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生物素范文1
關鍵詞
關鍵詞:高效液相色譜法 生物素 含量測定
前言
生物素(d-Biotin)又稱維生素H或輔酶R,主要作為各種羧化酶的輔助因子。對糖、脂肪、蛋白質和核酸等代謝有重要意義,廣泛應用于醫療,多維制劑及飼料添加劑等方面。已載入美國及歐州等國藥典,含量測定均采用化學滴定法。本文建立了測定生物素的HPLC法,操作簡便,結果準確,速度比較快。
實驗部分
一、主要儀器與試劑
1.儀器
高效液相色譜儀:Agilent 1100 Chemstation 色譜工作站
2.試劑
乙腈( 浙江臨海市浙東特種試劑廠,色譜純)
三氟乙酸(上海化學試劑廠,分析純)
磷酸(杭州化學試劑廠,分析純)
3.試驗樣品
生物素對照品(中國藥品生物制品鑒定所,含量100%,批號:1029*1-0001)。
生物素樣品(浙江醫藥股份有限公司新昌制藥廠,批號:20070826,20070827,20070831)。
二、實驗方法
1.色譜條件
高效液相色譜儀:安捷倫(Agilent)1100 (LC)
色譜柱:VP-ODS色譜柱(4.6 mm×250mm,5um);
流動相:取乙腈250ml,加磷酸1ml,再加入0.05%三氟乙酸溶液750ml,混合均勻,過濾;
檢測器:紫外檢測器
檢測波長:210nm;
進樣體積:20μl
柱溫:室溫。
2.測試方法
精密稱取生物素樣品約10mg,置于50ml容量瓶中,加流動相溶解,并稀釋至刻度,搖勻,得供試品溶液。另精密稱取生物素對照品約10mg,置于50ml容量瓶中,加流動相溶解并稀釋至刻度,搖勻,得對照品溶液。分別將上述兩種溶液20μl注入高效液相色譜儀,記錄色譜圖,計算主色譜峰峰面積,用外標法計算生物素含量。
三、方法的確定
實驗方法的確定涉及到多個方面,例如色譜柱、流動相、檢測波長、柱溫的選擇與確定等。本文重點闡述檢測波長的選擇與確定。
由于生物素結構具有有一定的極性,因此選擇采用反相色譜法,色譜柱選擇常用的ODS柱,尺寸4.6 mm×250mm,填料粒徑5um。
1.檢測波長的確定
根據生物素本身紫外吸收的特性,使檢測波長盡量靠近生物素最大吸收波長且盡可能避免溶劑截止波長的影響。
1.1 溶劑截止波長的影響
我們所使用的流動相和溶解樣品涉及的溶劑為乙腈,由于乙腈的截止波長為190nm,因此我們應該把波長的選擇放在大于或等于210nm的范圍。
1.2生物素的紫外吸收特性
當然波長的測定主要還是依賴于待測試樣品的紫外吸收特征來決定的。為測定生物素樣品的吸收特性,我們使用二級管陣列檢測器(DAD檢測器)進行測定得到生物素標準品的紫外吸收色譜圖。生物素的最大吸收波長位于198nm左右,從該波長開始隨著波長增大,吸收變弱。高于225nm時,生物素沒有明顯的紫外吸收跡象。198nm~215nm是生物素紫外吸收相對較強區域。結合流動相中所含溶劑乙腈截止波長的影響。故選擇范圍應大于等于210nm的波長。在210 nm ~215nm區域下生物素的最大吸收在210nm,故最后選擇210nm。
2. 流動相
流動相:采用乙腈-磷酸-0.05%三氟乙酸溶液(250:1:750)為流動相。
取空白溶液(流動相)注入高效液相色譜儀,按色譜條件進行色譜分析,記錄色譜圖。將空白溶液的色譜圖與樣品溶液的色譜圖進行比較,結果顯示空白溶液對生物素的測定無干擾。
取生物素對照品溶液(2.2測試方法)注入高效液相色譜儀,按色譜條件進行色譜分析,記錄色譜圖,結果該色譜條件下生物素峰的較高的柱效(本次為7943理論塔板數)和較低的拖尾因子(本次為1.146):
四、方法驗證
1.線性試驗
