前言：中文期刊網精心挑選了土壤滅菌的方法范文供你參考和學習，希望我們的參考范文能激發你的文章創作靈感，歡迎閱讀。
土壤滅菌的方法范文1
關鍵詞：菌核；真菌；抑菌性；實驗
中圖分類號：S6 文獻標識碼：A文章編號：1672-3198（2011）05-0289-01
油菜菌核病又稱菌核軟腐病,俗稱白桿、空桿、麻桿、爛桿、霉蔸等,是由油菜菌核病菌引起的一種真菌性病害。防治主要采用農業防治、化學防治等綜合防治的方法,雖然對生物防治的研究報道較多,但大部分研究結果仍然停留在實驗室階段,對于利用生防細菌防治的研究主要為篩選試驗,對其防病機理缺乏深入研究。本實驗取樣于不同油菜地的土壤進行病原物的分離與鑒定,弄清楚油菜地常見的幾種真菌及其抑菌性,對于防治油菜相關病害很有意義。
1 實驗內容
采集油菜地的土壤進行真菌分離純化,通過實驗結果分析對比它們之間的真菌種類有什么大同小異,分離出的真菌對油菜的生長有什么樣的影響,有沒有使油菜致病。
1.1 實驗過程
（1）樣本采集：采用五點采樣法分別采集剛收獲過后的菜地和表層1～35 cm深度范圍內的土壤樣品,充分混勻后取定量土壤樣品制備土壤懸浮液。
（2）土壤懸浮液的制備：稱取10g土壤置于盛有90mL無菌水的250 mL滅菌三角瓶內,充分振蕩10min,制成10-1的稀釋液,然后進行10倍倍比稀釋至10-3。
（3）土壤真菌的分離：
①制備加有氯霉素和孟加拉紅的馬丁瓊脂培養基。
②用稀釋平板法,此種方法在土壤真菌分離中最常用,用無菌水將土壤稀釋后得到的懸浮液,將一定量稀釋懸浮液均勻涂抹于培養基上,菌落長成后,將單個菌落挑出。
③培養：將接種土壤浮液的平板倒置于28°的溫度區培養3-5天。
④挑菌純化：從長有單菌落的平板中選取菌落轉接斜面。
（4）真菌鑒定：真菌培養基采用馬鈴薯葡萄糖培養基。
①制備平板：將15-20毫升溶化后冷卻到50度左右的培養基倒入培養皿中。
②接種：在培養基表面劃線接種。
③倒置平板：于最適溫度下培養1-2天。
④觀察菌落的形狀、大小、邊緣、表面、隆起形狀、透明度及培養基的顏色等。
1.2 需重點研究的關鍵問題及解決思路
設4個處理：（1）土壤未滅菌與菌核表面消毒；（2）土壤未滅菌與菌核表面未消毒；①土壤滅菌與菌核表面未消毒；②土壤滅菌與菌核表面消毒。
孟加拉紅瓊脂培養基對于計數來說最常用,松膏培養基可兼顧計數、分離和鑒定,適用于大多數土壤真菌和植物病原真菌的分離,尤其適宜于木生真菌的分離,并且孢子與菌落同步形成,菌落不擴展,可獲得較好的測數結果,是一種用途廣泛的培養基。土壤真菌中,無性態真菌（半知菌）占很大比重。無性態真菌中又以絲孢綱真菌所占份額最大。由于基本上無法通過生殖隔離試驗來測定無性態真菌成員之間的親緣關系,在培養過程中,觀察真菌的形態特征和性狀,如菌落的顏色、分生孢子的形態和菌絲的顏色等。查看文獻從中學習,思考每次的方案。
1.3 實驗主要設備、儀器及藥品
（1）設備、儀器。
天平,燒杯,電爐,試管,三角瓶,棉花,橡皮圈,標簽紙,量筒,滅菌吸管,玻璃棒,鑷子,漏斗,分裝漏斗架,顯微鏡,玻片等。
（2）藥品。
葡萄糖,蛋白胨,1/3000孟加拉紅水溶液,鏈霉素,瓊脂,KH2PO4,MgSO4.7H2O,等。
2 結果與分析
從未滅菌土壤與表面消毒菌核、未滅菌土壤與表面未消毒菌核這兩個處理中從油菜菌核表面分別分離到4株和3株不同種類的真菌；其它兩處理未能誘捕到任何真菌,表明以上真菌來自土壤而非菌核。7株菌株純化后回接到表面消毒的菌核上。20d時從土壤中取出菌核,少數菌核破碎,大多數菌核變軟,表面長有大量孢子,顯示已經被分解。經鑒定,這三個菌株分別屬于短帚霉、哈茨木霉菌和棘孢曲霉。
3 小結與討論
本試驗研究表明,短帚霉、哈茨木霉菌、棘孢曲霉（Aspergillus aculeatus）Asp－1對油菜菌核萌發有較強的抑制作用,致死率均在78%以上。木霉菌作為生防菌已有很多的報道,木霉菌生防作用的生化機制主要包括:代謝幾丁質酶、β-1,3-葡聚糖酶、蛋白酶等多種胞外酶,強烈水解植物病原真菌的細胞壁,抑制病原菌生長與繁殖。但曲霉作為生防菌尚未見報道。將三述的三種真菌用于制作生防制劑,有助于肥田,提高土壤的活性,對保護農業環境和提高食品安全很有效果,生物防治前景廣闊。
參考文獻
［1］陳天壽.微生物培養基的制造與應用［M］.北京:中國農業出版社,1995.
