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腎臟纖維化范文1
[中圖分類號] R259 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674—4721（2012）09（b）—0115—02
何立群教授是上海中醫藥大學附屬曙光醫院腎內科主任、上海中醫藥研究院腎病研究所所長、博士研究生導師，躬身臨床近30年，總結出治療慢性腎病一系列行之有效的方法和方藥，尤其擅長活血化瘀法治療慢性腎衰腎纖維化。筆者跟隨何教授臨證以來，深切體會到中醫藥在治療腎臟纖維化方面的特色和優勢，現將何教授研制抗纖靈系列方治療腎臟纖維化經驗介紹如下：
從現代醫學的角度看，腎臟纖維化（包括腎小球硬化和腎間質纖維化）是各種慢性腎臟疾病的主要病理學改變，也是各種腎臟疾病進展到終末期腎衰竭的共同通路[1—2]。終末期腎衰竭患者臨床主要表現有面色黧黑晦暗，水腫，肌膚甲錯，腰部、兩脅固定疼痛或刺痛，足趾關節腫痛，舌暗紅、青紫、瘀點、瘀斑，舌下絡脈粗張及瘀紫，脈沉、細、澀、弦等。中醫學根據終末期腎衰竭患者的臨床表現，認為腎臟纖維化病因病機是本虛標實，脾腎虧虛為本，瘀血、濕濁、濕熱、毒邪、風邪為標，就瘀血而言，可因虛致瘀、因實致瘀。根據以上理論，何師對慢性腎功能衰竭患者做了大樣本的臨床觀察，發現血瘀貫穿慢性腎臟病的各個階段，血瘀證在慢性腎臟病中所占比例約為67. 5%[3]。因此，何師提出早、中期慢性腎功能衰竭即使沒有血瘀證的典型表現，也要給予活血化瘀抗纖維化的治療。
1 抗纖靈方的研制和應用
在多年臨床實踐的基礎上，何師創制抗纖靈顆粒方，該方由活血化瘀的丹參、制大黃、當歸、牛膝、桃仁組成，方中丹參益氣補血活血，性微寒；桃仁祛瘀活血，性平；牛膝補腎活血，性平；制大黃清熱瀉濁活血，性寒；全當歸活血補血，性溫。綜觀全方，以活血為特征，兼以扶正瀉濁，攻補兼施，溫涼并用，使瀉而不傷正，補而不滯邪?，F代藥理研究表明，丹參能促進膠原降解，桃仁有改善腎臟纖維化，促進腎內的膠原分解，減少腎內的膠原含量，抑制肉芽形成的作用，大黃中提取的有效成分大黃蒽酮葡萄糖甙有抑制系膜細胞DNA和蛋白質合成的作用。
動物實驗研究結果顯示，抗纖靈方可通過降低模型大鼠血脂和24 h尿蛋白定量延緩腎小球硬化進展[4]。抗纖靈方亦通過上調結構型一氧化氮合酶誘導的一氧化氮含量，下調誘導型一氧化氮合酶誘導的一氧化氮含量，引起TGF—β1表達下調，減輕腎間質纖維化，延緩腎小球硬化，從而對腎臟起到一定的保護作用[5]?？估w靈方能顯著降低組織內TGF—β1、Smad2、Smad3、NF—κB、TNF—α、PDGFmRNA、IL—6mRNA、ATⅡ、AT1RmRNA水平，有效誘導CTGF基因表達下調，抑制性調節TGF—β1/Smads信號通路，調節TGF—β1/P38MAPK信號轉導通路，減輕ECM的沉積，抑制腎纖維化的發生[6—11]。臨床研究表明，抗纖靈方能延緩慢性腎功能衰竭的進展，尤其對于早中期有血瘀兼證的CRF患者療效顯著[12]。抗纖靈方可明顯改善腎衰患者的腎功能、蛋白尿，臨床總有效率為80%，并有降低血管緊張素Ⅰ和Ⅱ、層粘連蛋白、Ⅲ型膠原Ⅳ型膠原、TNF—α和升高纖維連結蛋白（FN）的作用[13—14]。
2 抗纖靈二號方的研制和應用
何師認為慢性腎臟疾病遷延日久，臟腑虛衰，最終將導致脾腎陽氣虛衰，瘀血濁毒內阻而發諸證，故提出脾腎陽（氣）虛兼血瘀證是存在腎小管間質損傷的慢性腎臟疾病患者的代表證型，在抗纖靈方的基礎上創制了益氣溫陽、活血化瘀的抗纖靈二號方。抗纖靈二號方的組成為抗纖靈方減去當歸加黃芪、仙靈脾，該方以黃芪、仙靈脾為君藥，黃芪性微溫，功能補氣升陽、利水消腫、固表生津；仙靈脾性溫，溫腎壯陽、強健腰膝；二者相合，補腎健脾、益氣溫陽以求其本；再以丹參、桃仁、懷牛膝三藥為臣，丹參善于活血祛瘀、涼血散結，有“一味丹參，功同四物”之說，為活血化瘀要藥，桃仁功能破血行瘀、潤燥滑腸，善泄血分之壅滯，牛膝性善下行，有活血通經之能，又善補益肝腎、利尿通淋，三藥相濟，共謀活血祛瘀、消積通絡以求其標。制大黃力猛善行，有斬關奪將之力，功效攻破積滯、活血祛瘀、涼血止血、瀉熱解毒、通泄祛濁，為中醫治療關格證的要藥，為本方佐藥?？估w靈二號方共達益氣溫陽、活血化瘀之意，以活血為主，兼以扶正瀉濁，攻補兼施，寒溫并用，使瀉而不傷正，補而不滯邪。
動物實驗研究結果顯示，抗纖靈二號方通過改善腎小球、腎小管功能，減少膠原纖維積聚，下調α— SMA、TGF—β1、FN及PAI—1表達，誘導HGF的高表達，抑制ECM沉積，促進ECM降解，抑制腎小管EMT，達到改善腎間質纖維化的作用[15—16]。筆者觀察了52例腎小管間質損傷患者，發現抗纖靈二號方能顯著改善腎小管間質損傷患者的脾腎陽（氣）虛兼血瘀證候，能減少患者尿α1—MG、尿β2—MG、24 hUPro的排泄，該方配合常規治療能取得76.92%的總有效率。
腎臟纖維化范文2
