效結合，以進一步提高課程效果。雖然國內外的研究學者已經做過將MOOC應用于大學教學中的研究，但是，針對于保密史及保密制度這一特定學科的研究還從未出現。因此，筆者將針對MOOC的特點，結合傳統大學教學模式，闡述MOOC的優勢和劣勢，以及如何結合兩者優點，形成新的保密史及保密制度教學模式。
二.什么是MOOC
1 MOOC的定義：MOOC，是“massive open online courses”的縮寫，即大規模開放式在線網絡課程。從它的名字來看，我們很容易得到MOOC的特點：1廣泛的開放性。它歡迎每個對相關課程感興趣的同學，學習沒有國籍、語言、年齡等任何方面的要求，只要你能上網，你就可以加入MOOC學院，免費學習。在線實時性。在MOOC學院學習不會受到時間與地域的限制，你可以在合適的時間，坐在家里，欣賞名師課堂，因為MOOC學院的學習是在網上完成的。當然，這只是MOOC的基本特征，是構成MOOC的前提。除了這些，MOOC還具有：易于使用；費用低廉；覆蓋的人群廣；自主學習；學習資源豐富[2]的優點。
2.MOOC中學生類型：結合已有研究，基于作者多年的MOOC教學實踐的基礎上，提出了5種學生類型[3]。1僵尸用戶：此處借用微博中名詞，即目前困擾大多數MOOC網站的現象，注冊的人數很多、但是堅持學習并堅持到最后的10%都不到。2瀏覽用戶：該類學生不能深入地學習相關課程，而是迅速瀏覽和了解課程信息或者偶爾完成MOOC中的測驗題甚至考試。無法達到教學目的。3淺學用戶：這部分用戶學習課程沒有明確目標和進度設計，而是根據自身愛好挑選不同的課程進行學習和嘗試。雖然比瀏覽用戶留在網上時間要長，并且可能會完成整個課程，但不會深入討論和學習。4被動用戶：該類用戶一般是在校學生或者已工作職工，為了獲得培訓證書。因此學習時完全按部就班地參與學習、討論，完成作業，既不能為課程做出貢獻，也不能產生額外的教學效果。5主動學習用戶：該類用戶有明確的學習目的、學習東西，能夠積極地參與到MOOC教學中，發起討論給出解決辦法，是課堂教學的有力補充和教學主體。同時能自掘地完成課堂任務。
3. MOOC的缺點：1分布廣泛，監管困難：大規模雖然是MOOC的一個優點，僵尸用戶沒有通過MOOC獲取任何知識，空占其位，浪費了學習資源。而且，由于規模較大，我們難以掌握每個人的學習情況。2無法提供“校園文化”。在校園中，學生需要處理人際關系，進行社會實踐，這在MOOC上都是無法獲得的。3互動距離遠，導致互動影響小。這是MOOC最顯著的問題。Pennsylvania大學教授邁克爾?慕而曾經在1983年論述過該問題，稱之為交互影響理論，也叫Moore理論。該理論是說在課堂教學過程中，教師和學生之間存在了物理距離影響著心里距離的情況[4]，即由于物理距離不可達可能導致心里距離的遙遠，從而影響了溝通和學習的效果。因此通過MOOC的學習，實際上是一種通過計算機技術將教師和學生之間的距離拉近，并降低了交互距離的現代化舉措[5]。
所以，正是基于上面的討論，MOOC只能作為傳統教學的補充，而不能也不影響傳統教學模式的地位。
三、課程特點
保密史及保密制度是哈爾濱工程大學針對信息安全（保密管理）專業設立的專業選修課。該課程于開始于2013年，作為一個新開設的課程，保密史及保密制度的課堂具有以下幾個特點：1在內容上偏屬文科。歷史是一種過去的事實，保密史也如此。而選修此課程的學生則都是理科生，這是一個矛盾。作為一個新興的學科，保密史與傳統的歷史學科相比材料較少，內容豐富度不足。2學科交叉聯系相關。保密史是一種綜合性強的學科。它保函古今中外，跟保密相關的各種史實和知識。所以，在課堂教學中要抓住這一特點。3師生間的影響距離大。本課程是小班課程，教學人數在20到30人之間，學生人數少，師生之間能夠獲得更多的交流、互動，這也是該課程于MOOC課程最大的差別，可以利用這個特點，形成互補。
四、MOOC與保密史及保密制度課程的結合方法
1. MOOC的教學模式：MOOC的授課主要是以視頻教學錄像與教師的講解相結合的方式進行在線教學，其中模塊化的短視頻方式方便學習者按主題學習，學生可以利用零碎時間拆分觀看學習。另外，在教學資源中一般會嵌入超鏈接與相關背景資料，方便學生對知識的延伸[6]。
MOOC的教學模式如圖2所示：
圖2 MOOC的教學模式
2. 結合MOOC教學模式的教學設計：結合MOOC的授課方式和教學模式，筆者得到以下方面的保密史及保密制度教學方法。1制作開發MOOC視頻，保證教學質量。視頻課程可以廣泛使用，每年只針對新的教學內容進行修改，是一種可持續的教學方式。學生們完全可以在課下進行自主的學習，將課堂的寶貴時間用來發散思維。2豐富教學內容，以知識塊為單位建設課程資。MOOC課程的視頻資源大多數是以知識模塊劃分單位，在不同的知識模塊之間，可以加入一些考核的內容以強化講過的知識點，這樣同事也可以給學生留出獨立思考的時間，并能強化教學效果[7]。3課堂將“以教師為中心”轉為“以學生為中心”因為知識的傳授可以在課下完成，在課堂上，教師的角色反而減弱。真實的課堂可以轉換為MOOC教學模式中的“在線討論組”“線下見面會”。老師可以及時解決學生的問題，師生之間也可以進行積極的討論。4發揮大學校園文化的獨特魅力[8]。大學作為一種特殊的組織機構，除了具有一般組織機構的特征外，它又有自己獨特的文化特性，并以物質的、制度的、精神的形態表現出來。面對MOOC浪潮的沖擊與社會的質疑，大學就應該發揮其獨特的文化魅力。