［2］中國科學院南京土壤研究所微生物室.土壤微生物研究法 ［M］.北京:科學出版社,1985.
［3］周德慶.微生物學教程［M］.北京：高等教育出版社,2007.
土壤滅菌的方法范文2
1.藥劑消毒法。在夏季閑茬時期，在未揭棚膜的情況下對栽培地塊或苗床土壤進行消毒；首先將土壤翻松后，用40%甲醛稀釋100倍均勻的噴灑土壤上，然后將所噴過藥的土壤重新深翻后使藥土均勻混合，用廢舊薄膜全部覆蓋后密閉溫室45天，然后揭去薄膜并再次松動土壤，打開通風口通風，15天后即可進行播種或栽植。
2.高溫消毒法。在春茬蔬菜拉秧后，把病株殘體清除到室外集體燒毀。清潔溫室后，若將土壤呈酸性，則施如少量的生石灰，若將土壤呈堿性，需加入碎稻草或麥秸500千克，再混入牲畜糞后深埋土壤50厘米然后開溝，溝內注入大水至溝滿，在太陽下密閉暴曬15～50天，使10厘米土壤內溫度在50～60℃，可有效防線蟲病、枯萎病、青枯病、軟腐病等。
二、種子消毒
播種前對種子進行消毒。主要有溫湯浸種，藥劑消毒和干熱消毒。有效殺死種子表面的病菌。其中干熱消毒法對種子進行消毒處理是消滅種皮帶菌的最好方法，利用夏季高溫季節對種子進行充分的晾曬，也屬于干熱消毒的一種。具體做法為：在播種前35天左右，選擇晴天將種子平攤于溫室中干凈的播種盆或紙盆中，在高溫條件下予以20天左右的充分晾曬，晾曬后放于恒溫箱再進行干熱消毒以此來消毒種子表皮的細菌、病毒。
三、棚室滅菌
1.煙劑熏蒸防治。通過點燃煙劑農藥，使煙劑中的農藥有效成分受熱氣化，遇冷形成微小顆粒，沉降于蔬菜作物表面進行殺蟲滅菌。煙劑使用省工省時，不受天氣影響，一般分兩個時期進行：一是在蔬菜作物定植前或播種前施用；二是在蔬菜作物生長期進行施用。主要有硫黃煙劑、百菌清煙劑、速克靈煙劑、殺蟲煙劑等種類。如：秋冬茬素菜育苗前一周，可用硫黃粉熏蒸消毒的方法對溫室空間和農具進行消毒。具體方法：每667平方米用硫黃粉1千克加鋸末混合，拌勻后分防在溫室各點，暗火點燃密閉溫室熏蒸12h，或用45%百菌清煙霧劑每畝用藥1千克熏蒸溫室，熏蒸后仍密閉溫室7～10天滅菌消毒，定植或播種前1～2天打開通風口通風。
2.粉塵劑施藥防治。通過噴粉器把粉塵劑農藥噴到空中，其農藥微粒再沉降到蔬菜作物表面進行殺蟲殺菌。其與煙劑熏蒸區別就是即使棚室封閉不嚴也可進行，其防治效果可比常規噴霧施藥提高防效40%以上。
土壤滅菌的方法范文3
關鍵詞 雞腿菇；木薯酒精廢渣；栽培技術
中圖分類號 S646 文獻標識碼 B 文章編號 1007-5739（2013）02-0117-01
雞腿菇又名雞腿蘑，因其外形似雞腿，肉質肉味似雞絲而得此名，被譽為“菌中新秀”。分析表明，雞腿菇鮮菇水分含量為92.2%；每100 g干菇中含粗蛋白、脂肪、總糖、纖維、灰分分別為25.4、3.3、58.8、7.3、12.5 g；雞腿菇含有20種氨基酸，其中包括8種人體必需的氨基酸。營養豐富，可燉食、炒食、煲湯，市場前景廣闊，深受菇農喜愛。
廣西已成為我國最大的木薯種植省區，其木薯酒精產量變性淀粉、山梨醇等產量均居全國前列。木薯酒精廢渣是一種良好的適合雞腿菇栽培的原料，其含有粗蛋白15.13%、粗纖維49.62%。解決木薯淀粉加工企業大量木薯酒精廢渣對環境的污染，是當前亟需解決的問題。利用木薯酒精廢渣栽培雞腿菇既降低了生產成本，又可變廢為寶[1-2]。配以適當的原料，雞腿菇的轉化率可達到100%以上。能夠有效延伸木薯產業鏈，促進廣西地區木薯產業的發展，又能夠解決雞腿菇生產用料與林業資源保護的矛盾，還可以提高雞腿菇產量，創造更高的經濟效益，具有明顯的社會效益、經濟效益與生態效益。
