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化學發光法范文1
【關鍵詞】 流動注射，后化學發光，過氧化單硫酸鹽，魯米諾，阿米卡星
1 引 言
阿米卡星(Amikacin，結構式為:)為半合成的氨基糖苷類抗生素，主要應用于治療對卡那霉素和慶大霉素耐藥革蘭氏陰性桿菌所致的尿路、下呼吸道、腹腔、軟組織、骨和關節、生殖系統等部位的感染以及敗血癥等。與其它氨基糖苷類抗生素一樣，使用過程中對聽覺和腎臟存在毒副作用，必須嚴格控制阿米卡星的臨床用量[1]。
測定阿米卡星的藥典方法為微生物法，但該法耗時長，操作復雜，靈敏度較低，且易擾。文獻報道測定阿米卡星的方法有高效液相色譜法[2]、毛細管電泳法[3]、熒光法[4]、紫外分光光度法[5]及薄層色譜法[6]等。熒光法或紫外分光光度法測定時需要使用熒光試劑或其它試劑進行衍生，試樣處理操作繁瑣、干擾因素多。薄層色譜法操作程序過多，影響因素不易消除，分離效果較低，重現性較差。
化學發光分析結合流動注射技術分析法，因具有靈敏度高、線性范圍寬、分析速度快和儀器操作簡單等優點，使得化學發光檢測法成為一種有效的痕量及超痕量分析技術，在藥物分析領域得到了廣泛的應用[7，8]。本研究組曾采用N溴代琥珀酰亞胺(NBS)熒光素體系化學發光法測定阿米卡星[9]，但選擇性較差，不能直接用于生物樣品中阿米卡星的測定。
過氧化單硫酸鹽(HSO-5，Peroxymonosulfate，PMS)有較強的氧化性，可以在三聚鹽過硫酸氫鉀制劑(K2SO4·KHSO4·2KHSO5)中穩定存在。Magdaleno等[10]采用PMS直接氧化化學發光法來測定腐殖質;也有利用PMS的氧化性結合化學發光法測定一元羧酸[11]和熒光有機化合物[12]的報道。本研究發現，在堿性介質中魯米諾可以被PMS氧化， 產生瞬時化學發光，發光結束后注入阿米卡星又會產生很強的慢速后化學發光，發光強度與阿米卡星濃度在一定范圍內成正比。基于此，建立了測定痕量阿米卡星的流動注射后化學發光分析方法。與其它方法相比，本方法具有選擇性好、操作簡單、重現性好及快速等優點，已用于制劑和尿樣中阿米卡星含量的測定。
2 實驗部分
2.1 儀器與試劑
IFFMD型流動注射化學發光分析儀(西安瑞邁電子科技有限公司);精密pH計(上海雷池儀器廠);TU1901紫外分光光度計(北京普析通用儀器有限公司);F4600熒光分光光度計(日本日立公司)。0.01 mol/L PMS儲備液：當天配制，準確稱取三聚鹽過硫酸氫鉀制劑(K2SO4·KHSO4·2KHSO5，Alfa公司)0.3078 g溶解并定容至100 mL容量瓶中，使用時適當稀釋。10 mmol/L魯米諾儲備液：準確稱取1.77 g魯米諾(陜西師范大學分析科學研究所合成)，P1， P2. 蠕動泵(Peristaltic); V. 進樣閥(Valve); F. 流通池(Flow cell); PMT光電倍增管(Photoelectric multiplying tube); HV. 負高壓(High voltage); PC. 計算機(Computer); R1. Peroxymonosulfate(PMS); R2. 魯米諾(Luminol); R3. 樣品(Sample); R4. 載流水(Carrier)用10 mL 1.0 mol/L NaOH溶解，加水定容于1000 mL容量瓶中，室溫下放置7 d后使用。1.0 g/L阿米卡星儲備液：準確稱取50 mg硫酸阿米卡星(中國藥品生物制品檢定所提供)，溶于水中，定容至50 mL，使用時稀釋到所需濃度。所用試劑均為分析純，實驗用水均為二次蒸餾水。
2.2 實驗方法
如圖1連接流路，泵入PMS、魯米諾、載流水和樣品。測定樣品的化學發光強度，以相對峰高定量。
3 結果與討論
3.1 實驗條件的優化
3.1.1 流速的影響 在本化學發光體系中，流速太慢會導致最大發光在流通池之前，流速太快會導致最大發光在流通池之后。本實驗考察了0.8～2.5 mL/min范圍內流速對化學發光強度的影響，主泵(圖1中P1)流速為1.5 mL/min，副泵(圖1中P2)流速為2.0 mL/min時，化學發光強度最大。
3.1.2 管道長度的影響 實驗表明，魯米諾和PMS的混合管長度L1為21.5 cm，混合池與流通池之間的反應管長度L2為5 cm時，化學發光信號最強。隨著采樣體積的增大，化學發光信號值也逐漸增大。但由于反應量的增多，導致反應不均勻，重現性下降。因此，在保證一定靈敏度的基礎上，采樣體積選擇為100 μL。
