前言:中文期刊網精心挑選了中藥提取物范文供你參考和學習,希望我們的參考范文能激發你的文章創作靈感,歡迎閱讀。
中藥提取物范文1
中藥提取物是指以中國傳統中草藥(不包括動物藥和礦物藥)為原料,利用現代植物化學提取分離技術提取分離所獲得的單味植物提取物。在化妝品的研究和開發過程中,中藥提取物作為功能添加劑,是制備具有特殊功效化妝品重要的物質基礎。目前,國內市場上銷售的中藥功效化妝品中應用的中草藥添加劑品種已超過百種以上。根據這些提取物成分及含量的不同,大體上分為三類:
一是以單一化合物成分為主的提取物,純度達到95%以上。其結構清楚、藥效明確、藥理學研究資料全面。國內一般稱其為天然藥物或植物化學藥物,如大豆異黃酮、人參皂甙、茶葉兒茶素、白藜蘆醇、石杉堿甲等均屬此類。
二是通過現代分離工藝如柱層析分離、沉淀分離、萃取分離等過程所獲得的有效部位或多組分提取物,有效部位尚需具有公認和明確的含量測定指標,其活性成分含量一般在20~50%之間,如銀杏黃酮、三七總皂甙、積雪草提取物等。
三是經過水或乙醇提取但未加以分離的單一植物浸膏粉或流浸膏,這些提取物的部分成分明確,一般均有明確的質量控制標準,如枳實、當歸、黃芪、五味子、靈芝、蒺藜、厚撲、刺五加、貫葉連翹、紅車軸草、銀杏葉等提取物。
在過去的幾年中,國內許多化妝品生產企業隨著“回歸自然”風潮在全球范圍內的興起,應用上述部分中藥提取物,開始對中藥功效化妝品進行研究和開發,目前已有包括美白、防曬和抗皺等多個特殊功效作用的化妝品應市,在國內化妝品市場占有一定的市場份額并享有一定的知名度。但是,無論在市場占有率還是在知名度方面,中藥功效化妝品,包括一些知名品牌,由于產品大多科技含量較低,缺乏市場競爭力,因而導致國內品牌的產品與國外知名品牌的天然植物化妝品在競爭中明顯處于“尷尬”地位。甚至有部分業內人士認為,國內市場銷售的所謂“中藥功效化妝品”或“綠色化妝品”,從某種意義上講只是一種商業概念的炒作,并無什么實際內容。研究結果表明,目前中藥功效化妝品市場狀況的成因與目前國內生產制備中草藥添加劑的提取工藝落后和有效成分缺乏定性定量研究有直接的關系。因此,提高我國這類產品的科技含量和市場競爭力就必須從添加劑這一源頭抓起,深入開展對中藥化妝品添加劑的研究和開發是我們當前必須解決的首要問題。
國內中藥功效化妝品中采用的中草藥添加劑與國外“綠色化妝品”采用的植物添加劑相比,主要有以下幾個方面的不足:
1. 生產工藝和生產設備方面
西方發達國家大多采用水提結合動態溫浸工藝并輔以先進的設備;而國內采用的多為水煎提取工藝,而且設備大多較為落伍。
2. 質量控制方面
國外天然植物添加劑開發研究比較發達的國家如德國、日本等,特別注重天然植物添加劑研究和開發走標準提取物的路子,許多生產企業均已建立了相應天然植物添加劑的行業質量標準體系;而國內還沒有相應的中草藥添加劑行業質量標準規范和要求。
3. 在中藥功效化妝品應用方面
國外同行研究開發的功效化妝品所用的天然植物添加劑以活性部位、單體化合物或所謂的“植物精油”居多,而國內大多數企業研究和開發的中草藥添加劑則多以單味中藥提取物或浸膏為主。
如上所述,國內研究機構或企業在中草藥添加劑研究和開發方面與國外同行相比存在諸多的差距,然而,我們也具有許多方面的優勢。近年來,特別是在中國加入WTO后,這些優勢更趨明顯,主要表現在以下幾個方面:
1. 資源優勢:我國擁有豐富的自然藥物資源,據悉,我國現擁有天然藥用植物11146種、人工栽培藥用植物400種,其有種類占50%以上。
2. 文化優勢:指我國作為中藥的發祥地,被國際社會認為有"正宗"的中藥,這些是包括鄰國日本和韓國在內均不具有的優勢。
3. 經驗積累優勢:我們的祖先在過去的幾千年里,為我們做了大量的研發工作,奠定了寶貴的知識基礎。
4. 政策優勢:中國政府已經意識到中醫藥產業對國家的重要性,并對這一產業給予大力支持。
5. 環境優勢:我國有多個相對集中的中藥產業基地,因而也具有相對的人才集中、信息的豐富和競爭意識強等所謂的環境優勢。
二、 中草藥添加劑標準體系建立及其意義
隨著現代科技,特別是近代醫藥的發展,各種天然藥物繁雜的化學結構和多個有效成分逐漸被揭示出來,為中藥功效化妝品研究及開發朝著天然型、安全型、療效型的健膚美容方向發展,奠定了理論基礎。以中藥提取物作為化妝品添加劑制備的化妝品具有作用溫和、效果明顯持久、副作用少等特點。然而,一直以來,中藥添加劑的質量不可控、功效不穩定、缺乏現代基礎理論支撐等關鍵問題依然存在,并嚴重制約著新型中藥功效化妝品的研究和開發工作。