1 季節選擇
雞腿菇屬中溫型菌類，出菇溫度15～28 ℃，可利用拱棚、大棚等栽培。一般春季、秋季分別在1月初至3月初、8月初至9月底栽培。
2 栽培場地的選擇與處理
場地可以因地制宜，可利用林場、休閑田整畦搭棚、果園、屋房以及室外小搭棚、冬暖式大棚等栽培雞腿菇。在栽培前4～6 d，將棚內地面清理干凈、整平，灌足1次水，同時要進行消毒處理，噴灑5%甲醛溶液殺菌，用量為25 g/m2；噴灑稀釋800倍的辛硫磷殺蟲劑，用量為15 g/m2。
3 原料的處理
木薯酒精廢渣取自廣西北海中糧酒精廠，系木薯酒精廢液經離心壓濾干燥后獲得。運回場地后，用粉碎機粉碎備用。
4 配方
木薯酒精廢渣50%，棉籽殼30%，麩皮8%，石灰8%，石膏2%，過磷酸鈣1%，碳酸氫銨1%[3]。木薯酒精廢渣堆料時使得原料酸度較大，調配時需將pH值調至9～10。
5 配料與裝袋
原料按配方準備好后，將石灰、石膏、碳酸氫銨直接拌入木薯酒精廢渣中，然后與棉籽殼充分拌勻，加水混合時注意控制木薯酒精廢渣的黏稠度，含水量達到50%后即可停止加水。堆積5～8 h進行裝袋。菌袋采用常規的22 cm或23 cm聚乙烯菌袋，裝袋要求松緊適當，在有些地方也可以讓其培養料自然發酵，以利于含水量均勻，培養料更加松軟，便于裝袋。
6 滅菌
將裝袋完畢的菌袋迅速地放入滅菌鍋內進行滅菌，料袋裝鍋時要留一定的空隙，便于空氣的流通，一般常壓滅菌達到100 ℃后，保持10 h，中途不可降溫熄火[4]。
7 接種發菌
將滅菌后的培養袋移入經過消毒滅菌的接種室，讓其自然冷卻，當菌袋溫度降到30 ℃以下進行接種。接種可采用一頭接或兩頭接的方法，為促進菌絲較快生長，采取兩頭接種的方法。發菌時，用層架安置菌袋并堆碼成“井”字形。還要隨時注意發菌室的溫度，及時檢查，每隔2 d要開窗進行適當的通風透氣，以利于菌絲的快速生長，一般情況下菌絲40 d即可長滿菌袋。
8 脫袋覆土
菌絲長滿菌袋后還要再過幾天的后熟，才可脫去塑料袋，覆土進行出菇管理。覆土前，先將栽培場地打掃干凈，用消毒劑和殺蟲劑徹底地消毒和殺蟲后再將菌袋搬入栽培場。用地膜鋪設寬1.2～1.3 m、長5～6 m的地塊，用火磚掀起固定膜邊，即圍成菇床[5-7]。撒適量石灰或草木灰后，把后熟期的菌棒脫袋，橫或豎臥于床內，要求排放均勻，菌棒之間盡量不留空隙。然后覆4 cm厚的經滅菌、殺蟲、堆制的菜園土，重噴1次水，再補土修整床面即可。
9 出菇管理
經過10 d的培養，菌絲從覆土層長出，此時要求通風量減少，同時注意濕度管理，采取菇蕾禁噴、空間勤噴、幼菇酌噴、成菇輕噴的原則，從而使雞腿菇出菇期間的溫度、濕度分別達到13～26 ℃、85%。
10 采收
采收在雞腿菇子實體7成熟時進行最好，由于菌蓋還緊包菌柄，產量和質量較好。采收時用手捏住基部左右轉動后輕輕拔出，不要帶出基部土壤。采收后對床面的老化菌根、殘菇進行清理，為使土壤濕潤，向床面噴水1～2次/d。用此法培植雞腿菇，一般可采收4～5茬，生物轉化率在100%左右。
11 加工與銷售
在雞腿菇栽培規模較小時，以新鮮出銷為主要銷售方式。雞腿菇易出現腐爛、破碎，保鮮時間較短，為提高產出，采收后應盡快銷售。對于銷售市場較遠的雞腿菇栽植地，可將雞腿菇的菇蕾切成薄片、碎塊，用電熱鼓風干燥機脫水烘干，每120～180 g分裝于包裝袋中。
12 參考文獻
[1] 萬四新，趙啟光，常艷麗，等.雞腿菇不同培養料配方栽培比較試驗[J].安徽農業科學，2006（22）：5820-5821.