分 析 化 學第37卷第10期閆瑞芳等：流動注射后化學發光法測定阿米卡星 3.1.3 魯米諾和PMS濃度的影響 在5.0～250 μmol/L范圍內，考察了魯米諾濃度對發光強度的影響，結果表明，魯米諾濃度為25 μmol/L時發光強度最大。在3.0～10 mmol/L范圍內，考察了PMS濃度對發光強度的影響，結果表明，PMS濃度為6.0 mmol/L時發光強度最大。
3.1.4 緩沖溶液及其酸堿度的影響 本實驗對10 mmol/L的Na2CO3NaHCO3，NaOH，Na2CO3，NaHCO3，NaHCO3NaOH，Na2B4O7NaOH，KH2PO4H3PO4和NaH2PO4NaOH等幾種緩沖溶液進行研究，通過實驗最終確定最佳緩沖溶液為NaHCO3NaOH。在pH=10.0～12.0之間進行緩沖溶液酸堿度對發光強度的影響研究，結果表明緩沖溶液NaHCO3NaOH的pH=11.5時發光強度最大。
3.2 校準曲線、精密度及檢出限
在最佳實驗條件下，阿米卡星濃度在0.04～80 mg/L范圍內與發光強度呈良好的線性關系。在0.04～0.4 mg/L范圍內，校準曲線為ΔI=842.88C-14.724(r=0.9964);在0.4～80 mg/L范圍內，校準曲線為ΔI=2607C+916.92(r=0.9991)。對4.0 mg/L阿米卡星進行了11次平行測定(圖2)，相對標準偏差為2.9%;據IUPAC建議，計算出方法的檢出限(3σ) 為0.01 mg/L。
3.3 干擾實驗
在阿米卡星濃度為4.0 mg/L，相對誤差±5%的條件下，研究了常見的共存物質及藥品中的賦形劑對測定的干擾情況。結果表明，50倍的醋酸鈉、酒石酸，30倍的Ca(NO3)2，20倍的草酸鈉、β環糊精，10倍的淀粉、葡萄糖、乳糖、蔗糖、MgSO4，5倍的Fe(NO3)3，2倍的尿素，5倍的尿酸，不干擾測定。由于尿樣中這些物質的實際含量均低于允許量，因此可不經分離或掩蔽，直接對樣品進行測定。但Vc對樣品的測定干擾較大(0.1倍)，需對尿樣進行簡單預處理。
3.4 實際樣品測定
取10支阿米卡星注射液，混勻，逐級稀釋至測定的線性范圍內，按上述實驗方法進行測定，并與紫 表1 阿米卡星制劑樣品分析結果外分光光度方法進行比較，所得結果列于表1。取10 mL新鮮尿液，加入0.1 g NaCO3， 60 ℃微熱10 min，消除Vc、谷胱甘肽等還原性物質[13]，冷卻后，加入適量樣品，離心分離。移取一定體積的離心上清液稀釋100倍。按照上述實驗方法操作，測得尿樣濃度，計算回收率，并與紫外分光光度法比較，所得結果列于表2。表2 阿米卡星回收率實驗結果
3.5 阿米卡星的后化學發光行為及其可能的機理
用IFFMD型化學發光分析儀采用靜態法測定，研究了阿米卡星在PMS魯米諾體系中的后化學發光行為。圖2給出了PMS魯米諾化學發光反應及阿米卡星在PMS魯米諾體系中后化學發光反應的動力學曲線。當1.0 mL 6.0 mmol/L PMS溶液注入到1.0 mL 0.025 mmol/L魯米諾溶液中時，立即發生了一個化學發光反應(峰1)，0.4 s后反應結束，化學發光信號回到基線。此時，向反應結束后的溶液中注入1.0 mL 40 mg/L阿米卡星溶液，又引發了一個新的、很強且很慢的后化學發光反應(峰2)，10 min后，反應結束，化學發光信號再次回落至基線。用空白溶液代替阿米卡星溶液進行實驗，未檢測到化學發光信號。以上實驗表明：阿米卡星在PMS魯米諾體系中有較慢的后化學發光反應。
用F4600熒光分光光度計分別測得PMS魯米諾化學發光反應和PMS魯米諾阿米卡星后化學發光反應的化學發光光譜(圖3)。從圖3可見，兩個化學發光反應的最大發射波長均為425 nm，這說明PMS魯米諾阿米卡星后化學發光反應與PMS魯米諾化學發光反應具有相同的發光體。眾所周知：魯米諾化學發光反應的發光體是激發態的3氨基鄰苯二甲酸根離子(3AP*)，圖3 體系的化學發光光譜(A)和紫外吸收光譜(B)
Fig.3 CL spectra of reactions(A)and UV absorption spectrum (B)
A1. 6.0mmol/L PMS+25 μmol/L魯米諾(Luminol); A2. 6.0 mmol/L PMS+25 μmol/L魯米諾(Luminol)+4.0 mg/L阿米卡星(Amikacin); B1. 6.0 mmol/L PMS; B2. 40 mg/L阿米卡星(Amikacin); B3.(B1)+(B2)。從而可以確定所研究的后化學發光反應的發光體就是3AP*。在TU1901紫外可見分光光度計上分別掃描了PMS溶液、阿米卡星溶液、PMS和阿米卡星混合液的紫外可見吸收光譜。結果表明，阿米卡星的紫外吸收光譜在(191±2) nm處有一個吸收峰，而PMS阿米卡星混合液在192 nm處的特征吸收峰消失了。說明在堿性條件下PMS能夠氧化阿米卡星。反應釋放的能量，可能會轉移給發光體，產生后化學發光。