在經濟全球化和經濟發展一體化的今天,一個企業或是一個國家如果控制了一個產業中的關鍵技術,而讓整個產業以其為標準,就會有巨大的競爭優勢,如微軟的視窗和英特爾的芯片就是如此。在競爭激烈的市場環境條件下,標準即財富,擁有標準就擁有財富。目前,國內只有少數中草藥提取物生產企業初步建立了植物提取物企業技術標準體系,但還沒有國家標準或行業標準,這就使得絕大多數生產缺乏相應的技術依據和可靠的產品質量檢測方法,而商業企業又多以合同中的質量條款作為產品交付的依據,因此,非標準化給生產經營設置了障礙,同時也制約了產業的發展?;谏鲜銮闆r,國內化妝品科研機構和企業正在積極開展中草藥添加劑質量研究和相關標準體系建立工作,這將對進一步拓展國內外市場作用巨大,意義深遠。
在對中草藥添加劑質量研究的基礎上,建立相應的質量標準體系,使中草藥添加劑在質量方面具備安全、有效、穩定、可控等必備特點,以滿足當前國內中藥功效化妝品企業生產及科研的需要。因此當務之急應是盡快在企業或行業內部建立中草藥添加劑的標準規范體系,實現中草藥添加劑產品的標準化;同時應強化標準國際化意識,并力圖最終實現產品標準的國際化。
在企業或行業內部建立中草藥添加劑的標準規范體系,必須首先確立中草藥添加劑的研究方向,從其質量研究入手,開展系統和規范性研究工作。中草藥添加劑質量研究的主要內容包括以下幾個方面:
1. 中草藥添加劑質量穩定性、可控性和均一性的研究
對中草藥添加劑的有效成分或標識成分采用定量分析的方法進行研究;對多組分成分采用指紋圖譜的方法進行研究。指紋圖譜是進行藥物特征性分析的主要手段,近年來,國內外普遍開展了此項工作,有許多成功的經驗可以借鑒。
2. 工藝的可重復性和可控制性研究
現代工藝技術的提高,為最大限度地將中草藥添加劑中的目標成分和其它組分分離提供了可能。柱層析分離技術、膜分離技術以及二氧化碳超臨界萃取技術等的綜合利用,是實現生產制備中草藥添加劑工藝可重復性和產品質量穩定的重要保證。
3. 功效的可評價性和安全性的研究
對中草藥添加劑在化妝品應用中的功效評價以及安全性的總體評價,是現代藥物應用的基礎。傳統中草藥評價主要是根據化妝品的使用感覺和經驗進行評價,缺乏量化指標導致功效和劑量的難以評價。因此,必須加大對中草藥添加劑有效成分的研究工作。
4. 質量保證體系的研究
中草藥添加劑具有植物藥的質量特性,因此在對中草藥添加劑質量標準研究基礎上,應借鑒植物藥管理系列規范,如藥品研究開發管理規范(GRP)、藥品生產管理規范(GMP)等,建立一個切實可行的中草藥添加劑質量保證體系。
三、 中藥添加劑在化妝品中的應用展望
根據國外藥用植物提取物在化妝品中的應用現狀并結合過去十幾年我國中藥提取物在化妝品中研究及應用方面所做的工作,多數人認為,中草藥添加劑在化妝品研究及開發中應走中醫藥基礎理論與現代化科學相結合之路,建立有中國特色的中草藥添加劑研究和應用規范。鑒于目前的研究現狀,在對中藥化妝品研究和開發中需要注意以下幾個問題。
1. 提高質量檢測水平。目前,我國化妝品企業對各種產品功效成分的分析和產品質量標準的檢測手段還相當落后,不解決這些矛盾,不可能真正提高產品的科技含量。
2. 突出自身特色的研究模式。除日本外,西方發達國家對植物提取物的研究是建立在化學成分學之上并進行藥理評價。國內化妝品生產企業和科研機構對中草藥添加劑的研究應以傳統中醫藥學理論為基礎,結合現代化科學技術,建立既要體現中醫藥基本理論特色,又要符合現代藥物標準評價體系的中草藥添加劑研究模式。
3. 聯合攻關。國內化妝品企業及科研機構應通過將包括精細化工、醫藥生產、生物工程技術等方面的優秀人才組合起來,進行跨學科的聯合攻關模式,開展對中藥功效化妝品生產工藝的研究和開發。
中藥提取物范文2
[關鍵詞]瘢痕疙瘩;中醫藥;成纖維細胞
[中圖分類號]Q813.1[文獻標識碼]A[文章編號]1008-6455(2010)05-0701-03
Effects of extractant from self-made traditional Chinese drug on proliferation of keloid-derived fibroblasts
ZHAO Qing-li,MENG Ru-song,YANG Qing-qi,CAI Rui-kang
(Department of Dermatology,Air Force General Hospital of Chinese PLA,Beijing 100036,China)