精密稱取生物素對照品25mg置50ml量瓶中,加流動相溶解并定容至刻度,搖勻。分別精密量取1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml、6.0ml各置10ml量瓶中,加流動相溶解并定容至刻度,搖勻。濃度分別為0.05 mg/ml、0.10 mg/ml、0.15 mg/ml、0.20 mg/ml、0.25 mg/ml、0.30 mg/ml(涵蓋范圍相當工作濃度的25%至工作濃度的150%),分別取上述溶液20ul注入色譜儀進樣測定,記錄色譜圖。以濃度C為橫坐標,峰面積A為縱坐標,進行線性回歸分析,計算線性回歸方程,相關系數。計算的結果見下表。
經回歸分析可得,生物素樣品的線性回歸方程為:A=8246.29 C + 15.73 (相關系數r=0.9999),線性范圍: 0.05~0.30mg/ml
以上結果表明,在樣品濃度0.05~0.30mg/ml(相當于工作濃度的25%至工作濃度的150%)范圍內線性關系良好。
2. 準確度(回收率試驗)
生物素范文2
一、生物科學素養包含的要素
1.掌握生物科?W的基本素質技能
在高中的生物學習中,首先要做的就是把課本上的理論知識理解透徹,在此基礎上再對真實的生物進行認知和掌握。當然,課本上的知識也包括現代生物的科學技能,比如:生物的種類等
知識。
2.培養學生正確的生物科學觀念
在生物的學習和教學中,都要先確定正確的生物科學的理念,這樣才能對學到的知識學以致用,更好地應用在現實生活中。一般都是在高中才開始接觸生物科學,所以高中的生物教學對學生的影響很重要,要促進學生對生物科學的積極性,保證他們在快樂的環境中學習到更多的知識,利用有限的課堂時間讓學生學到無限的知識。剛開始的時候學生肯定會對其有很大的好奇心,所以,要根據他們所好奇的東西進行激發引導,這樣對于教學就會有很好的效果,從而為生物科學的事業作出更大的貢獻。
3.認識到生物科學在現實生活中的作用
現在高中的學生認為在學校學到的知識只是來應付考試,但并非如此,如果在學習中能找到自己所感興趣的關注點就會在生活中也有所應用。當代的生活中很多地方都會應用到生物科學的知識,如果只是學理論知識,而不應用在現實生活中,就失去了學習的意義。所以要提高學生對生物科學的認識,保證他們能在生活中運用生物科學。
二、如何提升學生的生物科學素養
1.提升教師的整體素質
現在很多學校都提倡“翻轉課堂”,就是以學生為中心來進行教學工作,但是這并不代表就不需要老師,老師在這種教學中也起很大的作用。生物的教學任務雖然不如數學、語文等學科的任務大,但是生物科學對學生的生活有很大的幫助,所以要加強生物老師的能力,不能讓那些生物教師覺得學校不重視生物,那么他們就會出現消極怠工的心理,從而使學生對生物也沒有興趣。所以,要想提升學生對生物科學的素養,首先要做的就是加強對老師方面的投資,聘請更加專業的生物老師進行教學工作。
2.充分培養學生的興趣
在高中教學中,大部分學生會覺得學習是枯燥無味的,但是生物中的樂趣是很多的,這就需要老師對教學進行設計,通過各種方式提高學生的積極性。如果一個學生對這個學科感興趣就會很容易學到很多知識,在快樂的環境中得到的知識是最多的。學校也應該開展一些關于生物的實踐活動,例如:組織學生去大自然對生物進行探索,然后通過實際的觀察,得到更多的認識,讓學生更加主動地去尋找知識的來源,逐漸去探索生物科學的奧秘。
3.注重課堂生物素養的培養
