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擁有陽光范文1
她來了，一個瘦弱的身影，坐在輪椅上，目光呆滯著，渾濁的眼睛里總是透著讓人難以捉摸的情感，我看不懂她，也更讀不透她。
我還很小的時候，曾記得她的母親總是推著她到人多的地方來，每一次看見她，她一貫地低著頭，松松的羊角辮掛在腦后，我總能聽見她母親跟人說著：“今天又鬧脾氣了?！痹捳Z里有著無奈，而更多的是憐惜?？墒俏覀冞@群孩子又怎么能懂得呢？我們把她當做一件新奇的事物，把她當作我們尋樂子的源頭。每每她的母親走開，我們就竄上前去把她的下額抬起，她死命地搖頭，我們卻愈是歡樂，我們喜歡把她當做洋娃娃一樣給她扎辮子，喂她食物，做鬼臉對她笑，她總是一聲不吭，滿眼都是恐懼。我們沒興趣了，就把她擱在一邊，自顧自玩去了，偶爾我轉過頭來，總會看見她兩手撐著輪椅想要站起來，隨后又埋下了頭，臉微微透著紅，看不清她是怎樣的表情，我也不在意，只是有一次我無意間把這告訴了母親。
終于從母親那兒了解了一些她的情況，可是懵懂的我又怎么去了解一個與我同齡孩子的痛苦呢？但我還是驚奇地發現，從那以后，我對她的態度好了許多，也許有些不知名的情感在我心中萌生了吧。
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一、身先士卒，以身作則
“其身正，不令而行；其身不正，雖令不從。”在班級工作中，班主任往往起引領作用，只有身先士卒、以身作則，才能管理有效。
1.形成良好的班風。班風在某種意義上說就是一種“習慣”，建立合理的常規，使學生的言行規范化，是形成良好班風的前提。班主任一定要抓好班級常規工作。如課前提醒學生準備好學習用品，以便盡快進入學習狀態；課堂上，提醒學生注意聽講和注意讀寫姿勢。在文明禮儀方面，要注重表揚，做好榜樣。在衛生習慣上，一要言傳身教，講桌自己動手收拾干凈，地面上有垃圾時主動拾起來；二要分工明確具體；三要不厭其煩地向學生灌輸講衛生的重要意義，使他們樹立“衛生光榮，不衛生可恥”的觀念和“我為人人，人人為我”的思想。
2.組建一支責任心強、能力強的班干部隊伍。小學生的行為能力都處于不穩定狀態，尤其需要培養小老師來協助班主任管理班級。剛開始，小干部們不知道班級工作如何做，這就要求班主任跟他們多交流、多指導，同時要創設機會鍛煉小干部的能力，大膽放手讓他們做一些班級事務，時間一久，他們的能力自然會得到鍛煉。隨之要樹立他們作為班干部的榮譽感，以身作則，帶頭做好班級榜樣。老師也要樹立班干部的威信，為他們鋪路，使他們能協助老師管理好班級，使班干部真正成為老師的得力助手。
二、多一些鼓勵、表揚，少一些批評、指責
班集體是培養學生個性的沃土，有了這塊沃土，學生的個性才能發揚光大。班主任要有一雙善于發現教育素材的眼睛，適時創設教育平臺，合理利用教育資源。
1.樹立榜樣，正面引領。班風形成的開始，好人好事好現象總是表現在部分同學的一兩件事情上，這就需要教師有一雙善于發現的眼睛，并號召同學們學習，比如誰為班級做了好事、誰字寫得漂亮、誰發言積極等等。這樣，學生有榜樣可以學，也知道學什么。
2.活動，增強班級凝聚力。集體活動最能培養學生的凝聚力、集體榮譽感，以多表揚、多獎勵為準則更能激發孩子的上進心。比如：在學校組織的各種競賽活動中，我積極組織、指導學生參加，并適時用“你真棒”等鼓勵語言激勵他們不斷前進；在每周一次的班級流動紅旗爭奪中，每次得了流動紅旗，我會對孩子們大加贊揚。時間一長，班集體的正能量就會增加，健康向上、團結協作的班集體也會逐漸形成。