參考文獻
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化學發光法范文2
關鍵詞 流動注射；化學發光；魯米諾；三聚氰胺
中圖分類號 O657 文獻標識碼 A 文章編號 1673-9671-(2012)101-0172-01
三聚氰胺是一種三嗪類含氮雜環有機化合物，主要作為生產三聚氰胺甲醛樹脂的原料，食品（如奶粉）中如加入三聚氰胺會造成其蛋白質含量增高的假象，長期食用含三聚氰胺的食品會對生殖能力造成損害、并誘發膀胱或腎結石等疾病，目前，測定三聚氰胺的方法有高效液相色譜法、氣相色譜-質譜法、液相色譜-質譜法、毛細管電泳法、酶聯免疫分析法等，而化學發光法的報道甚少。本文研究發現，在堿性介質中三聚氰胺對魯米諾-過氧化氫發光體系有抑制作用，據此，結合流動注射技術建立了測定三聚氰胺的新方法，該方法操作簡便、測定快捷、靈敏，可用于水樣中三聚氰胺的測定，結果令人滿意。
1 實驗部分
1.1 儀器與試劑
IFFL-D型智能流動注射化學發光分析儀（西安瑞科電子設備有限公司）；天子天平（北京賽多利斯儀器系統有限公司）。
魯米諾儲備液（1.0×10-2 mol/L）：準確稱取0.443 g魯米諾，用0.1 mol/L氫氧化鈉溶液溶解轉移并定溶于250 mL的棕色容量瓶中，搖勻，于4℃下避光保存7天后使用。
三聚氰胺儲備液（10 mg/L）：準確稱取0.005 g三聚氰胺，用少量甲醇溶解，用水將其轉移并定容至500 mL容量瓶中，搖勻，使用時用水逐級稀釋到所需濃度。
過氧化氫儲備液：30% H2O2溶液，使用時逐級稀釋。
以上所用試劑均為分析純，所用水為二次去離子水。
1.2 試驗方法
2 結果與討論
2.1 實驗條件的優化
2.1.1 魯米諾濃度的選擇
魯米諾作為發光試劑，實驗考查了魯米諾濃度（2.5×10-5～1.75×10-4
mol/L）對化學發光強度的影響，當魯米諾為1.0×10-4 mol/L時相對發光強度最大，且有最佳信噪比。
2.1.2 過氧化氫濃度的選擇
過氧化氫溶液是此化學發光反應中的氧化劑，實驗考察了過氧化氫濃度（4.0×10-5～4.0×10-4 mol/L）對化學發光強度的影響，實驗表明，過氧化氫濃度為2.0×10-4 mol/L時?I最大，且具有最佳信噪比。
2.1.3 氫氧化鈉濃度的選擇
2.1.4 儀器負高壓，流速，閥池距的選擇
考察了負高壓、閥池距、流速等測定參數對體系?I的影響，結果表明，當負高壓為800 V，泵速為4.5 mL/min，輸液管內徑為0.8 mm，閥池距為8 cm時可獲得最大的相對發光強度。
2.2 工作曲線
2.3 干擾試驗
2.4 樣品分析
由于實際水樣中三聚氰胺含量很少，為了驗證本實驗方法的可靠性，對環境水樣進行加標回收處理。取廢水樣200 mL于分液漏斗中，濾去雜質不溶物，稀硫酸調節pH為6左右，加入20 mL EDTA，取10 mL處理樣品，用已建立的分析測定方法對三聚氰胺的進行測定。
參考文獻
化學發光法范文3
河南省商丘市第一人民醫院檢驗科，河南商丘 476100
[摘要] 目的 探討化學發光免疫分析技術（ECLIA）和酶聯免疫吸附試驗（ELISA）在乙肝病毒血清學檢驗中的應用效果。方法 選取2012年1月—2014年1月在我院就診的疑似乙肝患者150例，分離血清后分別應用ELISA和ECLIA進行檢測，比較兩種檢測方法的效果。結果 ELISA和ECLIA檢測出HBsAg陽性分別63例和82例，兩者比較差異顯著（P<0.05），同時ECLIA法檢測的批內CV和批間CV的重復性均明顯高于ELISA法（P<0.05）。結論 與ELISA檢驗法比較，ECLIA法具有更高的HBsAg陽性檢出率，且能進行精確的定性定量檢測，值得臨床推廣應用。
[
關鍵詞 ] 乙肝病毒；血清學檢驗；ELISA；ECLIA
[中圖分類號] R373.21
[文獻標識碼] A
[文章編號] 1672-5654（2014）11（b）-0032-02
[作者簡介] 張怡莎(1982-)，女，漢族，河南省太康縣，本科，技師，研究方向：免疫類，從事的工作：醫學檢驗。