課堂是學生最佳的學習時間,所以要把握好上課的時間,讓學生學到更多的知識。課后的作業也是不可避免的,但是不要過量,因為學生還有別的學科,如果僅這一科就有很多作業的話,就會使學生出現煩躁的心理,同時影響上課的情緒。要利用課堂上有限的時間,給學生傳授無限的知識和技能,還要引導學生的思維,使他們有更加開闊的視野。最重要的是在課堂上,教師要不斷地貫徹生物科學素養的問題,這樣就會使學生印象深刻,才能更好地提高學生生物科學素養。
三、注重生物實驗教學
生物素范文3
骨骼是雞儲存錳的重要器官。錳與骨骼發育有關,可影響磷酸酶的活力,缺錳時,血及骨中磷酸酶的活力降低,妨礙骨骼正常發育。錳與繁殖有關,錳的缺乏往往是由于雞過度舍飼,缺乏陽光引起。雞體中含鋅量較多的器官有骨骼、肝、皮膚、肌肉、心臟及性腺等。當日糧中含有過多鈣時就會增加雞對鋅的需要量,促使缺鋅病的產生。硒有促進雛雞生長的作用。硒也用于預防火雞肌胃和心臟的疾病。缺硒還隨之而產生胰纖維化及酯酶、胰蛋白酶元和胰凝乳蛋白酶元的減少。鹽堿地土地區硒的含量比非鹽堿土地區更少。微量的砷化合物有預防硒中毒作用。鉬為體內黃嘌呤氧化酶及硝酸還原酶的組成成分。缺鉬時種蛋質量下降,孵出的雛雞生長勢減弱。銅和鉬有拮抗作用,故補飼硫酸銅可減輕或消除鉬的有毒作用。動物體常含有微量的氟,成年動物骨骼中約含0.04%~0.06%。雞蛋中含氟量增高,主要含在卵黃中。
關鍵詞:
雞;微量元素;作用;生物學;有效性
微量元素對機體的作用是目前世界上廣泛重視的問題,根據對動物、植物與土壤中所存在的微量元素及相互關系的研究已證明雞對外界環境中所存在的化學元素有很大的依賴性。所以,微量元素引起的疾病往往與地質結構與化學成分有關。在當前畜牧生產中,還缺乏因微量元素過多或不足而引起營養疾病的資料。對土壤與動植物體間元素遷移的規律知道得還很少。因此,在實踐中如發現有微量元素缺乏癥可疑病禽,首先從土壤、水源、飼料及周圍環境等方面進行分析。
1錳
1.1骨骼是雞儲存錳的重要器官
由骨骼中含錳量的多少可以推測日糧及雞本身是否缺錳。在動物體內各器官中,肝臟和腦下垂體的含錳量最高。另外,動物各種器官都有少量錳存在。錳對雞生長、繁殖、造血都有重要作用,與雞體內許多酶的活化有關,故能影響雞體內碳水化合物、蛋白質、脂肪、維生素及礦物質的代謝。對錳的作用機制,現尚未充分闡明,據目前資料認為錳主要有以下的生理作用。
1.2錳與骨骼發育有關
錳可影響磷酸酶的活力,當含錳量正常時,血中磷酸酶活性較強,由血液中分解有機磷成為無機磷成分愈多,有利于動物體內鈣、磷的沉積和骨骼正常形成,而缺錳時,血及骨中磷酸酶活力降低,妨礙骨骼正常發育。因雞對錳的吸收能力較弱,缺錳后,雛雞會產生溜腱病,腿骨變粗短,骨骼系統畸形,如彎腿、脆骨癥和骨重減輕,骨的密度、長度、灰分含量下降。腿骨彎曲,病雞跛行,病情嚴重可致死。在高度集約化經營的籠式養雞場中易于發病。骨粗短癥也因膽堿或生物素缺乏而發生。
1.3錳與繁殖有關
日糧中錳的含量可影響到卵的錳含量。缺錳時母雞產蛋量下降,孵化率降低,蛋殼硬度也降低。缺錳時,雞胚產生軟骨退化病,腿部縮短變粗,翼部相應變短,喙的性狀如鸚鵡,下顎短,不能配合上顎,頭部呈球形,頸部由寰椎起出現水腫,并向后延伸到一定距離,腹部突出,有許多卵黃未吸收盡,胚體本身及皮膚上絨毛生長停滯,多在胚胎發育的18~21天時死亡。雞對錳的需要量不大,雞的日糧中每千克只需50mg錳就足夠,而且一般植物性飼料中都有錳,特別是糠、麩類飼料及青綠飼料中含錳豐富,故不易缺乏。錳的缺乏往往是由于雞過度舍飼,缺乏陽光引起。實驗證明,紫外線或維生素D可降低錳的需要量。此外,日糧中過量的鈣和磷會降低錳在小腸中的吸收率。因此,當日糧中含有多量鈣、磷時會增加錳的需要量[1]。
2鋅