五、結語
由于MOOC的興起，傳統大學的教學觀念和教學方法都會隨之改變。雖然，受到MOOC的沖擊，傳統的教學還是有其不可替代的地位和作用。如何將MOOC思想應用在保密史及保密制度課程，使教學效果更好是本文關注的方面。
首先，從MOOC的教學模式入手，進行視頻開發，并以知識塊為單位對課程進行分割；其次，把課堂的“以教師為中心”轉為“以學生為中心”，并根據學生的學習情況進行課程調整；只有老師與學生也要共同努力，將方法落實，課程設計還需要在長時間的實踐中不斷完善。
參考文獻：
[]郎大鵬，董宇馨，呂天陽，黃少濱，《基礎課教學中結構化綜合評價模型的構建與研究》，《計算機教育》，2013（11），第22期
[2]王文禮.MOOC的發展及其對高等教育的影響 2013
[3]中國教育網絡.MOOC的五種學生類型[EB/OL]. http：///li_lun_yj_1652/20130507/t20130507939524.shtml
[4]Lang Dapeng， Lv Tianyang， Research on the Method of Computer Practical Class Teaching Based on Cloud Computing，2012，2nd Teaching Seminars on Higher Education Science and Engineering Courses。2012：561-564；
[5]楊杉，夏志鵬.MOOC中的交互影響距離研究.2014
[6]謝瑩，解繼麗.MOOC革命：在線教育的發展對傳統大學的沖擊與影響 2014
保健室的秘密范文4
一、關于技術秘密信息許可費價值評估可能涉及的相關資料及其關聯性分析
從筆者目前所能夠掌握的資料來看，進行技術秘密信息許可費評估具體需要哪些資料，并沒有統一的要求，一般都需要根據案件的情況確定，在多數的情況下還要委托單位（公安機關）、受害單位（權利人）與評估機構進行多次溝通。什么時間開始溝通，什么時間溝通什么問題還有可能成為被關注或者被質疑的對象。偵查機關在正式委托評估機構之前，需要確認該評估機構是否可以承擔該工作并愿意接受委托。而評估機構在確認能夠完成該項委托評估事宜之前，需要了解案件所涉及的具體問題，包括可以提供哪些資料與數據信息等。簡單地講，評估機構在沒有回復確認可以完成該項委托前，偵查機關不會出具正式的委托書。如果出具了正式的委托評估函件而評估機構因客觀原因無法完成所托事宜的，就必須更換評估機構再次出具委托函件；按現行的流程，這會給公安機關帶來很多的問題。所以，在司法實踐中就常常會出現委托書出具的時間在評估機構接觸案件材料與受害單位之后，這也是辯護人在開庭質證時對此提出質疑的原因。評估機構在正式接受委托手續之前，與偵查機關、受害單位接觸的目的雖然是為了確認是否可以完成受托事項所做的必要工作，但程序依然有規范的必要，比如建議公安機關在正式出具委托函件前，將這一階段的工作納入辦案程序中，并把接觸的時間、事實、目的以及所提供的材料信息等予以明確。
基于上述分析，提高效率為順利進行評估工作做好充分準備顯得非常必要，筆者從實務的角度提出點滴建議供參考。下文以化工行業技術秘密信息許可費價值評估可能涉及的相關資料信息為例作簡要的說明。
一般而言，為《評估鑒定報告》準備的參考資料主要有：（1）關于經營資質和商業秘密成立的資料，主要是營業證照、公司章程，以及司法鑒定意見書、保密措施等。這類資料多是程序性材料，與評估結果沒有直接關系，可以提前做好準備；（2）關于案情的相關資料信息，主要是基本情況介紹、使用涉案技術秘密侵權的相關證據、侵權人項目的規模信息、與技術秘密有關的鑒定報告等；（3）受害單位的財務資料，主要是經過審計的財務報告、設備表、設備訂購合同等。這類資料與評估結果關系最密切。評估人員需要根據財務制度到受害單位核實與評估有關的原始單據、合同，并從經審計的財務報告中提取相關財務數據，作為評估的重要參考。這部分財務數據與材料，法律專家需要與受害單位的財務專家做充分深入的溝通；（4）第四類是評估人員根據專業經驗進行調研而獲得的有關涉案產品市場前景和產業政策等方面的資料。這些資料需要提前為評估機構做好前期的準備工作，包括可以獲得這些資料信息的渠道、途徑、方法等。
很顯然，從實務操作的角度看，上述介紹能夠貢獻的地方是極其有限的，對該部分業務有所了解的讀者不難發現，這是基于“收益法”評估方法而做的舉例說明。所謂的“收益法”，即依一定的產品銷售規模產生的收益入手，計算未來可能取得的收益，再通過一定的分成率，得出該評估對象在一定的經營規模下于評估基準日的公允價值。針對商業秘密市場價值的評估，除收益法外，還包括市場法和成本法。由于商業秘密形成的直接成本往往與其價值沒有直接的對應關系，即投入產出的弱對應性，因此一般不采用成本法，或者在采用時會非常慎重。如果國內有類似商業秘密充分交易的案例時可以考慮采用市場法評估，如果沒有充分的案例可以參考的，則放棄市場法。這里需要特別強調的是，不采用成本法的原因是投入產出的弱對應性，而不是對涉案技術秘密投入成本在案件中貢獻的漠視，更不是根本的否定。在本專欄的其他文章將會闡述這一問題。