乙型肝炎病毒相關性腎炎(HBV-GN)是由乙型肝炎病毒(HBV)感染的疾病。據報道，在HBV攜帶率高的國家，HBV-GN的發病率較高[1]。我國是乙肝病毒感染的高發區，HBV的攜帶率在15%左右，HBV-GN的發病率升高，占腎炎發病率的16.6%～32%。
臨床資料表明，我國HBV感染伴腎小球腎炎的發病率在6.8%～20%。乙型肝炎引起的膜性腎病(MGN)中，兒童患者?？勺匀豢祻?，成年患者則逐漸進展為終末期腎病(ESRD)[2]。目前研究認為，HBV相關性腎炎存在明顯的腎小管間質損傷，如腎組織HBV陽性患者的腎小管間質損傷程度遠比非陽性組強[3]。
筆者既往研究表明，臨床表現為腎失氣化的慢性腎病患者存在腎小管輕-中度的病變及間質的纖維化[4]。另外，筆者2005年腎臟穿刺病理發現，乙型肝炎患者其腎小管可見HBsAg沉積，支持乙肝病毒直接感染腎臟、損傷腎小管的可能性存在；并觀察到7例患者大多存在不同程度的腎小管間質損傷[5]。腎小管上皮細胞表型轉化是其纖維化進程的重要機理，補腎中藥理論上能對該病腎小管上皮細胞表型轉化有干預作用，可以提供中醫藥延緩HBV-GN向腎纖維化進展的新方法。
目前研究表明，在部分乙型肝炎患者血循環中，?？蓹z測出HBsAg、抗HBs等免疫復合物(CIC)。這些CIC沉積于腎小球基底膜小血管，激活補體釋放活性物質，引起Ⅲ型變態反應，出現腎小球腎炎[1]。病毒感染的一個關鍵點，即復制往往局限在固定的組織和細胞類型中。HBV感染(以大量釋放病毒進入血漿為特點)的另一種免疫致病方式，是病毒抗原和抗體組成的CIC的沉積引起腎臟損害。迄今為止，人類其他病毒并無類似的致病機制[2]。
1971年，Combes[6]第一次報道1例男性患者具有持續性的HBsAg血癥，16個月后發生了膜性腎病，并出現腎小球內有HBsAG沉積，從而引發了各國學者對HBV感染與腎臟病變關系的研究。
動物實驗表明，感染HBV鴨的腎組織中有病毒復制的中間體和病毒抗原。給狒狒接種HBsAg制成免疫復合物腎炎模型，并在腎組織中發現HBsAg。所以，目前認為HBV感染引起的腎炎是一種獨立的疾病實體。
1989年，我國確定了診斷標準，開始重視其診治，但迄今為止尚無特效藥物。激素治療可延緩中和抗體產生并促進HBV復制而加重病情。α-干擾素、阿糖腺苷等用藥后某些病例腎病也隨之好轉，但例數尚少。
總之，HBV-GN有不同于一般原發性腎小球腎炎的如下特點：①其發病率非常高(16.6%～32%)，是嚴重危害人們健康的疾病之一。②治療困難。目前國內腎臟病學界尚無統一的治療方案，且由于其病理類型多為膜型腎病、膜增殖性腎炎等，因此對激素治療不敏感，目前尚無療效確切的治療藥物，亟待開發有效的中藥制劑。③腎小管-間質損傷明顯。目前研究認為，HBV直接能感染腎臟致病。由此可以看出，HBV-GN存在著明顯的腎小管間質損傷。如有學者研究認為，腎組織HBV陽性患者的腎小管間質損傷程度遠比非陽性組強。HBV感染與原發性膜性腎病發病密切相關。④研究相對滯后。由于該病的臨床確診需通過腎穿刺活檢，由于腎穿刺活檢技術要求較高、有一定的風險，在基層單位尚難普及；同時又由于該病的治療涉及腎臟病和肝病兩個專業，因此，較之一般原發性腎小球腎炎的研究相對滯后。截至目前有腎穿臨床報道的前瞻性論著較少，動物實驗研究文獻寥寥無幾，亟待加強這方面的研究。
1 乙型肝炎病毒相關性腎炎會不可避免地導致腎纖維化、腎功能衰竭的發生
目前國內外的研究資料表明，HBV-GN能導致腎纖維化的發生，逐漸進入ESRD，即便是兒童患者亦并非均為良性過程。
Rajendra Bhimma等[7]報道，25%的成年HBV-GN患者逐漸發展成為腎功能衰竭。Lai KN[8]在對HBV-GN患者為期40個月的觀察中發現，14%的患者發展成為腎功能衰竭；并觀察了21例乙肝病毒相關性膜性腎病成人患者60個月，幾乎所有的患者都是圍產期感染的乙肝病毒，并且腎活檢中有HBeAg證據。16名未治療的患者有持續蛋白尿，29%發展為腎功能衰竭，10%最終發展成為血液透析患者。他們得出這樣的結論：乙肝流行地區成人乙肝相關性膜性腎病的過程不是良性的，若忽視治療，大約1/3患者的病情將發生緩慢但嚴重的進展[9]。
相同的結論也見于兒童患者的資料。臺灣的Lin CY[10]對1981年4月－1987年11月間34名HBV-GN兒童患者進行了研究。對其中32名兒童的臨床研究中，發現他們對強的松治療反應較弱，有持續而嚴重的蛋白尿(32.4%)或有較高的復發率(38.2%)，僅有1例患兒對激素有早期應答。4名隨訪患者的二次腎穿結果顯示患者均發生了進行性的腎臟損害。Ozdamar SO等[11]調查了14名兒童HBV-GN患者的臨床及免疫組織學特征(這些兒童年齡在2.5歲到16歲不等，平均10歲)，其中9名患者是腎病綜合征，8名患者是腎炎，其中5個兒童是兩者皆有。14名兒童中有4例(28%)發展為腎功能不全。因此，可以認為兒童HBV-GN并非是一個良性病理過程。
2 從腎小管上皮細胞轉分化角度研究腎間質纖維化的現狀
目前研究認為，HBV-GN存在明顯的腎小管間質損傷。如腎組織HBV陽性患者的腎小管間質損傷程度遠比非陽性組織強[3]；腎小管間質損傷決定患者預后，可以加速腎纖維化進程。