[2] 王尚堃，于醒.雞腿菇塑料大棚栽培培養料配方對比試驗[J].長江蔬菜，2009（18）：51-52.
[3] 王尚堃，米青山，秦新建，等.雞腿菇兩種栽培方式產量與效益的比較[J].中國蔬菜，2004（6）：31-32.
[4] 姜秀云，邱成書，王娟，等.雞腿菇高產栽培技術初步探索[J].中國食用菌，2011（4）：26-28.
[5] 林如海.提高雞腿菇產量的栽培方法探討[J].寧德師專學報：自然科學版，2005（3）：277-279.
土壤滅菌的方法范文4
關鍵詞：多肉植物；養護管理；注意事項
一、澆水
多肉植物澆水的一般的原則就是“見干見濕”。“見干”就是指上一次澆水后土里的水分消失，但也不能干透?？梢杂檬种富蜓篮瀬頇z查干濕程度。如果只是表土干而底層濕潤時，就不宜澆水?！耙姖瘛本褪侵笣菜獫餐福敛荒苌蠞裣赂?。因為植物根系位于底部，如果只是上層土濕潤，根本不能供給植物利用。因此澆水要澆透。澆水可以選擇直接澆灌，也可以選擇浸盆的方式。浸盆的好處就是澆的水一定能保證根系吸收，既滿足了植物生長所需的水分，還不易造成土壤板結，滿足透氣性。澆水的時間也有限制。禁止在陽光強烈的中午澆水。澆水的最佳時間為下午的6～8點，澆水后應當放置在通風良好的地方進行管理。
二、施肥
多肉植物其實是可以不施肥的，它們可以從土壤中汲取養分，還可以進行光合作用，所謂“萬物生長靠天氣”，環境好，多肉自然也就長得好。想要多肉長得更加健壯，可以進行施肥。肥料大致分三種：氮肥、磷肥和鉀肥。其中氮肥以促進植物枝葉生長為主，磷肥可以促進開花結果，而鉀肥的主要作用是促進根莖健壯。因此在購買時要看清成分。
多肉植物在上盆前需要在盆底放上緩效花肥就可以作為基肥了。除此之外，多肉還可以考慮追肥。對于一些生長旺盛的多肉如仙人掌和仙人球等就需要薄肥勤施。但是對于生長緩慢的品種就基本不需要施肥了。還有就是植物開花的時候需要施肥。由于植物開花需要消耗大量的營養，如果植物吸收到的營養不足以支持開花，就會消耗自身的營養。消耗自身的營養后就會使植株瘦弱，狀態差。因此在多肉開花時就要使用一些肥料，供給植物開花。常見的花肥主要有：花友等專業花肥，還可以直接施用稀釋后的磷酸二氫鉀來補充磷肥和鉀肥，效果都很不錯。
三、除蟲殺菌
多肉植物的葉片鮮嫩，人們十分喜愛。然而蟲子和病菌也很喜歡，因此在養多肉的過程中還需要進行除蟲殺菌。常見的蟲害主要有粉虱、介殼蟲、紅蜘蛛和小黑飛等。它們有的通過吸食多肉的葉片存活，例如紅蜘蛛，介殼蟲。還有的幼蟲危害多肉植物的根系，如小黑飛的幼蟲對多肉的根系危害極大。在害蟲少或者剛剛開始時盡量不用藥劑除蟲，可以手動去除。如果發現害蟲數量多，可以使用一些除蟲藥物，例如土蟲丹，呋喃丹，小綠藥等，將它們拌人土中，可以起到除蟲防蟲的作用。當多肉植物受到菌類侵染時就會造成腐爛，直至整株死亡。防止菌類危害需要對土壤進行滅菌處理，物理方法可以在種植前進行高溫殺菌或直接在太陽下暴曬。在種植植物后，可以使用藥物滅菌的方法。常用的滅菌藥物有多菌靈，百菌清和甲基硫菌靈等，進行稀釋后噴灑或澆灌在土中進行殺菌，效果都可以起到滅菌的作用。
四、換盆換土
多肉植物在生長過程中會長大和分頭，因此就需要進行換土和換盆。盆的選擇上以透氣性好為主，透氣性好的花盆有利于植物根系呼吸，防止爛根?；ㄅ杳烙^也是重要的因素。美麗的多肉植物再配上美觀的花盆才更加恰當。
五、多肉植物的休眠與養護