三、有一顆平常心，尊重學生個體差異
“誰愛孩子，孩子就會愛他，只有用愛才能教育孩子。”除了愛心，還需要耐心、誠心，更需要平常心。對于犯錯誤的學生，要講究寬容，論事不論人。態度上客觀，保護了學生的自尊；時間上寬容，讓學生有改正錯誤的機會；處理上寬容，促成了學生的自省。同時，要尊重學生的個體差異，真正懂得“有些花開在初春，有些花開在深秋”的道理。每個孩子接受知識的能力是不同的，作為教育工作者，我們不要過早強調讓學生成才，而首先要教育他們成人。對于特殊的孩子，要幫他樹立“天生我材必有用”的信心，讓他的個性得到充分的發揮，使他的角色更完整。
四、把握愛的律動，實現有效溝通
蘇霍姆林斯基曾說：“教育的效果取決于學校家庭的一致性，如果沒有這種一致性，學校的教學、教育就會像紙做的房子一樣倒塌?！卑嘀魅闻c家長溝通的效果如何，直接關系著家校合作是否成功，而溝通效果有賴于溝通藝術。
1.尊重家長，真誠交流。面對家長，老師最常犯的職業病就是居高臨下。其實作為老師，進行家校溝通無非就是希望取得家校教育的一致性，促進學生的健康發展。因此，我們不能違背與家長溝通的初衷，一定要尊重他們的人格，用平等的、真誠的話語來同他們交流。
2.把表揚當成一種溝通方式。每個家長都希望老師重視自己的孩子，都渴望自己的孩子得到認可。贊揚是一種認可，也是一個良好的開端。班主任要善于肯定孩子，學會欣賞每個孩子身上的閃光點。教師一句微不足道的稱贊，都會讓家長感到高興，直至影響對待孩子的態度，同時這種肯定也能使家長更坦誠地與老師交流。
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關鍵詞：小學；陽光體育；參與；運動；健康；快樂
所謂的陽光體育，是指由教育部、國家體育總局和共同決定，從2007年開始，結合學生體質健康標準的全面實施，在全國各級各類學校中廣泛、深入地開展全國億萬學生陽光體育運動的簡稱。為引導廣大青少年學生走向操場、走進大自然、走到陽光下，積極參加體育鍛煉，教育部、國家體育總局、于2009年4月29日全面啟動了全國億萬學生陽光體育運動。當天上午10時至11時，在全國范圍內統一舉行了陽光體育運動全面啟動儀式和全國億萬學生集體鍛煉1小時活動，以擴大全國億萬學生陽光體育運動的聲勢，形成全國聯動、上下互動的體育活動氛圍。
一、開展陽光體育的對策
1.提高學生對陽光體育的認識，營造良好的校園氛圍
思想決定行動，學校從上至下都要提高對陽光體育的認識，把陽光體育納入學校工作計劃，制訂相應的實施方案，并逐步逐項落實。學校要充分利用校廣播站、宣傳欄、校園網等各種宣傳工具和手段，開設專題欄目，大力宣傳陽光體育運動，讓“我運動、我健康、我快樂”的理念深入人心，喚起全校師生對健康的關注，鼓勵廣大學生自覺走向操場、走到陽光下、走到大自然中，積極參加體育運動。
2.活動設計以生為本，從學生的興趣、愛好出發
陽光體育開展的目的是增強學生的素質，增進學生健康，活動設計始終應從學生的角度出發，考慮學生的興趣與愛好，在活動內容的選擇上要符合大多數學生的意志，讓學生感覺不到課外活動是一種負擔。教師可根據學校條件和自身實際情況組織一些小型體育比賽，形成本校特色的體育項目和傳統體育項目，讓學生在體育比賽中體驗到成功的樂趣，從而愛上體育。
3.開展豐富多彩的體育比賽
