田漢妻子范例6篇

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田漢妻子范文1

1、這個冬季,是寒冷的,雪,一直飄,看著,讓人不寒而栗。人們都不愿出門,不愿被那寒冷的氣息包圍,就連小星星,也不愿待在天上了,讓這深夜顯得更蒼茫、寂寞了。

2、依然無語,我強忍住寒冷,而寒風卻更加肆無忌撣,奔騰著,呼嘯著,如同一群手持大刀的魔鬼,氣勢洶洶地奔騰而來。一直進入我的骨髓,我的手腳麻木了,緊接著,我的心也隨之麻木了。牙床不由自主地瑟瑟發抖。

3、與悶熱的夏日不同,冬日的寒風是真真實實地扎進血肉的,呼嘯的疾風狂躁地卷著冰冷而來,冬天這個季節,如一把叛逆的利劍,透支著少的可憐的溫暖,使放蕩不羈的寒冷洶涌而來。

4、肆虐的雪花紛紛揚揚地飄落下來,凜冽的寒風一陣一陣地吹過。路上都是縮著脖子,拉緊了衣服的領口急匆匆地的行人,空氣中到處膨脹著寒冷和干燥。這樣的天氣幾乎統治了這個冬天。

5、快半夜的時候,天氣冷極了,慘白的月光下,沙丘好似一座銀子筑成的墳,毫無動靜。

6、去年的冬日異常寒冷,滴水成冰。出行的人們不得不捂著口罩,呼出的熱氣立刻結霜。

7、我和媽媽捂得嚴嚴實實,準備出門去欣賞雪景。寒風刺骨,但空氣清新,使我迫不及待地想要去看看這場雪留下的痕跡。

8、數九以來,朔風吹,寒氣逼人,這又是一個奇冷的冬天。

9、樹葉也不例外。寒冷的空氣把他們麻痹,只是萬事具備,只欠冬風了。一陣風吹過,樹葉紛紛活躍了起來。有些樹葉經受不了寒風的刺痛,從樹上墜下,永遠沉睡了。

10、一年一度的冬季長跑在這個寒冷的季節也開始了。當我們長跑的隊列站到了操場上,我感到,我的手無法正常伸出來,寒冷讓十指早已彎曲僵硬。我的臉凍得生疼,從嘴里呵出的熱氣在陽光下宣泄著,一屢屢地繚繞在我的眉宇間。

11、枯黃的樹葉隨著蕭蕭的寒風,紛紛投身于大地母親的懷抱。

12、冬天的早晨,是寒冷的。寒風呼呼的吹著,吹到臉上如同刀割一樣疼,出行的人們都戴上厚厚的帽子,穿上了暖和的棉衣。

13、鵝毛般的大雪瀌瀌的下著,交織、纏繞成凌雜的油畫。少年在一間漏縫百出的茅草屋中哆哆嗦嗦,牙齒不住地打著寒顫,手也因寒冷而發抖。

14、在北方,寒冷的冬天已經到來了。早上,呼呼呼,寒冷的北風吹在人們的臉上,()像刀割一樣。青蛙不再唱卡拉OK,樹木像一把把光禿禿的掃把,上面結滿了冰凌。

15、剛燒開的水,一落地就結冰了。

16、如此冷的天,不僅人耐不住,動物們耐不住,花草也耐不住。昔日在枝頭歡快歌唱的小鳥不見了,就連我討厭的蚊子,蜘蛛,一個個的也不見了蹤影?;▋旱蛄懔?,草兒枯黃了。但是,唯有那路邊的松柏依然綠意濃濃,給這塊寂寥的大地注入了幾番生命的活力。