根據多肉植物的不同的生態習性，可將它們分成春秋型、冬型和夏型。春秋型即指春秋生長而夏季和冬季休眠的多肉；冬型，即為冬天生長夏季休眠的多肉；夏型，即是夏季生長冬天休眠。根據它們休眠的時間不同，養護要點也不同。
土壤滅菌的方法范文5
關鍵詞：靈芝；栽培技術；拉薩地區
中圖分類號：S56731文獻標識碼：A
靈芝（Ganoderma lucidum）被譽為“仙草”，現代研究表明具有抗病毒、抗氧化、抗腫瘤、鎮靜等多種生理活性和藥理作用。靈芝菌絲喜偏酸環境，最適pH值為60左右，最佳溫度為25℃左右，子實體生長最佳空氣相對濕度為80%左右。近年來，拉薩地區陽光溫室大力建設為靈芝在該地區的人工栽培創造了良好條件，4月中旬白天溫室內可達到25℃，室內溫度可達18℃，通過實驗室和陽光溫室互補使用可有效提高靈芝栽培成功率；拉薩地區干燥日照時間長蒸發量大，因此在溫室內應配備小拱棚及水幕帶，而在實驗室可用加濕器保持空氣相對濕度；可充分利用拉薩地區木材加工廠及農業生產下腳料配制培養料，配制培養料時加入適量石膏或生石灰粉滅菌后呈弱堿性，隨著菌絲生長時有機酸積累會逐漸中和堿性最終達到最佳pH值，而弱堿性培養料還可抑雜菌生長，保證靈芝栽培高產。
1菌種制備
11母種制備
一般為組織培養也就是切取部分新鮮靈芝子實體組織，用75%酒精或01%高錳酸鉀水溶液浸泡15min消毒，如果組織塊漂浮，可用火焰灼燒消毒過的鑷子將其壓入消毒液中；用無菌操作法將其切成花生粒大小的小塊，并接種土豆葡萄糖瓊脂平板培養基上，或接種在土豆葡萄糖瓊脂試管斜面培養基上；放置于培養箱25℃避光培養3～4d有白色菌絲生長。為防止雜菌污染需及時進行分離培養，用接種針等工具挑取純凈菌絲接種于新培養基中，培養約1周，觀察無雜菌生長，菌絲干凈潔白即可作為靈芝母種。如果分離效果不理想，可再次分離培養。
12原種制備
將母種接種于新的培養基中擴大培養，即為原種。一般1支試管斜面母種可接種20～30支試管斜面原種，瓊脂平板轉接擴繁量相當。放置于培養箱25℃避光培養至菌絲長滿斜面或平板。
母種和原種培養基配方一致，配制1L如：馬鈴薯（去皮）500g切片，水煮至綿軟，過濾所得液體備用，加葡萄糖20g，磷酸二氫鉀10g，硫酸鎂10g，維生素B1約005g（口服維生素B1約1片），用氫氧化鉀調節pH值至65～75，最后加入20g瓊脂粉攪勻。115℃或121℃，015MPa，滅菌15～30min備用。
此外，還可購買商品培養基如馬鈴薯葡萄糖瓊脂培養基，來進行培養。菌種制備方面，如果沒有條件，可向專業機構購買品質好的靈芝母種或原種使用。
13栽培種的制備
培養基配方可因地制宜的選用農林業下腳料。實驗室選用的培養基配方為：闊葉樹木屑70%，青稞粉20%，玉米（粉碎）5%，葡萄糖2%，磷酸二氫鉀1%，硫酸鎂1%，維生素B1約001%，加水攪拌均勻，用1%石膏或生石灰調pH至65～75，水分則以手握緊成團指縫間無水滴下為宜。用菌種瓶或菌種袋分裝，115℃或121℃，015MPa，滅菌15～30min備用。將原種接種于其中，25℃避光培養至菌絲長滿菌種瓶或菌種袋即成栽培種。
如果培養時沒有培養箱，則可選用干凈且保暖好的房間培養，可加裝加熱保溫裝置縮短培養周期。如果接種時沒有超凈工作臺，可用自制簡易工作臺進行接種，但要注意無菌操作；接種前需要進行甲醛加高錳酸鉀熏蒸或安裝殺菌紫外燈消毒，甲醛熏蒸消毒則應等甲醛散盡后工作，紫外燈消毒至少15min后方可使用，操作者的手部要用75%醫用酒精消毒，接種工具用酒精燈火焰灼燒消毒。