二、技術秘密信息許可價值評估意見結論成立的條件、有效期及其效力
價值評估結論受機構評估人員的職業水平和能力的影響，并且僅為委托方進行以本次評估目的所發生的經濟行為提供服務，對于將其運用到其他經濟行為時，評估結論一般會失效，不具同等效果。一般來講，評估工作不考慮國家宏觀經濟政策發生變化以及遇到自然力和其它不可抗力對資產價值的影響，也不考慮資產將來可能承擔的抵押、擔保事宜，以及特殊的交易方可能追加付出的價格等對其評估值的影響。當評估條件以及評估中遵循的持續經營原則等其他情況發生變化時，評估結果一般會失效。所以，我們無論是在技術秘密的刑事案件中還是在民事案件中，都要結合案件的具體情況看待所評估的價值，而不能脫離案件以及所涉及技術的具體情況，特別不應當通過運用經濟行為來模擬其準確性，從而泛泛地評論價值是過高還是過低，并進而質疑，甚至得出完全否定價值評估意見的結論。
技術秘密信息許可價值評估報告中，一般都會對有效使用期限做出表述，即：從XX年X月X日到XX年X月X日止，評估目的在本評估報告的有效使用期限內實現時，評估結果可以作為參照依據。超過該有效使用期限，需重新進行資產評估?？墒?，案件還沒有審理完畢，評估報告的1年有效期已經屆滿，怎么辦？技術秘密刑事保護司法實踐中辯護人曾提出過有效期屆滿不應采用的辯護觀點。筆者認為這個問題要結合案件的具體情況而定?！顿Y產評估準則DD評估報告》（中評協[2007]第189號）第11條規定，“評估報告應當明確評估報告的使用有效期。通常，只有當評估基準日與經濟行為實現日相距不超過一年時，才可以使用評估報告?！笨梢?，評估準則規定評估報告的有效期，是為了避免評估基準日確定的評估價值和經濟行為實現日的實際價值差異過大而無法使用評估報告。通常，評估報告的有效期是針對評估后一段時間才使用評估資產的情況，此時會產生“評估基準日”和“經濟行為實現日”兩個時間點，如果經濟行為實現日在評估基準日之后并超過1年，則評估基準日的評估價值可能發生重大變化，而不宜再使用評估報告。所以評估報告所確定評估基準日與評估目的很關鍵。比如，嫌疑人竊取了受害單位全套技術，所要評估的是在竊取完成日假定為受害單位將全套技術許可給使用方的許可價值，以確定受害單位因喪失該次許可機會而導致的損失?？梢?，竊取完成日，既是評估基準日，也是假定進行技術許可的經濟行為實現日，兩個時間點是重合的，因此，評估基準日的評估價值，就是許可這一經濟行為實現時的許可價值。當評估是對歷史時點的價值評估時，就不存在經濟行為實現日超過評估基準日后1年而評估報告不能使用的說法了。
三、價值評估報告復核人的法律地位以及《評估說明》的保密問題
《司法鑒定程序通則》（2016年5月1日起施行）第4條明確規定，司法鑒定實行鑒定人負責制度。要求司法鑒定人應當依法獨立、客觀、公正地進行鑒定，并對自己作出的鑒定意見負責?？墒?，第32條又規定了一個復核人，即委托的鑒定事項完成后，司法鑒定機構可以指定專人對該項鑒定的實施是否符合規定的程序、是否采用符合規定的技術標準和技術規范等情況進行復核，發現有違反通則規定情形的，司法鑒定機構應當予以糾正。復核人的法律地位是不清楚的。司法實踐中，曾發生過辯護人提出復核人是否應當回避的問題?！端痉ㄨb定程序通則》第20條規定：司法鑒定人本人或者其近親屬與委托人、委托的鑒定事項或者鑒定事項涉及的案件有利害關系，可能影響其獨立、客觀、公正進行鑒定的，應當回避。司法鑒定人自行提出回避的，由其所屬的司法鑒定機構決定；委托人要求司法鑒定人回避的，應當向該鑒定人所屬的司法鑒定機構提出，由司法鑒定機構決定。委托人對司法鑒定機構是否實行回避的決定有異議的，可以撤銷鑒定委托。可是沒規定復核人是否要適用回避的條款。《刑事訴訟法》第145條規定，“鑒定人進行鑒定后，應當寫出鑒定意見，并且簽名。鑒定人故意作虛假鑒定的，應當承擔法律責任?！敝袊Y產評估協會《資產評估準則――評估報告》第9條規定，“評估報告應當由兩名以上（含兩名）注冊資產評估師簽字蓋章。”法律和相關評估準則中沒有“復核人”的概念，更未將其規定為“鑒定人”，也未規定其適用回避的相關規定。但是司法實踐中復核人的角色又很重要。為了有效地避免爭議，筆者建議，評估機構在確定評估師時將復核人也一并告知并要求委托人或者當事人回復是否提出回避申請。
在技術秘密刑事保護的司法實踐中，還有一個很敏感的問題，即價值評估過程中評估機構內部保存一份叫做《評估說明》的文件，當辯護人提出要求評估機構提供時，是否應當被支持。這個問題之所以敏感是因為會涉及到受害單位的定價指數與定價原則，非常珍貴并且極易容易泄密，所以受害單位極力反對，評估機構也非常重視。筆者傾向于評估機構有權拒絕提供《評估說明》。
基本理由如下：（1）評估說明是財產評估主管機關、企業主管部門審查資產評估報告書和檢查評估機構工作之用，不是法律法規規定的評估報告的組成部分，也非附件；（2）評估說明屬于評估專家的專業和經驗范疇，評估專家已經當庭詳細解釋了其中涉及的重要問題；根據評估專家的當庭解釋，評估說明主要是如何確定評估中重要參數和方法的技術性說明，屬于專家專業和經驗范疇，比如技術分成率、評估方法、許可方式等。評估專家可以在當庭詳細解釋了為什么采用這些參數和方法，而且在評估報告中明確列出了選擇確定的最終結果。（3）評估材料中，對評估價值有實質影響的是受害單位的財務資料是保密的，且經過審計機構審計，質疑其真實性理由不充分。