我國是乙型肝炎病毒（HBV）感染率較高的國家，且目前尚無針對該病的特效療法，因此對于該病進行早期診斷尤為重要。目前采用標記免疫學方法檢查HBV血清學指標是診斷HBV感染的主要手段，目前常用的免疫學方法主要包括化學發光免疫分析技術（ECLIA）和酶聯免疫吸附試驗（ELISA）兩種，本文就這兩種方法在乙肝病毒血清學檢驗中的應用進行比較，以為臨床選擇有效的診斷手段提供依據。
1 資料與方法
1.1 一般資料
選取2012年1月—2014年1月來我院就診的疑似乙肝患者150例，所有患者診斷標準均參照《WS299-2008乙型病毒性肝炎診斷標準》，其中男性86例，女性64例，年齡18~56歲，平均年齡（41.3±5.7）歲。
1.2 檢驗方法
1.2.1 儀器和試劑對所有患者均分別行化學發光免疫分析技術（ECLIA）和酶聯免疫吸附試驗（ELISA）檢驗 。
1.2.2方法所有患者均于檢驗當天清晨空腹抽取肘部靜脈血10 mL，以3000r離心率離心10 min后分離出血清待檢。將所有患者的血清均分為兩份，先后采用ELISA和ECLIA進行檢驗，每次以定值參比血清作為質控，操作均嚴格按照試劑盒說明書進行。
1.2.3 ELISA檢驗方法和判定標準采用雙抗原夾心法進行測定，用去離子水稀釋將50 mL的濃縮洗滌液至1000 mL置于專門的洗液瓶中，并將酶標試劑置于試劑預定位置讀取吸光度值，以陰性對照平均吸光度（A）值×2.1為臨界值，以標本OD值與臨界OD值的比值（S/OD）≥1.00判定為陽性，否則判定為陰性。
1.2.4 ECLIA檢驗方法和判定標準同樣也采用雙抗體夾心法進行檢驗，將配套反應杯、吸頭和洗液等放置在預定位置，采用75%酒精棉球擦洗試劑，將HBsAg和生物素標記的HBsAb與待測樣品共同培育，再和親和素標記的磁微粒孵育，經過反復洗滌使游離的抗原和抗體與復合物分離，并加入三丙胺，啟動ECL反應，用其激光強度判定HBsAb濃度，若HBsAb＞10 mlU/mL則判定為陽性，否則判定為陰性。
1.2.5重復性比較選取HBsAg含量低、中、高濃度的陽性血清共分成20份進行冷凍保存，每天測量1次，其中10份計算批間重復性，其余10份用來計算批內重復性。
1.3 統計學方法
應用spss 15.0處理所有數據，計數資料應用χ2檢驗，以P<0.05表示差異有統計學意義。
2 結果
2.1 HBsAg陽性率比較
對ELISA和ECLIA兩種檢測方法的陽性率比較，ECLIA測定的HBsAg陽性率明顯大于ELISA，且差異顯著（P<0.05），詳見表1。
2.2 重復性比較
對ELISA和ECLIA兩種檢測方法的重復性比較，除高濃度HBsAg含量比較外，其余指標結果的比較均顯示ECLIA的重復性明顯優于ELISA，且差異顯著（P<0.05），詳見表2。
3 討論
乙型肝炎病毒是一種全球性傳染性疾病，我國乙肝病毒表面抗原（HBsAg）攜帶者高達10%[1]，其中HBsAb（乙肝病毒表面抗體）是人體感染HBV后針對HBsA生的特異性抗體，由于目前尚無特效療法，所有早期診斷HBsAb尤為重要[2]。在本研究中我們對乙肝病毒血清學檢驗分別應用ELISA和ECLIA進行檢驗比較，結果顯示ECLIA法HBsAg陽性檢出率為54.7%，明顯高于ELISA法的42.0%（P<0.05），這主要與兩種不同檢驗的具體方法有關，其中ELISA法是臨床中傳統的診斷乙肝方法，因其具有簡便、快速、價格低廉的特點，因此被廣泛應用于HBsAg的檢測中，但該方法僅能進行定性分析，不能進行定量分析，同時當待測標準中物質濃度過高時可能會出現假陰性，且由于不同廠家生產的抗原和抗體試劑具有較大的差異，加之反復洗板帶來的誤差，更易出現較高的假陰性[3-4]。ECLIA技術是一種采用生物素-親和素技術，其在電極表面可由電化學引發的特異性化學發光反應，是目前最為先進的化學發光免疫測定系統之一[5]。
ECLIA技術使用的載體是受電磁鐵控制的順磁性微粒，其全面的實現了檢測的自動化和標準化，減少了因人工操作帶來的誤差，并可精確的進行定性定量分析，大幅度減少了批內、批間的誤差[6-7]。同時電磁鐵的電磁快速消失性有利于游離抗體和復合抗體的分離，從而降低了由游離抗體所導致的假陰性結果，提高了ECLIA檢測的特異性[8-9]從本研究批內、批間重復性的研究結果中發現，兩種方法檢出率的差異主要集中在低濃度，而高濃度無顯著差異（P<0.05），這說明ELISA可對高濃度的HBsAb進行檢測，而對低濃度的HBsAb檢測率較低，而ECLIA具有更加廣泛的檢測方法，同時在我們的檢驗結果中，其檢出率差異主要集中在低濃度區，而高濃度區的差異無統計學意義（P>0.05），這可在一定程度上說明ELISA更適用于高濃度HBsAb，而ECLIA的檢測范圍更廣，而加大對低濃度HBsAg的檢出率可更加有效的控制傳染源[10-11]。