2靈芝栽培方法――瓶栽
該方法簡單易行，且占用空間少。當菌絲長滿菌種瓶或菌種袋時，表面可見子實體原基（白色疙瘩狀凸起物），打開瓶蓋或菌種袋，在培養架上臥放，溫度以25℃左右為宜，空氣相對濕度則以80%左右為宜，此時子實體將迅速生長。確保溫濕度時可適當的通風促進靈芝菌蓋生長和噴射擔孢子；培養室內可有一定散射光促進子實體生長，光線強度以在培養室內剛能看清報紙為宜。
3靈芝栽培方法――段木培養
31段木的選擇
實驗室選用拉薩地區易得的青木等硬雜木，在拉薩沒有開通暖氣之前藏族同胞主要用其燒火取暖。現在選用直徑15cm左右的青木，鋸成40cm長的木段，無需去皮直接碼放干燥?？筛鶕嶋H栽培場地確定段木長度，以方便操作為原則來確定直徑。
32接種與管理
菌種活力從強到弱依次實體原基、母種、原種、栽培種。實驗室選用栽培種接種于段木兩端。接種前段木需裝入兩頭開口的菌種袋中，扎緊開口（開口中間可放置棉塞以便通氣），115℃或121℃，015MPa，滅菌15～30min以備接種?？稍谙鄬崈舻姆块g內進行接種，2人配合，一人打開菌種袋，另一人迅速接種并扎緊開口，同法進行段木另一端接種。將接種好的段木放置于培養箱或培養室內培養，25℃避光培養至菌絲長滿段木時，在陽光溫室內覆土栽培。拉薩地區適合在4月下旬覆土栽培，如果溫室夜間溫度過低，可在可在溫室內設小拱棚并配以水幕帶，保持溫度及土壤濕度，待芝蕾長出時，空氣濕度須保持在80%左右，可對芝蕾進行適當修剪保證品質，約2個月后芝蕾長成成品靈芝即可采收。
此外，還可用電鉆在段木上打孔接種。鉆頭直徑和打孔間距以方便操作為宜，一般選用1cm左右鉆頭打1cm深的孔；間距一般約25cm，鉆孔排列呈三角形。打孔后立即接種入切割好的大小合適的實體原基（1cm2）。接種1個月后可見開孔四周形成棕色菌圈，此時可將段木埋入土壤中覆土栽培，土壤以微酸性為宜。4月前在實驗室培養好段木，之后白天拉薩地區陽光溫室溫度可達25℃左右，便進行覆土栽培。但4～6月晝夜溫差仍較大，夜間應注意溫室的保溫。
段木栽培靈芝可連續采收2～3a，每噸段木可收15kg干品。一茬采收完畢后，及時清除段木表面污物，去除畸形芝，再補充水份，在適宜條件下約1周又可長出芝蕾。拉薩地區溫室內段木栽培可采收到10下旬，若在配有保溫加熱設施的室內栽培可延長1個月。
4病蟲害防治
41雜菌
雜菌主要有青霉、曲霉等，無菌操作不嚴格或高溫高濕環境容易造成雜菌污染。防治方法：培養基必須徹底滅菌，嚴格遵守無菌操作方法；對培養箱或培養室需定期消毒，消毒液可選用新潔爾滅、多菌靈、綠霉凈等；在保持溫度和濕度時，要加強通風；污染嚴重的則立即淘汰，污染較輕的可去除污染部分后滅菌補充接種再培養。
42地螨
地螨等害蟲可用氯氰菊酯等藥物進行殺滅。此外，應當加固溫室（或培養室）和放置捕鼠夾等預防鼠害。
5采收
當靈芝子實體菌蓋邊緣由白色變為褐色，菌蓋下的管孔向外噴射孢子時，即可采收。直接采收整個子實體，晾曬或低溫（不超過50℃）烘干以防止靈芝中易揮發的有效成分喪失；采收后需及時烘干嚴防堆焐發霉。充分干燥后（含水量低于10%）放入塑封袋中4℃低溫保藏。子實體一般以身干、蓋厚、柄壯、質實、色亮且具漆樣光澤者為上品。
孢子粉的收集則在子實體下方放置干凈的塑料布，用刷子輕輕收集；也可以套袋收集。孢子粉需經干燥才能用塑封袋包裝，4℃低溫保藏。
參考文獻
[1]閆和健.靈芝豐產栽培技術[J].農業技術與裝備，2014， 285（05）：61-62.