注：本文節選自LexisNexis律商網【桃李知教】專欄，其專注觀察和解析知識產權領域最前沿、最新型的法律問題，旨在識微見遠，或指點迷津。
保健室的秘密范文5
關鍵字：降雪，觀測，.NET
中圖分類號： S161.6 文獻標識碼：A
1引言
根據中國氣象局關于開展降雪加密觀測的緊急通知中，為滿足預報服務對降雪觀測的需求，決定開展降雪加密觀測。為了減輕了觀測員的工作強度，降低手工編報出錯的機率在市局業務科的大力支持下開發編寫了降雪加密觀測編發報軟件。
2 Visual Studio .NET集成開發環境概述
Visual Studio 是微軟公司推出的開發環境。是目前最流行的 Windows 平臺應用程序開發環境。Visual Studio .NET繼承了Visual Basic 6.0的快速開發的優點，另外，與.NET框架下面的其他語言如C#和Visual C++ 一樣，Visual Studio .NET是完全面向對象的。Visual Studio 可以用來創建 Windows 平臺下的 Windows 應用程序和網絡應用程序，也可以用來創建網絡服務、智能設備應用程序和 Office 插件。
3 設計思路
此系統的流程如圖1所示，其功能包括：參數設置；報文編輯；報文發送；系統主界面如圖2所示：
圖1 系統運行流程圖
圖2降雪加密觀測編發報軟件主界面圖
3.1參數設置：右擊桌面右下角狀態欄的最小化圖標，選擇“參數”或者系統界面上的紅色參數設置連接按鈕可以打開參數設置窗體，如圖3所示。此模塊可以設置臺站的區站號、經緯度，方便靈活，可移植性強。報文的發送是通過FTP方式上傳到遠程服務器上指定的遠端路徑，所以首先設置連接遠程服務器的參數，可以通過此模塊設置服務器IP地址、端口、用戶名、密碼、遠端路徑，設置完畢重啟軟件設置生效。如果訪問的遠程服務器相應參數有變動可以通過此模塊重新設置。
圖3參數設置
3.2報文編輯：輸入觀測數據后單擊“計算編報”，系統在后臺根據降雪加密觀測的相關文件按照編報文件名的格式和編報文件內容的格式自動編譯并在本地文件夾中生成報文。報文的文件名、文件內容然后在界面上顯示出來，形象直觀，可讀性強。在輸入觀測數據的時候如果誤輸入其它的非法數值(如字符，漢字等)或超出觀測范圍的數值(如累積降雪深度為9999CM等)系統會出現錯誤提示對話框，來提醒觀測員。這在一定程度上減輕了觀測員的工作強度，也避免了在手工編報過程中因認為因素造成觀測數據的真實性。
3.3報文發送：觀測員在認真校對報文的文件名和報文內容準確無誤后，單擊“報文發送”，系統會自動連接到遠程服務器，并把生成的報文上傳到指定的遠端目錄文件夾下。報文發送到遠端目錄下后，系統把上傳到服務器的報文再下載到本地指定的目錄文件夾下，然后比較兩者報文的內容是否相同，如果相同說明文件發送成功，否則說明文件沒有成功發送。在報文發送的過程中從遠程數據庫的連接到報文內容的比較，發送是否成功，系統界面的報文回執欄都會顯示每一步報文的發送過程，一目了然的查看了報文的發送狀態。如圖2所示。
4 降雪加密觀測編發報軟件實現的核心代碼
4.1在Visual 平臺下實現報文編輯的主要代碼為：
……
FileName=CreateFileName();//文件名組合函數
if (File.Exists(FileName));//如果文件存在
File.Delete(FileName); //直接刪除已經存在的文件
sw=File.CreateText(FileName);//創建新文件
sw.WriteLine(ReportText);//寫入文本內容，ReportText表示編輯好的文本內容
……
StreamReader sr=File.OpenText(path);//打開文件
txtReportText=sr.ReadToEnd();//報文內容顯示在界面上
……
4.2報文發送是通過FTP方式發送到遠程服務器上，主要代碼為：
……
//連接FTP
FTP myftp=new FTP(IP,ServerPath,UserName,UserPwd,Port);
//其中IP表示服務器地址，ServerPath表示遠端路徑，UserName表示用戶名，UserPwd表示用戶密碼，Port表示服務器端口
//上傳文件
myftp.Put(UpFilePath, UpFileName);
//其中UpFilePath表示要上傳文件的本地路徑，fileName表示要上傳的文件名
//文件下載
myftp.Get(DownFileName,LocalFilePath); //下載到本地
//其中fileName表示從遠端服務器下載文件的文件名，LocalFilePath表示要下載文件到本地的路徑。
//關閉連接
myftp.DisConnect();
……
UpFileText=File.OpenText(UpFileName);//打開本地報文