“臺上一分鐘，臺下十年功?！斌w育訓練對許多人來說是枯燥的，而體育比賽卻有很大的吸引力。比賽的輸贏更能激發學生的熱情和永不服輸的斗志，加上比賽多與集體榮譽緊密相連，都能激發學生積極鍛煉的興趣。譬如，學?？梢远ㄆ谂e辦籃球、乒乓球、武術操、跳繩、拔河等比賽，爭取做到“人人有項目，班班有安排，月月有比賽”，從而使更多的學生加入到陽光體育運動中來，從而培養學生運動健身理念，激發他們的戶外活動和體育鍛煉的興趣。
4.進行專業的體育指導
在普及陽光體育的過程中，為了更好地發揮體育運動的作用，專業系統的體育指導是不可缺少的。體育教師在具備比較系統的專業知識和技術的前提下，不管在課堂內外，教師都可以根據需要對學生進行專業的體育指導，這樣的體育活動形式可以讓學生更積極地參與其中，更容易對體育活動產生興趣。這樣的活動，教師得心應手，學生積極主動，兩者相互激勵，形成良性循環的活動局面，對提高陽光體育活動的效果具有重要意義。
5.完善的硬件設施，為陽光體育的開展提供有力保障
許多體育活動需要借助硬件設施得以完成，學校作為學生最主要的活動場所，需要逐步完善相關配套設施，使學生可以有條件參與到豐富多彩的體育運動中來。小學階段是孩子精力最充沛的時期，感興趣的運動項目也很多，但學校的硬件設施往往很有限，久而久之，他們對體育運動越來越不感興趣。新課標指出：“體育場地、器材是加強素質教育，提高體育教學質量，增進學生健康的物質保證。”完善的硬件配套設施對開展陽光體育活動的意義重大，作為學校應該盡可能地完善校園的體育設施，從政策上予以支持，經濟上予以保證。
二、開展陽光體育應注意的事項
1.安全措施到位
體育活動的目的就是促進健康、增強體質，如果在活動中發生了傷害事故，就違背了體育鍛煉的宗旨，因此，在組織學生活動過程中要特別注意安全。首先，要經常檢查場地、器材，發現不安全因素要及時采取措施；其次，要教育學生遵守運動安全要求，加強自我安全保護的意識，鍛煉時要穿運動鞋，服裝一般要求寬松適合，禁止將鑰匙、別針、小刀等尖銳鋒利物品放在衣服口袋里以免發生傷害事故；最后，要做好活動前的準備活動和活動后的放松運動，避免身體受傷。
2.時間上要有保證
要合理安排好活動時間，這就要求學校把“保障學生每天課外活動時間不少于一小時”當作一項重要任務來抓。在開足開好體育課的同時，嚴格按照國家規定，積極組織學生開展豐富多彩的課外活動，跟上素質教育的步伐，不隨意侵占學生的課余時間。
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陽光、小院、青年旅社
三層樓的小院，帶著濃濃的藏式格調，清新、愜意。最引人注目的是院落里十幾平方米的透明天窗，陽光恣意地傾瀉而下，灑滿客棧的每一個角落。
掌柜都都是個陽光帥氣的東北男孩，骨子里透著一股無拘無束的慵懶。2009年，都都毅然辭掉大型國企的鐵飯碗，來到了，然后無可救藥地愛上這片圣潔的土地，愛上了這里傾城的陽光。經過一番努力，就有了這家在旅途驢友客舍。
漫步在客棧里，冷不防地竄出來一只大狗?！皠e怕！它叫大黃！”都都說。大黃是一只純種的中華田園犬。2010年，流浪的大黃“看上了”都都，一路跟到客棧，趕都趕不走。都都心生不忍，想著相遇便是緣分，于是，大黃成了都都最忠實的伙伴。
沒有太多的欲望，沒有太多的追求。一個人，一只狗，過著自由自在的生活。都都說，他開這個客棧的目的，是想在日光傾城的城市，和同樣熱愛生活熱愛自由的朋友相遇。
35間房，每一間客房都獨一無二
牧馬人有35間客房，每一間客房都有自己的特色，不同的色彩、不同的裝飾，可以按照自己的喜好自行選擇。每個房間都有獨立衛生間，即便是多人間也不例外，這在拉薩的客棧中非常難得?？蜅ι蠞M是驢友的涂鴉，“這里天藍、水清、云白，讓人心情舒暢……”是抒發對的熱愛，“能將這山、這水、這圣潔收于眼底是佛的恩典。感恩，再會”是約下次的相見……故事種種，全都雁過有痕。
