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免疫學的定義范文1
【關鍵詞】免費醫學定向生；培養管理；激勵引導
一、免費定向醫學生的現狀和特點
（1）免費定向生的特點。目前學校的獎懲制度，培養方式和學籍管理等等已經漸漸偏離了免費醫學定向生的學習機制。再加上，他們大都是家境中低下成績卻尤為突出的學生，肩負著國家的期望，親人的期望和社會的關注，因此對他們的培養社會各界都要求一定要保質保量的完成。但是他們本身對于醫學專業的認知并不是很多，更多的人只是傾向于免費和畢業定向分配的關系才選擇了這個專業。從而使他們自身對于醫學的專注和熱愛并不夠濃厚，更不用說對自身的目標的培養和學習生涯的規劃了。（2）免費醫學定向生的管理現狀。第一，對于本專業的不了解使得他們沒有清楚地學業規劃和學習目標。第二，免費醫學定向生在進入學校的時候已經與國家簽訂相關的就業協議，使得他們心理上對學習的緊張出現了懈怠，無所謂等情況，嚴重影響了免費醫學定向生的教育和培訓質量。第三，免費醫學生享有國家的補助政策和就業協議，但這是建立在學生順利畢業的基礎上。學校的學籍管理制度體現中，學生若是成績偏差或者其他一些因素會直接留級甚至退學。這些因素使得學生無法履行就業協議，也就與國家培養免費醫學定向生的目的相悖了。
二、為了保質保量的完成國家培養目標，提出以下建議
（1）制定全面的培養模式。針對免費醫學定向生的特殊情況制定相應的培養模式和管理方式。這樣才能對癥下藥，真正將學生教好。并針對可能出現的一些情況制定相應的配套措施。（2）全面教學，從一而終引導。為了完善學生學習的態度，必須從一入學開始就開設相應的專業引導課程。幫助學生樹立正確的醫學觀。鼓勵學生自主學習，引導學生找到學習醫療專業的欲望和興趣。（3）對于學籍管理制度的改善。學生在校期間如果因為某些原因無法完成學業時，政府部分應該采取一系列的措施對該學生的情況加以彌補和改善。比如由該學生上報申請協議延后一年。在一年內完成留級任務或者由院方對該類學生進行嚴格的把關從而將其培養成衛生人才?；蛘吖膭钚葘W生積極報名，填補因為留級而落下的空缺。從而使得國家的工作計劃不會被打亂。延后完成協議的或者無法完成畢業達成協議的必須退回相應的扶持培養的金額。（4）加強與學生的溝通和交流。在學習的過程中班主任以及專業老師都應該定期與學生進行心理溝通。及時了解學生近期內的生活和學習情況。減輕學生對老師的芥蒂和距離感，與學生做朋友。（5）建立免費醫學定向學生培養機構。院方應該聘請專業的老師和班主任，有針對性的對學生進行教育和培養。并配合校方的指導根據學生本身的學習進展進行學習教程的編排和指導。對學生學習的課程進行監督、引導和修正。（6）鼓勵學生社會實踐。“紙上得來終覺淺，絕知此事要躬行”。對于免費醫學定向生來說，專業知識的了解和學習也只是紙上談兵，并不能夠應用到實際中去。學?？梢栽诤罴俟膭顚W生參加醫療實踐，讓他們親身體會到治病救人的整個過程以及意識到自己學識的深淺并不能夠真正達到治療的水平。讓學生能夠在實踐中學習，更加鞏固自己的醫療知識。另外，學校也可定期組織學生去各大醫院義務服務，讓學生早一點接觸醫療機構，并在回來的時候上交實踐感言。鼓勵學生多多參加社會實踐。
免費醫學定向生的培養和管理并不是一日之功。他需要學校，老師，家庭和學生本身各個方面的努力和支持。嚴格制定相應的培養制度和管理制度，有針對性的給予學習上的鼓勵和引導。幫助學生樹立正確的醫療觀，學習觀。給學生最完善的學習保障，讓學生學習沒有后顧之憂。學校要建立一個完善的教育體制和激勵機制，還需要在學生學習的過程中不斷的修改和分析。根據學生反映的問題和出現的情況進行合理的改進制。只有這樣，才能給免費醫學定向生的培養一個堅實有力的基礎，才能在不斷的學習和管理中，培養一批精干的醫療隊伍。
