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中藥川芎范文1
中圖分類號:R212文獻標識碼:B 文章編號:1009-9166(2010)011(C)-0176-02
一、川芎的性狀、來源及化學成分
(一)川芎為傘形科藁本屬植物川芎Ligusticum chuanxiong Hort.的干燥根莖。其原植物自古以來就有數種,產地不同植物名異,因此芎一名常冠以地名,以示區別,古今用藥以產于四川的川芎為正品。川芎為我國的傳統中藥,也是著名的川產道地藥材,據統計,國內年產川芎5×106―6×106kg,四川占了全國產量的90%以上。川芎在我國有悠久的藥用歷史,歷代醫家均作為治頭痛、活血行氣、祛風止痛藥使用;現代臨床上主要用于治療心腦血管系統的疾病。在2005年版《中國藥典》Ⅰ部收載的564種成方制劑和單味制劑中,使用川芎的有85種,約占藥典收載中成藥的15%?，F對其開發利用現狀與前景作一簡要分析。
(二)植物形態。多年生草本,高40―70cm。莖直立中空,圓柱形,表面有縱溝,全株有濃烈香氣。2―3回羽狀復葉互生,小葉3―5對,卵狀三角形,羽狀全裂;葉柄基部呈鞘狀抱莖。復傘形花序頂生,總苞片3―6,傘幅7―20;小苞片線形;花梗10―24,花白色。雙懸果卵形。花期7―8月,果期9―10月。
(三)性狀鑒別。根莖為不規則的結節狀拳形團塊,直徑l.5―7cm。表面深黃棕色,粗糙皺縮,有多數平行隆起的輪節,頂端有凹陷的莖痕,下側及輪節上有多數細小的瘤狀根痕。質堅實,不易折斷,斷面黃白色或灰黃,具波狀環紋形成層,全體散有黃棕色油點。香氣濃郁而特異,味苦,辛,微回甜,有麻舌感。以個大飽滿、質堅實、斷面色黃白、油性大、香氣濃者為佳。
(四)化學成分。含揮發油、阿魏酸(ferulic acid),以及4-羥基-3-丁基釅內酯(4-hydroxy- 3- butylphthalide)、川芎嗪(tetramethylpyrazine)、藁本內酯(Ligustilide)、川芎酚(chuanxiongol)、瑟丹酸(sedanic acid)等。
(五)功能主治?；钛袣?祛風止痛。用于月經不調、經閉痛經。癥瘕腹痛、胸脅刺痛、跌撲腫痛、頭痛、風濕痹痛。
二、川芎的現代應用
(一)治療各種頭痛。河南省許昌縣人民醫院用川芎天麻散(川芎、天麻、僵蠶、柴胡、白芥子等)治療偏頭痛取得良好的效果[1]。由川芎、天麻等藥味組成的大川芎方臨床用于治療偏頭痛,現代藥理研究表明大川芎方對神經細胞缺血性損傷有保護作用[2]。古方川芎茶調散(川芎、荊芥、防風、細辛、白芷等)治療多種頭痛。鎮腦寧膠囊(川芎、藁本、細辛、白芷、水牛角等)用于治療多種原因引起的神經血管性頭痛。經上海醫科大學中西醫結合研究所老年醫學研究室對45例頭痛患者的臨床觀察,總有效率達91.1%,且未見有任何不良反應發生。
(二)防治冠心病、心絞痛。20世紀70年代初期研制的“冠心Ⅱ號”及后來研制的“川芎嗪注射液”被廣泛用于心腦血管疾病。以川芎、丹參、紅花、赤芍、降香組成的冠心Ⅱ號方對冠心病、心絞痛的療效較為肯定[3]。無錫中藥廠以鹽酸川芎嗪為其主要成分,以氮酮為透皮促進劑,制備的川芎貼膏劑,用于冠心病、心絞痛病的預防和病程穩定后的持續給藥[4]。湖北省仙桃市中醫院用芪桂川芎湯(黃芪、絞股藍、桂枝、川芎等)治療穩定型心絞痛患者,療效可靠。
(三)防治腦中風及腦出血。浙江中醫學院用川芎提取物穴位敷貼輔助治療中風后遺癥取得較好效果[5]。貴陽中醫學院第二附屬醫院神經科在中西醫結合基礎上加用桃仁、川芎二藥治療腦出血,可明顯促進腦水腫的吸收,改善患者神經功能。由三七、川芎、紅花等中藥組成的腦得生丸用于腦動脈硬化,缺血性腦中風及腦出血后遺癥等。
(四)治療腎炎。復方川芎膠囊(川芎、當歸),對增殖性腎炎患者的腎功能有一定的保護作用。在非胰島素依賴型糖尿病患者中早期應用黃芪、川芎進行干預治療,能減少微量蛋白尿轉變為顯性糖尿病腎病進而演化為腎功能不全的進程。
(五)治療呼吸系統疾病。川芎嗪靜脈滴注可治療哮喘急性發作,川芎、丹參、桃仁、蟬衣、辛夷、細辛、蒼耳子、黃荊子、黃芩、甘草等組成的川芎平喘合劑能治療哮喘發作期的患者。
(六)治療腹瀉。江蘇省泰山市高港人民醫院用川芎、紅花、赤白芍、三七等治療五更泄瀉、腹瀉。山東省聊城市中醫醫院用川芎、神曲、麥芽、白術治療血痢。
(七)保護肝臟。由甘肅省中醫院研制的傳統中藥制劑保肝利膽丸,主要由丹參、川芎、大黃、山楂、茵陳、大青葉等多味中藥組成,具有保肝、利膽等作用,用于乙型肝炎、遷延性肝炎、黃疸型肝炎等疾病的治療。川芎中有效成分之一川芎嗪不但廣泛用于治療腦血管疾病,現研究發現還能降低血清轉氨酶,維持和提高肝組織中SOD活性,清除自由基,減少其毒性,具有良好的抗脂質氧化損傷,顯示有抗肝纖維化作用。
(八)治療婦科疾病。傳統的婦科名方四物湯(當歸、川芎、熟地、白芍)用于調經活血。婦科養坤丸(熟地、甘草、川芎等)用于治療血虛肝郁而致月經不調,經閉,痛經,經期頭痛等癥。
(九)治療皮膚病。山西省渾源縣中醫院用莪術配伍川芎治療尋常疣。青海省中醫院用川芎注射液局部注射治療股外側皮神經炎,療效顯著。
(十)治療骨科疾病。山東省威海市文登中心醫院用川芎醋調后治療跟骨骨刺效果滿意,臨床用于治療跌撲腫痛、風熱頭痛、風濕痹痛、瘡瘍腫痛。福建省廈門中心醫院老年科用復方川芎離子導入液(川芎、當歸、生姜、防風、蜀椒等),治療頸椎病,肩周炎,骨關節等骨性關節炎。由羌活、川芎、葛根、秦艽、威靈仙等中藥組成的頸復康顆粒為頸肩痛類非處方藥,用于頸椎病引起的腦供血不足,頭暈,頸項僵硬,肩背酸痛,手臂麻木等癥。
(十一)保健用品。由當歸、川芎、紅花、熟地、桃仁等13味名貴中藥組成的太太口服液可調節女性內分泌,具有調經、除斑、養顏和延緩衰老的功效。川芎還可用于單純性肥胖癥。如三花減肥茶,將川芎與荷葉、玫瑰花、玳玳花、茉莉花配合,研末開水沖服代茶飲,功能祛痰逐飲,利水消腫,主治肥胖及高血脂癥。
(十二)化妝美容品。川芎等中草藥通過抑制酪氨酸的活性從而抑制黑色素生成,以達到皮膚美白的作用。如蓮方漢方化妝品系列添加了川芎等中藥材的萃取液。川芎還能通過擴張頭部毛細血管,促進血液循環而增加頭發營養。用于洗發液等可使頭發柔順和不易變脆,還可以提高頭發的抗拉強度和延伸性,防止脫發,亦能延緩白發生長,并減輕頭痛。如索芙特防脫生發香波。
(十三)食用。川芎天麻蒸鮮魚天麻具有驅風、補腦、降血壓、紓解四肢酸麻等功能,并對肝臟有疏通作用。而川芎可以行血行氣,并增強天麻功能,因而將兩者一起料理。而魚肉在五行中屬土,可以健脾養胃,最適合春天養身。川芎元貝燉海參海參味甘咸,性溫;元貝味甘,性平;川芎味辛,性溫。本品能活血行氣,養血除勞,祛瘀生新,補腎益精,壯陽祛痿,通腸潤燥,適用于風寒頭痛、關節痛等虛弱病癥。
作者單位:沈陽昆侖醫藥進出口有限公司
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中藥川芎范文2
[關鍵詞]川芎；HPLC；采收期；含量
川芎Ligusticum chuanxiong Hort.為傘形科藁本屬多年生草本植物，以根莖入藥，味辛、性溫，具有活血行氣、祛風止痛等功效[1]。川芎的主要藥效成分包括阿魏酸、總生物堿、內酯類化合物、揮發油和酚性成分等物質[2-3]。
目前川芎的質量評價主要以《中國藥典》2010年版（一部）的質量規范為標準，對川芎性狀、阿魏酸的含量（≥0.1%）、水分（≤12%）、總灰分（≤6%）、酸不溶性灰分（≤2%）、浸出物（≥12%）做了相關規定[1]。僅以阿魏酸一種藥效成分來評價川芎品質的高低有失偏頗，作者一致認為加之其他藥效成分綜合評價更為合理。如今測定阿魏酸單一成分含量的方法較多[4-9]，也有單一測定藁本內酯的方法[10]，或阿魏酸與川芎嗪、阿魏酸與藁本內酯2種成分同時測定的方法[11-12]，還有一些有關成分測定和川芎指紋圖譜建立的方法[5-6，13-16]，總之，這些方法只是單一成分及少數成分的定量測定，或是指紋圖譜中沒有確定具體成分、結構及藥效作用，只是對所測的材料確定了共有峰的數量及相對面積大?。ú荒艽硭幉闹械恼鎸嵑浚掖嬖诤臅r較長和溶液消耗較多的缺點，均不利于對川芎藥材品質的綜合評價，需要建立一套能同時測定多種藥效成分的快捷、高效而可靠的分析方法，以便全面、正確地綜合評價川芎藥材的品質。
另外，不同的采收期對川芎的品質影響較大，蔣桂華和饒凡[17-18]等對川芎的采收期有過研究，遺憾的是其涉及的采收期較少或只測定阿魏酸、生物堿和揮發油3個指標的含量，不足以篩選川芎的最適采收期；近年來，隨著種植結構和耕作制度的改變，川芎的收獲期逐漸提前，位于四川彭山縣的川芎產區也是雜交水稻的制種區，為保證制種水稻提前栽秧，川芎的采收期提前到了4月上中旬；位于都江堰和彭州市的川芎主產區，主要實行的是川芎-水稻輪作制，為了提高水稻產量，所選用水稻品種的生育期呈延長之勢，也在一定程度上影響了川芎的適時收獲。因此，系統研究川芎采收期特別是早收對川芎品質的影響可為川芎的生產提供理論依據。
本文建立了HPLC同時測定川芎藥材中阿魏酸、洋川芎內酯I、洋川芎內酯H、洋川芎內酯A和藁本內酯含量的方法，為川芎藥材及相關產品的品質評價提供新的方法參考，同時研究川芎采收期對川芎品質的影響對川芎的優質高產栽培及川芎-水稻輪作制度有重要意義。
1材料
安捷倫1100 LC系列液相色譜儀，ChemStation 化學工作站、VWD檢測器；CAP 225D電子天平（德國賽多利斯科學儀器有限公司），SB-5200 DTD超聲波清洗機（寧波新芝生物科技股份有限公司）。
試驗材料培養于川芎藥材采收期試驗田，川芎苓種來自都江堰市三江鎮，2011年8月10日栽種在都江堰市石羊鎮廣益村試驗田，土地平整，地力均一，pH為5.83，堿解氮58.34 mg?kg-1，速效磷114.27 mg?kg-1，速效鉀42.31 mg?kg-1，有機質23.82 g?kg-1。試驗采用單因素隨機區組設計，設置10個采收期，分別為2012年4月15日（栽后245 d，下同）、2012年4月20日（250 d）、2012年4月25日（255 d）、2012年4月30日（260 d）、2012年5月5日（265 d）、2012年5月10日（270 d）、2012年5月15日（275 d）、2012年5月20日（280 d）、2012年5月25日（285 d）和2012年5月30日（290 d）。重復3次，共30個處理，試驗小區面積為20 m2。施肥[19]、密度[20]及其他栽培管理措施保持小區間一致。
甲醇（HPLC級）和乙腈（HPLC級）購買于賽默飛世爾科技股份有限公司，乙醇（HPLC級）和冰乙酸（AC級）購買于成都科龍化工試劑廠，超純水由娃哈哈純凈水（杭州娃哈哈集團有限公司）代替，標準對照品阿魏酸和藁本內酯購買于中國食品藥品檢定研究院，洋川芎內酯I、洋川芎內酯H和洋川芎內酯A購于四川省中藥標準中心。
2方法與結果
2.1色譜條件