17、他在寒冷的北風中瑟瑟發抖,手腳都凍僵了。

18、今年的冬天又是一個寒冷的嚴冬,冷的人們直打哆嗦,仿佛整個地球放在一個冰冷的水箱里。

19、迎來了冬,我的第一感覺是寒冷寂寞。是冬的冷清讓懂得如何冷靜,我明白了,不是一切的寒冷都會讓人失意。

20、當黎明的曙色尚未到來的時刻,我感到透骨奇寒,便匆匆跑回宿舍,取件衣服披上。

21、北方的天氣十分寒冷,滴水成冰,寒風刺骨。

22、房頂破了好幾個洞,連綿不絕的雨水如根根麻線密集而又無情地落到屋里,打濕了整間貧寒的小屋,空氣里滿是寒冷,我的眉毛上幾乎都可以結上一層霜。

23、雪花瘋狂的咆哮著,打在臉上如同針扎一般,冰涼刺骨。

24、秋天尚未離去,那寒冷動冬天卻迫不及待地來了。它還帶來了寒冷的雨絲,把人們都冷凍在寒冷之中,感覺不道德一絲的溫暖,使人們的心都麻醉了。

25、天氣冷得能把湖水結成厚冰。

26、聽老師說,這兒夏天是長沙最熱的,熱得像火上燒的爐子;冬天恰恰又是最冷的,冷得像冰箱?,F在正值冬季,冷得我們穿四件衣服才敢到外面走走。

田漢妻子范文2

認清自己,拒絕童星光環

張子楓是被放養的小孩。在成長的過程中,她的父母很少用規規條條來束縛她,而是努力尊重她的意愿。因為得到了足夠的尊重和自由,張子楓一直都是按照自己的節奏成長的。

在很小的時候,張子楓就對表演發生了興趣,她喜歡看電視,還經常模仿經典影片中的片段,將大人們都逗得忍俊不禁。看到女兒頗具演藝天賦,張子楓的爸爸媽媽便送她去少年宮學習表演,她也學得非常認真,很快就成為了當地的演藝小明星。6歲那年,她偶然接拍了美的豆漿機的廣告,其乖巧可愛的形象很快受到了觀眾的喜愛,她也因此被選中拍攝了一系列的廣告。

雖然拍廣告讓張子楓獲得了許多在熒屏上露臉的機會,但她并不滿足于僅僅成為廣告商的寵兒,而是認真地告訴媽媽:“我要當演員?!眿寢尯茏鹬嘏畠旱南敕ǎ谑潜銕еケ本ふ覚C會。就這樣,年僅6歲的張子楓成為了一名“小北漂”。做北漂的日子很辛苦,張子楓和媽媽租住在簡陋的出租屋里,為了拍戲經常大冬天里四五點就要起床,但6歲的小丫頭卻咬著牙沒喊過一聲苦。因為極具表演天分又不嬌氣,張子楓先后參演了多部電視劇,雖然演的都是小配角,可她無一不是認真對待,頗受導演們的喜愛。

7歲那年,張子楓被馮小剛選中,在電影《唐山大地震》中飾演小方登一角。電影拍攝的過程非常辛苦,張子楓每天單是化妝就要3個半小時,要不停淋雨,還要被壓在石板下,滿身灰滿嘴泥,對此很多孩子都受不了,張子楓卻一聲不吭。更讓人驚喜的是她的眼神真實而充滿靈氣,以至于馮小剛都忍不住夸她:“她的眼神太有戲,讓我敢給她各種特寫,都能打動觀眾。她是這個電影的寶貝,沒有她這個電影不會這么有底氣。”徐帆也非常欣賞她的真實,贊她“演技太好”。而憑借《唐山大地震》中的表演,張子楓斬獲了第31屆大眾電影百花獎最佳新人獎 。

雖然年少成名,但張子楓卻有著不同尋常的低調和清醒,她拒絕媒體稱自己為“童星”,并認真告訴記者:“我就是一個小學生。”

享受拍戲,做個真正藝術家

沒有受過專業訓練的演員演戲,大都會在導演的引導下亦步亦趨,但張子楓卻能在最快的時間里入戲,不僅自己表現得特別到位,還能激發出其他演員的情緒。2010年她和王寶強合作《我的父親是板凳》,王寶強便直夸她太會演戲,能帶領著搭戲的演員一起往戲里走。正因如此,劇組里的好多演員都不敢跟張子楓對戲,還跟她開玩笑說“你這老天爺賞飯吃的小家伙也給大伙留口飯吃吧!”