雞體中含鋅量較多的器官有骨骼、肝、皮膚、肌肉、心臟及性腺等,骨骼為鋅的貯存器官。血液中也含有鋅。蛋中含鋅量高,每千克雞蛋約含1mg,主要集中在蛋黃中。鋅是構成多種酶的重要成分,另外,有些酶同鋅結合成一種復合體。因此,鋅主要是通過動物集中的某些酶發生作用,如分布廣泛的碳酸酐酶存在于動物的紅血球、胃黏膜及腎的皮質部。碳酸酐酶有催化碳酸分解合成的作用,能把體組織排出的CO2轉變為血中的碳酸,同時把后者分解為CO2由肺部排出的雙重作用。碳酸酐酶(催化)H2CO3幑幐CO2+H2O在胃黏膜中碳酸酐酶能催化CO2形成碳酸,中和胃黏膜中過量堿(由胃黏膜分解氯化鈉及形成鹽酸時產生的)。此外,由于鋅能影響性腺的活動和提高性激素的活性,對雞繁殖有重要影響。雞缺鋅時,體重減輕,身體短小,腿部軟弱,不活潑,行動蹣跚,步態不穩,腿部脛跗骨與跗蹠骨間關節腫大,羽毛發育不良,生長遲緩,食欲不振,毛質松脆,頭部及頸部羽毛遲遲保存幼時狀態不換。嚴重時,雛雞背部出現鱗狀角質化。股骨變粗短,其他管狀骨也有同樣變化。缺鋅還可使雞殖機能失常。公雞萎縮。降低孵化率,使雞胚畸形發育。鋅在飼料中分布很廣,酵母、麩皮、禾谷類的胚是良好來源。雞的常用飼料中一般含鋅量很高,不致發生缺鋅病,但當日糧中含有過多鈣時就會增加雞對鋅的需要量,促使缺鋅病的產生。
3硒
硒在雞體組織、器官中含量極微,在發生硒中毒時,肝腎以及血液、胰、脾中的含硒量增高。日糧中硒含量增加時,肉及蛋中的硒含量也相應增加。過去認為硒是有毒的微量元素,1957年開始發現硒對家禽營養有重要的作用。家禽缺硒后,可使白肌病發病率增高,肌肉球蛋白的合成作用受阻,發生胸肌萎縮。雛雞缺硒,發生滲出性素質病。毛細血管壁的損傷和通透性升高導致輕度出血及血漿成分透出,這些血樣顏色的液體積蓄于皮下,特別常見于胸部和兩翼內側的皮下,并可見在心包腔和肌肉積聚。此外,硒有促進雛雞生長的作用。硒也用于預防火雞肌胃和心臟的肌病。缺硒還隨之而產生胰纖維化及酯酶、胰蛋白酶元和胰凝乳蛋白酶元的減少。我國有不少地區屬缺硒地區,鹽堿地土地區硒的含量比非鹽堿土地區更缺硒。硒中毒是一種區域性地方病,于美洲干旱地區發生過,由于土壤含硒量高,某些多年生豆科、十字花科及菊科植物易于積聚硒,含硒多的植物,其中蛋氨酸和胱氨酸中的硫被硒所代替,稱為含硒的氨基酸,而含硒氨基酸不能被動物利用,因為使含硫氨基酸缺乏。因而羽毛受害最為嚴重。家禽硒中毒后采食量減少,瘦弱、生長停滯、產蛋率及孵化率降低,并產生畸形胚胎,孵出幼雛軟弱。絨毛非常堅硬。高蛋白質日糧可減輕硒的毒性,微量的砷化合物有預防硒中毒作用[2]。
4鉬
鉬為體內黃嘌呤氧化酶及硝酸還原酶的組成成分。缺鉬時產蛋母雞肝、腎及腸中黃嘌呤氧化酶急劇減少,產蛋量雖不減少,但種蛋質量下降,孵出的雛雞長勢減弱。據近來研究表明,在缺鉬的日糧中增加鉬能刺激雛雞的生長。銅和鉬有拮抗作用,故補飼硫酸銅可減輕或消除鉬的有毒作用。在一般飼料中都能滿足雞對鉬的需要。
5氟
動物體常含有微量的氟,成年動物骨骼中約含0.04%~0.06%。采食一般飼料,雞不會出現氟中毒。氟中毒的原因主要是雞采食磷礦地區污染的飼料、以未脫氟的磷灰面(含氟3%~4%)作磷補充物、或含氟高的深井飲水所致。氟中毒多呈慢性,因氟在骨骼中有慢性蓄積作用,雞受害后,骨骼的成分似乎沒有影響,但血液的凝固時間可能縮短,十二指腸處常見流血,雞蛋中含氟量增高,主要含在卵黃中。
6微量元素的生物學有效性
由于微量元素的來源不同,其化學結構及性質就不同,被雞利用的效率也不同,因此,在飼養實踐中,不僅要考慮各種微量元素的喂量,而且要考慮微量元素飼料的生物學有效性。生物學有效性是指某種微量元素離子改善某種生理作用的指標。例如,雞體體重的變化,血液中血紅素水平的變化等。微量元素的生物學有效性及有關情況見表1。
參考文獻:
[1]甘肅省畜牧學校.家畜飼養學[M].北京:農業出版社,1979.186.