Symmetry C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相為0～5 min，乙腈-甲醇-1%冰醋酸（20∶40∶40），5～30 min，乙腈-甲醇-1%冰乙酸（60～100∶0∶40～0）；流速l mL?min-1；檢測波長0～4.3 min，321 nm，4.31～30 min，275 nm；柱溫35 ℃，進樣體積10 μL。
2.2對照品溶液的制備
分別準確稱取阿魏酸、洋川芎內酯I、洋川芎內酯H、洋川芎內酯A和藁本內酯等5種對照品32.000，50.000，50.000，50.000，100.000 mg，用甲醇定容到100 mL，搖勻，即得對照品儲備溶液。分別準確吸取一定量的上述儲備液于10 mL量瓶中，用40%乙醇稀釋至刻度，搖勻，即得到0，3.2，6.4，12.8，19.2，25.6，32.0 ，64.0 mg?L-1的阿魏酸對照品溶液0，25，50，100，200，300，400，500 mg?L-1 3種洋川芎內酯（I，H和A）對照品溶液和0，0.050，0.100，0.200，0.300，0.400，0.500，1.000 g?L-1的藁本內酯對照品溶液。
2.3供試品溶液的制備
2.3.1 回流提取法 取川芎樣品0.5 g，精密稱定，置于圓底燒瓶中，精密加入40%乙醇50 mL，稱重，加熱回流提取30 min，放冷，再稱定質量，用40%乙醇補足失重，搖勻，靜置，取上清液，濾過，續取濾液，0.45 μm微孔濾膜濾過，注入高效液相色譜儀，見圖1。
2.3.2 超聲提取法 取川芎樣品0.5 g，精密稱定，置于圓底燒瓶中，精密加入40%乙醇50 mL，稱重，超聲提取30 min（200 W，40 ℃），放冷，再稱定質量，用40%乙醇補足失重，搖勻，靜置，取上清液，濾過，續取濾液，0.45 μm微孔濾膜濾過，注入高效液相色譜儀，見圖1。
結果表明加熱回流法與超聲波法對提取川芎藥材中的阿魏酸和洋川芎內酯H的含量差異顯著，超聲法提取效果更佳，其余3種內酯類物質的含量差異不顯著，由于超聲波法對藥效成分的提取操作更加簡便，且效率更高，在工作過程中放出的熱量更少，故本文選用超聲波優化提取法[21]作為提取川芎藥材中上述5 種主要藥效成分的方法。
2.4方法學考察
2.4.1 線性關系 精密吸取2.2項下稀釋的對照品標準溶液10 μL注入液相色譜儀，平行測定3次，取平均峰面積。以進樣量（X，μg）為橫坐標，峰面積（Y）為縱坐標繪制標準曲線并進行回歸計算，得到阿魏酸、洋川芎內酯I、洋川芎內酯H、洋川芎內酯A和藁本內酯的回歸方程分別為Y=73.630X+1.888 （R2=1.000），Y=33.922X-4.682 （R2=0.999），Y=6.117X-3.739 （R2=0.999），Y=4.664X+0.493 （R2=0.999） 和Y=9469.800X +4.622（R2=0.999），分別在0.049～ 64，0.785～500，2.334～500，0.188～500，0.025～1 000 mg?L-1線性關系良好。
2.4.2 精密度試驗 精密吸取2.3.2項下提取的川芎樣品溶液10 μL，連續進樣8次，測得上述5種藥效成分的峰面積RSD均小于2%，表明儀器具有良好的精密度。
2.4.3 重復性試驗 取同一批川芎樣品6份，按2.3.2項下方法制備樣品溶液，吸取10 μL注入液相色譜儀，結果顯示上述5種藥效成分峰面積的RSD分別為1.8%，0.90%，0.30%，0.44%，1.1%，表明超聲法提取重復性良好。
2.4.4 穩定性試驗 取同一樣品溶液，室溫放置，并分別于0，1，2，4，12，24，48 h進行測定，結果顯示上述5種藥效成分峰面積RSD均小于1.6%，表明樣品溶液在48 h內穩定。
2.4.5 回收率試驗 精密稱取已知含量的樣品0.5 g，共6份，精密稱定并加入阿魏酸0.46 mg、洋川芎內酯（I，H和A）和藁本內酯各0.5 mg，按2.3.2項下方法制備樣品，加樣回收率按如下公式計算：回收率（%）= （測得量-樣品中量） /加入量×100。 結果顯示上述5種藥效成分的平均加樣回收率，見表1，分別為103.1%，94.44%，96.61%，97.55%和95.22%。
2.5樣品測定
分別取不同采收期的川芎樣品，按2.3.2項下方法制備樣品溶液，按2.1項下色譜條件測定，利用已建立的標準曲線計算樣品中的阿魏酸、洋川芎內酯I、洋川芎內酯H、洋川芎內酯A和藁本內酯含量，見圖2。
10次采收期樣品的平均阿魏酸質量分數為2.51 mg?g-1，在260 d時采收的樣品質量分數最高，為2.94 mg?g-1，比平均含量高17.1%，顯著高于除255 d之外的其他8個采收時期，與255 d采收的川芎阿魏酸含量差異在0.05水平時不顯著，在245，285，290 d采收的阿魏酸含量最低，分別比平均含量低21.8%，4.1%，12.1%，而最高含量比最低含量高出了42.7%。洋川芎內酯Ⅰ的平均質量分數為0.58 mg?g-1，270 d時采收的樣品質量分數最高，達0.70 mg?g-1，比平均含量高20.69%，顯著高于其他各采收期的含量，290 d 采收時的洋川芎內酯Ⅰ質量分數最低，僅0.44 mg?g-1，比270 d時采收的樣品含量低59.1%。245，260 d時采收的樣品洋川芎內酯H質量分數最高，分別為2.19，2.15 mg?g-1，在α=0.05水平時與其他各采收期的樣品含量差異顯著，除245 d采收的樣品外，隨著采收期推遲其含量呈先增加后降低的現象，290 d 采收時的洋川芎內酯H質量分數最低，僅1.25 mg?g-1，比260 d 采收的樣品含量低67.8%。洋川芎內酯A和藁本內酯的質量分數均在260 d采收時最高，分別為15.21，31.35 mg?g-1，與其他各采收期樣品的含量差異顯著，290 d 采收時其含量均最低，分別比最高含量低63.0%，35.0%。
隨著采收期的推遲，川芎藥材中5種主要藥效成分的含量呈先增加后減小的變化趨勢，其含量與采收期均呈二次或三次函數關系，并建立了相關的數學模型。通過上述5種藥效成分的含量與采收期的數學模型可知，早收和晚收均不利于提高川芎藥材的品質，255～270 d期間采收川芎藥材的阿魏酸、洋川芎內酯I和藁本內酯的含量最高，250～260 d期間采收川芎藥材的洋川芎內酯H和洋川芎內酯A的含量最高。綜合上述5種主要藥效成分含量和實際生產情況的角度來分析，260～265 d為最佳采收時期，此時川芎生長最旺盛，隨后開始逐漸衰老，藥效成分的含量慢慢降低。
3討論
3.1HPLC同時測定川芎5種藥效成分含量的方法
中藥材的質量評價正向快速、高效、樣品前處理簡單、高重復性、低成本、容易操作的方向發展。HPLC是中藥材及中藥飲片品質評價常用的方法，在川芎上常被用于構建指紋圖譜[5-6，13-16]來評價不同產地和不同品種的藥材的品質，但一般沒有具體藥效成分的含量；也有一些測定阿魏酸、川芎嗪、揮發油、香草醛、內酯類等單一成分或其中2～4種成分測定方法方面的報道[4-12]，由于同時測定的成分少，測定的效率不高，至今鮮見同時測定阿魏酸、洋川芎內酯I、洋川芎內酯H、洋川芎內酯A和藁本內酯等多種成分方面的研究。
同時對色譜溶劑（乙腈和甲醇）與不同濃度的乙酸和水組成的流動體系（甲醇-水、甲醇-乙酸、乙腈-水、乙腈-乙酸和甲醇-乙腈-乙酸等）、柱溫（25，30，35，40，45 ℃）和流速（0.7，0.8，0.9，1.0，1.1，1.2 mL?min-1）等單變量（因素）試驗，優化出了HPLC同時測定阿魏酸、洋川芎內酯I、洋川芎內酯H、洋川芎內酯A和藁本內酯含量，即選用流動相為0～5 min，乙腈-甲醇-1%冰醋酸（20∶40∶40），5～30 min，乙腈-甲醇-1%冰乙酸（60～100∶0∶40～0），流速l mL?min-1，檢測波長0～4.3 min，321 nm，4.31～30 min，275 nm，柱溫35 ℃，進樣體積10 μL。本文通過對測定方法的考察，建立了高重復性、快速的川芎藥材中主要藥效成分含量的測定方法且線性、精密度、重復性和回收率均良好，洗脫時間僅為30 min同時測定川芎藥材中5種重要的藥效成分，大大的提高了工作效率，同時也降低了測定成本，且所測定樣品的藥效成分含量與之前報道的結果一致[5，7-8，16，22-24]，所以本測定方法可以全面應用于川芎藥材的品質評價。
3.2采收期對川芎5種藥效成分含量的影響
川芎的品質不僅因產地[10]、品種而異，也受耕作方式[25]、施肥技術[22-24]等生產技術的影響。蔣桂華[17]、饒凡[18]等研究認為采收期對川芎的品質也有較大影響，但前者研究的時期是5月20日及其前后10 d共3個時期，且結果在年度和地點不盡一致；而后者研究的時間從頭年12月至次年6月，時間間隔過大，對生產上主要采收時間（5月上旬至中旬）分析不夠。本文采用單因素隨機區組試驗方法，從4月15日（245 d）起每5天采收1次直至5月30日（290 d）止，共10個采收期，采用上述建立的方法，分析了都江堰產區（海拔600 m左右）每個采收期樣品的阿魏酸、洋川芎內酯I、洋川芎內酯H、洋川芎內酯A和藁本內酯共5種藥效成分的含量，并建立了其與采收期的回歸關系，發現采收期對這5種成分均有顯著影響，隨著采收期的推遲，5種藥效成分的含量均呈現先增后減的趨勢，采收過早過晚都會降低各藥效成分的含量，綜合考慮阿魏酸、洋川芎內酯I、洋川芎內酯H、洋川芎內酯A和藁本內酯的含量，確定最佳采收期為4月30日（260 d）至5月5日（265 d）。
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Quantitative determination of 5 active ingredients in different harvest
periods of Ligusticum chuanxiong by HPLC
LIU Jin-liang1， FAN Qiao-jia2， ZHENG Shun-lin1， TAN Jie1， ZHOU Juan1， YUAN Ji-chao1*， YANG Shi-min1， KONG Fan-lei1
（1.College of Agronomy， Sichuan Agricultural University， Key Laboratory of Crop Ecophysiology and
Farming System in Southwest China， Ministry of P.R.， Chengdu 611130， China；
2. College of Veterinary Medicine， Sichuan Agricultural University， Ya′an 625014， China）