在片場拍戲時,童星們因為年紀小、活潑可愛往往容易受到大伙兒的照顧和喜愛,但張子楓卻從來不拿自己當小孩兒看,而是時刻以一個專業演員的標準來要求自己。業余時間里,她會主動去看許多專業理論方面的書籍,并把握機會向導演和資深演員們請教。每次開機后,她總能在最短的時間內進入工作狀態。2011年,她和徐崢一起拍攝《摩登年代》,其間她表現得非常敬業,技術調整方面的問題更是一點即通,不需浪費額外的口舌溝通。劇中有場戲是張子楓忽悠交警,她把河南話飚得有板有眼,表情動作無懈可擊,連科班出身的徐崢也心服口服,贊她:“說到戲我覺得她簡直就是一個藝術家,她那種天然的感受能力和孩子的純真完美融合在一起。她無疑是中國最好的女演員之一。”

就這樣,張子楓保持著每年至少拍一部戲的節奏,在《心術》、《宮鎖沉香》、《老爸回家》等多部作品中都有精彩表現。但因為拍戲占用的時間太多,她在學習上有些松懈,有一次她離開劇組后參加考試,結果英語考了個全班最低分――17分。看到成績,張子楓覺得特別受打擊,暗暗下決心要把成績提上去。此后她盡量將拍戲時間安排在寒暑假,還經常利用拍戲的閑余時間溫習功課,終于把成績提了上去。她經常在微博上鼓勵自己和粉絲用功讀書,有粉絲問她:“你都是明星了,有那么多導演等著跟你合作,成績好不好還有那么重要嗎?”張子楓卻說:“除了演員,我還有一個身份是學生,我得對得起自己的學業。”

除了立志要當學霸,張子楓還非常認可黃磊說的一句話“讀書多才是王道”。這里說的讀書不單是指課本,還有各方各面的書籍。因此張子楓一直在閱讀中廣泛涉獵,從金融、推理到科普、文學無所不讀。她甚至還自學起了編程,并立志要考北大考古系。她說:“我熱愛演戲,但卻不想為了演戲而演,這就需要夯實的文化底蘊做鋪墊,我希望多年以后自己成為一名藝術家,那就要從現在開始打基礎?!?/p>

劇組為家,看遍繁華不改天真本色

張子楓在非常小的時候便離家北上,除了學校,劇組就是她最常待的地方。在片場,她遇見過形形的演員,有人敬業有人散漫,有人謙遜有人傲慢,她曾經以為,自己必須學會跟形形的人打交道,游刃有余地穿梭于片場之間才能受到大家的歡迎。但慢慢的她發現,討人喜歡其實沒那么重要,只有認真做好自己該做的事,踏踏實實提升自己的演技,才能在劇組中獲得他人的尊重。

因為很小就開始接觸社會,張子楓非常善解人意,待人也特別體貼:熱天看到工作人員忙得汗流浹背,她會主動跑出去幫大伙兒買水喝;在戶外拍片的時候天寒地凍,她怕其他小伙伴著涼便主動借出了自己的外套;拍戲時有粉絲來探班,她也從來不耍大牌,而是一口一個哥哥姐姐叫得親熱,并自掏腰包帶大家出去用餐;在微博上看到一家機構收養的狗狗食物短缺,她默默寄去了一大批狗糧……因為善良貼心,張子楓還獲得了“暖心少女”的稱號,而她快樂的秘密就是:“把劇組當作自己的家,用心去對待每一個人,這樣走到哪里都能感受到家的溫暖?!?/p>

雖然天資卓著,演起戲來自帶光環,但張子楓還是把握一切機會提升自己的演技,并搭建起了自己的“表演金字塔”理論,練就了爐火純青的哭功和笑功,遇到哭戲,她在五秒鐘內便能眼淚直流,笑起來更是表情百變,《唐人街探案》中詭異的笑容令無數人毛骨悚然,成為了該劇最大的看點,而她在《同桌的你》中飾演的周小梔更是摘得了中國電影導演協會表彰大會的“年度女演員”獎項。