生物素范文4
關鍵詞:素質教育 高中生物
(一)、培養學生的興趣
興趣是最好的老師。沒有興趣的學習,是一個沒有目的的學習。在高中生物的教學中,教師可以提出問題來提高學生的學習興趣。如:生命是怎樣誕生的?生命向哪些方面發展?我國在基因工程方面有那些主要的貢獻?生男生女是由誰決定的?為什么美國的生物圈二號沒有成功?人類能在月球上能生活么等等。通過一些現實生活和科技發展的問題,來激起學生的學習興趣,激起學探究問題的熱情。
(二)、在教學過程中培養學生辯證唯物主義自然觀
世界是物質的,物質是運動的,這是唯物主義的根本觀點。在新的課改下,高中生物教材主要從非生物界到生物界這個順序揭示了這個根本觀點。無機元素組成有機元素,有機元素有機結合在一起組成細胞。以細胞為基本單位的奇妙而多彩的生物世界,其組成的元素和化合物,即與非生命世界有普遍的聯系,又有重大的區別,尤其是組成細胞的有機分子,如生命活動的主要承擔者――――蛋白質;遺傳信息的攜帶者――――核酸;具有多種生命功能的的糖類和脂質。蛋白質、核酸和多糖又都是以特定的單體構成生物大分子,以碳鏈為骨架,為細胞的結構基礎,演繹著或簡約、或繁復的生命之歌。形成學生從分子水平上看待生命的物質性和生命物質的特殊性的認識,對于他們樹立正確的世界觀極為重要,無論是進一步的學習和研究,還是處理個人或社會事物,都需要唯物主義的觀點。
(三)、根據不同的章節和學生的實際,合理設計教學方案
1、以做一定量的鞏固練習,但不能拿“題海戰術”來提高學生的能力。
在實際教學過程中,很多教師采取“題海戰術”,通過讓學生多做題,多訓練,使學生在有限的時間范圍內,提高學生的成績,以顯示自己教學的水平。但長期如此,已經把學生訓練成了做題的機器,不會思維的、沒有頭腦的機器。在真正踏進科學殿堂以后,這些人思維受到很大的限制,不敢越雷池一步,沒有創造性思維,沒有新的發現,沒有開拓精神,不能發現事物的發展規律,只能固守先人的成就。在實際教學過程中,不要讓學生去做大量的題目。對所做的每一道題,認真精選,對出的題量嚴格控制。學生做完題后,和學生一起探究如何改變出題的方向、考查點,做到舉一反三。這種做法重在培養學生的創新思維能力。通過實踐證明,這種做法非常有效,也取得非常理想的效果。
2、創設新情景,培養學生運用已學知識解決實際問題的能力。
生物題是源于教材,又不拘泥于教材。生物題考查學生知識的遷移能力,運用已掌握的知識解決實際問題的能力。在實際教學過程中,本著培養學生的創新能力、探究能力為目的,在每堂課上,采取多變的教學模式,創設新的情景(也就是說,聯系生產、生活實際、社會熱點,創設性情景),引導學生去思維,引導學生去探究,引導學生主動地去發現問題、解決問題。
3、培養學生終生學習的習慣,提高學生的生物學素質
作為一個學科教師,我們不可能也沒有必要期望自己的學生個個都立下學習生物學的志向,但卻有可能也有必要在普遍提高學生生物學素質的同時,讓一些熱愛生物學的學生脫穎而出。
普遍提高學生的生物素質,在當今的時代顯得非常的重要。這里先說兩個實例:
例1、據報載某農民因妻生女逼妻離婚不成,就用砂槍射殺其妻。這一釀成家庭悲劇的愚昧行為,顯然是缺少應有的生物學知識。
例2、《野生動物保護法》頒布了四年多,但大肆捕獵、販賣和宰殺珍稀野生動物的行為卻屢禁不止。這一危及人類生存環境的愚昧行為,同樣是對生物科學的無知。
兩個實例從一個側面說明,中學生物教育培養千千萬萬具備一定生物學素質的勞動者,比之于高等教育培養少數專門人才,具有更為深廣的意義。
4、培養學生良好的心理素質
在生物學教學中可以進行如下幾方面的心理素質教育:
(1)激發學生學習動機,培養學習興趣。在介紹生物學的概念、規律發展的來龍去脈,生物學事實的發現過程,科學家的事跡和我國的生物資源等知識時,可使學生對知識的創造和創造者的思想品德、人格有一個全面深刻的了解,從中受到感染和影響,并由此激發學習的興趣和鉆研精神,從而樹立為國家為科學獻身的遠大志向。
(2)培養學生豐富的情感和良好的心態。讓學生了解與生物學有關的環境、資源、能源、土地、糧食、人口等問題,培養學生關心自然、關心社會、關心國家利益、關心地球的生存條件等的情感和責任感,樹立環境保護意識。生物課本自始至終都貫穿著生物與環境相適應、生物的結構與機能相適應的生物學觀點,我們要讓學生知道人不能被動地等待淘汰,而是要主動地適應自然的變化和社會的變革。中學生應該學會多種本領,增強耐挫折的能力,提高適應能力,培養健康的心理。
(3)培養學生逐步形成正確的審美觀。從美育的內容上看,生物學可以進行自然美、藝術美、社會美的教育。生物是自然美的主體。如動物、人體外表的對稱美;各種葉形、花冠的姿態美;動物(蜜蜂、螞蟻)社群生活表現的和諧美;科學家的優秀品質體現了社會美。引導學生投入到創造美的活動中去,如養鳥、護鳥、種花、種樹、綠化美化校園等。
生物素范文5
[關鍵詞] 血管內皮生長因子;肝素酶;鈣黏蛋白;胃癌