客棧另專設驢友休息區和樓頂觀景平臺，白天，可以窩在軟軟的沙發中，曬太陽、看書、暢談古今：晚上，可以和心愛的人，坐在觀景平臺上看布達拉宮，看拉薩的美麗夜景，一起數天上的星群。
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關鍵詞：冬暖大棚；五月陽光油桃；栽培技術
中圖分類號：S662.1 文獻標識碼：A 文章編號：1002－2910(2007)03－0027－02
自2001年開始，沂水縣利用冬暖大棚栽培五月陽光油桃，取得了顯著的經濟效益。
1 基地概況
油桃基地位于道托鄉下村。屬溫帶季風氣候區，年平均氣溫13.1℃，1月份平均氣溫－1.71℃，極端低溫－20.2℃，年降水量722mm，無霜期196天。地勢平坦，土壤為砂壤土。目前有大棚35個，以冬暖大棚為主。主要栽培品種為五月陽光油桃，5年生樹平均666.7m2產2650kg。平均單果重95g，最大145g。4月下旬至5月上旬上市。售價高，供不應求。
2 栽培技術
2.1 定植
春季，選生長健壯、根系發達、無病蟲害的當年生五月陽光油桃壯苗，在計劃建棚地片南北行栽植。栽前全面深翻60－80cm，每666.7m2施基肥1500－2000kg，整平地面，南北起壟，壟間距1.8m，高30－50cm，順壟溝灌透水，沉實后在壟背上按株距1m挖定植，每隔4－5株栽1株授粉樹。栽后及時澆水、定干、覆地膜。定干高度為30－50cm，南低北高。
2.2 建棚與扣棚
春季或秋季建棚。冬暖式大棚坐北朝南，東西走向。其東、西、北三面墻體厚80－100cm，用石頭、大塊磚或土坯建造。大棚跨度10m，長70m，高3－4.2m，后墻高2－2.5m，前沿高1.2－1.5m，棚面與地面夾角28°左右。溫室棚膜采用聚乙烯長壽無滴膜，扣棚前40天地面覆蓋黑色地膜，12月下旬開始扣棚。
2.3 整形修剪
根據南低北高的棚體結構，每行樹南端兩株采用開心形，后面采用紡錘形。開心形樹待新梢長10cm時選3－4個不同方向的新梢做主枝，其余全部抹除。紡錘形樹留作中干的新梢長至60cm時摘心，當年可摘心3－4次，每次選留一定數量的側枝培養為主枝；其他新梢長25－30cm時摘心，促發分枝培養結果枝組。注意及時拉枝、扭梢、疏枝和葉面噴布150－200倍15％多效唑，控長促花。冬剪以疏為主，疏除無花枝、弱花枝、背上枝和病蟲枝。疏后結果枝間距保持15cm左右。
2.4 肥水管理
適時施肥是保護地栽培油桃的重要技術環節。5月上中旬，每株追施尿素50g；6月份每株追施氮磷鉀三元復合肥50g；9月下旬至10月上旬，每株施入充分腐熟的有機肥20－30kg和果樹專用肥100g；果實膨大期每株追施氮磷鉀三元復合肥100－150g；果實轉色期至成熟前每隔5－7天噴1次0.2％－0.3％的磷酸二氫鉀，以提高糖度，促進著色；采收后每株追施50g尿素和100g氮磷鉀三元復合肥。一般結合施肥進行澆水，重點澆好催芽水(扣棚前)、催花水(開花前)和催果水(開花后至果實著色前)。
2.5 花果管理