現代醫學抗腎纖維化的研究和應用雖取得了一定的進展，但大多數尚處于實驗階段或僅用于腎纖維化的動物模型。研究表明，霉酚酸(MMF)、螺內酯對腎小管上皮細胞轉分化有直接的抑制作用，從而延緩腎間制纖維化的發展[12-13]。
腎小管上皮細胞表型轉化是腎小管間質纖維化的最新機制之一，目前研究認為它是在多種損傷因子長期刺激發生的細胞表型改變。在腎小管間質纖維化模型中，腎小管上皮細胞可發生上皮間質表型轉化，參與腎間質中成纖維細胞的積聚，進而促進腎間質纖維化的發生。
轉貼于
腎纖維化是腎病進展的標志，且以細胞外基質合成細胞在腎小球和小管間質中累積為特征。類肌成纖維細胞是異質性的，實驗表明，在特定的條件下，腎小管上皮細胞能夠改變其表型成為類肌成纖維細胞，這一過程稱為上皮間質轉分化[14]。大量的實驗證據表明，來自受損的腎小管的上皮細胞能轉分化為含有α平滑肌肌動蛋白的肌成纖維樣細胞(MFLC)[15]。
國內學者研究表明，補腎中藥可以抑制腎小管上皮細胞肌成纖維細胞轉分化，使肌成纖維細胞的表達減少，抑制纖維細胞的活化，從而抑制腎間質纖維化的形成和發生。黃芪、當歸能抑制間質成纖維細胞活化、轉型[16]。器官纖維化的形成涉及到間質效應細胞的增殖、活化、表型轉化，治療可用益氣補血通絡法[17]。
盡管目前腎臟學者做了大量研究，但腎纖維化的起源仍然是有爭議的。腎小管上皮細胞轉分化至少是腎纖維化的機制之一，各種腎損傷都有可能誘導腎小管細胞進入上皮細胞轉分化過程并發生腎纖維化，該觀點已經實驗動物模型、試管內試驗和腎活檢穿刺證實。這意味著，如果腎小管上皮細胞轉分化是腎纖維化共同的過程，那么，下一步的研究和這一過程的進一步探索將引導我們思考用特殊的治療法對抗腎病進展[18]。而腎小管上皮細胞轉分化的研究尚未見諸于HBV-GN的研究中，屬于國內外研究的空白領域。
3 乙型肝炎病毒相關性腎炎腎纖維化研究思路初探
HBV-GN隸屬中醫“尿濁”、“虛損”、“水腫”等范疇。中醫認為是本虛標實之證，正虛主要責之脾腎陽虛，外因是濕熱疫毒。現代醫學認為，HBV感染與機體細胞免疫功能低下有關，大多有不同程度的脾腎虧虛。在本病的發展中，目前更強調脾腎陽虛的重要性，腎的氣化功能失司，影響到“腎主水”和“腎主藏精”功能，臨床出現尿少、水腫、尿蛋白漏泄、乏力、腰酸、尿酶學明顯異常等表現。目前，腎間質纖維化中醫藥研究多為單味藥及其提取物，復方的前瞻性、對比研究尚缺乏，并且中醫藥干預HBV-GN腎小管上皮細胞表型轉化的研究尚未見諸報道。
因此，有必要開展中醫藥干預HBV-GN腎間質纖維化的研究，發掘中醫藥在治療肝病、腎病領域的優勢。目前，國內已有中藥抗腎纖維化的研究成果，為我們研究思路的提出奠定了基礎。腎臟疾病發展到一定程度必然會影響“腎主氣化”的功能，該階段治療主要應恢復腎的氣化功能[19]。該學術論點為從“腎主氣化”角度研究思路的提出奠定了理論基礎。
王氏等[20]研究認為，慢性腎臟疾病(腎纖維化)的病理基礎是脾腎虧虛，痰瘀互結。青風藤能阻抑腎間質纖維化模型存在的腎小管上皮細胞表型轉化[21]。此研究為溫腎化氣治療HBV-GN的腎間質纖維化、阻抑腎小管上皮細胞表型轉化的研究奠定了理論和方法學基礎。從恢復腎的氣化功能入手研究溫腎化氣法中藥(鞏隄丸)對腎間質纖維化的影響，從而達到有效治療HBV-GN腎間質纖維化、延緩其向慢性腎功能衰竭進展的最終目的。
腎小管上皮細胞表型轉化是慢性腎臟病腎間質纖維化的重要機制，國內外尚無HBV-GN小管上皮細胞表型轉化的報道。筆者在腎主氣化理論的指導下，提出HBV-GN的病理重點為“腎失氣化”，并提出腎失氣化與腎小管間質纖維化相關；上述表型轉化是HBV-GN腎失氣化的細胞生物學特征，改善腎的氣化可能對腎纖維化進程有抑制作用的假說。溫腎化氣中藥可改善腎失氣化臨床癥狀。研究可采用大鼠單側輸尿管結扎(UUO)腎纖維化模型和家鴨HBV-GN模型，證實在上述兩個模型中存在腎小管上皮細胞表型轉化的特征，用補腎中藥可對該模型腎小管上皮細胞表型轉化產生明顯抑制作用。由此證實，補腎中藥系通過抑制腎小管上皮細胞表型轉化而達到抗腎纖維化的作用，論證從改善腎的氣化入手，對HBV-GN的腎小管間質纖維化進程有阻抑作用。
腎小管間質纖維化是幾乎所有腎臟疾病進展到終末期腎功能衰竭的共同通路，是各種腎臟疾病慢性化的主要病理學表現之一。目前認為其更密切相關于腎小球疾病的腎功能損傷和預后；腎間質纖維化的發生主要與腎間質的固有的成纖維細胞轉化為肌纖維細胞及其功能有關，局部浸潤的單核巨噬細胞和腎小管細胞轉分化可能也部分參與這一過程。在腎小管間質纖維化模型中，腎小管上皮細胞可發生上皮-間質表型轉化，參與腎間質中肌成纖維的積聚，進而促進腎間質纖維化的發生。
HBV具有泛嗜性，它可直接感染腎組織，進而引起持續性免疫損傷、腎小球基底膜免疫復合物沉著，導致HBV-GN。HBV-GN腎小管間質纖維化時有無腎小管上皮細胞表型轉化？以及中藥能否對其進行干預？目前尚未見有研究報道。從理論上可以推斷，HBV-GN與其他腎小球腎炎一樣，腎小管上皮細胞存在表型轉化現象，因為HBV-GN有明顯的蛋白尿。而目前研究認為，蛋白尿可通過介導小管上皮細胞凋亡、小管間質單核巨噬細胞浸潤及小管上皮細胞轉分化等作用，促進小管萎縮和間質纖維化，加速腎臟病的進展。