[Abstract] A simple and quick method is described for the determination of ferulic acid， senkyunolide I， senkyunolide H， senkyunolide A and ligustilide in rhizomes of Ligusticum chuanxiong. The 5 active ingredients in the sample was extracted using 40% ethanol and analyzed by reversed-phase high performance liquid chromatography （HPLC）. Chromatography separation was performed using Agilent 1100 series HPLC system with a Symmetry C18 column and gradient elution with a mixture of three solvents：solvent A， acetonitrile， solvent B， methanol and solvent C， 1% aqueous acetic acid， 0 min to 5 min A∶B∶C 20∶40∶40， 5 min to 30 min A∶B∶C 60 to 100∶0∶40 to 0. The effluent was monitored using a VWD detector set at 321 nm （0-4.3 min） and 275 nm （4.31-30 min）. The flow rate was set at 1 mL?min-1 and the injection volume was 10 μL. The column temperature was maintained at 35 ℃. The calibration curve was linear （r≥0.99） over the tested ranges. The average recovery was 94.44%-103.1% （n=6）. The method has been successfully applied to the analysis in different harvest periods of L. chuanxiong samples. In this paper， single-factor randomized block design to study the 5 components content of L. chuanxiong on ten collecting stages.For the L. chuanxiong collected from April 15th to May 30rd， the content of 5 ingredients increased primarily， and then decreased. Determine the appropriate harvest time has important significance to the promotion of the quality of L. chuanxiong.
中藥川芎范文3
摘 要：目的：探討中藥聯合胸段硬膜外阻滯對哮喘大鼠肺泡灌洗液GM－CSF、血清中IL－12水平的影響。方法：將健康大鼠40只(雌雄各半)按隨機數字表將其分為5組：空白組(A組)、哮喘模型組(B組)、中藥組(C組)、胸段硬膜外阻滯組(D組)、胸段硬膜外阻滯+中藥組(E組)。建立大鼠哮喘模型以及胸段硬膜外阻滯的模型，采用中藥灌胃及硬膜外給藥，用ELIsA法檢測大鼠血清當中IL-12、肺泡灌洗液中GM-CSF水平的變化。結果：哮喘大鼠血清中IL-12水平明顯降低，肺泡灌洗液中GM-CSF水平明顯升高。中藥與硬膜外阻滯以及二者的聯合應用均可抑制IL-12水平的下降和GM-CSF水平的升高。二者聯合應用組IL-12的下降、GM-CSF水平的升高低于中藥組與單純硬膜外阻滯組。中藥組與單純硬膜外阻滯組IL-12、GM-CSF含量無顯著性差異。結論：胸段硬膜外阻滯聯合中藥對IL-12的下降及GM-CSF的升高有明顯的抑制作用。
關鍵詞：中藥；哮喘；硬膜外阻滯；IL-12；GM-CSF
支氣管哮喘是呼吸道慢性變應性炎癥性疾病，其發病率及患病率不斷上升。筆者建立胸段硬膜外阻滯聯合中藥對哮喘大鼠模型，檢測大鼠血清中IL-12、肺泡灌洗液中GM-CSF的水平，從免疫學角度探討其對哮喘的防治作用，從而為此方法應用于臨床治療哮喘提供理論和實驗依據。
1 實驗材料
1．1 實驗動物選用健康SD大鼠40只(雌雄各半)，體重230―300g(由中國農業科學研究院哈爾濱獸醫研究所動物實驗室提供)，在室溫18℃―28℃，相對濕度40％一70％的屏障系統內飼養。
1．2 主要儀器霧化吸入器；低溫高速離心機；酶標儀；洗板機。
1．3 主要試劑卵蛋白(OVA)購自北京鼎國生物制品公司；AL(OH)，購自上?；た倧S；滅活百日咳菌苗由黑龍江省疾病預防與控制中心提供；IL-12、GM-CSF酶免檢測試劑盒由上海森雄科技實業有限公司提供。
2 方法
2．1 實驗大鼠分組 40只大鼠按雌雄各半隨機分為5組，空白對照組(A組，n=8)；哮喘模型組(B組，n=8)；中藥組(C組，n=8)；硬膜外阻滯組(D組，n=8)；硬膜外阻滯聯合中藥組(E組，n=8)。
2．2 哮喘大鼠模型的建立實驗第1天B組、C組、D組和E組每只大鼠腹腔注射抗原混懸液(內含生理鹽水加OVA10mg，AL(OH)3 100mg，滅活百日咳菌苗5×109個)ImL致敏；A組腹腔注射等量生理鹽水。第8天重復上述操作。
2．3 連續硬膜外阻滯大鼠模型的建立 參照董有靜等介紹的方法，根據實際情況作一定的改進，復制硬膜外阻滯大鼠模型。在第8-9日開始對D組、E組大鼠行硬膜外腔置管術并長期留置。用10％水合氯醛(4mL/kg)對大鼠進行腹腔注射麻醉，將麻醉后大鼠取俯臥位固定，消毒后，以大鼠第4～5椎體棘突為中心作一長約2cm縱行切口，分離脊突兩側筋膜及肌肉，用手術鉗夾住脊突向上提，切斷T4一T5問的韌帶，將制備好的無菌導管經黃韌帶破口插入，方向向頭側與脊柱縱軸平行，導管送入約2cm，如無清亮的腦脊液外溢即為位于硬膜外間隙。固定導管，避免感染及大鼠咬噬。
2．4 哮喘的激發中藥灌胃及硬膜外給藥第15天后。B組、C組、D組、E組開始用1％OVA(需新鮮配制)超聲霧化吸入激發哮喘，每口1次，每次20min共7日。在每次激發前30min，C組、E組給予濃縮中藥湯劑2mL(按體表面積公式)灌胃，D組、E組大鼠從第15天行硬膜外給藥，每日注入0.125％Bupivicaine 25μL，8時，17時各1次。
2．5 取材及樣品處理肺泡灌洗液的采集與處理：腹腔注射1.5％戊巴比妥鈉(0.3mL/100g)麻醉后，開胸后氣管插管，用生理鹽水5mL注入氣管肺組織內，反復抽吸3次，將抽取的肺泡灌洗液放入離心管中3000r/min離心5～10min。取上清液1mL用放置于放免用聚苯乙烯管中，上用塑料封口膜封好，用大頭針刺滿孔放置真空低溫冷凍干燥箱中(-20℃)冷凍，待凍結后打開真空泵過夜(24h)，待成干粉后取出。
血標本的采集：在采集肺泡灌洗液同時，打開胸腔進行心臟取血。采集血液2mL。注入已加入的離心管中，然后立即在4℃、3500r/min離心15-20min，分離后的血漿在一20℃保存。
2．6 檢測方法肺泡灌洗液檢測之前用加入試劑盒中提供的緩沖液200μL，分別取100μL用于檢測；血漿樣品復融后在4℃、3500r/min離心15-20min，各取上清100μL用于檢測。檢測方法按試劑說明書進行。
2．7 統計學處理全部數據均表示為x±s，用t檢驗比較各組結果。
3 結果
3．1 一般狀態觀察哮喘模型組大鼠在卵蛋白霧化吸入后出現搔鼻、抖毛、呼喚急促腹部翕動，易激惹，煩躁不安且噴嚏頻頻，飲水增多，甚則跌倒等動作。對照組(A組)大鼠行動敏捷，未見異常；C組、D組、E組經抗原激發后，也出現B組情況，但癥狀明顯減輕。
3．2各組大鼠細胞因子水平的比較由表1可以看出，哮喘大鼠BALF中GM-CSF水平較正常組明顯升高而血漿中IL-12水平明顯下降。中藥組、連續硬膜外阻滯組以及二者的聯合應用組均可抑制GM-CSF水平的升高以及IL-12水平的下降。中藥組與連續硬膜外阻滯組GM-CSF、IL-12水平無顯著性差異。二者聯合應用組GM-CSF水平低于中藥 組與單純硬膜外阻滯組，IL-12水平高于中藥組與硬膜外阻滯組，接近正常水平。
4 討論
GM-CSF是源于T、B淋巴細胞、巨噬細胞、成纖維細胞及間質細胞的一種糖蛋白，是一種多向性和多效性的細胞因子，對機體造血、免疫、抗感染能力有重要調節和促進作用，參與調節EOS成熟、分化、活化和脫顆粒以及凋亡等過程，在哮喘氣道炎癥的形成中發揮重要作用。在體外，GM-CSF可以刺激EOS的產生，EOS被公認為通過釋放毒性蛋白而在許多炎性和過敏性疾病中起著重要作用，哮喘是與粒細胞尤其是EO$的聚積和活化的炎癥反應有關的疾病。研究表明GM-CSF可延長EOS的壽命并對其有直接活化作用，還可促進EOS表面CD11。黏附分子的表達，以增強其在炎癥局部的募集，還可以增強EOS的細胞毒性及釋放毒性嗜酸蛋白能力，并能促進白三烯的合成。有研究表明，哮喘大鼠BALF中GM-CSF水平明顯升高，與哮喘發病有直接關系。
IL-12是由巨噬細胞、單核細胞、樹突狀細胞(DC)以及表皮內的朗罕細胞等抗原遞呈細胞(APC)，經過不同的刺激途徑而產生，現代哮喘理論認為，體內輔助T淋巴細胞(Th)亞群(Thl和Th2)失衡是導致哮喘發病的重要原因，哮喘發病時，Thl功能相對抑制，Th2功能相對亢進。Th亞群的分化受多種因素影響，其中IL-12作用關鍵。實驗證實，哮喘患者IL-12水平低于正常對照組，經變應原刺激后IL-12的生成量也顯著低于健康對照者，Nass-er等觀察到，過敏性哮喘患者呼吸道活檢組織中IL-12mRNA的表達較正常人的表達水平顯著降低。這說明IL-12在哮喘發病機制中起著重要作用。國外實驗已證實鼠肺部過敏性炎癥反應模型實驗中，IL-12確有抗炎和抗過敏效應；對靈長類動物模型，呼吸道局部吸入IL-12的治療，亦取得了較好療效。
本實驗結果表明，接受胸段硬膜外阻滯術的哮喘模型誘導哮喘時癥狀較對照組減輕，聯合中藥組基本上沒有哮喘癥狀，證明其對哮喘確實有防治作用。從本實驗中大鼠一血清IL-12及BALF中GM-CSF的變化看，胸段硬膜外阻滯術從細胞因子水平上影響著哮喘的發生。從聯合中藥組看大鼠的IL-12和GM-CSF水平接近正常組，可以看出。
中藥川芎范文4
[關鍵詞]多成分藥物；藥物代謝；序貫代謝；整體吸收；液質聯用