FileText1=UpFileText.ReadToEnd();//讀取報文內容
DownFileText=File.OpenText(DownFileName);//打開從遠端服務器下載的報文
FileText2=DownFileText.ReadToEnd();DownFileName//讀取報文內容
if (string.Equals(FileText1, FileText2)==true)//如果文件內容相同
{
……//報文發送成功。
}
else
{
……//報文發送失敗。
}
……
5 結語
本系統在Visual 平臺下實現了降雪加密觀測自動編報、發報的功能,在張家口全市14個臺站2009年11月9日至今加密觀測編發報的運行下，沒有出現任何錯誤，可以幫助觀測人員減輕工作強度，降低手工編報出錯的機率，提高工作效率。
參考文獻：
保健室的秘密范文6
作者：李樹鈞，戚好文，葉江楓，帝新宇，季少平，何鵬，張英起，藥立波
【關鍵詞】 嗜酸粒細胞
【Abstract】AIM: To investigate the activity of MIP4 mutant (MetMIP4) in blocking eosinophils chemotaxis in vitro by expressing MetMIP4 in E. coli and purifying it. METHODS: The gene of MetMIP4 was inserted into the expression vector pRSETA and pRSETMetMIP4 fusion protein was expressed by IPTG induction. After E. coli. was lysed by ultrasonic wave， the solubility of the fusion protein was determined by SDSPAGE gel electrophoresis. Protein in supernatant was purified by Ni2+NTA agarose beads. The activity of pRSETMetMIP4 protein in inhibiting eosinophils chemotaxis was determined with 24well chemotaxis plate filter. RESULTS: The pRSETMetMIP4 fusion protein was expressed in E. coli. The solubility of the fusion protein reached 80% and the purity of the fusion protein was 87% by Ni2+NTA agarose beads. Eosinophil was purified from asthmatic blood and Eosinophil purity was 90%. Investigation of biological function of the fusion protein showed that the fusion protein inhibited the eosinophils chemotaxis. CONCLUSION: The pRSETMetMIP4 protein has been correctly expressed in E. coli and the fusion protein is soluble. Study of the biological function of the fusion protein indicates that the fusion protein can inhibit eosinophils chemotaxis in vitro.
【Keywords】 chemotactic factors; eosinophils; gene expression; genetic vectors
【摘要】 目的： 為研究MIP4（巨噬細胞炎性蛋白4）的突變體在拮抗嗜酸粒細胞的趨化作用中的活性，構建MIP4突變體（MetMIP4）并進行原核表達和純化，體外觀察其拮抗嗜酸粒細胞的趨化作用. 方法： 將MetMIP4基因片段插入到pRSETA融合表達載體中.誘導表達后，表達工程菌經超聲裂菌后鑒定可溶性，細菌裂解上清經鎳螯合親和層析純化.采用葡聚糖沉淀法分離和純化嗜酸粒細胞，利用24孔Transwell雙層板鑒定融合表達蛋白的趨化和抗趨化活性.結果： 構建入融合表達載體pRSET A的基因在大腸桿菌中得到表達.裂菌后鑒定顯示融合蛋白可溶部分占80%，經鎳螯合親和層析純化后純度達87%.分離的嗜酸粒細胞純度達到90%.拮抗嗜酸粒細胞趨化活性實驗表明，純化的MetMIP4蛋白具有明顯拮抗嗜酸粒細胞的趨化作用.結論： MetMIP4突變體基因在pRSET A融合表達載體中獲得可溶性表達和純化，生物學活性實驗表明融合的pRSETMetMIP4蛋白具有拮抗嗜酸粒細胞的趨化作用的活性， 為進一步開發其臨床應用奠定了基礎.