現代醫學抗腎纖維化的研究和應用雖取得了一定進展，但大多數尚處于實驗階段或僅用于腎纖維化的動物模型，抑制腎小管上皮細胞的轉分化在治療腎臟疾病、改善腎臟疾病轉歸中具有重要意義。因而，未來中醫藥抗腎纖維化，尤其是抑制HBV-GN存在的腎小管上皮細胞表型轉化、對HBV-GN腎纖維化的治療研究有著重要的臨床意義，并能開辟新的研究途徑。
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腎臟纖維化范文3
摘 要:目的:探討紅花黃色素對大鼠腎間質纖維化的影響。方法:將40只SD雄性大鼠隨機分為假手術(SO)組、單側輸尿管梗阻(UUO) 組、血管緊張素Ⅱ受體拮抗劑厄貝沙坦組(IRB組) 和紅花黃色素組(SY組) 。大鼠腎組織行蘇木精-伊紅和Masson染色,計算腎間質纖維化的相對面積。免疫組化技術檢測I型膠原(Col I)和纖維連接蛋白(FN)在腎組織中的表達。結果:SY治療組和IRB治療組能有效改善UUO大鼠的腎臟間質纖維化,SY組和IRB組中各時間點Col I和FN蛋白的表達均低于UUO組(P< 0.05),但高于SO組(P0.05)。結論:紅花黃色素可減輕UUO大鼠腎間質纖維化程度,延緩腎臟間質纖維化。
關鍵詞:紅花黃色素;腎間質纖維化;I型膠原;纖維連接蛋白
中圖分類號:R285.5
文獻標識碼:A文章編號:
1673-7717(2010)04-0891-03
Effect of Safflor Yellow Injection on the Renal Interstitial Fibrosis in Unilateral Ureteral Obstruction Rats
SUN Shihua1, YAN Fuhua1, JIANG Jianjun2,MAO Xingmei3
(1.Traditional Chinese Medical Hospital of Jiangshan, Jiangshan, 324100, Zhejiang,China;
2.Jiangshan People's Hospital,Jiangshan 324100,Zhejiang,China;3.Jiangshan Maternity and Child Care Hospital,Jiangshan 324100,Zhejiang,China)
Abstract:Objective:To investigate the antifibrotic effect of safflor yellow on renal intersititium in unilateral ureteral obstruction (UUO) rats.Methods:40 male Sprague-Dawley rats were randomly divided into sham-operated group (SO group), unilateral ureteral obstruction model group (UUO group), irbesartan group (IRB group) and safflor yellow group (SY group). The area of renal interstitial fibrosis was calculated by HE and Masson staining, while the expression of collagen I (Col I) and fibronectin (FN) were detected by immunohistochemistry. Results:Renal interstitial fibrosis was improved significantly in both IRB group and SY group. The expression levels of Col I and FN were significantly reduced in the IRB and SY group compared with UUO group, notwithstanding the lowest in the SO group. Conclusion:Safflor yellow could ameliorate renal interstitial fibrosis which might be realized by reducing the exressio n of Col I and FN, it could delay the progress of renal interstital fibrosis in UUO rat model.