參 考 文 獻
[1]李振宇，王金祥，劉洋.高等醫學院校加強人文素質教育探討[J].新鄉醫學院學報.2011（3）
[2]吳丹桂.醫學本科生科研創新能力培養的探討[J].西北醫學教育.2009（5）
免疫學的定義范文2
【關鍵詞】促甲狀腺激素（TSH）；化學發光免疫分析法；試劑盒
甲狀腺功能改變時， TSH的波動較甲狀腺激素更迅速且明顯， 是反映下丘腦、垂體、甲狀腺軸功能的敏感指標， 因此采用靈敏度高的TSH免疫分析法具有重要的意義。化學發光免疫分析（chemiluminescent immunoassay， CLIA）是一種靈敏的免疫分析方法， 在免疫診斷試劑研制中已得到了廣泛的應用[3]。本研究根據化學發光免疫分析法的原理研制了血清TSH的檢測試劑盒， 與國內外同類產品相比具有簡便、快捷、成本低等優點。
1 材料和方法
1.1 材料 TSH單克隆抗體（mAb）、 TSH標準品抗原和辣根過氧化物酶（HRP）為Sigma公司產品， 光免板為Thermo Electron公司產品， 化學發光底物為BioRad公司產品。
1.2 方法
1.2.1 標準品的配制 將TSH抗原標定后溶于小牛血清中， 配制成含0.1， 1， 5， 20， 100 mIU/L的標準溶液。
1.2.2 抗體包被板的制備 將100μL含TSH mAb（0.5mg/L）的pH9.6碳酸鹽緩沖液加至包被板中， 37℃包被2 h， 再用含10 mg/L BSA的0.01 mol/L pH7.4磷酸鹽緩沖液于37℃封閉2 h后晾干備用。
1.2.3 酶標記物的制備 TSH的酶標記物采用過碘酸鈉法制備， 然后經0.01 mol/L pH7.4磷酸鹽緩沖液透析過夜后， 加入等量的甘油于-20℃保存備用。
1.2.4 檢測方法 將50 μL待測樣品或標準品加入包被TSH的光免板中， 37℃溫育30 min， 棄反應液， 用洗滌液（含0.5 mg/L Tween20的0.01 mol/L pH7.4磷酸鹽緩沖液）洗5次， 加酶標記物50 μL， 37℃溫育30 min后同樣用洗滌液洗5次， 然后加入發光底物于5～10 min內測定各孔的發光值RLU。樣本中的TSH濃度依據由標準品TSH濃度和對應的RLU建立的數學模型進行定量。
2 結果
2.1 動力學性質 在HRP魯米諾H2O2發光體系中， 將不同量的免疫復合物加入發光液中， 發光強度（RLU）隨反應時間而變化。10 min后RLU接近峰值， 在5～15 min內RLU較為穩定， 隨后開始緩慢下降。
2.2 反應條件優化
2.2.1 加樣量對RLU的影響 樣本和酶標記物的加樣量分別為50μL和100μL考查標準品（0、0.1、1、5、20、100 mIU/L）RLU， 發現加樣量為100μL與50μL RLU相差不大， 說明50 μL的加樣量反應能達到平衡。
2.2.2 反應模式對RLU的影響 采用二步法。第一步： 加入標準品和待測樣品后， 將反應體系在37℃分別溫育15、30、45、60 min； 第二步： 加入酶標記抗體后， 將反應體系在37℃分別溫育15、30、45、60 min。結果表明溫育時間為30 min時反應皆能達到平衡。
A： 第一步溫育時間對RLU的影響； B： 第二步溫育時間對RLU的影響.