【關鍵詞】 趨化因子；嗜酸粒細胞；基因表達；遺傳載體
0引言
嗜酸粒細胞在外周血和周圍組織中的聚集是過敏性疾病、寄生蟲感染和許多系統性疾病的標志性特征.正常情況下，嗜酸粒細胞中只有一小部分存在于血液循環或組織中，在疾病狀態下可發生特征性的升高，這表明人體存在選擇性調節嗜酸粒細胞生成和聚集的分子機制.過敏反應時被激活的嗜酸粒細胞、Th2細胞濾過到組織，β趨化因子受體(CC chemokine receptor 3， CCR3)在這個過程中起到主要作用.CCR3特異地表達于嗜酸粒細胞、Th2細胞表面［1，2］，已經在幾種動物模型中證明可以通過同源重組減少Eotaxin.用這種配體的抗體或注射受體拮抗劑MetRANTES減少過敏性炎癥［3，4］.文獻［5］證實MetMIP4是一種強力和特異的CCR3拮抗劑，在1 nmol?L-1濃度時就能完全阻滯最強力的CCR3激動劑Eotaxin和MCP4引起的嗜酸粒細胞趨化.我們通過合成經過改造的CCR3拮抗劑pRSETMetMIP4，進行表達和純化，并觀察對嗜酸粒細胞趨化功能的影響.
1材料和方法
1．1材料克隆載體pUC19、表達載體pRSET A和E coli JM109(DE3)由本校生物化學與分子生物學教研室提供；DNA重組所用各種限制性內切酶、T4 DNA 連接酶 、反轉錄酶、PCR反應系統（Taq DNA聚合酶、dNTP，10×PCR緩沖液及MgCl2）購自華美生物工程公司；葡聚糖購自Sigma公司；Transwell 趨化板購自Costar公司.
1．2方法
1．2．1原核表達載體pRSET MetMIP4的構建pRSET A空載體以及測序證實連有MetMIP4的重組pUC19質粒經EcoRI和 BamHI雙酶切，回收切下的目的片段與切開的pRSET A載體，用T4 DNA 連接酶連接后，轉化入大腸桿菌JM109(DE3)中，挑取克隆，用上海華舜試劑盒提取質粒，經EcoRI 和BamIH 雙酶切鑒定獲得陽性克隆.
1．2．2pRSET MetMIP4融合蛋白的表達 重組的pRSET MetMIP4陽性克隆重新轉化大腸桿菌JM109(DE3)中，于含氨芐青霉素（100 mg?L-1）的培養基中，37℃培養過夜，轉接后培養至A600 nm=0.5左右，加入IPTG（異丙基D硫代半乳糖苷）至終濃度為0.2 mmol?L-1， 24 ℃誘導（為增加可溶性）培養2 h.常規方法收菌，進行SDSPAGE凝膠電泳觀察融合蛋白的表達［6］.
1．2．3pRSET MetMIP4融合表達蛋白的可溶性分析獲得融合蛋白表達的菌株經大量誘導后收菌，加入細菌裂解液（50 mmol?L－1NaH2PO4， pH 8.0， 300 mmol?L-1 NaCl，1 mmol PMSF），超聲裂菌（輸出功率為40 Hz， 4℃ ， 2×1 min）. 12 000 g，4 ℃離心30 min ，收集上清和沉淀，分別加入2×上樣緩沖液（100 mmol?L-1 TrisCl， 200 mmol?L-1 DTT， 40 g?L-1 SDS， 2 g?L-1溴酚藍， 200 mL?L-1甘油）， 煮沸5 min，離心5 min，進行SDSPAGE凝膠電泳，觀察融合蛋白的可溶性.
12. 4融合表達蛋白pRSET MetMIP4的純化 獲得表達的融合蛋白的菌株經大量誘導后收菌， PBS洗2遍，加入MCAC0（20 mmol?L-1 TrisCl，05 mol?L-1 NaCl， 100 mL?L-1甘油，1 mmol PMSF， pH 7.9），超聲裂菌（輸出功率為40 Hz， 4 ℃， 2×1 min）.12 000 g，4 ℃離心30 min，收集上清，加入TritonX100至終濃度為1 mL?L-1， 經0.45 μm濾膜過濾.濾過后的上清以10~15 mL?h-1的流速過Ni2+-NTA柱.隨后分別以MCAC0，MCAC30（MCAC0中加入咪唑至30 mmol?L-1），MCAC100（MCAC0中加入咪唑至100 mmol?L-1，余類推），MCAC200，MCAC300和MCAC500洗柱，收集洗脫液，SDSPAGE分析后，合并含有目的蛋白的組分.以分子截流量為10 000的透析膜于透析緩沖液（20 mmol?L-1 TrisCl，0.5 mol?L-1 NaCl， pH 7.4）中透析24 h后，凍干濃縮.采用Bradford法蛋白定量.
1.2.5血嗜酸粒細胞的分離和純化取哮喘自愿者靜脈血20 mL，用27 g?L-1 EDTA抗凝，加入50 g?L-1葡聚糖TBS緩沖液，靜置45 min，吸取富含白細胞的上層液，加在淋巴細胞分離液，1000 g離心20 min， 棄取單個核細胞，管底顆粒細胞用比重為1.070 kg?L-1的percoll液(含100 mL?L-1FCS)調細胞數為1.5×109?L-1， 將percoll原液用10×PBS溶解，用1×PBS調成所需濃度，在10 mL離心管中，依次加入比重為1.070，1.080，1.090 ，1.100 kg?L-1 的percoll液1，1，2，1 mL，最后加入1 mL顆粒細胞懸液.1000 g離心15 min， 回收比重為1.100和1.090 percoll液交界面的細胞層，重懸于Hank’s液中，取少許涂片，Wright染色，測定嗜酸粒細胞純度［7］.