Abstract:ObjectiveTo study the effects of the extractant from the self-made traditional Chinese drug on the proliferation of keloid-derived fibroblasts (KFB).MethodsKFB and normal fibroblasts (NFB) were cultured in vitro. The aqueous or alcohol extractant in various concentr ation from the self-made traditional Chinese drug was added to the culture media. Inverted microscope, CCK-8 and biochemistry analysator were applied to observe or detect fibroblasts appearance, proliferation, growth and lactate dehydrogenase (LDH) activity.ResultsWithin certain concentration, after the extractant from drug taking action, KFB appearance was altered, the proliferative activity was decreased, the LDH activity was increased. In addition, the alcohol extractant inhibited the proliferation of KFB more efficiently than the aqueous extractant,KFB were more sensitive to drug than NFB. Conclusions The self-made traditional Chinese drug may produce a therapeutic effect by inhibiting the proliferation of KFB,cytotoxicity,etc.
Key words:keloid, traditional Chinese drug, fibroblast
我們將全蝎等六味中藥配制成軟膏外用瘢痕疙瘩皮損處,經采用隨機、對照試驗方法進行臨床觀察,獲得比較滿意的結果(待發表)。本研究檢測自制中藥提取物對體外培養的瘢痕疙瘩成纖維細胞增殖的影響,旨在為瘢痕疙瘩臨床治療提供實驗依據。
1材料和方法
1.1 實驗材料:自制中藥由全蝎、蚤休、丹參、生乳香、浙貝母、生甘草組成,其水提物、醇提物由中國中醫科學院廣安門醫院制劑中心陳賢師制備。體外培養的人瘢痕疙瘩成纖維細胞(Keloid Fibroblasts, KFB)6株、人正常皮膚成纖維細胞(Normal Fibroblasts, NFB)3株由中國醫學科學院整形外科醫院王春梅教授贈送。主要試劑及儀器包括CCK-8試劑盒(碧云天生物技術研究所)、倒置顯微鏡(日本OLYMPUS)、酶標閱讀儀(450型 美國BIO-RAD)、全自動生化分析儀(日本 日立)。
1.2 實驗方法
1.2.1 藥物的配制:稱取適量的自制中藥水提物細粉加PBS溶解,高壓滅菌;量取適量的醇提物液水浴蒸干,加二甲基亞砜及PBS溶解,微孔濾膜濾過除菌。水提物、醇提物均用細胞培養液(含DMEM、新鮮小牛血清、青霉素、鏈霉素)倍比稀釋為31.25、62.5、125、250、500、1 000、2 000、4 000、8 000、6 000μg/ml。
1.2.2 成纖維細胞形態學觀察及增殖活性的測定:人KFB、NFB傳代3~7代,加0.25%胰蛋白酶消化,制成5×104/ml細胞懸液,以100μl/孔(5×103細胞/孔)加入96孔板,培養箱中孵育48h。吸除原培養液,中藥組KFB、NFB孔中分別加入31.25~16000μg/ml間10個濃度的中藥水提物、醇提物培養液100μl/孔,陰性對照組KFB、NFB孔中加入培養液100μl/孔,每組均設3個復孔,培養箱中繼續孵育48h。倒置顯微鏡下觀察細胞形態并攝像。向各培養孔中加入CCK-8溶液10μl,培養箱中作用1h,在酶標儀上測定450nm處光密度值(OD值)。抑制率(%)=陰性對照OD值-中藥組OD值/陰性對照OD值。
1.2.3 成纖維細胞生長狀況的測定:根據增殖實驗結果,設定抑制率為50%左右的自制中藥醇提物濃度為本實驗濃度。細胞接種同前。中藥組KFB、NFB孔中加入2000μg/ml中藥醇提物培養液100μl/孔,陰性對照組KFB、NFB孔中加入培養液100μl/孔,每組均設3個復孔,于培養箱中孵育24h、48h、72h、96h、120h時取出培養板,在相應孔中加入CCK-8溶液10μl,培養箱中作用1h,在酶標儀上測定450nm處OD值,將在各時間點測得的OD值繪制出生長曲線。