[中圖分類號] R735.2 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701(2012)03-0051-02
Research of relationship between VEGF, heparinase, E-cadherin and biological behavior of gastric cancer
FU Yuxiang MA Guiliang MAO Weizheng LI Yang
Department of General's Surgery Qingdao Municipal Hospital Affiliated to Medical College of Qingdao University, Qingdao 266071, China
[Abstract] Objective To investigate the relationship between vascular endothelial growth factor (VEGF), heparinase, E-cadherin and gastric cancer biological behavior. Methods The expressions of VEGF, heparinase, E-cadherin proteins of 91 cases of gastric carcinoma and adjacent normal tissues were detected by immunohistochemistry. Results In gastric carcinoma and adjacent normal tissue, the positive expression rate of VEGF protein was 72.52% and 16.48% respectively, and there was significant difference between the two groups. The positive expression rate of heparinase protein was 80.21% and 18.68% respectively, and there was significant difference between the two groups. The positive expression rate of E-cadherin protein was 64.84% and 92.31% respectively, and there was significant difference between the two groups. The expressions of VEGF, heparinase, E-cadherin proteins were closely correlated with differentiation, depth of invasion, metastasis of lymph nodes and TNM stage. And the expression of VEGF protein was also closely correlated with tumor size, but the expressions of heparinase and E-cadherin proteins were not correlated with tumor size. Conclusion VEGF, heparinase, E-cadherin show high expressions in gastric cancer and are correlated with gastric cancer biological behavior. The united detection of the VEGF, heparinase, E-cadherin will be helpful to judge prognosis and formulate treatment program.
[Key words] VEGF; Heparinase; E-cadherin; Gastric cancer
浸潤轉移是胃癌一個本質的生物學行為,是胃癌患者死亡率高、預后差的主要原因。癌組織的浸潤轉移是復雜的、多步驟的、多階段的、多基因的病理過程,其分子機制還不明確,研究與胃癌浸潤轉移相關的免疫分子,對胃癌的指導治療、預后判斷有重要價值。本文就研究血管內皮生長因子(VEGF)、肝素酶、鈣黏蛋白(E-cadherin,E-cad)與胃癌生物學行為的關系進行統計學分析,以了解VEGF、肝素酶、鈣黏蛋白能否作為胃癌浸潤轉移的臨床指標。
1 材料與方法
1.1 實驗標本