Key words:safflor yellow; renal intersttitial fibrosis; collagen I; fibronectin
收稿日期:2009-11-27
作者簡介:孫時華(1971-),女,浙江江山人,主管藥師,研究方向:藥物的臨床研究。
紅花黃色素(Safflor Yellow)是紅花中多種水溶性有效成分的混合物,屬酮類化合物。多年來,研究發現其具有擴張冠狀動脈、抗血栓形成、抗動脈粥樣硬化等多種作用。對于肝硬化等慢性纖維化性病變也有一定療效。本研究將紅花黃色素應用于單側輸尿管梗阻大鼠這一典型的慢性腎臟纖維化模型,通過檢測腎組織中膠原I(Collagen I, Col I)及纖維連接蛋白(Fibronectin,FN)的表達變化,探討紅花黃色素對大鼠腎間質纖維化的影響。
1材料與方法
1.1實驗動物
清潔級SD雄性大鼠40只(購自浙江大學醫學院動物實驗中心),體重(200±25)g。于溫度23℃、相對濕度(55±2)%,定時日光燈照射12h/天的房間內,保持通風、恒溫,自由飲食、飲水。
1.2藥品與試劑
紅花黃色素注射液為浙江永寧藥業股份有限公司提供(批號0702114),厄貝沙坦為杭州賽諾菲安萬特民生制藥有限公司提供(批號0601339),I型膠原和纖維連接蛋白抗體(武漢博士德生物工程公司),生物素化羊抗兔IgG(北京中杉金橋生物技術有限公司)。
1.3動物模型建立和分組
單側輸尿管結扎(UUO)誘導腎間質纖維化大鼠模型:10%水合氯醛腹腔注射麻醉大鼠后,取右側臥位,背部左肋下備皮,常規消毒,選左側背部肋下5mm做切口,打開腹腔,游離左腎及左側輸尿管,將左輸尿管用組織鉗托起,取中上段,用止血鉗夾住,在兩端以1號絲線結扎后剪斷,然后逐層縫合關閉切口;假手術組在打開腹腔、游離出左輸尿管后即關閉縫合切口。隨機分為4組:模型組、假手術組、厄貝沙坦組和紅花黃色素組。每組10只,組間大鼠體重無統計學差異。手術前2天開始給藥,假手術組、模型組均給予同等劑量的生理鹽水灌胃;厄貝沙坦組10mg•kg-1•d-1、紅花黃色素注射液10mg•kg-1•d-1劑量分別灌胃治療。
1.4觀察指標和方法
1.4.1腎功能測定同上麻醉大鼠后由頸總動脈采血,分離血清后檢測血清尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)水平,由醫院生化室測定。
1.4.2腎組織病理光鏡檢查取左腎組織,甲醛固定后石蠟包埋切片,切成3μm切片后行蘇木精-伊紅(HE)、Masson染色。HE染色觀察腎小管間質病理改變及細胞浸潤,Masson染色在400倍鏡隨機選取10個不重疊視野,拍照,對腎臟間質纖維化程度行半定量分析。
1.4.3免疫組化法檢測Col I和FN的表達 按S-P法試劑盒說明進行操作,測定Col I和FN的表達水平。采用Image Pro Plus多媒體彩色病理圖像分析軟件進行分析。
1.5統計學方法
數據由第一作者采用SPSS 11.0(SPSS,Chicago)統計包進行統計學分析,計量資料采用±s表示,多組均數間比較采用One-Way ANOVA分析,以P
[BW(D(Y,1,2)MD2]
[WT5”FZ〗中華中醫藥學刊
2結 果
2.1腎功能檢測
表1各組大鼠的腎功能情況
組別nBUNScr
假手術組107.15±0.5747.25±3.41
UUO組1012.04±0.71*57.02±2.19*
厄貝沙坦組1011.79±0.96*55.46±2.77*
紅花黃色素組1010.57±1.14*55.29±2.53*注:與假手術組相比,*P0.05。
造模成功后UUO組大鼠血尿素氮和肌酐水平均顯著升高,與假手術組相比,差異有顯著性(P0.05)。見表1。
2.2腎組織病理改變
假手術組HE染色無明顯變化;UUO組與術后第7天開始出現明顯的腎小管細胞腫脹,腎小管局灶性萎縮,腎小管間質變寬,其中可見纖維細胞增生和少量淋巴單核細胞浸潤;第14天時則表現為腎小管的嚴重破壞,腎小管和集合管擴張,管腔塌陷,小管間質顯著增寬,間質內大量彌漫分布的單核巨噬細胞,較多的成纖維細胞分布。IRB組和SY組病理改變與UUO組相類似,但程度明顯減輕。Masson染色提示假手術組的腎臟膠原主要位于腎小球基底膜、系膜區和小管周圍毛細血管;UUO組可見腎組織間質膠原沉積顯著增加,在14天時病變更為顯著。IRB組和SY組與同期的UUO組相比,間質增寬程度和膠原沉積程度降低,有顯著的統計學差異(P
表2各組大鼠的腎臟間質纖維化相對面積(%)