2.3 穩定性 將試劑盒放置于37℃ 6 d后， 比較與放置前參考標準品各點RLU值， 參考標準品各點RLU值未見明顯降低， 且本底發光值無明顯升高， 表明試劑盒標準曲線無明顯漂移， 滿足穩定性要求。
2.4 方法學評價
2.4.1 標準曲線與靈敏度 在設定的免疫反應和發光條件下， 以標準血清的濃度（0～100 mIU/L）制作的標準曲線見圖3。同時測定20個零標準， 用零標準均值加上2倍標準差， 計算出此方法的靈敏度為0.0788 mIU/L。
2.4.2 精密度 取低（4.44 mIU/L）、中（19.45 mIU/L）和高（79.23 mIU/L）3種TSH濃度各重復測定10次， 測定批內CV分別為6.2%、3.3%和4.6%，平均為4.7%。隔日分別進行5次獨立試驗， 測批間CV分別為8.3%、7.6%和9.3%， 平均為8.4%。
2.4.3 準確性 在已知TSH濃度的血清中加入3種不同濃度的標準血清，測定加入回收率為93.05%。將TSH濃度為44.42 mIU/L的血清用標準零血清分別按1/2、1/4、1/8、1/16稀釋， 測量各稀釋濃度的TSH含量， 測定稀釋回收率為99.86%。
2.4.4 特異性 在已知濃度的血清樣品中加入不同濃度的LH、FSH和HCG后， 對TSH的測定無干擾。
2.4.5 與進口試劑的比較 將研制的TSH CLIA定量檢測試劑盒與Abbott architect i2000全自動化學發光系統共同對30例正常人、20例甲亢及80例甲低臨床標本進行檢測， 通過數據分析， 得出兩個檢測系統所得數值具有明顯相關性。
3 討論
免疫學的定義范文3
動機所涉及的是行為的能量和方向，是激發、維持、調節人們從事某種活動，并引導活動指向某一目標的內部心理過程或內部動力。大學生的入學動機將對他們后繼的學習能力及行為發展產生不可忽視的影響。學習自我效能感也被稱為學業自我效能感，是自我效能感在教育領域中的應用，是個人對自己是否有能力去操作學習行為的期望值。了解免費醫學定向生的入學動機和入學后的學習自我效能感，對于提高醫學教育水平和醫學生的個人發展等都具有重要的意義。
一、方法
（一）對象
以257名免費醫學定向生為調查對象。發出問卷325份，回收有效問卷257份，問卷有效率為79.08%。被調查對象的平均年齡為20.21±1.40。男生117人（45.5%），女生140人（54.5%）。
（二）工具
1.醫學生入學動機調查問卷：共24個項目，包括個人特性、社會激勵、他人影響以及就業職業。
2.醫學生學習自我效能感調查問卷：共22個項目，包括學習能力自我效能感和學習行為自我效能感。
二、結果
（一）免費醫學定向生入學動機的總體情況
在入學動機的四個維度中，按照得分由高到低順利排列，依次是就業職業（3.40±0.68）、個人特性（3.29±0.61）、社會激勵（3.19±0.56）以及他人影響（2.90±0.89）。
（二）免費醫學定向生學習自我效能感的總體情況
總效能感的得分為71.49±10.24。133人（51.75%）的總效能感得分低于均分。學習能力自我效能感和學習行為自我效能感的得分分別為45.99±6.88、25.50±4.34。
（三）免費醫學定向生入學動機和學習自我效能的相關情況
個人特性（r=0.444，P
（四）免費醫學定向生入學動機對學習自我效能的回歸分析
以個人特性、社會激勵以及就業職業為自變量，以學習自我效能感為因變量，以通過ENTER回歸分析發現，只有個人特性進入回歸方程，B=7.96，β=0.47，t =7.19，P
三、討論
免費醫學定向生是一個將來定向在基層工作的醫學生群體。醫生工作的特殊性決定了人們對醫生這個職業的要求非常高?？陀^地說，醫學生學習與成長的過程相當艱辛。因此，他們不僅要保持積極努力的狀態，更要不斷克服各方困擾。擁有健康的入學動機并逐步提高醫學生的學習自我效能感至關重要。本研究通過對免費醫學定向生的入學動機和學習自我效能感問卷調查、數據整理、結果分析，得出初步結論，再通過相關分析和回歸分析研究二者之間的關系。
本研究發現，影響免費醫學定向生入學動機最主要的因素是就業職業。如今，大學生就業形勢依然非常嚴峻。每年都有成百萬的大學畢業生涌入社會，選擇就業崗位。相對于免費醫學定向生來說，他們的學費不用擔心，就業也有保障。這最直接地反映了免費醫學定向生的入學理由，體現了醫學生將就讀免費醫學定向生作為今后生存的保障。