收集2010年2~6月手術切除的新鮮標本及術后病理石蠟塊91例,術前未經任何抗癌治療,其中男63例,女28例,年齡45~81歲,中位年齡62歲;根據2010年新TNM分期標準分為Ⅰ期10例,Ⅱ期21例,Ⅲ期38例,Ⅳ期22例。每例分別取胃癌組織及癌旁正常組織(距癌緣5 cm以上)各一塊,-80℃冰箱保存。術后病理示中高分化腺癌36例,低分化腺癌55例。
1.2 主要試劑
VEGF兔抗人抗體和E鈣黏蛋白兔抗人抗體購自美國Santa Cruz公司,肝素酶兔抗人抗體購自武漢博士德生物工程公司,SP試劑盒和DAB顯色試劑盒購自北京中山生物技術有限公司。
1.3 實驗方法
VEGF、肝素酶、鈣黏蛋白在胃癌及癌周正常黏膜的表達通過免疫組織化學方法檢測。組織經1%甲醛固定,石蠟包埋,4 μm連續切片。常規石蠟切片脫蠟。滴加內源性過氧化酶阻斷劑,室溫下孵育20 min。熱抗原修復,切片置于盛有檬酸鹽緩沖液的高壓鍋中2 min。滴加正常羊血清封閉,室溫下孵育30 min。滴加一抗(1:50稀釋),4℃冰箱過夜。滴加生物素標記的二抗,室溫下孵育30 min。DAB顯色,鏡下控制反應時間。蘇木素輕度復染,脫水,透明,封片。陰性對照試驗以PBS替代一抗。
1.4 半定量結果判定
染色強度分數標準無色為0分,淡黃色為1分,棕黃色為2分,棕褐色為3分。同樣物鏡下陽性細胞數1分為陽性細胞數≤10%,2分為11%~50%,3分為51%~75%。兩類分數乘積滿3分為(+),滿4分為(++),5分以上為(+++)。
1.5 統計學處理
應用SPSS 17.0軟件進行統計學分析。組間差異采用χ2檢驗,VEGF、肝素酶和鈣黏蛋白表達與胃癌生物學行為的關系采用秩和檢驗,相關性采用Spearman等級相關分析,P < 0.05為差異有統計學意義。
2 結果
2.1 肝素酶、VEGF、鈣黏蛋白的表達
肝素酶蛋白表達陽性產物位于細胞質(圖1A),癌組織陽性表達率為80.21%,癌周正常胃組織也有18.68%的表達率,差異有統計學意義(χ2=68.931,P < 0.05)。VEGF陽性產物位于細胞質(圖1B),91例胃癌患者癌組織陽性表達率為72.52%,癌周正常組織陽性表達率為16.48%,差異有統計學意義(χ2=57.864,P < 0.05)。鈣黏蛋白陽性表達產物位于細胞膜,細胞質及細胞核不表達,胃癌組織陽性表達率為64.84%,癌周正常組織陽性率92.31%,差異有統計學意義(χ2=20.396,P < 0.05)。肝素酶、VEGF、鈣黏蛋白的表達相互之間無相關性。
2.2 VEGF、肝素酶、鈣黏蛋白的表達與胃癌生物學行為的關系
VEGF、肝素酶和鈣黏蛋白的表達與胃癌的分化程度、浸潤深度、淋巴結轉移和臨床分期相關,VEGF還與腫瘤大小相關,肝素酶和鈣黏蛋白與腫瘤大小不相關。見表1。
3 討論
VEGF、肝素酶在低分化組中的表達明顯高于中高分化組,有淋巴結轉移組高于無淋巴結轉移組,胃癌Ⅲ~Ⅳ期高于Ⅰ~Ⅱ期。E-cad在低分化組、有淋巴結轉移組和胃癌Ⅲ~Ⅳ期組中是低表達的。表明VEGF、肝素酶和E-cad與胃癌的侵襲和轉移潛能密切相關,可作為胃癌生物學行為的標志物。
VEGF是活性最強的血管生成因子之一,它能與血管內皮細胞表面受體特異性結合,誘導血管生成,促使血管通透性增加,導致血管內的蛋白物質滲透到血管外間隙,形成纖維基質,誘導內皮細胞增生,最后使間質血管化,為胃癌的浸潤轉移提供基礎[1]。VEGF還能促進腫瘤的淋巴管生長,維持血管正常的結構完整性,從而引起腫瘤細胞生長和轉移[2,3]。研究發現[4],胃癌組織VEGF表達陽性的患者與VEGF表達陰性的患者相比,其腫瘤組織體積更大,病理分期更晚,腫瘤細胞浸潤程度更深,更容易發生轉移。肝素酶是一類能降解肝素類物質的裂解酶,通常被稱作類肝素酶或乙酰肝素酶(heparanase),是通過水解硫酸乙酰肝素蛋白聚糖的肝素類側鏈破壞細胞外基質和基底膜的基本結構,釋放并激活連接在肝素類側鏈上的活性物質,與血管生成、腫瘤轉移等過程密切相關[5,6],促進了胃癌的浸潤轉移和血管形成[7],實驗結果顯示肝素酶與胃癌的分化程度、浸潤深度、淋巴結轉移和臨床分期相關,與腫瘤大小沒有相關性,與VEGF亦沒有相關性。
鈣黏蛋白(E-cad)是一類介導細胞與細胞之間相互黏附的具有鈣依賴性的跨膜糖蛋白,是主要的正常細胞生長接觸抑制劑,E-cad表達減少和異質性使細胞間的黏附減弱,因此癌細胞更易脫落,這是癌轉移的基礎[8]。鈣黏蛋白在癌周正常組織的表達明顯高于癌組織。本研究顯示,VEGF、肝素酶、鈣黏蛋白的表達與胃癌的分化程度、浸潤深度、淋巴結轉移和臨床分期等生物學行為相關,可作為胃癌浸潤轉移的分子指標。由此,除了手術、放化療等治療手段外,可聯合基因工程或其他方法,抑制VEGF、肝素酶在癌組織中的表達,增強鈣黏蛋白的表達,為胃癌治療提供新手段。
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生物素范文6