1．2．6嗜酸粒細胞的趨化活性測定純化的嗜酸粒細胞用Hank’s液重懸，調細胞數為1×1012?L-1， 加入40 μL的分離純化的嗜酸粒細胞懸液到24孔Transwell細胞趨化板的上層孔中.實驗分為2組1組下層孔加趨化劑Eotaxin至終濃度為50 nmol?L-1， 2組下層孔中加入終濃度為50 nmol?L-1的趨化劑Eotaxin和50 nmol?L-1的MetMIP4蛋白，每組6孔，37 ℃培養5 h，通過上、下層的細胞數，計算嗜酸粒細胞的趨化百分比， 確定pRSET MetMIP4蛋白拮抗嗜酸粒細胞的趨化活性.通過細胞分類計數，分離的嗜酸粒細胞純度約90%.苔盼藍染色檢查活力，嗜酸粒細胞活力大于90%.
2結果
2．1MIP4突變體的克隆 PCR擴增的MIP4突變體，連入克隆載體pUC19中，經測序證實，與所要克隆的序列一致.
2．2pRSET MetMIP4融合蛋白的表達用EcoRI和 BamHI雙酶切連有插段的克隆載體pUC19，瓊脂糖凝膠電泳分離，回收目的片段，與相同酶切表達載體pRSETA連接，轉化入大腸桿菌JM109（DE3）中.經相同酶切鑒定，獲得正確的重組pRSETMetMIP4表達載體.轉化入大腸桿菌JM109(DE3)中，經IPTG于24 ℃條件下誘導2 h.常規方法收菌行SDSPAGE，電泳結果顯示誘導后Mr 約為12×103的新生蛋白條帶出現（Fig 1），與預期的蛋白分子質量相近.
1，2：Expression of fusion protein MetMIP4 induced by IPTG； 3：Expression of fusion protein MetMIP4 without IPTG induction； 4：pRSETA vector in E.coli induced by IPTG； 5：Protein marker.
圖1MIP4突變體原核表達載體pRSET A的融合表達，大小約12 Ku（略）
Fig 1Expression of fusion protein MetMIP4 in SDSPAGE（略）
2. 3融合蛋白pRSETMetMIP4的可溶性分析轉入大腸桿菌JM109(DE3)中的pRSET MetMIP4融合表達載體經IPTG，24℃ 誘導表達，獲得表達的菌體經超聲裂菌，分別取上清和沉淀作SDSPAGE（聚丙烯酰胺凝膠），結果顯示融合蛋白存在與上清和沉淀中，由于上清體積大于沉淀，經計算可溶性約占80% (Fig 2).
1：Protein marker； 2：Supernatant of E.coli lysate expressing fusion protein MetMIP4； 3：Precipitation of E.coli lysate expressing fusion protein MetMIP4； 4：Full E.coli expressing fusion protein MetMIP4.
圖2MIP4突變體原核表達載體pRSET A的融合表達的可溶性 （略）
轉貼于
Fig 2Soluble identification of fusion protein MetMIP4 in SDSPAGE（略）
2. 4MIP4突變體原核表達融合蛋白的純化 轉入大腸桿菌JM109(DE3)中的pRSET MetMIP4融合表達載體經IPTG，24 ℃誘導表達和裂菌后，上清經鎳螯合親和層析柱純化，收集洗脫液，經SDSPAGE蛋白電泳，得到了純化的融合表達蛋白，純度達87%（Fig 3）.
1：Protein marker， 97， 66， 43， 30， 21 and 14 Ku，respectively， from top to bottom； 2：Eluted fraction of fusion protein MetMIP4 with MCAC100； 3：Eluted fraction of fusion protein MetMIP4 with MCAC200； 4：Eluted fraction of fusion protein MetMIP4 with MCAC300；5：Eluted fraction of fusion protein MetMIP4 with MCAC500； 6：Fraction flowed through Ni2+NTA agarose.
圖3MIP4突變體原核表達融合蛋白的純化（略）
Fig 3Purification of fusion protein MetMIP4 with MCAC in SDSPAGE（略）
2. 5MIP4突變體融合表達產物拮抗嗜酸細胞的趨化第1組和第2組嗜酸性粒細胞的趨化百分比分別為70%，29%.結果表明融合蛋白MetMIP4可明顯抑制趨化劑Eotaxin誘導的嗜酸粒細胞的趨化作用， 兩組相比差異顯著（P
3討論
趨化性細胞因子是一族對各種白細胞亞類如中性粒細胞、淋巴細胞具有顯著趨化作用的細胞因子，可分為CXC和CC兩個主要亞家族， CXC趨化性細胞因子主要趨化中性粒細胞和T細胞.CC 趨化性細胞因子趨化除中性粒細胞外的其他白細胞，又稱β趨化因子，其配體為Eotaxin， MCP3， MCP4和RANTES，主要趨化嗜酸粒細胞、單核細胞.趨化性細胞因子受體有7個跨膜片段，受體的胞內側是與G蛋白偶聯的，G蛋白與多種信號有著廣泛的聯系，G蛋白的α和β亞單位作為信號效應器而激活細胞內的生物學效應.根據配體亞家族，其受體被分為CCR， CXCR， CX3CR和XCR［8］.