田漢妻子范文3

【摘要】 目的 觀察牛黃天龍膠囊(含藥血清)對人子宮內膜癌HECB細胞能否誘導凋亡并對其抗癌機制進行探討。方法 實驗組分低、中、高3個劑量組并設空白組和陽性對照組進行含藥血清的制備;MTT法觀察細胞毒作用;細胞排染法觀察瘤細胞直接損害實驗;吖啶橙/溴化乙錠(AO/EB)雙熒光染色法及電鏡(TEM)下觀察細胞凋亡的形態學變化;流式細胞術(FCM)測定細胞凋亡率并進行細胞周期

分析,測定凋亡抑制蛋白survivin和凋亡效應蛋白Caspase3的表達。結果 MTT法:人子宮內膜癌HECB細胞經含藥血清作用后細胞生長受到明顯抑制且以低劑量組抑制率最高。細胞排染法:同一時間段內以低劑量組效果最好,不同時間段內(24、48h)細胞抑制率顯著提高(P

【關鍵詞】 血清藥理學;細胞凋亡;AO/EB雙熒光染色法;TEM;FCM.

Key words:Pharmacology; Cell apoptosis; AO/EB double fluorescent dye staining; Transmission electron microscope;Flow cytometry

大量研究表明,復方中藥制劑可通過阻滯腫瘤細胞生長周期,影響癌基因和抑癌基因表達等途徑發揮抗癌活性[1]。我們所用方劑“牛黃天龍膠囊”,是在傳統抗腫瘤中藥方劑“犀黃丸”[2]基礎上添加了新的抗腫瘤中藥成分,針對婦科腫瘤而研制的新的抗癌組方。本研究運用血清藥理學方法從細胞、分子和基因水平對牛黃天龍膠囊(含藥血清)誘導人子宮內膜癌HECB凋亡的作用機制進行了初步探討,旨在為篩選有效的抗婦科腫瘤的中藥方劑提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 Waster大鼠40只,雌性,清潔級動物,體重(280±30)g,合格證號:DK04020086,由河北醫科大學動物實驗中心提供。

1.2 實驗藥物 復方中藥牛黃天龍膠囊主要由牛黃、麝香、乳香、沒藥等十幾味中藥組方(生藥購自河北省石家莊樂仁堂中藥飲片廠)由河北醫科大學第四醫院藥劑室按工藝制成,相當于含生藥量每膠囊2.5g。

1.3 細胞株 人子宮內膜癌中分化細胞系HECB細胞由北京醫科大學附屬第一醫院北京醫院婦科科研室提供。

1.4 主要儀器和試劑 PRMI1640培養基為美國Gibco公司產品;胰蛋白酶,丫啶橙(AO),溴化乙啶(EB)由美國Sigma公司提供;胎牛血清由河北醫科大學第四醫院科研中心提供;順鉑(凍干型)購自山東省德州制藥廠,產品批號031001;CO2培養箱,美國Forma Scientific公司產品;倒置相差顯微鏡(XS2D2型),熒光顯微鏡(Nikon UFXⅡ型)均購自日本Olympus公司;透射電子顯微鏡為日本日立H7500;流式細胞儀420為美國B.D公司產品。

1.5 方法

1.5.1 含藥血清的制備[3,4] 將40只Wistar大鼠隨機分成5組:陰性對照組(空白組),實驗組(分高、中、低劑量組)和陽性對照組(順鉑組)。實驗組高、中、低三組每日用藥劑量分別按1/10LD50、1/20LD50、1/40LD50給藥,以每只2ml /次灌胃,陽性對照組采用腹腔注射每只1ml /次(劑量按每只5mg/kg /天計算)。采用李儀奎“通法原則”方案,即每日劑量分2次灌胃(灌胃前禁食12h不禁水)連續3d,于第3d第1次給藥2h后再給藥一次,間隔1h以烏來糖腹腔注射麻醉,背位固定,無菌條件下腹主動脈取血,分離血清,56℃,30min滅活,0.2μm過濾除菌,分裝,-20℃冰箱保存備用。