花期在棚內放蜜蜂授粉，但溫度較低時，蜜蜂不出箱效果很差，而溫度適宜時授粉效果好，但又會給疏果帶來困難。因此，在生產中多采用人工點授法，不管是新采集的混合花粉，還是冰箱儲存的花粉，效果都很好，授粉后果實大，果形正，畸形果很少。疏果分兩次完成。第1次在花后15－20天，即第1次生理落果后，此時果實大如蠶豆，疏掉小果、畸形果、過密果和背上果，優先保留兩側果；第2次疏果為定果，在第2次生理落果后硬核前進行。這次疏果要根據樹勢、樹齡和管理條件確定留果量。長果枝一般留3－4個果，中果枝一般留2－3個果，短果枝留1個果；管理條件好的大棚可適當多留，反之則適當少留。定果后，多次葉面噴施0.2％－0.3％磷酸二氫鉀，可明顯提高單果重和產量，促進果實提前成熟。
2.6 溫濕度和光照
扣棚后，白天蓋草苫，夜間揭開草苫并打開通風口，以降低棚溫。當棚內7.2℃以下的溫度累積達到600小時以上時，即開始緩慢升溫。升溫后，前5－7天白天溫度15－18℃，夜間5℃以上；7－14天白天溫度18－20℃，夜間8－10℃；14天后白天20－25℃，夜間IO~C左右；花期白天溫度20－23℃，夜間15℃；果實生長期白天25－28℃，夜間15℃。從開始升溫至萌芽前棚內空氣相對濕度控制在70％－80％；開花期控制在50％左右；坐果后至果實成熟期控制在60％－70％。為增強光照，在溫室的后墻及東西兩山墻掛反光膜或將墻體用石灰涂白，并選擇透光性好的聚乙烯長壽無滴膜做棚膜，保持棚膜的清潔，以增強透光性。
2.7 采后管理
采果后應及時撤棚膜。為防止結果部位外移，及時回縮結果枝、結果枝組及各主枝和中心干延長枝，保留的下部枝或斜生中庸枝約占原全樹總枝量的1/4－1/3。對當年生新梢，過密者疏除，保留的新梢留2－3節重短截。修剪結束后，噴1次10％殺菌優水劑800－1000倍液進行全棚殺菌消毒，并及時撤除地膜、施肥、澆水，促進生長。7－8月氣溫高，濕度大，為防止桃樹旺長，噴布150－200倍15％多效唑。對因坐果多或控長劑使用濃度大而長勢很弱的樹，可葉面噴60mg/L赤霉素加0.4％尿素，以促進生長。
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【摘要】 利用分光光度法和基質輔助飛行質譜法研究了谷胱甘肽對1，1二苯基2苦肼基(DPPH)自由基的清除作用。通過比較不同濃度和不同配比的還原型谷胱甘肽(GSH)和氧化型谷胱甘肽(GSSG)以及Na2SeO3混合溶液的自由基清除率，發現GSH/GSSG的配比對自由基清除率有明顯影響。當GSH/GSSG的配比大于50∶1時，自由基清除率比同濃度的GSH大，且自由基清除率隨GSH和GSSG的絕對濃度的增加而明顯增加，說明適量的GSSG可協同催化GSH清除自由基過程。質譜測定結果表明: 此協同作用與GSSG 參與自由基清除過程中的自由基反應有關。Na2SeO3對GSH的清除自由基的影響主要是通過與GSH反應生成GSSG來調控GSH/GSSG配比的結果。通過測定和分析一定配比的GSH+GSSG混合溶液與DPPH作用前后的質譜圖，提出了少量的GSSG共存下，GSH催化清除DPPH自由基的作用機理。
【關鍵詞】 谷胱甘肽， 自由基， 抗氧化性， 分光光度法，基質輔助飛行質譜法
1 引 言
谷胱甘肽是生物體內抗氧化防御系統中最重要的小分子活性寡肽，分為氧化型谷胱甘肽(GSSG)和還原型谷胱甘肽(GSH)[1]。GSH作為谷胱甘肽過氧化物酶(GPx)或谷胱甘肽轉移酶(GSH stransferase)的作用底物，可清除生物體內有害自由基(主要是氧自由基)或脂質過氧化物，使其轉換成脂肪酸和水，而GSH被氧化成GSSG[2](見圖解1)。 圖解1 GSH 的抗氧化功能示意圖
Scheme 1 Antioxidant fuction of glutathione(GSH)