[Abstract]The multiple components in Chinese herbal medicines （CHMS） will experience complex absorption and metabolism before entering the blood system Previous studies often lay emphasis on the components in blood However， the dynamic and sequential absorption and metabolism process following multicomponent oral administration has not been studied In this study， the in situ closedloop method combined with LCMS techniques were employed to study the sequential process of Chuanxiong Rhizoma decoction （RCD）. A total of 14 major components were identified in RCD Among them， ferulic acid， senkyunolide J， senkyunolide I， senkyunolide F， senkyunolide G， and butylidenephthalide were detected in all of the samples， indicating that the six components could be absorbed into blood in prototype Butylphthalide， Eligustilide， Zligustilide， cnidilide， senkyunolide A and senkyunolide Q were not detected in all the samples， suggesting that the six components may not be absorbed or metabolized before entering the hepatic portal vein Senkyunolide H could be metabolized by the liver， while senkyunolide M could be metabolized by both liver and intestinal flora This study clearly demonstrated the changes in the absorption and metabolism process following multicomponent oral administration of RCD， so as to convert the static multicomponent absorption process into a comprehensive dynamic and continuous absorption and metabolism process
[Key words]multicomponent drug； drug metabolism； sequential metablism； integral absorption； LCMS
doi：10.4268/cjcmm20160703
多成分藥物代謝[12]由序貫代謝、并發代謝和多重代謝3部分組成。其中，序貫代謝是中藥類多成分藥物代謝研究的首要研究內容。中藥生物藥劑學分類系統[3]的構建堅持以多成分為整體，并注重每種成分受其他成分的影響，在發展過程中逐漸加大成分代謝對吸收的影響研究，生物藥劑學分類系統中的腸滲透性評價量化指標是終點性評價，但中藥的多成分在吸收前，需先面對消化液、消化酶、腸內細菌酶、內源性酶及自由基反應等引起的生物轉化，在透過胃腸道生物膜時，也有被上皮細胞中的藥物代謝酶生物轉化的可能[4]，這些原因中哪個因素主導引起腸滲透性變化是闡述中藥生物藥劑學分類屬性變化機制的重要方面。因此本研究采用多成分藥物代謝序貫代謝研究方法進行，力爭為中藥生物藥劑學分類系統中的腸滲透性評價提供代謝原因闡述。
多成分藥物發揮藥效是多種成分面對多個靶點的綜合作用[5]，這些成分到達靶點的代謝過程決定了它們產生療效的可能性，因此天然多成分藥物的多種成分代謝動態過程研究已經發展成為一個熱點科研方向[6]。目前單一成分代謝研究比較成熟[7]，2種成分之間的代謝性相互作用也闡述清晰[8]，但是將2種以上多成分作為整體研究代謝輪廓的方法還較少見，所以本研究堅持多成分同時測定的原則，按照口服多成分藥物的消化道歷程，開展多成分總體代謝輪廓研究，采用對照比較法依次進行。①消化液及消化酶代謝：分別在人工胃液、人工腸液的酸堿物理環境及消化酶作用下多成分是否發生代謝轉化。②腸道菌群代謝：對比在有無腸道菌情況下多成分代謝情況。③腸壁代謝：對比在有無腸壁細胞內代謝酶抑制劑情況下多成分代謝情況。④肝代謝研究：對比肝門靜脈血和腹主動脈血的多成分差異，闡述在肝內代謝情況。因4個過程在空間和時間上保持連續性，因此命名為“序貫代謝”。
川芎是高頻使用的傳統常用中藥[9]，課題組前期已經運用高效液相色譜法對川芎多成分序貫過程進行了研究[10]，該研究中表明以色譜峰為代表的川芎多成分中，原型吸收種類較多，代謝轉化種類相對較少。本論文在前期研究基礎上，運用在體封閉腸環法結合液質聯用技術，定性分析成分類型，系統闡述川芎多成分的腸道菌群代謝、腸壁代謝和肝代謝的序貫過程，并遴選出以原型吸收為主的成分作為下一步中藥生物藥劑學分類系統中腸滲透性評價的首選成分。
1材料
Thermo 液質聯用系統（美國賽默飛世爾科技），包括ultimate 3000高效液相色譜儀，自動進樣器，DAD檢測器，柱溫箱，二元泵和LTQ Orbitrap質譜；Xcalibur， Metworks和 Mass Frontier 70用于數據采集和處理；電子分析天平（BT25S，北京賽多利斯儀器有限公司）；電熱恒溫水浴鍋（DZKW4，北京中興偉業儀器有限公司）；超聲波清洗器（KQ500DE，昆山超聲儀器有限公司）；115PK離心機（德國Sigma 公司）；蠕動泵（BT1001F，保定蘭格恒流泵有限公司）；QL901漩渦混和機（其林貝爾儀器制造公司）。
川芎飲片（購買于北京同仁堂藥店）經北京中醫藥大學張貴君教授鑒定為傘形科藁本屬植物川芎Ligusticum chuanxiong的干燥根莖；對照品阿魏酸（Aladdin，純度99%，批號F1110835g）、藁本內酯（中檢院，純度≥98%，批號ZJ0724BB13），對照品洋川芎內酯A（純度≥98%，批號140914）、洋川芎內酯Ⅰ（純度≥98%，批號141027）和正丁基苯酞（純度≥98%，批號130907）購于成都普菲德生物技術有限公司；甲醇、乙腈（色譜純，Fisher公司），1氨基苯并三唑（北京百靈威有限公司），娃哈哈純凈水（杭州娃哈哈集團有限公司）。其余試劑均為分析純。
SD大鼠，雄性，體重280～330 g，斯貝福（北京）實驗技術有限公司提供，許可證號SYXK（京）20110024，動物飼養于北京中醫藥大學實驗動物部標準屏障環境內，自由飲食，明暗節律12 h/12 h。實驗前適應性喂養大鼠1周以上，自由飲水和進食。
2方法
21溶液配制
211KrebsRinger′s營養液（KR液）配制稱取NaCl 780 g，KCl 035 g，CaCl2 037 g，NaHCO3 137 g，NaH2PO4 032 g，MgCl2 002 g，葡萄糖140 g；加蒸餾水定容至1 000 mL，調節pH到739～741，放置備用。
212川芎水煎液的制備取川芎飲片100 g，精密稱定，置具有冷凝回流裝置的圓底燒瓶中，加1 000 mL去離子水，浸泡1 h后回流提取15 h，趁熱過濾出提取液。再向燒瓶中加入1 000 mL去離子水，回流提取1 h，趁熱過濾出提取液。合并提取液。濾液經過水浴濃縮，并用KR液定容至100 mL，制成含生藥1 g?mL-1的溶液，作為灌腸藥液。取適量水提液加蒸餾水制成相當于藥材質量濃度為10 g?L-1溶液，用022 μm濾膜過濾，取續濾液進行液質分析。
213對照品的配制分別精密稱取適量阿魏酸、藁本內酯、洋川芎內酯I、正丁基苯酞對照品于10 mL量瓶，甲醇溶解稀釋為質量濃度約為10 mg?L-1的對照品溶液進行液質分析。
22實驗動物手術方法
221腸道菌代謝研究15只SD大鼠禁食12 h，自由飲水，分為2組，12只為供血組，3只為實驗組，腹腔注射戊巴比妥鈉麻醉，實驗組腹主動脈取血，血液放于肝素化離心管置于37 ℃水浴鍋中保溫。在實驗組大鼠頸靜脈插管輸血，保證實驗過程的血液損失得到補充，腸系膜靜脈插管收集血液。沿其腹中線打開腹腔約3～4 cm選取結腸，在腸段首末端事先系上絲線，用注射器將藥液注入腸腔。當藥液到達腸段末端，用絲線結扎，然后取下注射器并結扎腸段前段。通過蠕動泵從頸靜脈給實驗鼠供血。在蠕動泵另一端開始收集血液，同時結扎門靜脈，待實驗完成后，收集腸道內藥液。
無腸道菌實驗手術方法與有腸道菌實驗相同，不同之處在于藥液被注入小腸前，于小腸末端切一橫向口，用溫熱的生理鹽水洗凈腸內容物后再進行后續操作。實驗持續15 h，收集的血液放入肝素化的離心管中，4 000 r?min-1離心10 min，取上清液加入3倍量甲醇，渦旋2 min，1萬 r?min-1離心10 min，取上清液過045 μm濾膜，進行液相分析。
222腸壁酶代謝研究采用無腸菌實驗的手術方法。唯一不同的是在多成分藥液注入腸道循環前，非特異性CYP450酶抑制劑1氨基苯并三唑需要加入到沖洗液和藥液中。1 h后腸系膜靜脈收集18 mL血樣，處理方法同腸道菌實驗。
223肝代謝研究肝代謝后多成分進入血液系統，此實驗也是采用封閉腸環法，將川芎藥液封閉在結腸，不需要供血，不結扎門靜脈，在1 h后腹主動脈采血約10 mL，樣品處理同腸道菌實驗。
23液相和質譜條件
色譜條件：采用Thermo Bos Hypersil C18色譜柱（21 mm ×150 mm， 24 μm），流動相003%甲酸水（A）甲醇（B），梯度洗脫（0～3 min，20%～25% B；3～7 min，25%～58% B；7～10 min，58%～60% B；10～15 min，60%～65% B；15～20 min，65%～80%B；20～24 min，80%～80% B），流速035 μL?min-1，柱溫30 ℃，檢測波長280 nm，進樣量2 μL。
質譜條件：ESI源，正離子模式檢測，噴霧氣壓34474 kPa，干燥氣（N2）流速 50 L?min-1，干燥氣體溫度 330 ℃，氣化室溫度為 350 ℃，毛細管電壓+4 000 V，電暈放電電流正離子模式為40 μA，破碎電壓（Fragmentor）為100 V；掃描范圍100～1 000。
3結果
31川芎水煎液中主要成分液質聯用分析
采用23下的色譜條件能夠對川芎水煎液的成分實現較好的分離，見圖1，對色譜圖進行分析，結果表明川芎中主要成分為內酯類成分或酚酸類成分。對各色譜峰進行了串聯質譜分析，結果見表1。
化合物1一級質譜準分子離子峰為m/z 195[M+H]+，二級質譜中有m/z 177為[M+H-H2O]+的碎片離子峰，與阿魏酸對照品數據一致，故化合物1為阿魏酸。