1.5.2 細胞培養 將人子宮內膜癌HECB細胞置于含10%胎牛血清的PRMI1640培養基中,在37℃,5% CO2,95%濕度條件下的培養箱中貼壁生長,以按0.25%胰蛋白酶和0.02% EDTA 1∶1比例配置的消化酶消化,3d傳一代。實驗分組:將制得的5組含藥血清即空白組、高、中、低實驗組和陽性對照順鉑組分別加入PRMI培養基中,使各培養基的血清終濃度為10%[5]。

1.5.3 細胞抑制率的檢測(MTT法)[6] 取對數生長期的細胞,以1∶10.25%胰蛋白酶和0.02%EDTA消化,制成單細胞懸液,再以2.0×104/ml濃度接種于96孔板,每孔200μl,實驗分5組,即空白組、高、中、低實驗組和陽性對照(順鉑)組,每組設4個復孔并設空白調零孔(除不加細胞外,余處理與其他各組相同)。將已接種HECB細胞的培養板置于37℃、5% CO2、95%濕度的培養箱中培養24h,待細胞進入對數生長期,棄去原培養基以PBS液洗兩遍,然后依次更換含10%藥物血清的PRMI1640培養基,置培養箱中分別培養24h和48h。取出培養板,向每孔加入MTT20μl,繼續培養4h后終止培養,小心吸去孔內上清液,每孔加入DMSO 150μl,在微量震蕩器震蕩15min,使結晶物充分溶解之后在酶聯免疫檢測儀490nm處讀取各孔光密度值(OD值)。瘤細胞抑制率=空白組平均光密度值-實驗組平均光密度值/空白組平均光密度值。

1.5.4 吖啶橙/溴化乙錠(AO/EB)染色法觀察HECB細胞凋亡的形態學變化[8] 取對數生長期的細胞消化制成單細胞懸液以2×105/ml接種于6孔板,每孔2ml,每組設4個復孔。將培養板置于37℃、5% CO2、95%濕度的培養箱中培養24h,細胞貼壁后棄原培養基,更換含10%藥物血清的PRMI1640培養基,繼續培養48h。分別消化制成1.0×106/ml的細胞懸液,取100μl受檢細胞懸液加入4.0μl上述染液輕輕吹打均勻后取細胞懸液一滴滴在潔凈的載波片上,加蓋玻片后立即置于熒光顯微鏡下觀察凋亡細胞的形態學變化并攝片。

1.5.5 透射電鏡(TEM)觀察HECB細胞凋亡的超微結構變化 收集含藥血清(空白組、實驗組)培養48h的HECB細胞,離心(1 000轉/分 15min),PBS洗滌3遍,沉淀細胞以2.5%戊二醛溶液前固定,1%鋨酸后固定,梯度乙醇脫水,Epon812浸透、包埋、聚合、超薄切片、硝酸油檸檬酸鉛著色,涼干,在透射電鏡下觀察凋亡細胞的超微結構特征并攝片。

1.5.6 細胞凋亡率及細胞周期的測定 取1×105/ml單細胞懸液0.1ml加入10%的雞紅細胞作為內參標準,調整儀器CV值在5%以內。加入碘化丙錠(PI)(PI:50mg/L,triton×100 1.0%)1 ml,在4℃冰箱染色30min,以500目銅網過濾使樣品成為合格的單細胞懸液上機檢測。

1.5.7 HECB細胞凋亡相關基因Survivin和Caspase3的定量檢測 取單細胞懸液1×106/ml,分別加入鼠抗人survivin單克隆抗體和鼠抗人Caspase3單克隆抗體0.1ml,室溫孵育30min,加入PBS 10ml洗滌一次,棄上清,加入羊抗鼠FITCIgG二抗工作液100μl,避光室溫孵育30min,加入PBS10ml離心同上,棄上清以除去未結合的熒光二抗,上機檢測前加入PBS 0.1ml,經500目銅網過濾后上機檢測。檢測結果用熒光指數(fluorescence index,FI)或Xmode值表示。