1.2.4 乳酸脫氫酶(LDH)活性測定:KFB、NFB以2ml/孔(3×105細胞/孔)接種于6孔板中,方法同前。中藥組KFB孔中分別加入31.25~16 000μg/ml間6個濃度的中藥醇提物培養液2ml/孔,NFB孔中加入500μg/ml中藥醇提物培養液2ml/孔,培養箱中繼續孵育48h。收集上清,用全自動生化分析儀測定LDH活性。
1.3 統計學分析:將所有資料輸入數據庫,采用SPSS 13.0統計軟件進行統計處理,檢測指標用x±s、率表示,統計分析方法為t檢驗。P
2結果
2.1 藥物對成纖維細胞形態的影響:倒置顯微鏡下可見陰性對照組人KFB、NFB貼壁生長,形態狹長,多平行排列。在自制中藥水提物、醇提物16000μg/ml作用下,KFB、NFB全部裂解成碎片;在4000~8000μg/ml作用下,部分細胞碎裂,部分貼壁生長,形態短粗,部分呈圓形漂浮于培養液中;在1000~2000μg/ml作用下,部分短粗細胞貼壁生長,部分為圓形漂浮細胞,并呈濃度依賴性,無碎裂細胞;在31.25~500μg/ml濃度下,細胞以狹長貼壁生長為主,見少數短粗貼壁細胞及圓形漂浮細胞,對濃度依賴性不明顯。藥物各個濃度水提物與醇提物間比較,KFB與NFB間比較,碎裂細胞、短粗貼壁細胞、圓形漂浮細胞無鏡下可見的差異(圖1)。
2.2 藥物對成纖維細胞增殖活性的影響:自制中藥水提物在2 000~1 6000μg/ml、醇提物在1 000~1 6000μg/ml對KFB增殖具有抑制作用,水提物及醇提物在4 000~16 000μg/ml對NFB增殖具有抑制作用,與陰性對照組比較差異均有統計學意義(P
2.3 藥物對成纖維細胞生長狀況的影響:從生長曲線中可見,陰性對照組KFB、NFB數量隨時間的延長而增多,至96h細胞數達高峰,至120h細胞數稍減少。2 000μg/ml自制中藥醇提物作用24h后,KFB、NFB數量均減少;隨著時間的延長,NFB數量逐漸增多,呈現出細胞數量稍少于陰性對照組的持續生長狀態;在24~120h間 5個時間點,KFB數量均顯著減少, 呈現出持續地被明顯抑制狀態(圖2)。
2.4 藥物的細胞毒性作用:KFB在2 000~16 000μg/ml自制中藥醇提物的作用下,培養液上清中LDH活性增高,與陰性對照組比較差異均有統計學意義(P0.05)(表3)。
3討論
以往的研究表明,瘢痕疙瘩的發生與成纖維細胞生物學功能異常有關,主要表現為成纖維細胞活性增高及耐受性增強;KFB在離體時可繼續產生高水平的膠原蛋白、纖維粘連蛋白、彈力蛋白、蛋白多糖等細胞外基質,在低濃度血清生長因子培養液中仍能持續生長[1]。藉此,檢測藥物作用后體外培養的KFB增殖性能,已成為多數學者探討瘢痕疙瘩治療藥物作用機制的基本手段[2]。近年來,關于中藥對KFB生物性狀的影響已引起國內學者的重視,但所測定的中藥多為單味藥提取物或活性成分,關于復合中藥的實驗室研究為數有限[3-4]。
成纖維細胞是貼壁生長細胞,其形態并不固定,當培養條件發生改變、自身生理功能出現變化時容易在形態方面表現出來[5]。Aggeler等[6]認為,凡是能導致成纖維細胞變圓的試劑或條件,都能增加其膠原酶的合成。我們在倒置顯微鏡下觀察到,當自制中藥水提物、醇提物在濃度31.25~8000μg/ml范圍內,KFB、NFB均有不同程度的細胞形態改變,這說明藥物影響著成纖維細胞的正常生理功能,可能包括增加膠原酶的合成。
本研究的成纖維細胞增殖活性的測定結果顯示,自制中藥醇提物對KFB增殖的抑制濃度偏低,對KFB、NFB增殖的抑制呈濃度依賴性,而水提物的抑制濃度偏高,在較低濃度時其抑制作用明顯降低,甚至有促進增殖作用。因此,我們認為自制中藥醇提物對成纖維細胞增殖的抑制作用較水提物更有效,這可能與醇提法能更多地提取中藥的有效成分有關,故在后續實驗中我們僅采用醇提物進行檢測。將成纖維細胞增殖活性測定與生長狀況測定結果結合起來分析,我們發現KFB在中藥醇提物、水提物作用下其增殖均被抑制,且藥物濃度偏低,而NFB增殖的藥物抑制濃度偏高,且對31.25~62.5μg/ml水提物的刺激呈現出增殖增強反應;在2 000μg/ml中藥醇提物作用120h時,KFB增殖顯現出持續地被明顯抑制狀態,而NFB增殖雖亦被抑制,但細胞增殖仍顯現出逐漸增加的趨勢。因此,我們認為自制中藥具有較強的針對性,對KFB增殖的抑制作用更明顯,即KFB對自制中藥抑制的反應比NFB更敏感。
本研究還發現,當自制中藥醇提物≥2000μg/ml濃度時,KFB培養液中LDH活性顯著增加,這表明存在有細胞膜受損、LDH外釋的現象,這提示我們本藥物有可能是通過殺傷、破壞KFB而發揮作用的[7],同時也提醒我們盲目地增加本藥物的濃度并不安全。
[參考文獻]
[1]陳海蓉,吳延芳.瘢痕疙瘩成纖維細胞研究進展[J].中國麻風皮膚病雜志,2004,20(5):465-466.