化合物2一級質譜準分子離子峰為m/z 227[M+H]+，推測相對分子質量為226，最大吸收波長為279 nm，與文獻[11]報導的洋川芎內酯J相符，證明該化合物為洋川芎內酯J。
化合物3和4的質譜圖相似，只是質譜響應豐度略有不同。在一級質譜準分子離子峰為m/z 247[M + Na]+，證明該化合物的相對分子質量為224。二級質譜中均存在m/z 207[M+H-H2O]+，189[M+H-2H2O]+等特征碎片離子，其UV最大吸收波長為277 nm，保留時間、質譜數據和紫外數據均分別與洋川芎內酯I和H對照品一致，因此化合物3和4分別為洋川芎內酯I和H。
化合物5一級質譜準分子離子峰為m/z 229[M+Na]+，一級質譜中未出現m/z 207[M+H]+，推測該化合物相對分子質量為206，二級質譜中存在m/z 189[M+H-H2O]+，161[M+H-H2O-CO]+等碎片離子，其最大吸收波長為327 nm，與文獻[11]報導的洋川芎內酯F相符，推測該化合物為洋川芎內酯F。
化合物6一級質譜準分子離子峰為m/z 229[M+Na]+，207[M+H]+證明該化合物相對分子質量為206，二級質譜中存在m/z 189[M+H-H2O]+，161[M+H-H2O-CO]+等碎片離子，其質譜數據與文獻[12]報導一致，推測該化合物為3羥基丁基苯酞。
化合物7一級質譜準分子離子峰為m/z 209[M+H]+，231[M+Na]+，推測其相對分子質量為208，在二級質譜中存在m/z 191，173，163，145等類似于內酯類的碎片離子，其UV最大吸收波長為279 nm，與文獻[9]報導的洋川芎內酯G相符，因此化合物7推測為洋川芎內酯G。
化合物8一級質譜中準分子離子峰為m/z 193[M+H]+，同時還有m/z 215[M+Na]+，推測其相對分子質量為192，其二級譜產生m/z 175[M+H-H2O]+，147[M+H-H2O-CO]+等碎片離子，其UV最大吸收波長為279 nm，質譜數據和紫外數據均與洋川芎內酯A對照品一致，因此化合物8為洋川芎內酯A。
化合物9，10和12一級質譜具有相同的準分子離子峰m/z 191[M+H]+，化合物9二級質譜產生碎片峰m/z 173[M+H-H2O]+，145[M+H-H2O-CO]+，其UV最大吸收波長為275 nm，經與對照品比對，化合物9確定為正丁基苯酞。化合物10和12有相同的裂解碎片，所以推測是順反異構體。其二級質譜中除了有m/z 173，145外，還有m/z 163[M+H-CO]+，155[M+H-2H2O]+，149[M+H-C3H6]+，117[M+H-H2O-CO-C2H4]+等碎片峰，其UV最大吸收波長在278 nm，與文獻[89]報道藁苯內酯一致。一般情況下，在C18柱中反式較順式先出峰，所以化合物10為E藁苯內酯，化合物12為Z藁苯內酯。
化合物11和14質譜圖相似，裂解碎片均相同，推測為同分異構體。一級質譜中產生分子離子峰m/z 279[M+H]+，推測相對分子質量為278。同時二級質譜產生m/z 261[M+H-H2O]+和233[M+H-H2O-CO]+等類似于內酯類的裂解碎片，根據元素組成分析該化合物分子式為C16H22O4，相對分子質量實測值為279158 29，與理論值279159 09相差28，其UV最大吸收波長在278 nm，與文獻[9]報導洋川芎內酯M和Q數據類似，故暫時推測化合物11和14分別為洋川芎內酯M和Q。
化合物13一級質譜中產生準分子離子峰m/z 195[M+H]+，二級裂解質譜中產生m/z 177[M+H-H2O]+和149 [M+H-CO]+的碎片峰。根據元素組成分析該化合物分子式為C12H18O2，相對分子質量實測值為195137 3，與理論值195137 9相差34 ppm，與文獻[9]報道的新蛇床內酯的結構相同，故化合物13推測為新蛇床內酯。
32川芎水煎液多成分吸收與序貫代謝研究
由于前期結果已經表明川芎多成分在人工胃液和人工腸液中穩定性良好[7]，因此繼續運用液質聯用技術對川芎多成分在腸壁、腸道菌群和肝臟3個部位序貫過程的吸收和代謝進行了研究，結果見表2。
由表中數據分析可知，阿魏酸，洋川芎內酯J，I，F，G，3羥基丁基苯肽在所有樣品中均存在，說明這6個成分可以一直以原型的形式吸收入血；正丁基苯酞，E藁本內酯，Z藁本內酯，新蛇床內酯，洋川芎內酯A，Q，在所有樣品中均不存在，說明這6個成分不吸收或者在進入肝門靜脈血前已經被代謝；洋川芎內酯H在肝代謝的樣品中不存在，說明其會被肝代謝；洋川芎內酯M在有菌樣品和肝代謝樣品中不存在，而在其他2個樣品中存在，說明其會被腸道菌和肝代謝。
4討論
由實驗結果可知，阿魏酸，洋川芎內酯J，I，F，G，3羥基丁基苯肽這6個成分能以原型吸收入血，并在序貫代謝的各個階段均不代謝，可作為中藥生物藥劑學分類系統中首選腸滲透性評價成分。正丁基苯酞，E藁本內酯，Z藁本內酯，新蛇床內酯，洋川芎內酯A，Q這6個成分因其難以在肝門靜脈中查見，所以不適于選擇作為腸滲透性評價成分。洋川芎內酯M在腸道內可被菌群代謝，其吸收情況受菌群影響不穩定，難以找到包含腸道菌群影響因素的實驗手段，不適宜作為中藥生物藥劑學分類系中的腸滲透性評價成分。洋川芎內酯H可以原型吸收后只在肝發生代謝，可用于作為腸滲透性評價的可選成分，但該成分肝代謝轉化效率及產物與原型化合物定量吸收回溯問題十分復雜，只能作為腸滲透性評價的備選方案。
通過川芎多成分序貫代謝過程動態追蹤研究，可全面地、完整地、系統地描述多成分吸收代謝輪廓。多成分吸收代謝一直是科學研究的難點，但作為中藥的用藥特點，又是不可回避的內容。隨著近年來腸道首過代謝越來越受到研究人員的重視[13]，對于多成分藥物肝腸吸收代謝的差異性及連續性描述也變得越來越重要。因此，在研究中應該堅持多成分同時測定的原則，并注重過程的序貫銜接的整體性，才能使多成分為支撐的中藥生物藥劑學分類系統中腸滲透性評價成分選擇更具科學性。
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中藥川芎范文5
[關鍵詞] 川芎； 乳香沒藥； 揮發油； 透皮吸收； 皮膚血流； 促透機制
[Abstract] The aim of this paper was to explore the effects of Frankincense and Myrrh essential oil on transdermal absorption in vitro of Chuanxiong， and to investigate the possible penetration mechanism of their essential oil from the perspective of skin blood perfusion changes. Transdermal tests were performed in vitro with excised mice skin by improved Franz diffusion cells. The cumulative penetration amounts of ferulic acid in Chuanxiong were determined by HPLC to investigate the effects of Frankincense and Myrrh essential oil on transdermal permeation properties of Chuanxiong. Simultaneously， the skin blood flows were determined by laser flow doppler. The results showed that the cumulative penetration amount of ferulic acid in Chuanxiong was （8.13±0.76） μg?cm-2 in 24 h， and was （48.91±4.87）， （57.80±2.86）， （63.34±4.56）， （54.17±4.40）， （62.52±7.79） μg?cm-2 respectively in Azone group， Frankincense essential oil group， Myrrh essential oil， frankincense and myrrh singly extracted essential oil mixture group， and frankincense and myrrh mixed extraction essential oil group. The enhancement ratios of each essential oil groups were 7.68， 8.26， 7.26， 8.28， which were slightly greater than 6.55 in Azone group. In addition， as compared with the conditions before treatment， there were significant differences and obvious increasing trend in blood flow of rats in Frankincense essential oil group， Myrrh essential oil group， frankincense and myrrh singly extracted essential oil mixture group， and frankincense and myrrh mixed extraction essential oil group when were dosed at 10， 20， 30， 10 min respectively， indicating that the skin blood flows were increased under the effects of Frankincense and Myrrh essential oil to a certain extent. Thus， Frankincense and Myrrh essential oil had certain effect on promoting permeability of Chuanxiong both before and after drug combination， and may promote the elimination of drugs from epidermis to dermal capillaries through increase of skin blood flow， thus enhancing the transdermal permeation amounts of drugs.