1.6 統計學處理 統計學處理在SPSS 12.0軟件包內進行。方法采用單因素方差分析和t檢驗。檢驗水準α=0.05,P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 MTT法 檢測牛黃天龍膠囊含藥血清對人子宮內膜癌HECB細胞作用24h、 48h后, 細胞增殖受到明顯抑制, 與空白組相比差異均有顯著性(P<0.01),但并非濃度越高抑制率越高而以低濃度組抑制率最好。 同一劑量組24、 48h細胞抑制率相比差異有顯著性(P<0.01), 見表1。

2.2 AO/EB雙熒光染色法 鏡下可見到空白對照組細胞以正常細胞為主,表現為細胞結構完整,大小正常。細胞被AO染色呈均勻一致的綠色,并可表1 含藥血清對HECB細胞的生長抑制作用 MTT法在同一時間段,細胞生長抑制率與中、高組相比P<0.01見到少量早期凋亡細胞,表現為細胞染色增強,熒光亢進,細胞被染色呈黃綠色黃色熒光。實驗組中、高劑量組正常細胞減少,凋亡細胞增多并可見到晚期凋亡細胞,表現為細胞被EB染色呈橙紅色,細胞體積縮小,部分細胞核破裂,呈現為大小不等、形態不規則的熒光染色碎片或梅花狀核形。低劑量組和陽性對照順鉑組正常細胞明顯減少,晚期凋亡細胞更多并可見到凋亡小體及細胞腫脹,體積增大,邊緣模糊,被染成桔紅色的壞死細胞見圖1。

2.3 實驗組人子宮內膜癌細胞,在電鏡下均可見到凋亡的早期信號,表現為凋亡細胞的部分核膜向外呈銳角凸起,凋亡征象表現為核染色質濃縮并凝結成塊,呈半月或新月狀聚集在核膜周邊,細胞漿濃縮,內質網變疏松并與胞膜融合形成一個個空泡及凋亡小體。空白對照組則很少見到凋亡細胞征象(圖略)。

2.4 實驗各組含藥血清作用人子宮內膜癌HECB細胞48h后,在DNA直方圖上均出現G1期前明顯的細胞凋亡峰。各組凋亡率與空白組相比差異均有顯著性(P<0.01)。實驗各組對細胞周期亦有明顯影響,表現為S期細胞減少、G1期細胞增多,與空白組相比差異均有顯著性(P<0.01),見圖4、表2。表2 含藥血清對HECB細胞增殖(48h)的 影響 FCM陰性對照組低劑量組中劑量組高劑量組陽性對照組圖4 含藥血清作用HECB細胞48h的凋亡測定FCM

轉貼于

蛋白在空白組的表達量最高,而在實驗組和順鉑組的表達則降低, 各組與空白組相比差異均有顯著性(P<0.01﹚, 但中、高濃度組相比差異無顯著性(P>0.05), 低濃度組與中、 高濃度組相比差異均有顯著性(P<0.01)。Caspase3蛋白表達則相反, 在空白組表達量最低,而在順鉑組最高, 實驗組中以低濃度組表達較高, 與中、 高組相比差異均有顯著性(P<0.01), 而中、 高組相比差異無顯著性(P>0.05),并且顯示在空白組survivin蛋白表達最高,Caspase3蛋白表達最低, 此時細胞凋亡率也最低, 細胞增殖指數最高。 在順鉑組則相反, 此時細胞凋亡率也最高, 細胞增殖指數最低為39.40±0.75, 見表3。表3 含藥血清作用HECB 48h對基因的影響 FCM實驗各組與空白組相比P<0.01; * P<0.01與中、高劑量組相比P<0.01