免疫學的定義范文4
[關鍵詞] 化學發光免疫分析法；地高辛；血藥濃度；測定
[中圖分類號] R969.1 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2013）09（c）-0104-02
地高辛是從毛花洋地黃葉中提取的一種二級苷，是臨床上應用于治療心臟疾病的強心苷類藥物之一，對急慢性充血性心力衰竭、室上性心動過速、心房顫動和心房撲動等病癥的治療效果明顯[1-3]。但該藥物的作用機制較為復雜，治療指數不高，有效治療的濃度范圍較窄，且藥動學和藥效學在不同個體間差異較大，很容易導致中毒。另外有報道顯示，地高辛中毒癥狀和藥物劑量不足的臨床表現較為相近，監測其血藥濃度便顯得至關重要[4-5]。本研究采用化學發光免疫分析法對地高辛血藥濃度進行檢測，旨在為臨床監測提供不同的指導。
1 資料與方法
1.1 一般資料
收集2011年全年來海南省人民醫院行心臟疾病治療的50例患者，對其進行地高辛血藥濃度監測，其中男32例，女28例；年齡18～74歲，其中年齡>65歲者36例，45～65歲者11例，
1.2 儀器與試藥
全自動化學發光免疫分析儀（羅氏），復合質控及地高辛診斷試劑均來源于Sigma。
1.3 測定方法
給予患者地高辛（國藥準字H33021657，杭州民生藥業集團有限公司），口服，劑量0.125 mg，每日1次。共計1周。待藥物達到穩態血藥濃度時，取末次服藥12 h后的血樣作為樣本采用化學發光免疫法分析患者的血藥情況。
1.4 療效評定
參照《臨床內科學》[6]及《實用內科學》[7]進行地高辛中毒癥狀的確定。
2 結果
2.1 地高辛血藥濃度監測結果
參照《中國藥典》2010年版二部規定，地高辛血藥質量濃度以0.8～2.0 μg/L作為有效治療范圍。監測結果顯示，有效治療濃度范圍內37例，占74.0%。具體見表1。
2.2 不同年齡地高辛血藥濃度監測
結果顯示，隨著年齡的增大，血中地高辛的含量濃度出現增大的趨勢，提示，可能與老年患者機體代謝弱有關。見表2。
2.4 患者的中毒情況
50例患者中出現中毒癥狀者9例（18.0%），其地高辛平均血藥濃度為（2.41±0.20）μg/L，主要表現為心血管癥狀：房性傳導阻滯、室性早搏、房顫、心動過緩、心肌梗死；消化系統癥狀：腹脹、腹瀉、惡心嘔吐，個別患者存在頭暈、頭痛、視物模糊等神經系統癥狀。
3 討論
地高辛血藥濃度常用檢測方法主要包括放射免疫、酶聯免疫吸附分析法、液相-質譜聯用分析法、化學發光免疫，這些方法各有特點[8]。放射免疫分析法主要優勢在于價格低廉、方法簡單、結果可信且靈敏度較高，但由于其放射性污染較大，標志物半衰期短，檢測周期長等使得該方法下的地高辛測定結果在動態觀察時可比性降低，較難用于臨床的即時測定[9]。液相-質譜聯用分析法的檢測結果較為準確，樣品的預處理步驟較為簡便，但所需孵育的時間較長，操作中人為干擾的因素占據大部分，酶的穩定性也會因溫度、pH值等受到影響。液相-質譜聯用分析法具有快速、準確等優點，其所需血量較小，高靈敏度及專屬性，交叉反應發生率極低[10]。但由于該類儀器價格較為昂貴，維護費用極高，檢測成本大，因此其臨床應用受到限制。
本研究采用的化學發光免疫分析法，專屬性極強。并且該方法標志物有效期長、試劑穩定性好、反應快速，利用磁場原理進行分離，全自動操作，即便是臨床的大量樣品，也能在較短的時間內完成，與其他強心苷類藥物及內源性地高辛樣免疫物質無交叉反應，與其他方法比較優勢較為明顯。報道顯示[11]，有學者分別將不同溶劑的蟾酥提取物加到空白血清中和含微量地高辛血清中，用化學發光免疫法檢測地高辛濃度，所測地高辛濃度與真值幾乎接近。本研究結果顯示，監測結果顯示，有效治療濃度范圍內37例，占74.0%。隨著年齡的增大，血中地高辛的含量濃度出現增大的趨勢，提示，可能與老年患者機體代謝弱有關。具體分析如下：地高辛在體內的轉化代謝量較低，較多的以原形由腎排泄，老年人由于其生理功能的特殊性，腎功能較弱，藥物在機體內的清除率下降，半衰期延長[12]，導致血藥濃度升高。另外，由于地高辛在體內與骨骼肌受體結合，老年人由于肌肉組織減少，相應的地高辛的受體結合量也下降，外周血藥濃度隨之升高。不同性別間各濃度分布比例差別不大，提示性別可能對地高辛的血藥分布影響不大。50例患者中出現中毒癥狀者9例（18.0%），其地高辛平均血藥濃度為（2.41±0.20）μg/L。