土壤滅菌的方法范文6
一、實驗材料的選擇和處理
該實驗的目的是使用含有尿素的培養基分離有脲酶的細菌和利用指示劑顏色的變化檢知脲酶所催化的反應;實驗的內容是從土壤中分離出能利用尿素的細菌，觀察菌落數，了解它在生態平衡中的作用，并以LB全營養培養基為對照，觀察全營養生長細菌的菌落數。為了獲得實驗的成功，首先必須正確地選擇和處理實驗材料。[1]
（一）土樣的獲取
為了分離到能分解尿素的細菌，需要獲取合適的土樣。教材中只提到從有哺乳動物排泄物的地方獲取，具體的方法并未說明，操作過程中由于實驗材料獲取不當很容易導致實驗的失敗。土壤中的微生物數量繁多、種類復雜，在富含有機質的土壤表層，有更多微生物生長。細菌適宜在中性環境的潮濕土壤中生長，且絕大多數分布在距地表約3～8cm的土壤層。因此在土壤取樣時，可以從施用人畜糞便的農田等環境中選擇肥沃、濕潤的土壤，先鏟去表層土3cm左右再取樣，將樣品裝入事先準備好的信封中備用。
（二）制備土壤稀釋液
教材中只說明了制備土壤稀釋液的過程要在無菌條件下進行，實際上土樣的稱取也應該無菌操作，在超凈臺上酒精燈火焰旁進行。
在無菌條件下，稱取1g土樣，加到99mL無菌水的三角瓶中，振蕩，即成10-2稀釋液，從該稀釋液中取0.5mL懸液加到4.5mL無菌水的試管中，經振蕩制成10-3 稀釋液，再依次制備10-4、10-5土壤稀釋液。實驗要求每次稀釋后都要振蕩10min，在實際教學中很難有那么長的時間給學生操作，可以適當縮短振蕩時間，混勻即可。
二、尿素固體培養基的配制
該實驗中分離以尿素為氮源的微生物所依據的原理是在氮源只有尿素時，這些微生物能利用尿素獲得氮源而存活，其他微生物則因為缺乏氮源而死亡，因此尿素固體培養基的配制是本實驗的關鍵。
（一）用瓊脂糖代替瓊脂
其他版本的教材中配制尿素固體培養基時添加的是瓊脂，浙科版教材改為瓊脂糖。瓊脂在制作固體培養基時可作為凝固劑，但它是一種未被純化的混合物，里面有一定量的含氮化合物。
瓊脂糖是瓊脂進一步純化，去除了含氮化合物后的產物。利用瓊脂糖作凝固劑，能防止含氮化合物對實驗的干擾，有利于以尿素為氮源的細菌的篩選。
（二）適當降低尿素的濃度
教材中配制尿素培養基時，25mL培養基溶液中是加入了10mL含有2g尿素的尿素溶液，質量分數達到了8%，實驗研究發現，經這種培養基培養長出的細菌含量很少，10-2的稀釋度下也只是偶爾能看到1個菌落，高的稀釋度下更難有結果出現。文獻資料表明，尿素可在脲酶的作用下水解成碳酸銨進而生成氨，尿素濃度過高，產生的氨太多會導致培養基pH增大，不利于細菌生長。[2]若尿素濃度過低，產生的氨太少，酚紅的顯色現象則不明顯。
為了確定尿素溶液的最佳比例，筆者配制了不同濃度梯度的尿素溶液進行實驗，在25mL培養基溶液中分別加入10mL含有0.25g、0.5g、1g、1.5g、2g尿素的尿素溶液，結果表明，添加0.5g尿素的培養基中細菌生長較多，顯色現象較明顯。由此可見，適當降低配方中的尿素濃度，有利于實驗效果的改善。
（三）尿素溶液的滅菌方法
尿素加熱后會分解，因此不能使用高壓蒸汽滅菌，一般采用的是過濾除菌法，可以使用G6玻璃漏斗或針頭式過濾器過濾。教材中采用的是G6玻璃漏斗過濾的方法。玻璃漏斗使用前要先在121℃下用紙包好滅菌，使用后需要用1mol/L的HCl浸泡，并抽濾去酸，再用蒸餾水洗至洗出液呈中性，干燥后保存，操作起來非常煩瑣，且過濾耗時很長。目前實驗室中廣泛采用的過濾處理裝置為針頭式過濾器。一次性針頭式過濾器可與一次性注射器配套使用，過濾尿素時，一般選擇孔徑為0.22μm的針頭式過濾器。這種方法不需要換膜和清洗濾器，省去了復雜、費時的準備工作，使用起來快速方便。
也可以使用化學滅菌法對尿素滅菌。取麝香草酚結晶一塊，在燒杯中用蒸餾水反復洗滌三次，然后置于一定量的尿素溶液中，在冰箱內保存24小時后即可使用。由于麝香草酚對霉菌的抑制力較差，故配好后應在冰箱中保存，以免受到霉菌污染而使尿素失效，同時可以長期使用。這種方法非常簡便，效果也較好，在醫院中經常使用。
三、稀釋涂布分離法的操作
分離以尿素為氮源的微生物需要使用稀釋涂布分離的方法，教材中只是簡要介紹了稀釋涂布的內容和程序，對于移液槍的正確使用和涂布法的操作都沒有說明，對于首次使用涂布分離法的學生來說困難很大。
（一）移液槍的使用方法