目前認為哮喘主要是以嗜酸粒細胞浸潤為主的氣道慢性炎癥［9］.在哮喘氣道炎癥調控機制中，不同的趨化因子激活不同的細胞與分子途徑，以協調方式構成復雜的細胞因子網絡.嗜酸粒細胞可以釋放血小板激活因子、白三烯、白細胞介素、嗜酸性陽離子蛋白和趨化因子等，直接參與哮喘的發病.在眾多的趨化因子中，迄今只有Eotaxin被證明具有特異性激活嗜酸粒細胞作用，對中性粒細胞、巨噬細胞、淋巴細胞等均無活性.因此對Eotaxin 的研究，不僅有助于從嗜酸粒細胞趨化的角度探討哮喘特異性氣道炎癥的本質，亦可能在特異地阻斷嗜酸粒細胞募集的環節上，探討新的不干預正常的細胞/因子活性的平喘藥物［10］.在IL2和IL4存在的情況下，Eotaxin 通過T 細胞的CCR3激活T 細胞趨化和粘附活性［11］.Eotaxin 還可以通過ERK2和p38導致嗜酸粒細胞趨化和脫顆粒［12］，說明Eotaxin能夠明顯地影響嗜酸粒細胞的功能.而突變的MetMIP4能拮抗CCR3受體的活性，阻斷其介導的信號途徑［13］，抑制過敏性炎性反應.我們通過MIP4氨基末端的丙氨酸改造為蛋氨酸，成功地突變了MetMIP4，通過序列測定，完全符合序列設計，并且成功地進行了融合表達和純化.MIP4也是PARC，DCCK1，AMAC1［14］.實驗顯示融合6個組氨酸殘基對MetMIP4活性無明顯影響，能夠通過CCR3阻滯嗜酸粒細胞的趨化.由于pRSETMetMIP4能特異地作用于嗜酸粒細胞、Th2細胞，而且不干擾中性粒細胞功能，因而有望成為抗哮喘和其他過敏性疾病的藥物.
【參考文獻】
［1］Bonecchi R， Bianchi G， Bordignon PP， D′Ambrosio D， Lang R， Borsatti A， Sozzani S， Allavena P， Gray PA， Mantovani A， Sinigaglia F. Differential expression of chemokine receptors and chemotactic responsiveness of type 1 T helper cells (Th1s)and Th2s［J］. J Exp Med，1998;187(1):129-134.
［2］Ponath PD， Qin S ， Post TW， Wang J， wu L， Gerard NP， Newman W， Gerard C， Mackay CR. Molecular cloning and characterization of a human eotaxin receptor expressed selectively on eosinophils［J］. J Exp Med， 1996;183(6):2437-2448.
［3］Rothenberg ME， Maclean JA， Pearlman E， Luster AD， Leder P. Targeted disruption of the chemokine eotaxin partially reduces Aginduced tissue eosinophilia［J］. J Exp Med， 1997; 185(4): 785-790.
［4］Elsner J， Petering H， Hochstetter R， Kimming D， Wells TN， Kapp A， Proudfoot AE. The CC chemokine antagonist MetRANTES inhibits eosinophil effector funtions through the chemokine receptors CCR1 and CCR3［J］. Eur J Immunol，1997;27(11):2892-2898.
［5］Nibbs RJ， Salcedo TW， Campbell JD， Yao XT， Li Y， Nardelli B， Olsen HS， Morris TS， Proudfoot AE， Patel VP， Graham GJ. CC chemkine receptor 3 antagonism by the βchemkine macrophage inflammatory protein 4，a property strongly enhanced by an AminoTerminal AlanineMethionine Swap［J］. J Immunol， 2000;164(3):1488-1497.
［6］Yuan JL， Wang Z， Wu GJ， Hao XK. Construction and expression of antiprostate specific antigen Vh single domain antibody gene［J］. Disi Junyi Daxue Xuebao(J Fourth Mil Med Univ )， 2001;22(5): 425-428.
［7］Wu CJ，Mao BL， Sun B. Effects of vasoactive intestinal peptide on degranulation and adhesion of eosinophils［J］. Chin J Appl Phsiol， 2000;16:239-242.
［8］Premack BA， Schall TJ. Chemokine receptors: Gateways to inflammation and infection［J］. Nat Med， 1996; 2(11):1174-1178.
［9］Li SJ， Sun B. The effect of ginkgolide B on airway reactivity and eosinophil in asthmatic guinea pig［J］. Disi Junyi Daxue Xuebao(J Fourth Mil Med Univ) ， 1995;16(4):269-271.
［10］Saeki T， Ohwaki K， Naya A， Kobayashi K， Ishikawa M， Ohtake N， Noguchi K. Identification of a potent and nonpeptidyl ccr3 antagonist［J］. Biochem Biophys Res Commun， 2001;281(3): 779-782.
［11］Jinquan T， Quan S， Jacobi HH， Reimert CM， Millner A， Hansen JB， Thygesen C， Ryder LP， Madsen HO， Malling HJ， Poulsen LK. Cutting edge: Expression of the NF of activated T cells in eosinophils: Regulation by IL4 and IL5［J］. J Immunol， 1999; 163(1): 21-24.
［12］Shyamala V， Khoja H. Interleukin8 receptors R1 and R2 activate mitogenactivated protein kinases and induce cfos，independent of Ras and Raf1 in Chinese hamster ovary cells［J］. Biochem， 1998:37(45):15918-15924.