綜上所述，地高辛安全治療范圍較窄，個體差異較大，年齡越大，體內藥物濃度越多，易發生中毒。因此，針對患者的生理狀況，結合臨床表現及用藥情況，合理調整給藥方案及劑量。對于老年患者，應給予個體化的給藥方案，減少不良反應的發生，以便尋求最佳的治療效果。
[參考文獻]
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免疫學的定義范文5
【摘要】 目的 構建細粒棘球蚴鐵蛋白基因的重組表達質粒ferritin/pET-28a，表達、純化出重組蛋白，并對重組蛋白的免疫學特性進行初步研究。方法 將目的基因亞克隆至表達載體pET-28a，轉化入大腸桿菌BL21(DE3)plysS，加入IPTG對其進行誘導表達。通過Ni2+的His-bind樹脂柱純化出重組蛋白，用50μg/100μL免疫ICR小鼠，獲得抗血清，通過western-blot及ELISA對重組鐵蛋白的免疫學特性進行初步研究。結果 表達并純化出分子量約19kD重組鐵蛋白，western-blot顯示重組蛋白免疫制備的抗血清可識別純化的重組蛋白及抗原囊液、原頭蚴，位置大致相同，約19kD。ELISA結果顯示實驗組小鼠與對照組小鼠血清中IgG的OD值有統計學意義(P＜0.01)。結論 細粒棘球蚴重組鐵蛋白Eg.ferritin具有較好的抗原性及免疫原性，具有成為包蟲疫苗候選分子的潛能。
【關鍵詞】 細粒棘球蚴；重組鐵蛋白；純化；免疫特性
鐵蛋白(ferritin)是普遍存在于生物體內的一種保守性較高的多功能多亞基蛋白，其作用是儲存鐵，對生物體內鐵含量進行調控，在生物體內鐵含量過多時起到解毒作用［1-2］，它的存在保證了生命體的正?；顒?。本實驗中心已構建了重組表達質粒ferritin/pGEX-6p-1，但由于重組蛋白ferritin/GST以包涵體形式存在于細胞中，無法通過親和層析柱純化出單一的Eg.ferritin［3］。只能通過切膠純化的方法獲得融合蛋白Ferritin/GST，雖然試驗結果說明該融合蛋白具有較好的抗原性及免疫原性，但影響蛋白特性的因素較多，不能很好的反映蛋白的實際特性，因此本次試驗將鐵蛋白基因重組到表達質粒pET-28a中，pET-28a是個高效表達載體，能純化變性及非變性的蛋白，通過表達純化可獲得較純的Eg.ferritin，以便更好地研究蛋白的特性，為鐵蛋白能成為包蟲病候選疫苗提供依據。
1 材料與方法
1.1 質粒與菌種 Eg.ferritin/pGEM-T/JM109及E.coli BL21(DE3)plysS由本室保存；pET-28a表達載體購自Novagen公司。
1.2 試劑 T4連接酶、限制性內切酶BamH I、Not I、IPTG、N'N'N'N-四甲基乙二胺、丙烯酰胺、甲叉雙丙烯酰胺購自Promega公司；β-巰基乙醇、二甲基亞砜、弗氏完全(不完全)佐劑、過硫酸銨、Tween-20等試劑購自于SIGMA公司；考馬斯亮藍購自BIOMOL公司；酵母提取物、蛋白提取物購自OXOID公司；蛋白預染Marker購自北京賽百盛；卡那霉素、TMB、4-氯-1-奈酚購自AMRESCO；羊抗鼠HRP-IgG、質粒DNA提取試劑盒等購自北京華美公司；DNA純化回收試劑盒購自北京賽百盛生物有限公司；標準蛋白分子量Marker 購自中國科學院上海生物化學研究所；含Ni2+的His-bind樹脂純化試劑盒購自Novagen公司；其它常用試劑為國產分析純。
1.3 實驗動物 ICR小鼠，6～8周，(18±2)g，雌性，由寧夏醫科大學實驗動物中心提供。
1.4 Eg.ferritin/pET-28a重組質粒的構建及鑒定 取Eg.ferritin/pGEM-T/JM109菌株劃板接菌［4］，并挑單個菌落進行培養，通過堿裂解法提取重組質粒；同時取適量的表達載體pET-28a，將兩者分別用BamH I，Not I進行雙酶切處理，用1%的瓊脂糖凝膠電泳分離帶有雙黏性末端的目的片段和表達載體，切膠，經DNA回收試劑盒純化目的片段及載體。目的片段與表達載體在T4連接酶的作用下，16℃連接過夜。繼而將連接產物轉化到已制備好的感受態菌BL21(DE3)plysS中［5］，經含卡那霉素終濃度為50μg/mL的LB固體培養基篩選陽性菌株［6］。挑取陽性菌株含卡那霉素的LB培養基中振蕩培養，經質粒提取試劑盒純化重組質粒，用限制性內切酶BamH I，Not I進行酶切鑒定。