[2]陳洪,農曉琳.皮膚病理性瘢痕的基礎理論研究與進展[J].中國組織工程研究與臨床康復, 2008,12(42):8358-8361.
[3]蔣文波,金兵,戴昭秋,等.中藥對瘢痕疙瘩成纖維細胞抑制作用的研究進展[J].中醫藥學導,2006,34(5):55-56.
[4]林序文,吳浩俊,張培華.中藥有效成分治療病理性瘢痕研究進展[J].現代中西醫結合雜志,2007,16(26):3920-3922.
[5]司徒鎮強,吳軍正.細胞培養[M].北京:世界圖書出版社公司,2001:6-85.
[6]Aggeler J, Frisch SM, Werb I. Changes in cell shape correlate whit collagenase gene expression in rabbit synovial fibroblasts[J]. J Cell Biol,1984,98(5):1662-1671.
[7]陳明春,黃茂芳.積雪草甙和苦參堿對皮膚瘢痕成纖維細胞生長及膠原合成影響的研究[J].中國中西醫結合皮膚性病學雜志,2006,5(1):11-14.
中藥提取物范文3
【摘要】
目的篩選抗龍膽葉枯病菌活性的中藥。方法以龍膽葉枯病菌(Alternaria sp.)為供試菌種,對9種中藥乙醇提取物進行抗龍膽葉枯病菌活性實驗,采用有限稀釋法,測定最低抑菌濃度。結果9種中藥乙醇提取物均有抑菌作用,其中蛇床子、川楝子提取物14 d的最低抑菌濃度MIC100小于0.1 g/ml。結論蛇床子、川楝子具有較強的抗龍膽葉枯病菌作用,可進一步開發為防治龍膽葉枯病藥物。
【關鍵詞】 中藥殺菌劑 抑菌作用 活性篩選 龍膽葉枯病
Abstract:Objective To screen the antifungal activity against Alternaria sp. of TCMs. MethodsThe antifungal activity against Alternaria sp. for the ethanol extracts of nine speices of TCMs was tested on Alternaria sp. Use limiting dilution to test the minimum inhibitory concentration.ResultsAll the ethanol extracts of TCMs exhibited inhibition on Alternaria sp.. The minimum inhibitory concentration of Fructus Cnidii, Fructus Tossendan was under 0.1 g/ml. Conclusion The antifungal activity of Fructus Cnidii, Fructus Toosendan against Alternaria sp.. is much stronger and can be developed.