[Key words] Chuanxiong； Frankincense and Myrrh； essential oil； transdermal absorption； skin blood flow； penetration mechanism
中藥經皮給藥可發揮局部或全身治療作用，早在漢代《五十二病方》中，就有“藥浴法”治療小兒“子癲”的記載，清代外治專著《理瀹駢文》幾乎把一切見聞的病都用膏藥治療，表明中藥經皮給藥運用的悠久歷史與重要地位[1]。現代研究發現應用透皮吸收促進劑可改善藥物透皮吸收，且中藥揮發油大多具有良好的透皮吸收促進效果。改變皮膚角質層結構組成是目前公認的中藥揮發油皮膚促透機制[2-3]，也有研究者認為可通過促進皮膚血流來實現促透效果[4]。
川芎味辛、性溫，具“活血行氣，祛風止痛”功效，阿魏酸是其中一個主要有效成分，具抗氧化、抗菌消炎、抗血栓、抗腫瘤等多種藥理活性，其pH穩定性好、相對分子質量小、親脂性強、透皮滲透性能好，醫藥、保健品、化妝品等行業有較高的應用價值[5]。川芎以經皮給藥系統給藥可避免口服的肝臟“首過效應”，并可維持穩定而持久的血藥濃度。在中醫外治處方中川芎常與乳香、沒藥配伍，廣泛應用于心血管疾病、風濕痹痛、月經不調、跌撲腫痛等治療中[6]。乳香、沒藥以揮發油類成分為主，因此研究乳香、沒藥揮發油對川芎的促透作用及其機制或可闡述其配伍意義。
本研究從經皮滲透的角度，研究川芎提取物阿魏酸的經皮滲透特性，比較川芎與乳香、沒藥配伍前后阿魏酸的透皮量變化，探索乳香、沒藥對川芎透皮吸收的影響，并從皮膚血流變化角度闡述其促透機制，為外用復方制劑配伍研究提供新思路。
1 材料
TT-6D 型藥物透皮擴散試驗儀（天津市正通科技有限公司，配套改良Franz擴散池）；Agilent 1260型高效液相色譜儀（美國安捷倫公司）；Moor VMS型激光多普勒血流與溫度檢測儀（英國Moor Instruments 公司）；ESJ182-4型電子分析天平（1/10萬沈陽龍騰電子有限公司）；XW-80A渦旋混合器（上海青浦滬西儀器廠）；KQ3200E型超聲波清洗器（昆明市超聲儀器有限公司）。
乳香飲片（批號150914，產地云南）、沒藥飲片（批號151227，產地云南）、川芎飲片（批號150805，產地四川），均購自江西樟樹藥材市場，經江西中醫藥大學中藥鑒定教研室鄧可眾教授鑒定為正品；乳香、沒藥揮發油采用2010年版《中國藥典》附錄揮發油提取甲法提取，得淡黃油狀溶液，無水硫酸鈉脫水后密封避光保存。
阿魏酸（純度>98%，成都普菲德生物技術有限公司，批號151103）；1，2-丙二醇（西隴化工股份有限公司，批號151123）；冰醋酸（西隴科學股份有限公司，批號160517），甲醇、乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。
健康雄性KM小鼠，體重（20±2） g，健康雄性SD大鼠，體重（200±20） g，均購自湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，許可證號SCXK（湘）2013-0004。
2 方法
2.1 樣品的制備
2.1.1 川芎溶液制備 取川芎藥材適量，加8倍量80%乙醇，提取3次，每次2 h，合并濾液，減壓回收乙醇，濃縮，減壓干燥；精密稱取川芎提取物適量，加1，2-丙二醇-蒸餾水（80∶20）溶劑系統超聲溶解完全，即得。
2.1.2 實驗用藥制備 分別取適量乳香揮發油、沒藥揮發油、乳沒單提等體積混合揮發油、乳沒等重混合提取揮發油、氮酮于10 mL量瓶中，加川芎溶液溶解定量至刻度線，超聲并渦旋使揮發油充分分散，即得。
2.2 HPLC測定川芎阿魏酸含量
2.2.1 色譜條件 菲羅門C18色譜柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流動相為乙腈-l%醋酸溶液（20∶80），流速1.0 mL?min-1，檢測波長為321 nm，柱溫30 ℃，進樣量20 μL，阿魏酸的相對保留時間約為12.00 min，理論塔板數阿魏酸峰計算不低于5 000。
2.2.2 方法學考察 配制阿魏酸對照品溶液、體外透皮試驗空白接受液及川芎提取物體外透皮試驗接受液，考察方法專屬性、線性關系、精密度及加樣回收率、穩定性。專屬性見圖1，接受液中其他成分對川芎阿魏酸的測定無干擾，阿魏酸在0.123～12.3 mg?L-1線性關系良好（Y=63.524X-2.062 6，r=0.999 9），低、中、高3質量濃度（0.123，2.46，12.3 mg?L-1）的日內精密度分別為0.96%，0.18%，0.37%，日間精密度分別為2.3%，0.51%，1.9%，加樣回收率分別為103.8%，99.35%，95.71%；川芎提取物體外透皮試驗接受液的含量測定，2日內RSD為0.81%。
2.3 體外透皮研究
2.3.1 離體小鼠腹皮的制備 小鼠頸椎脫臼處死，剝離取下腹部去毛后皮膚，小心除去皮下脂肪及粘連物，生理鹽水漂洗至無渾濁，濾紙吸干，置于錫箔紙上，-20 ℃保存，于實驗前1 d取出，自然解凍。
2.3.2 川芎體外透皮研究 采用改良的 Franz擴散池，容積為5.0 mL，有效擴散面積為0.64 cm2，將處理好的皮膚置于擴散池上，真皮層面向接受池，表皮層面向供給池，夾緊，置于（37±0.5） ℃水浴中，加入轉子（轉速100 r?min-1）。準確移取2 mL供給液，注入供給池中，接受池中準確加入30%無水乙醇的生理鹽水，在0.5，1，2，4，6，8，10，12，24 h時取樣1 mL，補加等體積新鮮接收液，所得樣品以0.22 μm微孔濾膜過濾，測定阿魏酸含量。
2.4 皮膚血流量
2.4.1 動物分組與給藥 將SD大鼠編號隨機分為5組，分別為溶劑基質組、乳香組、沒藥組、乳沒單提混合組、乳沒混合提取組（每組為1，2-丙二醇-蒸餾水80∶20溶劑系統配制的3%乳香、沒藥揮發油樣品處理）。大鼠腹腔注射10%水合氯醛麻醉，電動剃毛器剔除耳局部毛發，并使大鼠適應恒溫實驗室內溫度30 min，使體表溫度與室溫平衡。恒溫實驗室的溫度控制在29～30 ℃，實驗前后溫度變化不超過1 ℃。實驗時分別給各組大鼠耳內側皮膚等面積均勻涂布等體積相應揮發油樣品。
2.4.2 激光多普勒血流儀檢測 實驗開始，受試大鼠取俯臥位，平伸并固定四肢，從表面尋找大鼠耳局部血管，固定激光多普勒血流檢測探頭于大鼠耳外側，給藥前后儀器示數均穩定5 min后開始記錄數據，給藥前連續監測30 min基礎血流值。給藥后每10 min記錄1次，取平均值，共監測觀察至60 min處。保持給藥前后檢測位點不變。
2.5 稻荽理與分析
2.5.1 體外透皮數據 根據如下公式計算各個時間點的阿魏酸累計透過量。
Qn=VCn+∑n-1i=1CiViA
式中A為有效經皮吸收面積，V為接受液體積，Vi為取樣體積，Cn為第n個取樣點測得的接受液中藥物質量濃度，Ci為第i（i≤n-1）個取樣點測得的接受液中藥物質量濃度。以不同時間的Q對t作圖，對作圖后直線部分的Q對t進行線性回歸，所得斜率即為藥物的經皮吸收速率（Jss），直線部分反向延長線與X軸的交點即為滯后時間（Tlag）。為進一步比較促透劑的促滲效果，按下列公式計算其經皮促滲倍數： ER（enhancement ratio）= Jss（含促透劑）/ Jss（不含促透劑）。
2.5.2 皮膚血流量數據 采用MoorVMS數據分析軟件，分析大鼠耳局部皮膚給藥前，給藥后10，20，30，40，50，60 min的血流平均值，最后結果以給藥后各時間點的血流值與給藥前基礎血流值之比即皮膚血流變化值表示。SPSS 17.0軟件統計處理，數據以±s表示，采用t檢驗分析和單因素方差分析，P
3 結果
3.1 透皮實驗
乳香、沒藥揮發油對川芎中阿魏酸體外滲透動力學曲線及相關經皮滲透參數的影響，分別見表1，圖2。
由結果可知，氮酮對川芎中阿魏酸經皮滲透的促進作用倍數為6.55，乳香、沒藥及其混合配伍揮發油對川芎經皮滲透的促進作用倍數分別為7.68，8.26，8.28，表明乳香、沒藥揮發油配伍前后對川芎指標成分阿魏酸均具有一定的促滲透作用，且配伍后促滲作用最強；而乳香、沒藥揮發油1∶1混合后促進作用倍數為7.26，表明兩者揮發油簡單混合應用會相互抑制對方的經皮促進作用，但仍大于氮酮。
因此，乳香、沒藥揮發油配伍前后對川芎均有一定的促透作用，且配伍后提取所得揮發油促透作用增強。