在酶的調控下，生物體內GSH和GSSG通常處于穩恒性動態平衡，即當機體內由于GSH的清除自由基作用導致積累較多的GSSG時，GSH還原酶將作用底物GSSG還原成GSH。這種穩恒性動態平衡的重要標志是GSH/GSSG比值約為100∶1[3]。 當機體受到嚴重的氧化脅迫時，GSSG 還原成GSH的過程受阻，大量的GSSG積累在細胞液中，并破壞氧化還原動態平衡，給生物體帶來不良影響[4]。圖解1所示的抗氧化模式中，GSH是通過電子和質子的傳遞作用來清除自由基，而GSSG本身無清除自由基作用，只參與維持兩種形態谷胱甘肽的動態平衡。在該生化反應體系中，GSSG除了作為GSH還原酶底物維持谷胱甘肽的穩恒性動態平衡之外，還可能參與其它生化反應。文獻[5]報道胱氨酸殘基中的二硫鍵在生物體內參與許多氧化還原反應和自由基反應并生成各種硫氧化物。研究非酶條件下的氧化型谷胱甘肽在谷胱甘肽抗氧化系統中的作用和相關的化學反應，對進一步了解谷胱甘肽的生物學功能具有重要意義。本研究考察了GSH 和不同配比的GSSG和Na2SeO3混合溶液對DPPH自由基的清除能力，探討了GSSG和Na2SeO3對GSH的協同抗氧化作用。根據自由基清除率和質譜測定結果，提出了GSSG和Na2SeO3對GSH自由基清除過程中的協同機理。
2 實驗部分
2.1 儀器和試劑
UV8500紫外/可見分光光度計(天美公司);MALDMACFR(日本島津公司);激光解吸電離飛行時間質譜儀(N2激光器，激光波長為337 nm)。 1，1二苯基2苦肼(DPPH)、還原型谷胱甘肽(GSH)、氧化型谷胱甘肽(GSSG)、Na2SeO3、α氰基4羥基肉桂酸(CHCA)及三氟乙酸購自Sigma公司。DPPH用無水乙醇配制，谷胱甘肽用三次蒸餾水配制。
2.2 實驗方法
體外檢測清除自由基的方法以清除DPPH自由基為最常見。參照文獻[6，7]，采用分光光度法，通過測定DPPH自由基與GSH作用前后最大吸收波長(517 nm)處吸收光譜，用多項式回歸擬合的方法[8] 得到作用前后的吸光度變化值(ΔA517)與GSH濃度的多項式擬合回歸方程，并根據回歸方程計算出不同濃度的GSH和DPPH混合溶液的自由基半數清除率(IC50)。
3 結果與討論
3.1 GSH 清除自由基實驗
圖1為DPPH乙醇溶液和在該溶液中加入適量GSH、GSSG和Na2SeO3混合溶液后的吸收光譜圖。DPPH在517nm處有最大吸收。當加入與DPPH等量的GSH時， 此波長處的吸光度(A517)從1.33降低到0.55(圖1A曲線2)，說明GSH具有明顯的清除DPPH自由基的能力。圖1B中曲線2和3分別為GSH 和GSSG量比(GSH∶GSSG)為10∶1和100∶1時的吸收光譜圖， 其吸光度分別為0.79 和0.48，說明GSH/GSSG 比率為100∶1時具有更高的自由基清除率。與圖1A的結果比較，當GSH/GSSG 比率為100∶1時，比等量的純還原型谷胱甘肽(GSH)的吸光度降低更明顯，說明盡管認為氧化型GSSG無清除自由基能力，但適量GSSG的存在會提高GSH的自由基清除能力。當固定GSH濃度為0.10 mmol/L，圖1 DPPH、DPPH和谷胱甘肽及Na2SeO3混合溶液的吸收光譜圖