Key words:Fungicides of TCMs; Inhibition; Screening; Rough gentian
龍膽葉枯?。ˋlternaria sp.)是龍膽生產中的重要葉部病害,發生普遍。在龍膽及其它藥材生產中對病害的防治大量使用化學藥劑,導致環境污染、農藥殘留,影響藥材的質量。我國中藥資源豐富,許多中藥含抑菌活性物質[1~3],從中尋找抑制植物病原菌活性物質,研制植物源新型殺菌劑,防治藥用植物病害,對生產符合GAP標準中藥材具有重要意義。
目前,國內外學者在中草藥抗真菌實驗方面已做了大量的工作 [1~5],而從中篩選抗藥用植物病原真菌的研究較少。本研究根據以往中藥抗真菌文獻報道,選出9種中藥,研究其對龍膽葉枯病菌(Alternaria sp.)的抑制作用。
1 材料與方法
1.1 材料
1.1.1 中藥
地膚子、苦參 、知母、川楝子、蛇床子、大風子、蒼耳子、白鮮皮、土槿皮購于哈爾濱市同泰大藥房,經鑒定為正品; 95%乙醇(天津泰達化工有限公司),葡萄糖(沈陽市試劑三廠),瓊脂(青島水產品加工廠)。
1.1.2 供試菌種
龍膽葉枯病菌,從黑龍江北安栽培的粗糙龍膽Gentiana scabra Bunge中分離純化得到,采用從病組織分離培養,將分離得到的菌種接種到PDA培養基上培養[6],待產生孢子后,采用單孢分離的方法對菌種進行純化。應用柯赫氏證病法則(Kochˊs postulate)證明為龍膽葉枯病病菌,通過對分生孢子梗、分生孢子等的觀察鑒定為Alternaria sp.。
1.1.3 培養基
用PDA培養基。
1.2 方法
1.2.1 樣品的制備
將中藥樣品于60℃烘干,經粉碎過20目篩,加5倍量的95%乙醇回流提取兩次,2 h/次,濾過,濾液減壓濃縮至1 g/ml(即每毫升含1 g生藥)。濃縮液于冰箱(0~4℃)冷藏備用。
1.2.2 菌種活化
將保存的菌種接于PDA培養基上培養4d備用。
1.2.3 抑菌實驗
在無菌操作條件下,以1 g/ml生藥的藥液為原液,用滅菌PDA培養基稀釋,分別 稀釋為原液的50% ,40% ,30% ,20%,10% ,5%,1% ,0.8%,0.6%,0.4%,0.2%,0.1%(相當于每毫升含0.5,0.4,0.3,0.2,0.1,0.05,0.01,0.008,0.006,0.004,0.002,0.001 g生藥)12個濃度的藥基,對照為70%乙醇代替藥液配制,并控制藥基中的乙醇含量在15%以下(在配制高濃度的藥基前,對加入的藥液揮去部分乙醇),每管接種新培養的真菌菌落邊緣2 mm2的真菌菌絲塊,重復3次,25℃培養。每天觀察接種菌落生長情況,凡生長的菌落記為“+”,凡完全不生長的菌落記為“-”。
1.2.4 MIC100的確定
MIC100為殺真菌劑(fungicide)的最低抑菌濃度,菌種接種在每種藥物系列梯度濃度培養基上,恒溫箱中培養7 d 和14 d,用肉眼觀察,接種菌塊未擴大,無細胞生長,取完全不生長管最低藥物濃度為最低抑菌濃度(MIC)。
2 結果
抗菌實驗結果見表1。表1 9種中藥乙醇提取物對龍膽葉枯病菌(Alternaria sp.)的抑制作用(略)
由表1給出各中藥乙醇提取物的最低抑菌濃度,結果見表2。表2 中藥乙醇提取物對龍膽葉枯病菌(略)
結果表明,9種中藥乙醇提取物對龍膽葉枯病病菌(Alternaria sp.)均有不同程度的抑制作用,隨著培養時間的延長,抑菌作用逐漸減弱,培養7 d最低抑菌濃度MIC100≤0.2 g/ml有地膚子、蛇床子、白鮮皮、川楝子、大風子,最低抑菌濃度MIC100≤0.1 g/ml有蛇床子、白鮮皮、川楝子;培養14 d最低抑菌濃度≤0.2 g/ml有川楝子、蛇床子、大風子,培養14 d 最低抑菌濃度MIC100為0.1 g/ml有川楝子、蛇床子。將藥基上的菌種轉接到無藥PDA培養基上仍不能生長,表明真菌已被殺死,川楝子、蛇床子乙醇提取物有較強抗龍膽葉枯病菌(Alternaria sp.)作用,其次為白鮮皮和大風子,可進一步作田間實驗。
3 討論
用乙醇提取抗菌活性物質優于水提法[4,7]。本實驗采用乙醇回流提取法,有利于生物堿等生物活性物質的提取,同時減少了提取液中蛋白質、多糖等雜質。
本實驗采用在藥基上接種菌絲體的方法測定藥物抗真菌活性,屬于固體瓊脂篩選抗真菌藥物,并采用有限稀釋法測定MIC100,該法操作簡便。前人實驗多采用培養基與藥物同時滅菌的方法,本實驗在藥基配制時,僅對培養基進行高溫滅菌,冷卻至70℃左右用微量移液器加入藥物,藥物有效成分不被破壞,在經長時間培養未滋生雜菌,實驗方法可靠。
由真菌引起的病害防治困難,只要有部分真菌細胞不被殺死,在適宜條件下就能生長繁殖,因此本抗菌實驗以真菌生長完全受到抑制來評價抑菌效果,即在較長時間(14 d)仍能保持對真菌生長的抑制,才是理想的抗菌藥物。9種中藥經長時間抑菌試驗觀察,川楝子、蛇床子乙醇提取物對龍膽葉枯病菌抑菌作用強而持久,是理想的抗龍膽葉枯病真菌的中藥。白鮮皮在培養7 d時抑菌作用最強,雖然到14 d時抑菌作用有所下降,也是一個較理想的抗真菌藥物。有待對其抗菌機理進一步研究。
【參考文獻】
[1]曹仁烈,孫在原.中藥水浸劑在試管內抗皮膚真菌的觀察[J].中華皮膚科雜志,1957,4:286.