總之，與ELISA法比較，ECLIA法在乙肝病毒血清學檢驗中具有更高的優越性，可明顯提高HBsAg的陽性檢出率，并能準確的進行定性和定量分析，并可早期發現病情，從而更好的為臨床及時可控制傳染源提供依據，為改善患者病情贏得時間，意義重大，因而值得臨床推廣應用。
[
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化學發光法范文4
關鍵詞： HCV抗體； 酶聯免疫吸附試驗； 電化學發光法
丙型肝炎病毒（HCV）已經成為人類重要的病原體并在世界上許多國家成為引起慢性肝臟疾病的主要病原體[1]。由于HCV主要通過血液傳播，傳播的范圍廣，因此在輸血和腎臟透析等以及在健康人群中進HCV篩查對控制丙肝傳播以及及時進行抗病毒治療有很重要的意義。 酶聯免疫吸附試驗是從1971年誕生至今是篩查HCV抗體的主要手段，已經被廣泛應用去免疫檢測領域，具有特異性和敏感性高、重復性好等優點[2]。但是隨著免疫檢測技術的發展，化學發光逐漸被應用于免疫的檢測領域，如羅氏電化學發光儀應用于HCV抗體的定量檢測。應用三種ELISA試劑和羅氏電化學發光同時檢測我院80例（2009年12月15日-2010年1月20日）80例門診及住院患者，統計有關數據結果，分析如下。
1、資料和方法
1.1 一般資料：經HCV-RNA檢測確診丙肝患者35例，均來自安徽醫科大學第一附屬醫院門診及住院患者，健康體檢者45例，經HCV-Ab及HCV-RNA檢測排除丙肝感染，年齡20-75歲之間。清晨抽取全血2ml于普通試管管中，37℃水浴箱放置30分鐘，3500rpm離心5分鐘分離血清。
1.2 試劑：抗HCV抗體ELISA試劑盒分別購自英科新創（廈門）科技有限公司、中山生物工程有限公司、上海科華生物工程有限公司，電化學發光試劑盒購自瑞士羅氏公司。所有試劑均有注冊證并在有效期內。
1.3 儀器：中國科大創新股份有限公司中佳分公司KDC-1044型離心機、美國Bio-RAD公司1575型洗板機、瑞士TECAN公司RSP150型全自動加樣系統、瑞士HAMILTON公司FAME-STAR全自動酶免儀、瑞士羅氏公司Cobas e601電化學發光儀。
1.4 實驗方法 所有的操作均嚴格按照試劑和儀器說明書和《實驗室標準操作規程》規定要求進行。
1.5 ELISA法CUTOFF值計算及結果判讀標準：英科新創（廈門）科技有限公司CUTOFF值=陰性對照OD值均值×2.8（陰性對照孔OD值低于0.05時以0.05計算）、中山生物工程有限公司CUTOFF值=0.15+陰性對照OD值均值（陰性對照孔OD值低于0.05時以0.05計算）、上?？迫A生物工程有限公司CUTOFF值=0.1×陽性對照平均OD值+陰性對照平均OD值。ELISA試劑盒S/CO值≥1為陽性，S/CO值
1.6 統計學處理 使用SPSS11.0軟件進行卡方檢驗和相關分析。
2 結果
2.1 三種ELISA試劑盒CUTOFF值：結果見表1。
2.2 35例丙肝患者檢測結果：35例丙肝患者四種試劑HCV抗體檢測結果見表2，中山生物5例假陰性標本S/CO值均小于0.5，上?？迫A2例假陰性標本S/CO值分別為0.58和0.16；45例健康體檢者四種試劑HCV抗體檢測結果見表3。
2.3 對陽性標本做卡方檢驗，其差別有統計學意義結果見表4
2.4 對四種試劑檢測的結果做相關性分析，結果見表5
3.討論
從表2我們可以看出，四種試劑同時對35例丙肝患者血清標本進行檢測，其靈敏度分別為中山（84.4%）、 羅氏（100%）、 科華（94.3%）、新創（100%），以及從表3我們可以看出，四種試劑同時對45例健康體檢者血清標本進行檢測，其特異性分別為中山（85.7%）、 羅氏（93.3%）、 科華（97.8%）、新創（93.3%），表明假陽性和假陰性是難以避免的，因為每個試劑盒都有自己的特征以及適應范圍[3]。然而在輸血和腎臟透析等以及在健康人群中進HCV篩查對控制丙肝傳播以及及時進行抗病毒治療有很重要的意義，從而激勵著我們尋求提高其檢測結果的準確性的試劑盒以及試驗方法。從表2、表3、和表5我們可以看出四種試劑之間的靈敏度和特異性均有差異，同時不同試劑檢測結果的相關性有顯著的統計學意義（α
參考文獻：
[1] Dore GJ， Law M， MacDonald M， et al. Epidemiology of hepatitis C virus infection in Australia. J Clin Virol. 2003； 26（2）：171-184.
