前言：尋找寫作靈感？中文期刊網用心挑選的藻膽體純化鑒定生物綜合實驗設計論文，希望能為您的閱讀和創作帶來靈感，歡迎大家閱讀并分享。
1藻膽體簡介
藻膽體由“桿”復合物和“核”復合物組成。前者直徑12nm，長度18nm，由若干個藻膽蛋白(包括藻紅蛋白、藻藍蛋白)六聚體通過連接肽聚合而成，組成六聚體的每個單體包括藻藍蛋白α和β兩個亞基;核復合物直徑12nm，長度12nm，由3個藻膽蛋白(別藻藍蛋白)三聚體和相應的連接肽組成，三聚體中每個單體由別藻藍蛋白α和β兩個亞基組成。核結構并排排列并附著于類囊體表面，桿結構分布于其核結構側面，呈放射狀排列，構成完整的藻膽體。在完整的藻膽體中，藻紅蛋白、藻藍蛋白復合物將吸收的光能傳遞給別藻藍蛋白復合物，能量最終被匯集并傳遞給光系統中的葉綠素a。不同物種藻膽體的組成和結構差異較大，而在實驗教學中宜選擇組成和結構比較簡單的藻膽體(如Synechococcus6301)。尤其是只含有藻藍蛋白和別藻藍蛋白，不包含藻紅蛋白的藻膽體，更適宜于該綜合實驗。
2實驗流程
藻膽體分離、純化以及性質分析實驗的具體操作步驟在相關文獻中均有詳細介紹，在此只給出實驗流程及所用到的實驗技術。其中，藻膽體分離和純化過程中，常溫操作及高濃度(0．6～0.9mol/L)磷酸緩沖液是保持藻膽體結構完整的關鍵，這兩個條件也是分離藻膽體實驗操作的特殊之處，完整的藻膽體經蔗糖密度梯度離心后形成明藍色區帶，吸收光譜最大吸收峰位于610～615nm;而藻膽蛋白的分離純化需在4℃下進行。另外，通過透析除去磷酸鹽(通常降至5mmol/L以下)后，藻膽體自動解體。
3藻膽體作為實驗材料的優勢
3．1實驗材料容易獲得
藍藻培養方法現已非常成熟，且藍藻在旺盛生長時，藻膽體占可溶性蛋白含量的80%左右，因此完成以上實驗流程每組只需要30～50g藍藻細胞。
3．2綜合性強
該實驗涉及表面活性劑的使用、密度梯度離心、透析、吸收光譜分析、SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳以及色譜等多項常用生化技術。
3．3實驗結果明顯、成功率高
實驗中得到的藻膽體及其解聚得到的藻膽蛋白均為有色的色素蛋白，密度梯度離心和層析結果均可直接觀察，增加了學生實驗過程中的興趣度，且各組往往是得到藻膽體和藻膽蛋白量上的差異，基本不會出現無實驗結果的問題。
3．4難度適當
在進行充分準備后，高年級本科生均可完成整個實驗流程，該實驗流程約需要24～36學時。該實驗靈活性強，既可作為綜合性實驗，也可作為分步實驗，隨講隨做，將每個實驗結果凍存備用，因此各院?？筛鶕n時情況、學生基礎以及具體實驗條件對該實驗流程進行適當修改。此外，有條件的學校還可以在此基礎上，完成完整藻膽體的電鏡觀察、藻膽體及藻膽蛋白室溫或低溫熒光激發/發射光譜分析以及連接肽的分離純化等實驗，以增加實驗難度。
3．5實驗費用較低
完成實驗操作，若藻膽蛋白的純化使用羥基磷灰石柱層析，每組所需試劑耗材300元左右。
4實驗存在的問題
(1)密度梯度離心是純化藻膽體的必需途徑，也是制約該綜合性實驗大規模開展的重要因素，完成該實驗流程需至少收集2管的藻膽體(每管容量50mL，上樣5～10mL)，而每臺超速離心機只能同時放置6支離心管。由于我院擁有1臺超速離心機，因此該實驗每次開設均不超過6個小組。
(2)藻膽體結構與功能的研究始于上世紀70年代，現在已成為研究得最為透徹的生物大分子之一，目前已不是研究熱點，因此該實驗設計基本屬于驗證型，相比而言創新性稍顯不足，但無疑是訓練學生蛋白分離純化相關技術不可多得的實驗材料。
5結語
藻膽體純化鑒定實驗為蛋白質復合體分離純化經典實驗，由于色素與肽鏈共價結合，實驗難度相對較低，且該實驗既體現蛋白質純化普遍規律，又有其自身特點(藻膽體常溫下穩定)，是學生辨正認識蛋白分離純化流程的良好范例。
作者：黃輝 潘寶平 單位：天津師范大學生命科學學院