[2]王理達,胡迎慶,屠鵬飛,等.13種生藥提取物及化學成分的抗真菌活性篩選[J].中草藥,2001,32(3):241.
[3]馮俊濤,石勇強,張 興.56種植物抑菌活性篩選試驗[J].西北農林科技大學學報(自然科學版),2001,29(2):65.
[4]馬廉蘭,鐘有添.6種中草藥對深部感染真菌的體外抑菌效果[J]. 贛南醫學院學報, 2001,21(1):1.
[5]方中達. 植病研究方法[M].北京:農業出版社,1987:83,150.
中藥提取物范文4
【關鍵詞】 中藥提取液; 藥材吸水量; 相對比重; 固含量; 黏度
中藥提取液是中成藥制藥過程中重要的物料形態,在各工藝過程中主要經過的過程包括化學物質自藥材中的溶出擴散、液體在管道內的流動、液態物料水分的蒸發(濃縮)和固態半固態物料水分的蒸發(干燥)。相關的物理性質主要有反映提取液中物相比例的固體含量(含固量,浸出物量)、表示濃縮狀態的相對比重和與運動性質有關的黏度等。了解中藥提取液的主要物理性質之間的相關性,可以提供對提取液本身的深入認識;在進行濃縮干燥的時候可以利用提取液本身性質的相關性簡化研究因素,可以更廣泛深入研究提取液性質與其它工藝參數之間的關系,為提供更有效控制濃縮干燥過程的參數設置提供理論基礎[1]。本研究就中藥提取液的常見物理性質進行了研究。
1 材料與方法
1.1 材料
藥材:薄荷等40種常用中藥飲片(上海養和堂中藥飲片有限公司)、丹參(飲片,上??禈蛑兴庯嬈瑥S)。
主要儀器:液體比重天平(pzb5,上海精密科學儀器有限公司天 平儀器廠);黏度計(brookfield viscosmeter ldi+,brookfield engineering laboratories,inc. us);真空干燥箱(zk82b,上海實驗儀器廠);上皿電子天平(fa1004,上海天平儀器廠)。
1.2 方法
1.2.1 提取液的制備 取飲片以常水(視藥材被充分浸泡)于室溫(20℃)浸泡12 h,傾倒讀取濾液,以加水量與讀取量差值為飲片吸液量。以此量的5倍為浸提量加熱煮沸后,保持微沸2 h,120目濾布濾過,濃縮至不同相對含量(g藥材·ml-1)。同一提取液在濃縮過程中連續取樣,放置于同一溫度,分別測定其相對比重、含固量(浸出量)和黏度;對同一濃度提取液進行加熱,測定不同溫度條件下黏度。
1.2.2 相對比重的測定[2] 以液體比重天平法進行。
1.2.3 含固量的測定[2] 參考浸出物含量測定法進行。
1.2.4 黏度測定[2] 用旋轉式黏度計測定不同溫度、相對比重、含固量同一提取液的運動黏度。
1.2.5 相關性考察 分別考察以上考察指標之間的相關性,進行回歸分析。數據處理、分析及繪圖使用excel軟件。
2 結果
2.1 飲片吸水量
飲片的吸水性考察結果見表1。結果表明常見中藥飲片的吸水量倍數在0.8~2.9之間,一般浸提加水量在5~10倍,為平均吸水量的2倍以上。這個數值可以做為浸提條件研究中加水量的計算基礎。
表1 常用中藥飲片的吸水量/mlo(50g)-1,20℃
飲片名稱吸水量飲片名稱吸水量/mlo(50g)-1生白芍50金銀花130 生甘草70夏枯草200 葛根75100 柴胡110訶子70 桂枝40北五味子50 生黃芪60枸杞子80 知母90桃仁30 當歸120梔子30 川芎60桑寄生70 熟地85麻黃70 鉤藤60益母草140 忍冬藤90茯苓30 黃柏95豬苓s50 丹皮55乳香- 陳皮100沒藥40 番瀉葉130生牡蠣- 枇杷葉110丹參105 大青葉90阿膠 -
依據藥材入藥部位的不同,計算相同入藥部位的飲片吸水平均倍數,進行比較后得到不同入藥部位藥材飲片的冷浸(20℃)吸水順序為:花>葉>全草>皮>莖木>根及根莖>果實種子>菌類>樹脂,見表2。表2 不同入藥部位藥材飲片的平均吸水量/倍(20℃)
2.2 含固量與相對比重