1.5 重組鐵蛋白的表達、純化
1.5.1 重組蛋白的表達 將重組菌接種于含卡那霉素(終濃度為50μg/mL)的3mL 的LB培養基中，37℃ 200 r/min 振蕩培養數小時，按1∶50接種于50mL培養基中，37℃，220 r/min，培養至OD600=0.5時，加入IPTG至終濃度為0.05mmol/L，繼續振蕩培養6h，4℃ 4000r/min 離心15min，棄上清，收集細菌沉淀，SDS-PAGE觀察表達情況。
1.5.2 表達產物的鑒定 將樣本與2×SDS-PAGE樣本緩沖液混合，經12% SDS-PAGE，180V電壓，電泳至溴酚蘭指示劑到膠底為止，用0.2%考馬斯亮藍R250染色2h，用含7%冰醋酸5%甲醇的脫色液脫色至本底無色。
1.5.3 重組抗原的純化及制備 對細胞進行裂解，發現重組蛋白以包涵體的形式存在，按照Novagen公司His-bind樹脂純化試劑盒說明書中的包涵體大量純化方法進行純化，然后將純化好的包涵體蛋白放入透析袋中，用1×PBS透析去除尿素。
1.6 動物免疫及特異性抗血清的制備
1.6.1 動物免疫 ICR小鼠分兩組，即免疫組與對照組，每組10只。1)免疫組每只注射弗氏佐劑與重組抗原Eg.ferritin的乳化劑50μg/100μL。對照組注射弗氏佐劑和PBS的乳化劑100μL。根據Bio-Rad公司的Gel Doc1000凝膠分析系統對純化的抗原進行定量。2)免疫方法 每組小鼠在0、2、4周各免疫1次，共3次，第1次基礎免疫用弗氏完全佐劑，以后2次為加強免疫均用弗氏不完全佐劑。采用背部皮下多點注射免疫，每次注射量為100μL/只。分別于0、2、4、6周斷尾采血，共4次，8周眼眶取血并處死小鼠。
1.6.2 特異性抗血清的制備 將血液4000r/min 離心 10min，提取血清，-20℃保存。
1.7 血清特異性識別 純化的重組抗原Eg.ferritin、天然可溶性抗原囊液、原頭蚴通過10%分離膠及5%的濃縮膠，180V電壓下進行SDS-PAGE電泳 1h。在30mA下對硝酸纖維膜進行印跡轉移1h。然后將硝酸纖維膜浸入5%的脫脂奶粉溶液中，37℃ 封閉1h，以PBS-T(PBS中含0.5‰ Tween-20)溶液洗3次，每次5min。再將硝酸纖維膜剪開分別浸泡于1∶100稀釋的Eg.ferritin免疫的特異性小鼠抗血清及對照組鼠血清中，4℃ 過夜。次日將膜用PBS-T溶液洗3次，每次5min，然后與1∶1000稀釋的羊抗鼠IgG-辣根過氧化物酶(HRP)結合，37℃反應1h。再以PBS-T溶液洗4次，每次10min。加入新配制的底物液(6mg 4-氯-1-奈酚，2mL冷甲醇，10mL的TBS，12μL的H2O2)37℃顯色5min，最后用蒸餾水沖洗終止反應。
1.8 抗血清中IgG的測定 采用ELISA法，用純化的Eg.ferritin 5μg/mL包被酶標板100μL/孔，4℃過夜。次日，PBS-T洗3次，5％牛奶封閉100μL/孔，37℃ 1h，PBS-T洗3次，取0～8周的免疫組及對照組小鼠血清作為一抗，按1∶100稀釋，100μL/孔，37℃ 1h，PBS-T洗4次，羊抗鼠HRP-IgG為二抗，按1∶1000稀釋，100μL/孔，37℃ 1h，PBS-T洗4次，加入顯色劑100μL/孔，待對照孔顯色時，加入2M H2SO4 50μL/孔 終止反應。以包被抗原及進行牛奶封閉的孔為空白調零，置酶標儀450nm波長處測OD值。
1.9 統計學方法 應用SPSS11.0統計學分析軟件，采用兩樣本t檢驗的方法對測定的OD值進行分析。
2 結果
2.1 表達質粒Eg.ferritin/pET-28a的酶切鑒定
將構建的重組表達質粒Eg.ferritin/pET-28a 用限制性內切酶BamH I和Not I 雙酶切后，經1％瓊脂糖凝膠電泳檢測到插入片斷大小約560bp，與目的基因片段相符。M1.Lambda DNA/HindⅢMarker；1.pET-28a空質粒；2.Eg·ferritin/
2.2 Eg.ferritin 的純化
含Ni2+的His-bind樹脂親合柱純化Eg.ferritin/pET-28a表達的蛋白，經SDS-PAGE，根據標準蛋白分子量可知，純化蛋白的分子量約19kD.