3 討論

血清藥理學已成為中藥藥理研究的熱點并逐漸被人們所認同。既往研究中藥藥理的離體實驗多采用中藥粗制劑直接體外給藥,但由于中藥粗提物并不能代表在體內真正發揮作用的有效成分,加之中藥本身的理化性質也會干擾實驗結果,因此對其可信度難于進行客觀的評定。1998年由日本田代真一正式提出了“血清藥理學”這一概念[9]。血清藥理學是將中藥或復方經口給動物灌服一定時間后,采集動物血液,分離血清,用含藥物成分的血清進行體外實驗的一種方法和技術(ex vivo method)[10]。優點是:(1)排除了通常體外實驗中復方粗制劑的各種雜質成分,電解質以及PH等因素對實驗結果干擾的不利影響。(2)客觀地模擬了藥物與機體相互作用的過程,其血清所含的藥物成分也是經過體內一系列生物轉化后真正發揮作用的有效成分及藥物作用于機體所產生的內生性有效成分,并且血清的理化性質與細胞所處的內環境相似。(3)實驗結果與在體實驗有較好的一致性,不但能反映中藥(母體藥物)及其可能的代謝產物的藥理(效)作用,而且還能反映可能由藥物誘導機體內源性成分所產生的作用,比較客觀和真實地闡明了中藥的藥效和作用機理,為從細胞、亞細胞和基因水平研究中藥的抗癌機制提供了一個更加科學、客觀的新手段。本實驗正是采用了血清藥理學方法研究牛黃天龍膠囊(含藥血清)誘導人子宮內膜癌HECB細胞凋亡極其凋亡相關基因表達情況并分別從細胞形態學、流式細胞術及分子生物學等方面對其誘導凋亡的機理進行了初步探討。

復方中藥牛黃天龍膠囊以牛黃清心、退熱、化痰、通竅、散結腫為主藥;以麝香通經絡、散結滯、辟惡毒、除穢濁為輔藥;并配以水蛭、天龍、巴豆等消癥、化結;佐以乳香、沒藥等活血、化瘀、消腫、定痛。君臣佐使,各有所司,從而起到有主次、多靶點、多環節的整體協同的抗癌治療效果。本研究結果也顯示牛黃天龍膠囊可顯著抑制人HECB生長并能誘導其發生凋亡, 通過熒光顯微鏡和電子顯微鏡對人HECB細胞的形態學觀察和流式細胞儀的DNA含量分析,證實牛黃天龍膠囊含藥血清具有使人子宮內膜癌HECB細胞發生凋亡的作用并可使其生長阻滯在G0/G1期。

目前觀點認為惡性腫瘤是一種多基因異常的疾病,它發生的分子基礎是原癌基因的激活或抑癌基因的突變失活或缺失,導致某些細胞分化不良、凋亡受阻、增殖失控而形成腫瘤。研究顯示細胞凋亡的核心成分是半胱氨酸蛋白酶家族(cysteinyl aspartate specific proteinase,Caspase)。其中研究最多,功能相對較明確的為Caspase3, Caspase3被發現是哺乳動物細胞凋亡的關鍵蛋白酶之一,為凋亡的效應分子,被稱為凋亡的“執行者”[1113]。survivin是凋亡抑制蛋白家族(IAPs)結構獨特的新成員1997年由耶魯大學的Altieri等[14]首先分離出來。survivin只在胚胎和腫瘤組織中表達在正常成人分化組織中(胸腺,生殖器除外)檢測不到。survivin能抑制細胞凋亡,促進細胞增殖,參與調節細胞的有絲分裂并可能參與血管形成,是至今發現最強的凋亡抑制因子[15,16]。研究發現survivin可強烈抑制由Caspase3和Caspase7過度表達誘導的凋亡。另有研究顯示[1719]在食管小細胞癌、肝癌和胃癌中survivin和Caspase3的表達呈負相關,提示survivin基因對Caspase3的表達可能是負反饋調節,survivin直接或間接抑制Caspase3的表達從而促進腫瘤的發生、發展及惡性增殖,但二者在子宮內膜癌組織中的表達關系如何,目前國內外尚未見報道。本實驗運用流式細胞技術檢測了survivin和Caspase3這兩個基因,對牛黃天龍膠囊(含藥血清)能否誘導人子宮內膜癌HECB細胞凋亡方面進行了初步研究。結果顯示,在實驗組中survivin的表達降低,Caspase3的表達升高,二者與空白組相比差異均有顯著性(P<0.01),且顯示以低劑量組表現最明顯(P<0.01)。本研究survivin和Caspase3的表達也證實了以上觀點。表明牛黃天龍膠囊(含藥血清)能降低人子宮內膜癌HECB細胞survivin的表達同時可升高Caspase3表達,而使人子宮內膜癌HECB細胞凋亡增加,進而使腫瘤細胞生長受到抑制。由此推測,牛黃天龍膠囊(含藥血清)誘導人子宮內膜癌HECB細胞凋亡的機制之一,可能是干擾了腫瘤細胞代謝,并使其基因蛋白表達發生改變,從而抑制了人子宮內膜癌HECB細胞的生長。