組別n第7天第14天
假手術組102.13±0.362.17±0.41
UUO組1018.03±3.91*27.13±2.97*
厄貝沙坦組1013.38±1.59*17.31±1.72*
紅花黃色素組1012.48±1.36*15.45±1.51*
注:與假手術組相比,*P
2.3免疫組化
Col I在假手術組中僅有少量表達,腎小球和腎小管中無陽性表達,而在UUO組中則大量表達于腎臟間質;FN在假手術組中僅在腎小球和腎小管基底膜少量表達,而在UUO組中,在萎縮的腎小管周圍及腎小球、腎小管基底膜等處均可見強烈的表達。上述指標在IRB組和SY組中,雖表達部位與UUO組相同,但表達程度顯著減輕(P0.05)。見表3。
表3各組大鼠的腎組織免疫組化結果
組別n型膠原(Col I)第7天第14天
纖維連接蛋白(FN)
第7天第14天
假手術組107.15±1.897.21±1.233.99±0.754.21±1.13
UUO組1092.15±8.32*159.37±29.5*83.06±12.55*155.46±11.48*
厄貝沙坦組1057.83±11.25*78.29±15.32*43.67±5.41*75.26±7.15*
紅花黃色素組1063.19±15.76*94.37±14.33*41.57±5.72*73.92±7.22* 注:與假手術組相比,*P
3討 論
腎臟間質纖維化是由各種原因的腎臟疾病引起的腎臟功能進行性惡化的過程,最終導致腎功能衰竭,其主要的病理基礎是細胞外基質堆積和在間質的積聚。目前認為其發生發展的機理在于:各種炎癥因子的釋放和炎細胞的浸潤,激活成纖維細胞和各種纖維化相關的生長因子如TGF、PDGF等的活化,促進腎小管上皮細胞發生轉分化,向著成纖維細胞的方向發展;另外,調控細胞外基質合成/降解的一系列酶系統在多種細胞因子/生長因子的作用下發生功能紊亂,是的基質合成增多,降解減少,從而促進腎臟纖維化的進程。臨床上常用的血管緊張素II受體拮抗劑如厄貝沙坦等可以減輕上述過程的進展,在一定程度上延緩腎纖維化的進程。尋找更多的抗纖維化藥物是目前腎臟病學的主要任務之一[1-2]。
紅花黃色素是從紅花中提取的有效成分,屬于水溶性黃酮中的查爾酮類分子,研究發現其具有擴血管、抗血栓形成、抗動脈粥樣硬化、保護中樞神經系統等多重藥理學效應,在心血管疾病中已開始系列臨床觀察[3-4]。
單側輸尿管結扎(UUO)是研究腎小管間質纖維化的成熟的動物模型。在本實驗中,觀察到大鼠腎臟體積增大、皮質變薄,腎間質炎癥細胞浸潤、腎小管擴張、壞死,腎間質面積增寬,膠原堆積,間質纖維化等系列病理改變,符合慢性進展性腎纖維化的特點,提示該模型的建立是成功的。
本研究采用經典的UUO模型,予以紅花黃色素進行干預治療,并采用血管緊張素II受體拮抗劑厄貝沙坦作為對照,進一步觀察紅花黃色素對大鼠腎纖維化的治療作用。UUO組腎臟病理見腎小管破壞明顯,間質單核巨噬細胞浸潤、成纖維細胞增生,Masson染色見間質膠原堆積增多,間質纖維化成灶性分布;厄貝沙坦組和紅花黃色素組的病理改變雖然與UUO組類似,但程度明顯減輕。
如前所述,細胞外基質的堆積與纖維連接蛋白(FN)密切相關,FN是一種細胞外基質糖蛋白,可與多種基質成分結合,促進細胞外膠原I(Col I)-IV和蛋白多糖成分的沉積,FN在腎臟纖維化病變中表達較早,同時FN還是成纖維細胞的趨化劑[5]。因此,降低FN合成和表達對于防治腎小管間質纖維化是至關重要的。多項研究顯示,在外源性轉化生長因子的刺激下,腎臟近曲小管可產生FN和Col I等基質成分[6]。本研究顯示,UUO組大鼠在第7天、第14天腎組織中FN和Col I表達均較假手術組顯著增強,而予以厄貝沙坦、紅花黃色素治療的,上述指標有不同程度的下降,以上說明,紅花黃色素可改善大鼠腎組織病變,減少腎臟間質纖維化發生的面積。
綜上,紅花黃色素可明顯減輕大鼠UUO術后的腎臟病變,降低腎組織FN和Col I的表達,抑制細胞外基質在腎間質的堆積,延緩腎小管損傷及腎纖維化的進展。本研究為臨床開發新的有效的抗腎臟纖維化治療藥物提供了一定的理論依據。
參考文獻
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[4] Wang C, Zhang D, Li G, et al. Neuroprotective effects of safflor yellow B on brain ischemic injury[J]. Exp Brain Res,2007,177(4): 533-539.