2.3 特異性抗血清識別純化蛋白和天然抗原
純化Eg.ferritin免疫小鼠制備的抗血清可特異性識別未純化的重組Eg.ferritin，純化的Eg.ferritin 及天然抗原(原頭蚴、囊液)，識別蛋白條帶的位置大致相同約19kD(見圖3)。
2.4 小鼠血清IgG水平變化
根據對小鼠血清IgG水平在0～8周變化趨勢的檢測及對免疫組和對照組小鼠血清IgG的比較發現，小鼠血清中IgG的水平隨著免疫次數及時間的延長呈上升趨勢，免疫4周以后同一時期的免疫組小鼠血清中的IgG水平明顯高于對照組(P＜0.01)。表1 兩組小鼠免疫不同時間血清IgG水平變化
3 討論
本實驗將細粒棘球蚴鐵蛋白基因重新克隆到表達載體pET-28a上，主要考慮：① pET-28a表達載體具有高效表達的能力［7］；② pET28a質粒在插入目的DNA后表達的蛋白N 末端含6個組氨酸，它作為His標簽蛋白，可與Ni2+鰲合，使得重組融合蛋白在變性或非變性狀態下均可被含Ni2+的His-band 樹脂親合柱純化，即使被純化的重組蛋白含量很低也能被有效地純化出來?？朔吮局行囊呀洏嫿ǖ闹亟M表達質粒ferritin/pGEX-6p-1表達的重組蛋白ferritin/GST不能通過GSTTrapTMFF親和層析柱純化的弊端［3］；③重組蛋白是標簽蛋白His和目的蛋白共同組成的融合蛋白，為獲取目的蛋白，本應通過相應的剪切酶將標簽蛋白剪切下來，但由于N-末端組氨酸所表達的蛋白分子量很小，它的存在不改變目的蛋白的活性，所以無須去除。這不僅能減少實驗步驟，降低純化蛋白在酶切過程中的損失，同時還可節省用來購買剪刀酶的費用，為后續研究提供了較好的實驗材料?；诖宋覀兊玫搅艘粋€高效表達且易于純化重組蛋白的基因工程菌株，并得到了較純的重組蛋白，進行動物實驗。通過實驗說明Eg.ferritin作為抗原可誘導動物產生較強的的體液免疫應答，證明其有良好的抗原性；免疫血清與細粒棘球蚴天然抗原(囊液和原頭蚴)的Western blot實驗結果顯示，免疫血清能夠較好地識別天然抗原中位于19kD處的條帶，說明Eg.ferritin具有較好免疫原性，由此推測中國大陸株細粒棘球蚴鐵蛋白基因具有作為包蟲疫苗候選分子的潛能，為進行重組鐵蛋白對宿主的免疫保護性及保護性機制等方面研究的可能性提供了依據。
參考文獻
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免疫學的定義范文6
[關鍵詞] 反復呼吸道感染；免疫指標；微量元素
[中圖分類號] R56[文獻標識碼]A [文章編號]1673-7210（2009）06（c）-011-02
Determination and analysis of serum trace elements and immune indexes of children with recurrent respiratory infection
PANG Yin
(Department of Pediatrics, the First People's Hospital of Ji'ning City, Shangdong Province, Ji'ning 272011, China)
[Abstract] Objective: To investigate the relationship between serum Zn, Cu, Ca, Mg and immune indexes of Children with recurrent respiratory infection (RRI). Methods: The level of serum Zn, Cu, Ca and Mg in 77 children with RRI were measured by atomic absorption spectrophotometry. Meanwhile, the relationship between deficiency of serum Zn, Cu, Ca and immune indexes of children with RRI was analyzed. Results: The level of serum Zn, Cu and Ca in children with RRI was significantly lower than that of normal control group (P