本實驗為復方中藥治療婦科惡性腫瘤提供了新依據。雖然本研究在多方面證明了牛黃天龍膠囊的抗腫瘤效果,但有關該中藥抗腫瘤作用的研究尚處于起步階段,且由于條件的限制本實驗未能對含藥血清的有效成分進行定量和分析,所以有關復方中藥牛黃天龍膠囊抗腫瘤作用的其他機制及其活性成分如何尚有待深入研究。

參考文獻

[1] 汝海龍,陳敏明.抗腫瘤中藥誘導細胞凋亡的研究進展[J]. 黑龍江醫學,2002,26(1):810.

[2] 熊鷹,孔小云,陳如山.復方犀黃丸含藥血清對人肝癌細胞生長極其周期影響的實驗研究[J].中國中醫藥科技, 2001,8(4):217218.

[3] 李儀奎,吳健宇.血清藥理實驗中采血時間的通法方案[J].中國藥理學通報,1999,15(6):56970.

[4] 李儀奎. 中藥血清藥理學實驗方法的若干問題[J]. 中藥新藥與臨床藥理, 1999,10(2):9598.

[5] 劉平. 關于血清藥理學的若干思考[J]. 中國中西醫結合雜志,1999,19(5):263265.

[6] 司徒鎮強,吳軍正.細胞培養[M]. 西安: 世界圖書出版社,2001.186187.

[7] 張靜波. 組織與細胞培養技術[M]. 北京:人民衛生出版社,2002. 111112.

[8] 汪承亞,盛瑞蘭,汪凡,等.丫啶橙/溴化乙錠雙熒光染色檢測細胞凋亡的形態學變化[J].中國病理生理雜志,1998,14(1):104106.

[9] 楊奎.關于血清藥理學的若干思考[J]. 中國中西醫結合雜志,1999,19(5):263265.

[10]韓克起,凌昌全. 中藥體外抗腫瘤效應血清藥理學研究現代與前景[J]. 中國中西醫結合雜志, 2003, 23(9):717719.

[11]Chen YC,Shen SC,Lee WR,et al. Emodin induces apoptosis in human promyelokukemic HL60 cells accompanied by activation of caspase3 cascade but independent of reactive oxygen species production[J].Biochem Pharmacol, 2002,64(12):17131724.

[12]周喜樂,鄭樹森,謝海洋.半胱氨酸酶3在依托利酸誘導肝癌細胞凋亡中的作用[J].中華實驗外科雜志,2004,21(5):541543.

[13]鄭世營,葛錦鋒,趙軍,等.外源性FasL基因誘導肺癌細胞Caspase3的表達及凋亡[J].腫瘤防治雜志,2004,11(3):273277.

[14]Ambrosini G,Adida C,Altieri DC. A novel antiapoptosis gene,survivin,expressed in cancer and lymphoma[J].Nat Med,1997,3(8):917921.

[15]徐紀香,李珊珊,董雪蕾. Survivin、細胞凋亡與惡性腫瘤[J].醫學綜述,2004,10(1):1416.

[16]伊新,曲喜英,林木生. 凋亡抑制因子Survivin與腫瘤診治的研究進展[J].中國癌癥雜志,2003,13(2):182185.

[17]林木生,伊新,繆輝來,等. 生存素和天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白酶3在肝癌中的表達及其關系[J].中華實驗外科雜志,2004,21(2):210211.

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