腎臟纖維化范文4
【關鍵詞】糖尿病腎?。蛔慵毎麚p傷；腎間質損傷；干預治療
doi：10.3969/j.issn.1004-7484（x）.2013.07.094文章編號：1004-7484（2013）-07-3591-01
DN在DM患者中的發病率較高，在1型DM患者中可達40%，2型DM患者中也有10%左右。在臨床上，其最早可檢測的異常情況是微量白蛋白尿，隨著病情的進展，微量白蛋白尿逐漸進展為臨床蛋白尿，而蛋白尿與腎小球細胞外基質聚集、腎小球硬化及進展性小管間質纖維化、腎小管萎縮密切相關，但具體機制并不清楚[1]。本文首先分析了DN足細胞及腎間質損傷的可能機制，再簡單探討了其干預治療方法，現報道如下。
1足細胞損傷機制
DN足細胞損傷及其蛋白分子表達異常的具體機制尚不清楚，可能與活性氧基團、高糖刺激、非糖基化終末產物的聚集、腎臟局部血管緊張素II及高血壓所致的機械應力等因素有關。有研究表明，在PAN、Heyman腎炎等模型中均可發現活性氧基團（ROS）表達增加，預防性給予抗氧化劑可阻止足突融合和蛋白尿發生；而血管緊張素II的影響在于兩方面，即對腎小球的血流動力學和其屏障作用的干擾，當給予大鼠血管緊張素轉換酶抑制劑之后可阻止蛋白尿的發生；若患者患有高血壓時，腎小球內毛細血管袢壓力增加，牽拉刺激可損傷足細胞，最終也會導致腎單位減少和局灶性節段性腎小球硬化。
2腎間質損傷機制
對于本機制的研究一直在持續，綜合目前的資料發現，腎間質纖維化是一個不斷發展的過程，主要包含四個階段：①多種細胞因子的表達；②細胞外基質的異常積聚；③細胞異常增殖及表型轉化；④炎癥細胞的浸潤。其中，細胞因子的影響尤其重要，其作用包括促纖維化和抑制纖維化，伴隨著疾病的發生、發展。機體正常時，這兩種拮抗效果處于平衡，使得腎臟能正常地發揮生理功能，顯然，一旦抑制作用減弱，促纖維化作用就會占據優勢，纖維化也就不可避免了。而在眾多的細胞因子中，最重要的幾類包括OPN、TGF-β1、CTGF以及BMP-7，這些細胞因子之間平衡的紊亂在DN的發生、發展中可能起重要作用。OPN在腎臟中含量很高，主要發現于腎小管及一些集合管上皮中。2型糖尿病模型OLETF大鼠誘導DN后，其腎臟可發生炎性細胞浸潤、腎小球硬化及小管間質纖維化等。OPN及TGF-β的表達量也顯著增加，同時發現OPN mRNA及其產物在病變處大量存在，并且與小管間質纖維化的評分及單核巨噬細胞的標志物ED-1陽性細胞數呈正相關。這提示OPN表達增加可誘導單核巨噬細胞的趨化，從而促進DN中腎間質病變的發生[2]。
3干預治療研究
BMP-7是轉化生長因子TGF-β超家族的一員，是一種分泌性蛋白，在人體內廣泛存在，腎臟是其主要表達器官之一。它持續性地發揮作用，在腎臟的形成、發育階段十分重要；同時，腎臟成熟后其表達依然很活躍。這就提示我們，BMP-7可能是腎臟維持和發揮其生理功能的重要因子。通過分析近些年的研究資料也發現其在腎臟疾病的發生、發展和轉歸方面有著密切聯系。腎功能異常時，BMP-7在腎臟內的表達量大大降低，使用BMP-7后，腎損傷癥狀明顯減輕，并且腎功能也逐漸恢復，而且療效比依那普利更好。分子生物學資料表明，BMP-7可減少中性粒細胞的聚集和活化，增加血管內皮生長因子的表達，抑制細胞凋亡，從而減緩腎功能喪失的進程。這些資料說明BMP-7能延緩和阻止梗阻性腎病腎纖維化的發生。
結締組織生長因子（CTGF）具有促進成纖維細胞活化和細胞外基質的產生、積聚等功能，其在多種組織纖維化疾病中起促進作用。有研究顯示，1型糖尿病患者血漿CTGF水平較高，且與蛋白尿緊密相關，血和尿CTGF水平升高比微量白蛋白尿的發生要早。這提示我們在DN的早期可將CTGF的水平作為診斷指標，也從側面說明CTGF在DN的發生、發展過程中的重要作用，抑制CTGF的表達便有望達到治療的目的[3]。
很多中藥也可進行干預治療，如黃芪，冬蟲夏草等。黃芪味甘，性微溫，具有補氣升陽、益衛固表、利尿消腫等作用，是臨床上治療蛋白尿的常用藥材，可能與其抗氧化應激有關。冬蟲夏草有補肺益腎、止血化痰等作用。有研究證實，冬蟲夏草能減輕脂質過氧化物損傷，加快腎小管修復。此外，其對免疫的影響也可能是其降低蛋白尿，改善腎功能的原因[4]。
4小結
綜上所述，DN是DM逐漸發展的一類嚴重慢性并發癥，足細胞損傷及腎纖維化是其兩大病理性特征。盡管發病機制還沒有完全確定，但可以針對部分可能的機制采取來進行干預治療。如調控血糖及血壓、給予抗氧化劑等，這些均可對疾病有緩解作用。此外，抑制CTGF也可特異的對抗DN所引起腎纖維化，從而延緩DN患者的病程進展。
參考文獻
[1]楊洪梅，鐘清，王輝，等.IgA腎病CD68、AngII表達及尿蛋白與腎間質損傷的關系[J].中華臨床醫師雜志，2012，6（19）：5865-5868.
[2]王惠，何方方，張春.足細胞損傷機制研究進展[J].中國中西醫結合腎病雜志，2008，9（11）：1018-1021.