關鍵詞:初中生物 提升 科學素養
世界科技創新步伐的加快與基礎教育課程改革的實施把全面實施素質教育、 促進學生和諧發展、培養學生的科學素養和人文精神擺在了教育的重要位置。科學素養這一概念伴隨二十世紀五六十年代美國課程改革運動而系統確立起來,把科學素養作為科學教育的目標已在世界各國達成共識。科學素養包括科學興趣、科學知識、科學方法和科學精神四個核心要素,既要對青少年進行責任感、團隊精神、追求真理、堅持真理等規范性教育,又要通過具體知識的傳授,培養學生對科學研究的興趣,促進其個性的健康發展,促進其健全人格的形成和完善,提高他們的創造能力。
生物課程的根本任務是提高學生的科學素養?!疤岣呷窨茖W素質,特別是青少年科學素質,是關系中華民族偉大復興的根本大事,是科學教育的神圣使命?!睋芯抠Y料顯示,科學素養教育成果的顯現是一個漫長的過程,而我國又是一個經濟、社會、文化等領域發展相對落后的發展中國家,開展青少年科學素養教育,就顯得尤為重大、突出和緊迫。作為生物教師,作為生物科學教育在生物課堂的代言人,不僅要完成生物學科知識體系的傳授,更要注重對科學的共性、本質和研究方法的指導,并在此過程中引導學生對科學研究的感悟,對人與自然和社會和諧關系的認同,對自己行為準則的規范。
我工作多年以來,注重發揮學科的資源優勢,依托初中生物教材,逐步提升學生的生物科學素養。具體做法是:
一、在課堂中放手讓學生講、演,轉變學習方式,提升學生的生物科學知識素養
生物課程目標涵蓋了生物學知識、能力以及情感態度與價值觀等方面的基本要求,是要通過每節課或每項活動來逐步完成的。課堂教學一直是實施新課程的主陣地,教學模式的改革,只有在課堂上體現出來才是可行的、有效的、成功的。我在“以人為本”教學思想的指導下,進行了一系列的教學改革。針對不同內容設計不同的教學模式,如實驗探究課、中心概念形成課、多媒體與課堂教學整合課、問題模式課和學生主講課等。例如,我在學生充分預習的情況下,給每組學生分別安排不同的展示內容,由學生主講,并用小品、角色扮演、講述、談話等多種多樣的手段,把知識講解得淋漓盡致,使我真正認識到了“你給學生一個機會,學生會給你一個奇跡”的內涵。
二、在探究實驗中,放手讓學生討論、探究、實驗,提升學生的生物科學方法素養
生物教學不僅是教師講解和演示的過程,也是師生交往、共同發展的互動過程,教師必須向學生提供更多的機會讓學生親自參與和實踐。發展學生的科學素養離不開科學的學習過程??茖W的核心是探究,教育的重要目標是促進學生的發展,科學課程應當將這兩者相結合。突出科學探究的學習方式,應給學生提供充分的科學探究機會,讓學生通過手腦并用的探究活動,體驗探究過程的曲折和樂趣,學習科學方法,發展科學探究所需要的能力并增進對科學探究的理解。新的課程標準突出了科學探究的重要性,將其放在科學教育的中心環節上,著力于發展每一個學生對科學的理解力和從事科學探究的能力,讓學生像科學家那樣探索和思考,在積極參與科學探究的過程中逐漸對自然界有所認識。
三、在生物課外科技活動中,放手讓學生參觀、調查、訪問,提升學生的生物科學精神素養
生物學習注意課內外活動相結合。教師應打破課堂內外的約束,有計劃地安排好需要較長時間才能完成的活動,包括必要的調查、訪問、參觀等,充分利用多種教學資源,保證活動時間。生物課外科技活動是生物學習的重要形式,生物課外科技活動主要是學生在教師指導下進行的一些與生物科學技術相關的試驗、考察、種植等實踐活動。一般情況下,課外活動以學生的實踐活動為主,突出學生的活動主體地位,活動內容和課程標準所規定的教學內容是相聯系的。在課外活動過程中,學生通過親身實踐去擴大、加深和鞏固課內所學到的基礎知識和基本技能;通過生物課外活動,培養學生的科學素質。但由于課外活動的內容具有多樣性、廣泛性,容易與課堂教學內容脫節,因此,生物課外活動應圍繞課堂教學內容擴展和加深。這樣,學生在課外活動中不僅可以學到一系列科學工作方法和技能技巧,增強學習的興趣,而且可以達到培養學生的科學創新精神、科學實驗素質和熱愛生物環境科學的良好品質。
四、在校本課程編寫中,放手讓學生搜集、設計、撰稿,提升學生的生物科學興趣素養
為凸顯學科特色,充分發揮生物學科優勢,進一步提升學生的科學素養,筆者創造性地開發了一批注重激發學生潛能的校本課程。在編寫校本課程的過程中放手讓學生搜集、設計、撰稿,并讓學生制作豐富多彩的多媒體課件。多樣的校本課程使學生獲得能力、情感的提升,喚起學生的學習積極性,提升學生的生物科學興趣素養,也為他們獲得成功提供更多的機會。
基礎教育需要通過一系列學生主動參與的科學探究和技術設計活動,才能使學生的科學素養逐步發展并成熟。科學素養的培養和提升,是教育與教學的統一,是一項需要多方緊密配合、共同實施的系統工程。依托初中生物教材,提升學生生物科學素養將是一項長期而艱巨的任務。
參考文獻
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