在設定容量時先通過粗調將容量值迅速調整至接近自己的預想值，再將移液槍橫置，水平放置在自己的眼前進行細調，慢慢將容量值調至預想值，從而避免視覺誤差。需要特別注意的是，從大值調整到小值時，剛好就行;但從小值調整到大值時，需要調超1/3圈后再返回，這是因為計數器里面有一定的空隙需要彌補。在該過程中，不能將按鈕旋出量程，否則會卡住內部機械裝置而損壞了移液槍。將移液槍垂直插入槍頭中，稍微用力左右微微轉動即可使其緊密結合。
在吸取液體之前，應該先預吸取、排放三次，讓吸頭內壁吸附一層液膜，確保移液的精度和準度。吸液時，先將移液槍排放按鈕按至第一停點，再將吸頭垂直浸入液面2～4mm以下，然后慢慢松開按鈕回原點。放液時，先將按鈕按至第一停點排出液體，稍停片刻后，繼續按按鈕至第二停點吹出殘余的液體，最后松開按鈕，確保吸頭內無殘留液體。整個過程應保持慢吸慢放，避免速度太快而產生反沖和氣泡，導致移液的體積不準確，同時還要注意是否會有漏氣現象。
（二）涂布分離的操作
涂布分離時，若平板不干燥，會影響涂布的效果，有時會因涂布不均勻使某些部位的菌落不能分開，或在培養基上出現一層薄膜。因此涂布前可將制備好的平板預先放在培養箱里培養一段時間，待表面水分蒸發后再進行涂布。取0.1mL 10-4、10-5土壤稀釋液加入尿素培養基和全營養LB培養基中，右手持玻璃刮刀平放在培養基表面，將菌液沿同心圓方向輕輕地向外擴展，可以先按一條線輕輕地來回推動，使菌液分布均勻，然后再按其垂直方向來回推動，平板邊緣可弧線推動。需要注意的是，涂布完成后不宜立即將培養基倒置，而應先在室溫下靜置5～l0min，使菌液滲透入培養基內，再將培養基倒置培養。
此外，玻璃刮刀在使用前保存在70%酒精中，使用時先將玻璃刮刀在酒精燈火焰上引燃，待酒精燃盡、火焰熄滅后，先在培養皿蓋內側稍作冷卻后再進行涂布。切忌將剛剛灼燒過的玻璃刮刀立即放入酒精中，以免高溫引起酒精燃燒，造成危險。更換稀釋度時，需要將玻璃刮刀灼燒滅菌并更換玻璃刮刀，若由低濃度向高濃度更換，也可以不更換。因此，建議先進行10-5土壤稀釋液的涂布，再進行10-4土壤稀釋液的涂布，這樣在使用移液槍滴加液體時可以不用換槍頭，玻璃刮刀也可以不用更換，省去了許多麻煩。
四、培養時間的調整
該實驗中利用酚紅作為指示劑檢測脲酶所催化的反應，細菌培養時間為24～48h。
酚紅是一種酸堿指示劑，顯色范圍為pH6.4～8.2，酸性條件下顯黃色，堿性條件下顯紅色。細菌培養后，產生的脲酶將尿素分解成氨，從而使酚紅由黃變紅，從而可以檢測出細菌是否已將尿素分解。隨著培養時間的延長，紅色區域的面積越來越大，據此也可以判斷細菌分解尿素能力的強弱。
實驗研究發現，在含有酚紅的培養基中細菌生長會較緩慢。在沒有添加酚紅的尿素培養基中，培養24h后即可看到明顯的菌落產生;添加了酚紅的培養基中，則要到48h后才能看到菌落出現，若要觀察到顯色反應，時間則更久，至少需要72h，甚至一周左右。因此，建議可以將培養時間相對延長至72h以后，紅色也會越來越明顯。
五、改進后的實驗效果
根據預期的實驗結果，有脲酶的細菌菌落周圍應出現著色環帶，但教材中的實驗結果圖片只能顯示出兩種培養基上細菌數量的不同，并沒有清楚地看見紅色環帶，學生很難產生直觀的認識。經過反思和改進后，取得了較好的實驗效果，如圖1所示。
實驗結果顯示，在相同的稀釋度下，全營養培養基中有較多菌落，尿素培養基中只有少量菌落;全營養培養基中菌落種類多樣，尿素培養基中菌落種類較單一;有脲酶的細菌菌落周圍出現紅色環帶，菌落較多的尿素培養基逐漸變紅。值得注意的是，理論上尿素培養基中分離出的只有以尿素為氮源的細菌，但實際上尿素培養基中分離出的細菌不一定全都是以尿素為氮源的，有些細菌會利用其他微生物代謝的產物為氮源，如尿素分解后產生的氨就可為硝化細菌提供氮源，[3]因此還需要通過進一步的檢測確定細菌的種類。
六、小結與反思
“分離以尿素為氮源的微生物”的實驗教學不僅有助于學生更深入地認識微生物的利用，拓展生物科技視野，增進對生物科技與社會關系的理解，還有助于提高設計實驗、動手操作等科學探究的能力。充分的實驗準備和良好的實驗效果是提高實驗教學有效性、達成教學目標的基本途徑和重要手段。
經過改良后的實驗方案，既提高了實驗的效率，又能取得較好的實驗效果，學生們基本都能培養分離得到以尿素為氮源的細菌并觀察到紅色環帶的現象。成功的實驗結果更能激發學生學習的興趣和動力，增強實驗的自信心和積極性，提升對生物學科的熱愛，有助于知識的意義建構，大大提高了實驗教學的有效性。
參考文獻：
[1] 李其安.高中生物實驗教學中存在的問題及解決策略[J].中學生物學，2012（9）：13-14.