A. (1): 0.1 mmol/L DPPH， (2): (1)+0.1 mmol/L GSH; B. (1): 0.1 mmol/L DPPH， (2): A(2)+0.01 mmol/L GSSG， (3): A(2)+0.001 mmol/L GSSG; C. (1): 0.1 mmol/L dPPH， (2): A(2)+0.005 mmol/L Na2SeO3， (3): A(2)+0.0002 mmol/L Na2SeO3; D. (1): 0.1 mmol/L DPPH， (2): B(3)+0.005 mmol/L Na2SeO3; (3): B(3)+0.0002 mmol/L Na2SeO3. 加入不同濃度的Na2SeO3(見圖1C中曲線2和3)時，DPPH在517 nm處的吸光度隨GSH 和Na2SeO3的相對量比的增加而增加，說明在恒定的GSH濃度下，其自由基清除率隨Na2SeO3加入濃度的減小而增加。當固定GSH/GSSG比率為100∶1，加入不同濃度的Na2SeO3的濃度(見圖1D中曲線2和3)時， DPPH在517 nm處的吸光度隨Na2SeO3加入濃度的增加而減小，說明自由基清除率隨Na2SeO3的濃度增大而減小。
為考察GSH濃度、GSSG和Na2SeO3對GSH的清除DPPH自由基能力的影響，在固定DPPH濃度(0.10 mmol/L)情況下，分別測定了一系列不同濃度的GSH和不同配比的GSH、GSSG和Na2SeO3混合溶液在517 nm處的吸光度變化值ΔA517=ADPPH-AGSH混合液。結果發現，ΔA517 值隨GSH濃度的增加而增加。采用多項式回歸擬合方法[7] 對ΔA517和混合溶液的GSH濃度(CGSH)進行回歸，根據回歸方程確定ΔA/A0=0.5 時的CGSH為IC50值(式中A0為純DPPH溶液的吸光度，ΔA為加入抗氧化劑后的吸光度變化值)。表1為不同混合溶液的吸光度變化值(ΔA)對CGSH的擬合方程和IC50值。表1 擬合回歸方程和不同濃度、摩爾配比的GSH、GSSG和Νa2SO3混合溶液的DPPH自由基清除率(IC50)
16.3845C2(r=0.9980) 表1 表明：(1)GSH 具有較高的自由基清除率，其IC50達0.088mmol/L， 是良好的抗氧化劑。(2) 實驗中發現氧化型谷胱甘肽(GSSG)本身對DPPH自由基無清除能力，但當其與還原性谷胱甘肽共存時，對GSH的自由基清除率具有較大的影響。當GSH/GSSG配比大于50∶1時，其自由基清除率大于等量的GSH的自由基清除率; 當GSH/GSSG配比小于50∶1時，清除率小于等量的GSH的清除率。(3)Na2SeO3也對GSH的抗氧化性具有協同作用。在一定濃度的GSH條件下，加入Na2SeO3的量相對較大時(GSH/Na2SeO320∶1)時， 自由基清除率大于同濃度的GSH的自由基清除率。(4)當固定GSH/GSSG配比為100∶1加入不同量的Na2SeO3時， 盡管Na2SeO3的相對量減小對GSH/GSSG混合溶液的自由基清除率有增強的趨勢，但總的趨勢是Na2SeO3會降低GSH/GSSG 混合溶液的自由基清除率。
綜上所述，GSH具有較強的DPPH自由基清除率，但適當配比的GSSG的存在會提高GSH的自由基清除率，說明GSSG對GSH自由基清除過程具有協同作用。這種協同作用與GSH:GSSG 配比有關。當其配比為100∶1時，對DPPH自由基清除率最高。向含有GSH溶液中加入Na2SeO3 會影響GSH自由基清除率，是由于GSH和 Na2SeO3 發生了氧化還原反應[9]：
4GSH+Na2SeO3GSSG+GSSeSG+2NaOH+H2O
GSSG+Se(1)
此反應使得部分GSH被氧化成GSSG，改變了GSH/GSSG的相對量和氧化還原電位，從而影響了對DPPH自由基清除率。