[Key words] Recurrent respiratory infection; Immune indexes; Trace elements
兒童反復呼吸道感染（RRI）是兒科呼吸系統常見疾病，與小兒因營養狀況、環境污染、氣候變化等因素造成的機體免疫功能狀態異常密切相關，其中微量元素的缺乏與其相關性日益受到重視。為了探討微量元素及礦物質與RRI患兒的關系，筆者2007年1月~2008年2月對77例RRI患者進行了血清鋅、銅、鈣、鎂水平與免疫指標測定，細致地探討了鋅缺乏與RRI患兒免疫功能狀態異常的關系，現報道如下：
1 資料與方法
1.1 一般資料
觀察組77例均為就診于我科門診或住院患兒，按1987年4月全國呼吸道成都會議制定的診斷標準[1]確診為RRI；正常對照組69例，為兒童保健門診經全面體格檢查無疾病的查體兒童，兩組在性別、年齡等方面比較，無顯著性差異（P>0.05），具有可比性。
1.2 方法
1.2.1血樣采集取被檢者空腹靜脈血2 ml，1 500 r/min，離心5 min后取血清待測。
1.2.2 實驗儀器與分析采用上海精密儀器儀表有限公司出產的WFX-110A原子吸收分光光度計，血清用去離子水稀釋適當倍數，用空氣-乙炔火焰原子吸收分光光度法分別測定鋅、銅、鈣、鎂，數據自動打印。免疫球蛋白（IgG、IgA、 IgM）測定采用定向擴散法；T淋巴細胞亞群（CD3、CD4、CD8）測定采用SPA法。
1.3 統計學方法
數據以均數±標準差（x±s）表示，采用SPSS 11.5軟件進行統計分析，兩樣本均數比較用t檢驗，組間差異用方差分析，P＜0.05表示有顯著性差異。
2 結果
2.1 血清鋅、銅、鈣、鎂含量測定結果
77例RRI患兒血清鋅、銅、鈣、鎂含量測定結顯示，RRI患兒血清鋅、銅、鈣均有不同程度的降低，與正常對照組比較，有非常顯著性差異（P0.05），見表1。
2.2 RRI患兒血清鋅、銅、鈣、鎂含量與免疫指標的關系
經過對RRI患兒血清鋅、銅、鈣、鎂含量與免疫指標檢測結果的比較發現，血清銅、鈣、鎂含量與免疫指標水平變化比較，無顯著相關；而血清鋅的含量變化與免疫指標水平變化有著密切的關系。觀察組RRI患兒與正常對照組比較，免疫指標水平部分降低，而低鋅患兒較鋅正常對照組免疫指標低下更顯著（P
3討論
微量元素及礦物質與兒童反復呼吸道感染的發生關系密切，本研究主要探討微量元素鋅、銅、鈣、鎂與RRI的關系，結果提示，RRI患兒血清鋅、銅、鈣水平明顯低于正常兒童，而血清鋅的降低對免疫指標的影響更大。
在人體內，鋅是具有廣泛生理作用的微量元素之一，它可以參與許多重要的生理過程，能影響細胞分裂、生長和再生[2]。鋅可以影響免疫系統的調節，明顯的鋅缺乏可以抑制T細胞的增殖和分化，從而引起T細胞功能損害。有資料表明，鋅缺乏患兒的淋巴細胞轉化率低于正常，鋅不足還可以引起胸腺素活性降低，而胸腺素被認為是人體缺鋅的靈敏指標。目前鋅缺乏引起的胸腺素活性降低被認為是免疫紊亂的首要原因[3]。
從免疫學指標檢測結果對比來看，RRI組患兒IgG較正常對照組明顯降低（P0.05），說明嚴重缺鋅不僅造成體液免疫功能低下，而且可以影響人體細胞免疫功能狀態，造成人體細胞免疫功能低下。此外，鋅缺乏可以促進細胞凋亡，這主要通過防止鈣離子內流來實現，反復呼吸道感染時的呼吸道黏膜損傷[4]、纖毛運動障礙是否與其有關，有待進一步研究。
本研究在對RRI患兒血清鋅進行檢測的同時，還對患兒血清銅、鈣、鎂三種物質水平進行了測定，并對其變化與免疫學指標檢測結果的變化進行了對比分析，結果發現，血清鈣、銅在RRI患兒中也有降低，其中鈣較明顯，但沒有鋅顯著，且與免疫指標水平變化的相關性不大。血清銅也是體內多種酶的構成成分，并在氨傳遞中起著重要作用。銅缺乏將出現氨傳遞異常，進而導致轉鐵蛋白功能受損，引起缺鐵性貧血[5]，這也可以解釋本研究中發現的缺鋅伴隨缺銅的患兒病情更易反復且難以控制。
RRI患兒上述快速微量元素及礦物質缺乏均無特異性，不進行微量元素（主要是血清鋅、銅、鈣、鎂）含量測定很難確診。所以根據本研究結果，筆者建議對于RRI患兒常規檢測上述微量元素，一旦發現缺乏，應及時補充，同時加強營養治療。
[參考文獻]
[1]胡儀吉.反復呼吸道感染的診斷標準[J].中華兒科雜志,1988,26(1):41.
[2]馬麗英,李云,張永亮,等.鋅缺乏和鋅過量對培養長骨細胞周期和細胞凋亡的影響[J].營養學報,2000,22(2):109-112.
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