[2] Sánchez-Conde M， Montes Ramírez ML， Bellón Cano JM， et al. Impact of liver steatosis on the correlation between liver stiffness and fibrosis measured by transient elastography in patients coinfected with human immunodeficiency virus and hepatitis C virus. J Viral Hepat. 2010 Dec 3. [Epub ahead of print]
化學發光法范文5
【關鍵詞】化學發光法；連苯三酚自氧化法；氧自由基
1.引言
近年來，藥學及其有關學科的迅速發展使藥學的研究領域不斷擴大且日益廣闊和繁榮。在現代藥學的各個學科中，臨床醫學和生命化學領域中的自由基理論的研究及其在醫學科學中的應用，是藥學新領域研究的重要發展。
隨著年齡的增長，生物體內產生抗氧劑和抗氧化酶能力逐漸下降。自由基代謝平衡紊亂，過多的自由基會通過各種作用使機體受損而導致各種疾病或加快衰老。因此，如何有效清除自由基就顯得尤為重要，而O2?自由基是其中常見的一種。目前，國內外對消除O2?自由基的測定方法很多，主要有：連苯三酚自氧化法、化學發光法、腎上腺素法、極譜電極法等，本文主要通過五種抗氧化劑來研究化學發光法與連苯三酚自氧化法對O2?自由基消除作用，從而比較兩法的可靠性。
2.實驗部分
2.1 試劑與儀器
試劑：茶多酚、苯甲酸、蘆丁、蕓香葉苷、槲皮素、連苯三酚、NaCO3、NaHCO3、HCl、Tris（三羥基甲基氨基甲烷）、EDTA（乙二胺四乙酸二鈉），以上均為國產分析純；魯米諾（3-氨基鄰苯二甲酰肼）為德國Merck-Schuchrdt公司產品；所用水均為二蒸水。
儀器：化學發光儀、pH數字酸度計、UV-754紫外分光光度計（上海第三分析儀器廠）。
2.2 溶液的配制
2.2.1 配制苯多酚等溶液
（1）稱取一定量的槲皮素、苯甲酸、蘆丁、蕓香葉苷等，用乙醇水溶液（體積比為4：6）溶解定容，配制濃度分別至：100 mg/25 mL、100 mg/10 mL、20 mg/10 mL、50 mg/10 mL；稱取一定量的茶多酚，用水溶解定容至濃度為100 mg/10 mL。
（2）緩沖液的配制
稱取NaCO3 5.3g、NaHCO3 4.2 g，用二蒸水分別定容至500 mL，按兩者體積比6：4配制成500 mL的溶液，用pH計調整至pH=10.16。
稱取Tris 0.6057 g，EDTA 0.149 g，用二蒸水分別定容至500 mL，再取0.1 mol/L HCl 22.9 mL，混合均勻后，用用二蒸水定容至100 mL，調整pH=8.2。
（3）5 mmol/L魯米諾溶液的配制
稱取0.0442 g魯米諾，加入少量三乙胺，再用pH=10.16 NaCO3 -NaHCO3緩沖液定容至50 mL，放置三天后備用。
（4）10 mmol/L HCl的配制
先量取濃HCl 5 mL稀釋至100 mL，再移取3.33 mL定容至200 mL即可。
（5）6 mmol/L連苯三酚溶液的配制
稱取連苯三酚0.0378 g，用10 mmol/L HCl定容至50 mL。
3.實驗方法
3.1化學發光法
先啟動發光儀預熱兩小時，在測定管中加入魯米諾溶液1.6 mL，加入不同溶液的待測液0.04 mL，再加入連苯三酚0.2 mL，混合反應，待10s后，測定器5 s內發生強度的平均值，求出抑制率。
3.2連苯三酚自氧化法
（1）自氧化法曲線的測定
按下表要求加樣，迅速搖勻，立即加入比色皿中，在420 nm處測其吸光度，每分鐘一次，共測5分鐘，平行三次，求出自氧化曲線。
（2）抗氧化性的測定
按下表加樣，調整X的數值，以調節抗氧劑的量，測定不同濃度下的曲線，求出他們的斜率。
（3）抗氧化劑抑制率的測定
抑制率=（A0-AS）/A0%
其中A0為自氧化曲線斜率，AS為加抗氧化劑后的曲線斜率。