3.2 基質輔助激光解吸電離飛行時間質譜(MALDITOFMS)檢測
光譜測定結果表明，適量的GSSG對GSH清除DPPH自由基具有協同作用，說明GSSG在與GSH和DPPH的混合溶液中參與了相關的化學反應。為了辨別相關反應產物，應用MALDITOFMS法，以α氰基4羥基肉桂酸(CHCA)為基質，對GSH∶GSSG配比為100∶1的含有和未含有DPPH的混合溶液進行了質譜測定，結果見圖2。
圖2 0.1 mol /L GSH和1.0 mmol/L GSSG混合溶液(A) 及該混合溶液中加入0.1 μmol/L DPPH后測得的MALDITOFMS圖
Fig.2 MALDITOFMS spectra obtaiend in 0.1 mol /L GSH and 1.0 mmol/L oxidized glutathione(GSSG) mixed solution before(A) and after(B) addition of 0.1 μmol/L DPPH從圖2可見，不含有DPPH的混合溶液(圖2A)在m/z 308 和613處可觀察到質子化的GSH和GSSG分子離子峰， m/z 330和637 處分別觀察到GSH的鈉的加合物和GSSG在電離過程中與基質中的氰基相互作用產生的氰化物加合物的分子離子峰，在m/z 379處觀察到質子化的基質α氰基4羥基肉桂酸)的二聚體的離子峰。當溶液中含DPPH(圖2B)時，m/z 613，638和379處的峰消失，而在m/z 669處觀察到GSSG結合2個羥基和Na+的峰，說明GSSG 可能生成氧化產物來協同GSH的自由基清除作用。
3.3 GSSG對GSH清除DPPH自由基的協同作用機理
(1) GSH對DPPH自由基清除作用是通過氧化作用將谷胱甘肽的電子傳遞給DPPH自由基單電子的過程。這種電子傳遞過程受GSH氧化還原電位的影響。根據能斯特方程;E=E0′+RTnFln[GSSG][GSH]2，在GSH/GSSG混合溶液中，GSH/GSSG比率越高，谷胱甘肽的還原電位負移，使得GSH傳遞電子與DPPH的能力越強。這解釋了實驗中GSH/GSSG混合溶液中，自由基清除率隨GSH/GSSG的比率增高而增加的原因。(2)GSH/GSSG混合溶液中，當其比率>50∶1時，自由基清除率高于等量的純GSH的清除率，說明自由基清除作用不只是GSH對DPPH自由基的還原作用所驅動，少量的GSSG的存在會協同GSH的自由基清除作用。GSH和DPPH的清除作用涉及氧化還原作用的自由基反應。當GSH與DPPH·自由基發生給電子作用后，本身氧化生成GS·自由基。此自由基在水相中仍具有較強的反應活性，在一定條件下與水相中的 GSSG 發生氧化還原作用，見下式：
(2)
上式中第二步反應中GS·自由基，可能首先與水分子發生自由基反應，生成反應性很強的羥自由基(·OH)和GSH，生成的·OH自由基與GSSG通過自由基反應生成GSOH(glutahione sulfenic acid)。這種反應的結果使得GSH在清除DPPH自由基反應中起到催化劑作用。至于GSSG氧化后的產物GSOH (圖3B 中m/z 669 所對應的物質)，文獻[5]已報道在生物體內被檢測到。 總之，低配比的GSSG，通過催化作用協同GSH的清除自由基過程，但當GSSG相對于GSH配比提高時無協同作用。這可能與GSSG 阻礙GS·自由基與水分子之間的自由基反應有關。
參考文獻
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