腎臟纖維化范文5
【關鍵詞】水飛薊素；腎小管間質纖維化；轉化生長因子-β1 腎小管間質纖維化（renal tubulointerstitial fibrosis，TIF）幾乎是所有慢性腎臟疾病發展的最終結局，是導致終末期腎功能衰竭的主要原因之一[1]。這個過程受許多因素影響，其發展機制涉及許多方面。近年來研究表明轉化生長因子-β1（TGF-β1）在TIF進程中具有重要的促進作用[2]。本文旨在探討應用水飛薊素延緩腎小管間質纖維化可能機制?，F報告如下。
1 資料與方法
1.1 動物模型及分組 選用3月齡SD大鼠56只，體重200～250 g，隨機分為：梗阻組（24只）、治療組（24只）、假手術組（8只）。大鼠行氯胺酮50 mg/kg麻醉，取左旁正中切口剪開腹壁，以4號手術線將左輸尿管近端兩處結扎。假手術組同樣處理但不結扎。其中于術前30 min治療組開始給予水飛薊素30 mg/kg灌胃，1次/d；假手術組和梗阻組給予等量生理鹽水灌胃處理。UUO大鼠于術后第7天、14 d、21 d隨機收獲8只，假手術組于第21天一次處死。取腎臟，10%多聚甲醛固定。免疫組織化學法檢測腎臟TGF-β1的表達情況和RT-PCR法檢測各組腎組織TGF-β1mRNA表達水平。實驗過程中梗阻組第14天、21 d時間點各死亡大鼠1只。
1.2 免疫組化 采用SABC法檢測腎組織中的TGF-β1，操作步驟按SABC試劑盒說明書進行。高倍鏡（×200）下在每張不包含腎小球和血管的腎小管間質區域隨機選取10個不重疊的視野，應用IDA-2000高清晰度數碼圖像分析系統進行圖像采集，經灰度變換將陽性染色區域面積與該視野總面積百分比，計算平均值作為該樣本的百分比值。
1.3 RT-PCR PCR 引物合成：上海申工生物工程公司。引物序列及產物如下。
作者單位：453000 新鄉市中心醫院兒一科（王成祥）；新鄉醫學院第一附屬
醫院兒二科（韓子明） 采用凝膠成像攝片及分析 用瓊脂糖凝膠電泳圖像分析系統（SYNGENE公司）在紫外光下采集圖像并分析，分析時TGF-β1與β-actin擴增條帶的吸光度值比值作為各指標mRNA相對表達水平。
1.5 統計學方法 各組數據均采用均數±標準差（x±s）表達，組間差異采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD檢驗法。由SPSS11.5統計軟件進行統計學處理。
2 結果
2.1 腎組織免疫組化變化 假手術組腎組織微量表達TGF-β1，主要位于腎小球系膜和上皮細胞，小管主要表達于遠曲小管；梗阻組和治療組腎組織表達TGF-β1逐漸增強，遍布皮髄質損傷的腎小管，除腎小管上皮細胞有陽性表達外，增殖的單核巨噬細胞TGF-β1亦有表達。各觀察時間點治療組較梗阻組減少（P
2.2 RT-PCR結果 假手術組大鼠腎臟存在少量TGF-β1mRNA表達。UUO大鼠各組隨著病情進展，腎組織表達TGF-β1mRNA逐漸增強，高峰持續至21 d實驗結束。治療組腎臟組織表達TGF-β較梗阻組減少（P均
3 討論
水飛薊素是從水飛薊植物提取的混合物，是一種黃酮醇類化合物，主要含水飛薊賓、水飛薊寧、水飛薊醇等。水飛薊素作為一種傳統藥物曾廣泛用于防治肝臟纖維化。它主要通過下調TGF-β1在肝內的表達，改變肝枯否細胞的功能，抑制炎癥反應，有效阻止肝纖維化[3]。韓子明等[4]應用水飛薊素治療大鼠腎小管間質纖維化，明顯延緩了腎小管間質纖維化。TGF-β1表達增加與腎間質纖維化關系密切。本實驗研究結果顯示：梗阻組、治療組腎組織表達TGF-β1逐漸增強，遍布皮髄質損傷的腎小管，除腎小管上皮細胞有陽性表達外，增殖的單核巨噬細胞TGF-β1亦有表達。RT-PCR結果顯示TGF-β1mRNA與蛋白表達水平在UUO大鼠術側腎臟漸進性增加的情況，反映了相似的分布變化規律。這與文獻報道相一致。經水飛薊素治療的治療組腎臟組織各觀察時間點TGF-β1mRNA與蛋白表達均較梗阻組減少（P
參 考 文 獻
[1] Li M.X， Liu B.C. Epithelial to mesenchymal transition in the progression of tubulointerstitial fibrosis. Chinese Medical Journal，2007， 120， 1925–1930.
[2] Wynn TA. Cellular and molecular mechanisms of fibrosis. J Pathol.2008，214：199-210.
腎臟纖維化范文6
慢性腎臟病近年在我國的發病率呈逐漸增高的趨勢。我國成人CKD(chronic kidney disease,CKD)患病率大致在9.4%~13.6%,而且發病率仍然在增加,每年達到7%以上[1]。同全世界一樣,我國CKD也已開始呈現流行病學特點,成為一個必須重視的衛生問題。如未能積極控制,隨著病情的進展,最終都將導致腎小球硬化及腎間質纖維化,從而進展為終末期腎臟病(ESRD)。根據2007年國際腎臟病學會最新資料,全世界有超過5億人患有不同的腎臟疾病,每年超過百萬人死于慢性腎臟疾病及并發的心腦血管疾病。目前研究發現生長因子(如,轉化生長因子-β1、結締組織生長子CTGF、血小板源生長因子(PDGF)等為促纖維化因子,近年大量研究結果顯示,雖然多種細胞因子參與腎間質纖維化的發生發展,但研究最多的和作用最明顯的是轉化生長因子-β1(transforming growth factorβ1),本文主要對轉化生長因子-β1與腎纖維化的關系作一綜述?，F報告如下。
TGF-β的生物學特性
哺乳動物中TGF-β只存在TGF-β1,2,3 3種形式。分別由不同的基因所編碼。這三者的基因有80%的同源性[2]。巨噬細胞、肌成纖維細胞和血小板合成的TGF-β1主要是無活性的TGF-β1,需經內皮細胞可能通過纖維蛋白溶解作用將其結構中的LAP裂解,使其轉為由二硫鍵相連的兩條各含112個相同氨基酸亞單位、分子量為25KD的活性TGF-β1,具有活性的TGF-β1能與其相應受體結合,發揮生理功能[3]。