4.實驗結果
4.1 抗氧化劑對O2-的消除作用
4.1.1 茶多酚對O2-的消除作用
化學發光法 連苯三酚自氧化法
4.1.2 苯甲酸對O2-的消除作用
化學發光法 連苯三酚自氧化法
4.1.3蘆丁對O2-的消除作用
化學發光法 連苯三酚自氧化法
4.1.4蕓香葉對O2-的消除作用
化學發光法 連苯三酚自氧化法
4.1.5槲皮素對O2-的消除作用
化學發光法 連苯三酚自氧化法
5.討論
5.1各物質對O2-的最大消除率的比較
化學發光法是應用自氧化反應產生的O2-，而O2-與化學發光劑魯米諾反應產生電子激光態的中間產物，當其返回基態時即發光，當抗氧化物存在時由于歧化反應而發光。自氧化法是由于自氧化反應屬于游離基鏈反應，自氧化過程產生O2-，抗氧化物通過消除O2-降低了自氧化反應的總速度，其氧化產物在一定的波長處表現特征吸收，基于上述機理，樣品的顏色對化學發光法無影響，而對自氧化影響較大，因為顏色越深，透過率越小，故其所測的最大消除率較小。
5.2 各物質對O2-消除作用的CI50比較
CI50是指抗氧化物對O2-自由基消除率達50%時所需抗氧物的量，通常用它來比較抗氧化物對自由基消除能力的大小，其值越小，抗氧化能力越強。表6為各氧化物的CI50。
可見，化學發光法能較好的測出各物質的CI50值，而連苯三酚自氧化法對有些物質則不能測出，為了更好的比較兩法的差別，我們又做了它們的吸光光譜。
5.3 誤差及造成誤差的原因
兩種方法除去系統誤差的影響外，偶然誤差的影響不可忽視，現舉一例說明如下：
在化學發光法中以茶多酚的消除率的50%為例，空白值為2500，當加入樣品后其值為1250，若讀數偏差為50時，其誤差率為2%。
在分光光度計中，自氧化速率為0.0139 min-1，加入樣品后其讀數為0.00695，如讀數偏差為0.00095，其誤差率可達7%。
由此可見，偶然誤差對分光光度法的影響較化學發光法大的多，從而使其可靠性有所降低。
6.結論
綜合上述實驗不難看出：首先最大消除率方面，化學發光法所測值比連苯三酚高的多，其次在求CI50值時，前者能準確測出各物質的CI50值，而后者則做不到，最后去除其他外界因素對兩法的影響，偶然誤差的存在對前者的影響要小的多。
由此可見，在測定抗氧化劑對自由基的消除作用時，化學發光法比連苯三酚自氧化法更可靠。
參考文獻：
[1] 陳執中，超氧化物歧化酶和自由基的測定及其在醫藥科學研究中的應用進展：上海藥品檢驗所.
[2] 鄒國林，桂蘭芬，鐘曉凌，朱汝潘，一種測定方法：武漢大學生物系.
[3] 袁勤生，陳潔，周剛宏，超氧化物歧化酶測活方法比較：華東理工大學.
化學發光法范文6
某些化學反應可產生發光現象，反應所產生的化學能，激發分子或原子，當被激發的分子或原子回到基態時，無法承載之前吸收的化學能，這些化學能便以輻射的形式釋放出去，產生發光現象。不同性質、不同量化學成分發生化學反應的能量差異，決定發光廣譜大小、范圍，通過分析這些差異，可定量測算空氣中含有的化學物質成分與量?；瘜W發光分析具有較高的靈敏度，相較于傳統的物質質量分析法，化學發光法操作與實現路徑簡單，光譜分析誤差與準確率可基本滿足需要。如對硫化物進行火焰化學發光反應，測定精度可達到0.02μgS，以一氧化碳與臭氧進行氣相化學發光反應，測定NO精度可達1ppb.以化學發光反應分析物質成分準確度較高，不易受其它因素干擾其主要原因有二：
1）化學發光廣譜是由化學反應本身決定的，化學反應決定受到激分子或原子在整個化學反應中的作用，而化學反應可通過控制物質成分實現精準控制；
2）化學發光反應的類型較少：同一種物質與之發生反應可產生發光效果的物質成分種類較少；不同化學反應產生的光譜多不相同。通過對一種光譜進行分析，便可較容易的分析出是哪種物質發生化學反應。目前，我國各大城市常用的動態多功能空氣污染監測設備，便可對空氣進行實時監測，無需進行分離、沉淀等預處理?；瘜W發光反應符合率、精確度較高，應用于空氣污染測定，無需太多復雜的設備，一般只需濾光片與光電倍增管即可。同時因化學反應、設備操作、分析過程較簡單，應用化學發光測定空氣污染，速度極快，可實現連續、實時測定，有助于獲取更多的樣本?？偠灾?，化學發光法是一種理想的空氣污染監測技術。