3.2 皮膚血流變化
基質對大鼠耳局部皮膚血流量的影響，乳香、沒藥揮發油單用及其配伍對大鼠耳局部皮膚血流的影響，各組大鼠耳局部皮膚血流改變的比較見表2，3。
由表2可知，在溶劑基質涂布于大鼠耳局部60 min內，大鼠耳局部皮膚血流無明顯變化，說明本實驗所用的的溶劑對大鼠耳局部皮膚血流量沒有影響。
由表3可知，實驗中各組大鼠耳局部皮膚血流量相比涂藥前出現顯著性差異的時間點略有差異，分別為乳香組10 min、沒藥組20 min、乳沒單提混合組30 min及乳沒混合提取組10 min。在前30 min各組對大鼠耳局部皮膚血流改變值無差異；在40 min時乳香揮發油對大鼠耳局部皮膚血流改變值最大，且優于沒藥揮發油；在50 min時乳香揮發油對大鼠耳局部皮膚血流改變值最大，其次是混合提取揮發油，沒藥揮發油效果最弱，且乳香揮發油效果優于沒藥揮發油、單提混合揮發油，混合提取揮發油效果優于沒藥揮發油。在50 min時乳香揮發油對大鼠耳局部皮膚血流改變中，乳香揮發油、混合提取揮發油效果優于沒藥揮發油、單提混合揮發油。因此，乳香、沒藥揮發油均具有一定的促血流作用，且乳香、沒藥單獨及合提所得揮發油均具有起效快的特點，乳香揮發油促血流效果最優，沒藥揮發油可能會影響乳香揮發油的促血流效果，但是兩者合提時該抑制效果減弱。
4 討論
近年來，中藥揮發油作為經皮給藥促透劑的研究已成熱點。研究發現中藥揮發油大多具有良好的透皮吸收促進效果[7-8]，對其促透機制研究已為當下一大熱點。擾亂高度有序排列的皮膚角質層結構[9]、拉動效應[10]、增強皮膚角質層的水合作用[4]，是目前普遍認為的中藥揮發油促滲機制。
活血類中藥藥對乳香、沒藥，乳香味淡性溫，氣香而走竄，善理氣活血；沒藥氣薄味苦，重在化瘀理血，古今醫家每每將此二者相須為用[11]。揮發油類成分是乳香、沒藥的主要有效成分，乳香、沒藥含有烯類、醛類、酸類等揮發油，其主要揮發油成分乙酸辛酯具有顯著的促透作用[12-13]。從體外滲透動力學曲線及相關經皮滲透參數可發現，乳香、沒藥揮發油配伍前后對川芎指標成分阿魏酸均具有一定的促滲透作用，混合提取所得揮發油促滲作用最強；而單提混合所得揮發油促進作用倍數小于兩者單用，表明兩者揮發油簡單混合應用會抑制經皮促進作用。有文獻報道川芎揮發油也有促進藥物經皮滲透的作用[14]，文章以川芎作為模型藥，可能會干擾該文中乳香、沒藥揮發油促透作用的評價。但是，該文在設計體外透皮實驗時就有考慮川芎揮發油的存在，采用平行對照，設置了川芎空白體外透皮組，可扣除川芎揮發油促透作用的干擾。因此，文章從體外透皮實驗評價乳香、沒藥揮發油對川芎經皮滲透的促進作用是可行的。
近年研究表明，中藥揮發油可通過促進皮膚血流以達到皮膚促透效果[4]。雖然表皮和真皮內的血液脈管系統并非是影響藥物透皮的主要因素，但增加皮膚血流，可增加藥物在皮膚中的消除速率，出現漏槽效應，從而實現藥物促透[14]。透皮吸收促進劑在促進皮膚微循環血流過程中具有其固有的起效時間、維持時間及透皮作用強度。本實驗中，乳香、沒藥、混合提取所得揮發油均具有起效快的特點，乳香、沒藥揮發油均具有一定的促血流作用，乳香揮發油促血流效果優于沒藥、乳沒藥對揮發油，沒藥揮發油可影響乳香揮發油的促血流效果，但是兩者合提時該抑制效果減弱。
通過研究發現，乳香、沒藥揮發油配伍前后對川芎均有一定的促透作用，尚可通過增加皮膚血流，促進藥物從皮膚表皮到真皮層毛細血管的消除，從而實現促透。然乳香、沒藥揮發油促川芎透過皮膚角質層的具體作用機制，乳香、沒藥混合提取所得揮發油與乳香、沒藥混合揮發油二者之間的作用差異機制，都尚不清楚，有待進一步研究。
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中藥川芎范文6
關鍵詞：藥代動力學；補陽還五湯；腦健片；阿魏酸；洋川芎內酯A；藁本內酯
DOI：10.3969/j.issn.1005-5304.2016.07.021
中圖分類號：R285.5 文獻標識碼：A 文章編號：1005-5304（2016）07-0082-05
Comparative Study on Pharmacokinetics of Components of Buyang Huanwu Associated Prescriptions LIU Fang1， YANG Yan-tao1， HE Fu-yuan1， LIU Lin2， WU Shuang1， WANG Yu-hong2， 3， CAI Guang-xian3 （1. Pharmacy School， Hunan University of Chinese Medicine， Changsha 410208， China； 2. The First Hospital of Hunan University of Chinese Medicine， Changsha， 410007 China； 3. National Key Laboratory Co-built by Departments of Herbal Powder and New Drugs of Hunan Province， Traditional Chinese Medicine Powder Technology and Equipment of National and Local Joint Engineering Laboratory， Changsha 410208， China）
Abstract： Objective To study the pharmacokinetic features of ferulaic acid， senkyunolide A and ligustilide in Buyang Huanwu associated prescriptions （Buyang Huanwu Decoction and Naojian Tablets）. Methods HPLC-DAD was applied for simultaneous determination plasma concentration of three ingredients with jugular venous cannula rats after intragastric administration of Buyang Huanwu associated prescriptions. The pharmacolinetic parameters of each ingredient was calculated by DAS2.0， and then the total quantum statistical moment （TQSM） standard similarity was used to measure the overall pharmacokinetics behaviors. Results There were great differences in the three ingredients after the administration of two prescriptions， while the total quantum statistical parameters were very closely. The TQSM pharmacokinetic parameters of the three components in Buyang Huanwu Decoction and Naojian Tablets showed that AUC， MRT， VRT were 240.6 and 133.0， 3.192 min and 3.259 min， 21.59 min2 and 19.75 min2， respectively. The similarity was up to 0.977 8. Conclusion The metabolic processes in vivo of Buyang Huanwu Decoction and Naojian Tablets have similarities. The efficacy of Chinese herbal compounds mostly depends on the multi-components overall contributions.