2幾種常見空氣污染物及其化學發光法測定
2.1一氧化碳測定測定碘的五氧化物與一氧化碳產生化合反應中碘含量的增減是檢測一氧化碳含量最精確的化學檢測法，但該法僅適用于煙道氣與廢水中的一氧化碳測定，測定空氣中的一氧化碳含量靈敏度較差。利用裝有氨磺酰苯酸銀的硅橡膠膜滲透裝置，濾過一氧化碳，生成淡黃色-褐色膠態銀，可測定2~80μ/l范圍內的一氧化碳，但該法反應速度較慢，不適合環境空氣一氧化碳實時監測。目前綜合效益最好的測定法為：通過元素鈀與酸性氯化物溶液中的碘酸鹽發生還原反應，萃取陰離子，以焦寧G為反離子，在535nm處測定萃取物的吸光度，精度范圍達到1μl/L，適用于測定交通環境空氣中的一氧化碳。
2.2氮氧化合物測定鹽酸萘乙二胺分光光度法是國家環境保護部關于環境空氣氮氧化合物檢測的推薦方案，其基本原理是：建設一套具有兩支吸收瓶的反應設備，第一支吸收瓶中的吸收液吸收空氣中的二氧化氮發生化學反應，產生粉紅色偶氮染料，濾過的一氧化氮通過氧化管中的酸性高錳酸鉀溶液生成二氧化氮，被第二支吸收瓶中的吸收液吸收發生反應。應用分光光度法對產生粉紅色偶氮染料過程中的光譜進行測定，其在波長540nm處吸光度與吸收瓶中的二氧化氮含量密切相關，計算兩只吸收瓶中的偶氮染料可測定環境空氣中一氧化氮、二氧化氮水平。該法適用性良好，準確度高，反應溶液穩定，保存時間長，是一種較為理想的氮氧化合物檢測方法。
2.3二氧化硫測定甲醛吸收-副玫瑰苯胺分光光度法是環境空氣質量監測國家標準推薦技術方案，該技術起源于美國，自1982年引入我國，并逐漸得到推廣，經過十數年驗證改進，其技術路徑已基本成熟。該技術主要實現路徑與原理如下，通過吸收瓶中鹽酸副玫瑰苯胺儲備液吸收環境空氣中的二氧化硫，對產生的二氧化硫化學反應進行分光光度法檢測，計算二氧化硫含量。工作場所檢測標準為：標準曲線濃度范圍0.60μg/ml～1.60μg/ml，對所生成的化合物在575nm處分光度在20℃±2℃水浴環境下處理15min進行顯色對比分析，檢出上限為1.6μg/ml，實際標準限為：0.45μg/ml；環境空氣監測標準為：標準曲線濃度范圍0.050μg/ml～1.000μg/ml，測定波長577nm，20℃顯色，時間20min[5]。該法適應性強，在多個省市地區經過實證驗證，抗干擾能力極強，試劑無劇毒、廉價易得，吸收效率高，溶液室溫下穩定性強易保存，采樣最佳吸收范圍與光度寬度范圍易于控制，技術易于掌握，是一種較理想的環境空氣二氧化硫監測方法。
2.4鉛元素測定鉛是一種有毒重金屬，危害極大，近年來，血鉛中毒事件頻發，已引起人們的廣泛關注，城市空氣鉛含量水平不斷上升，嚴重威脅城市居民生命健康?；鹧嬖游辗止夤舛确ㄊ菄噎h保總局推薦的空氣鉛含量測定技術方案，通過吸收瓶濾過膜直接采集空氣中的鉛元素，經消解制備，直接吸入空氣，通過乙炔火焰進行原子化，獲得283.3nm分光度，一般采用空心陰極燈測定，據吸光度與金屬濃度定量分析。石墨爐原子吸收法也是目前應用較廣泛的環境空氣鉛元素測定方法，將富含鉛元素的溶液吸入空氣，經過石墨管，在高溫環境下原子化，發生發光效應，通過鉛空心陰極燈發射譜線，測定波長283.3nm，一般來說輻射光特征與其居石墨管的距離有關，兩者呈反比，通過測定能量吸收情況，計算鉛元素濃度，進行定量分析。兩種方法靈敏度、精確度并無優劣之分，均適用于空氣中鉛元素測定，但從實踐操作來看，火焰原子吸收分光光度法操作更簡單，影響吸光度因素較少，抗干擾能力更強，回收率更高，適用于日常連續監測。
2.5臭氧監測測定大氣中臭氧含量的方法較多，包括碘量法、紫外線分光光度法、氣相色譜法、靛藍二磺酸鈉（IDS）分光光度法、化學發光法等，其中IDS是目前我國環?？偩滞扑]方案，具有靈敏度高、重復性好、抗干擾能力強、試劑穩定等優點。IDS溶液吸光度曲線與濃度密切相關，在1610nm處達到最大吸收波長。IDS與臭氧以1∶2摩爾比進行反應，通過計算吸光度，分析溶液濃度改變情況，進而定量測算出臭氧含量。
3小結