Key words： pharmacokinetics； Buyang Huanwu Decoction； Naojian Tablets； ferulaic acid； senkyunolide A； ligustilide
基金項目：國家重點基礎研究發展計劃（2012CB723503）；湖南省中醫藥科研計劃項目（2014135）；湖南省“十二五”中藥學重點學科（2011年）
通訊作者：賀福元，E-mail：；蔡光先，E-mail：
補陽還五湯類方包括補陽還五湯及其精簡方（腦健片）。補陽還五湯出自《醫林改錯?癱痿論》，由黃芪、川芎、當歸等7味中藥組成，系清代醫家王清任創立的治療半身不遂辨證屬氣虛血瘀證的經典名方。腦健片處方是遵循補陽還五湯之方義，秉承“益氣祛瘀生新法”，將補陽還五湯精簡為黃芪、川芎和地龍，經過二次開發而成的新型制劑。本課題組前期研究表明，腦健片治療腦缺血療效顯著[1-2]，現進一步對其代謝動力學進行研究，選擇補陽還五湯類方均含有的阿魏酸、洋川芎內酯A、藁本內酯3種入血成分為檢測指標，研究大鼠灌胃后體內藥代動力學參數變化，旨在探討精簡方配伍變化后其同類成分的藥物動力學變化行為。
1 材料與方法
1.1 藥物與試劑
補陽還五湯干浸膏（黃芪120 g，當歸6 g，赤芍4.5 g，川芎3 g，紅花3 g，桃仁3 g，地龍3 g）和腦健片干浸膏（黃芪30 g，川芎9 g，地龍6 g）均由湖南省中醫藥研究院中藥所張水寒教授提供，所有藥材質量均符合2010年版《中華人民共和國藥典》標準。補陽還五湯按傳統水煎法濃縮干燥后制備成干浸膏，相當于原藥材4.5 g/g。腦健片按新工藝制備，其中川芎以揮發油量為考察指標，對川芎粗粉進行SFE-CO2萃取，不加夾帶劑，提取1.5 h；地龍以醇浸膏得率及氮含量為指標，溫浸2次，第1次加5倍量50%乙醇溫浸48 h，第2次加4倍量50%乙醇溫浸48 h；再合并藥渣，與黃芪藥粉一同水煎，所有藥液濃縮干燥后即得干浸膏，相當于原藥材4.7 g/g。
阿魏酸對照品（批號MUST-12112204）、洋川芎內酯A對照品（批號MUST-12121202）、藁本內酯對照品（批號MUST- 12082702），北京盈澤納新化工技術研究院；乙腈，美國Tedia公司，色譜純；甲醇，美國Tedia公司，色譜純；怡寶純凈水（華潤怡寶飲料有限公司），其他試劑均為分析純。
1.2 儀器
Instech自動采血系統（Instech Solomon公司），離心濃縮儀（Centri Vap，LABCONCO），Agilent-1260型高效液相色譜儀，配有自動進樣器，四元梯度泵，在線真空脫氣機，柱溫箱和二極管陣列檢測器（DAD）；超聲波清洗儀（SB-3200D，寧波新其生物科技股份有限公司），分析天平（JA-3003，上海恒平科學儀器有限公司），Elipse XDB-C18色譜柱（250 mm×4.6 mm， 5 ?m，安捷倫公司）。
1.3 動物
SPF級雄性SD大鼠20只，9～10周齡，體質量260～300 g，湖南斯萊克景達實驗動物有限公司，許可證號SCXK（湘）2011-0003。室溫無菌喂養，自由飲食飲水。
1.4 分組、給藥及處理
建立大鼠實時活體采血方法。將SD大鼠麻醉后固定于手術臺上，切開頸下靜脈，分離頸靜脈，埋線，待血液充盈時用眼科剪將頸靜脈剪開一小口，插入特制PU軟管約20 mm深并固定，縫合傷口。灌胃后將插管大鼠與Instech自動采血系統連接。將頸靜脈插管的健康SD大鼠分為補陽還五湯組和腦健片組，每組5只。二方均以4倍于人體劑量的原藥材給藥[3]，折算成干浸膏量分別為12.04 g/kg體質量和9.64 g/kg體質量。灌胃前采血作為空白血漿，再分別于5、15、30、45、60、90、120、180、240、300、360、480 min采血0.5 mL，并取上層血漿，-80 ℃冰箱保存備用。
1.5 供試品溶液的制備
取藥物血漿100 μL，加0.1 mol/L鹽酸50 μL，混勻后加800 μL乙酸乙酯，渦旋震蕩5 min，8000 r/min離心10 min，取上清液；重復上述操作，合并上清液，離心濃縮儀揮干溶劑后殘渣用50 μL甲醇復溶。
1.6 對照品溶液的制備
分別精密稱量阿魏酸、洋川芎內酯A、藁本內酯對照品，用甲醇溶液制成濃度分別為0.125、0.1、2.5 g/L的標準溶液。其中阿魏酸對照品溶液中含5%乙酸，4 ℃冰箱避光保存備用，藁本內酯-20 ℃冰箱避光保存備用。
1.7 色譜條件
本研究采用HPLC-DAD法與腦健片體外成分測定建立的方法[4]一致。色譜條件：Elipse XDB-C18色譜柱（250 mm×4.6 mm，5 ?m），柱溫30 ℃；以0.3%乙酸水（A）和乙腈（C）為流動相進行梯度洗脫（0～5 min，15% C；5～30 min，15%～31% C；30～32 min，31%～36% C；32～82 min，36%～72% C；82～90 min，72%～95% C），流速1.0 mL/min；檢測波長為阿魏酸325 nm、洋川芎內酯A 280 nm、藁本內酯328 nm。
1.8 數據分析
采用DAS2.0軟件，分別獲得阿魏酸、洋川芎內酯A和藁本內酯3種成分的經典藥代動力學參數，參照文獻[5-6]按總量統計矩（相似度）法計算藥代動力學總量統計矩參數，并進行比較分析。
2 結果
2.1 系統適用性與專屬性考察
分別取空白血漿，加入阿魏酸、洋川芎內酯A、藁本內酯標準品溶液的空白血漿，補陽還五湯和腦健片給藥后30 min的藥物血漿樣本，處理后上樣分析，見圖1。結果顯示血漿中內源性物質不干擾測定，該方法專屬性良好。根據前期研究結果，由保留時間和紫外光譜圖確定1號峰為阿魏酸，2號峰為洋川芎內酯A，3號峰為藁本內酯[4]。
2.2 標準曲線的建立及線性關系考察
取空白血漿100 μL，依次加入“1.6”項下3種對照品各20 μL，處理后上樣分析，采用程序進樣，設定進樣體積依次為0.05、0.1、0.2、1.0、2.5、5、15、20 μL。記錄各成分最大吸收波長下的峰面積，以進樣的絕對質量為橫坐標，以峰面積為縱坐標，繪制標準曲線。結果見表1。
2.3 精密度和重復性考察
將“2.2”項下藥物血漿連續進樣5次，每次10 μL，記錄峰面積值，計算RSD值。結果所得血漿中阿魏酸、洋川芎內酯A、藁本內酯峰面積RSD分別為0.85%、0.84%、1.79%，表明本法精密度良好。取5份空白血漿100 μL，按“2.2”項下方法平行加入3種對照品溶液，處理后分別進樣10 μL，記錄峰面積值，計算RSD。結果表明，5份空白血漿中加入3種藥效成分，測得阿魏酸、洋川芎內酯A、藁本內酯峰面積RSD分別為1.50%、2.91%、3.32%，表明本法用于體內藥物血漿測定重復性良好。
2.4 體內加樣回收率試驗
按高、中、低3個濃度進行加樣回收率試驗。分別取大鼠空白血漿100 μL，加入一定量的阿魏酸、洋川芎內酯A、藁本內酯對照品溶液，配制高、中、低3個不同濃度的樣品，處理后進樣分析，計算加樣回收率，結果見表2。阿魏酸和洋川芎內酯A均具有較高的回收率，遠高于生物樣品藥物回收率至少為80%的要求，說明本研究采用離心濃縮儀揮干血漿樣品能有效避免化學成分的丟失，此法明顯優于傳統的吹氮法。其中藁本內酯的加樣回收率略有偏高，這可能與藁本內酯自身化學結構的穩定性相關。
2.5 藥代動力學測定
將各組血漿樣品預處理后進樣分析，分別計算補陽還五湯和腦健片給藥后阿魏酸、洋川芎內酯A和藁本內酯在不同時間點的血藥濃度，得各成分量-時曲線，見圖2。采用DAS2.0藥代動力學軟件處理得出3種成分的藥代動力學參數，見表3。結果發現，阿魏酸在補陽還五湯類方灌胃大鼠后藥代動力學行為較相似，Cmax持平，且AUC值也基本相同，但是洋川芎內酯A和藁本內酯在大鼠體內的藥代動力學特征相差較大。采用總量統計矩法對補陽還五湯類方中3種成分在體內的藥代動力學參數繼續深入分析，計算單成分及3種成分總和的統計矩參數，見表4。結果發現，補陽還五湯類方灌胃大鼠后，3種成分在體內的零階矩、一階矩、二階矩參數均相差較大。但是，3種成分總和的統計矩參數卻比較接近，特別是總量的一階矩和二階矩參數非常接近，MRT值分別為3.192 min和3.259 min，VRT值分別為21.59 min2和19.75 min2，提示補陽還五湯類方在體內的代謝過程較為相似，體現了中藥復方發揮功效確實依賴于多成分的整體貢獻。
2.6 補陽還五湯類方單成分及總量兩兩間藥物動力學相似度分析
依據文獻[7]方法對補陽還五湯類方中單成分及3個總成分的總量統計矩參數進行相似度分析，見表5。從單成分看，補陽還五湯和腦健片灌胃大鼠后，阿魏酸在體內的代謝相似度僅為0.506 9，洋川芎內酯A相似度為0.804 1，藁本內酯為0.347 8，證實僅對1種成分進行分析不能代表中藥復方多成分在體內的整體代謝過程。而對3種成分總量分析則發現，補陽還五湯和腦健片在體內代謝過程相似度達到0.977 8，說明二方的總體功效相似。
3 討論
中藥發揮藥效往往取決于多種藥效成分的協同作用，講究君臣佐使配伍原則。采用傳統西藥藥代動力學模型對中藥復方藥代參數進行分析，發現同一藥效成分在不同藥效部位、不同藥材及不同配伍復方中的藥代動力學特征均不盡相同[8-10]。本研究表明，采用房室模型對補陽還五湯類方中單個成分分析，洋川芎內酯A和藁本內酯在體內藥代動力學特征均存在較大差異，說明處方的精簡較大程度改變洋川芎內酯A和藁本內酯在大鼠體內的代謝過程，這可能是由于補陽還五湯與腦健片處方中其他單味藥的差異引起各有效成分相互作用而產生不同結果。但是，采用總量統計矩法對補陽還五湯類方中3種成分藥代動力學參數深入分析，發現3種成分總和統計矩參數差異較小；進一步對3種成分總量分析，發現補陽還五湯和腦健片在體內代謝過程的相似度達到0.977 8，體現了中藥復方發揮功效依賴于多成分的整體貢獻。而我們前期研究結果表明，補陽還五湯類方均能發揮抗腦缺血損傷功效[1-2]，且總體功效相當，提示兩方在一定程度上有相似的代謝過程，這是否暗示兩方基本藥效物質基礎類似？后續將展開相關研究。
采用傳統西藥單一成分藥代動力學模型對中藥多成分在體內藥代動力學行為進行評價存在一定的局限性[11]，不能充分體現補陽還五湯類方整體成分在體內的真實代謝過程。本研究采用總量統計矩參數對經典房室模型的藥動參數繼續深入分析，既能反映總量藥物濃度的動力學行為，又能與單個成分的統計矩參數關聯，是整合多成分藥物動力學較宜的數學處理方法，同時更能體現出中藥多種化學成分多靶點、多途徑、多環節進行整合調節的優越性。
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