薄荷水提取液的含固量與相對比重關系見表3。以線性回歸考察薄荷水提取液相對比重與含固量的關系得到一條直線,線性關系良好,見圖1。同法得到丹參片提取液相對比重與含固量的直線關系,見圖2。提取液的含固量與相對比重之間正相關,具有良好的直線回歸關系。表3 薄荷水提取液的含固量與相對比重
2.3 相對比重與黏度
測定不同相對比重丹參水提取液的黏度,結果見表4。直接回歸考察兩者相關關系,相關系數r2=0.9197。對黏度值做數學變換,取自然對數再后進行回歸,得到較好結果r2=0.9912,見圖3。表4 丹參提取液的相對比重與黏度(25℃)
2.4 黏度與溫度
丹參提取液的相對比重、黏度與溫度的關系見表5。當rpm=50時(圖4),回歸曲線按照提取液濃度從大到小的順序依次是:
y=151729x-1.9504,r2 = 0.9871;
y =4734.4x-1.4023,r2 = 0.9806;
y= -0.0594x + 7.4098,r2 = 0.9500。
當rpm=100時,回歸曲線按照提取液濃度從大到小的順序依次是:
y=213130x-2.0244,r2 = 0.9918;
y =2304.6x-1.1962,r2 = 0.9862;
y =-0.0626x + 9.037,r2 = 0.9669。
提取液在低濃度時候,溫度與黏度成直線關系;隨著濃度的增大,溫度與黏度之間呈現出指數關系,溫度越高黏度越小;如果溫度足夠,不同濃度提取液黏度值有接近趨勢。
在黏度計不同轉速下,曲線的系數有差異,說明了提取液的動力學性質屬于非牛頓流體,黏度隨著受力的改變而改變。表5 丹參提取液的濃度、黏度與溫度
2.5 含固量與與黏度
含固量表現為一定體積提取液的固體總量,如果以該固體為目標物質,那么含固量就等于提取液的濃度。因此,從上節內容可知,含固量與黏度是正相關關系。圖5是70℃時濃度與黏度的回歸關系。
圖5 提取液濃度與黏度的關系
3 討論
本研究顯示不同植物部位來源藥材的吸水量具有規律性。賀福元等建立了中藥材吸水膨脹動力學數學模型并對大黃進行了研究,結果表明中藥材吸水膨脹服從一級線性動力學量變,可用線性模型表達[3]。
中藥提取液提取液代表總固體物質含量的濃度(含固量)、濃縮程度的比重和動力學性質的黏度之間多具備良好的相關性,因此,在進行中藥浸提液的處理過程中,可以利用這些指標進行工藝控制。在濃縮干燥過程中,如果建立質量控制成分與提取液的含固量的聯系,那么就可以將干燥的過程控制與制劑質量連接起來,提高中藥制劑全程控制的水平。其中,提取液的含固量與相對比重之間正相關,具有良好的直線回歸關系。其關系式可以歸納為:含固量=a(相對比重-1),其中a是一個接近2的數字[1]。該公式與實際生產的經驗比較吻合,可以作為經驗公式應用,并可以進一步探討其理論上的規律性。
中藥制劑技術研究應關注提取物的物理性質[4]。中藥提取液同樣是廣義“中藥提取物”的表現形式之一。中藥提取液的這些性質不僅可以用于濃縮干燥過程控制,還可以向中藥制劑的上游工序延伸,用于提取過程的監控。例如,提取達到平衡時,其行對比重應該達到一個平衡數值,直接監控該參數就可以判斷提取進行的程度。中藥制藥過程中物料相關物理性質的相關性研究將有利于對中藥制藥過程的理解和控制,相關研究已經有所開展,如文獻[1,3~6]。在這一方面,相關行業(如食品、飲料、化工領域)對物料的物理性質包括其過程動力學研究的比較深入,中藥制劑值得借鑒,使生產過程的認識和控制水平得以提升。
【參考文獻】
1 耿炤. 中藥提取物固體顆粒化研究.上海:上海中醫藥大學,2004.
2 中國藥典.2005年版二部.2000.
3 賀福元,馬家驊,劉文龍 ,等.中藥材吸水膨脹動力學數學模型的建立及對大黃的驗證實驗研究.中成藥,2004,26(10):788~791.
4 劉怡,馮怡,徐德生. 中藥制劑技術研究應關注提取物的物理性質.2007,29(10):1495~1498.
中藥提取物范文5
【摘要】 目的 研究5種中草藥對致病弧菌的抑菌活性,為水產品的安全用藥提供參考。方法 采用紙片法和試管法,以溶珊瑚弧菌(Vibrio coralliilyticus)、塔氏弧菌(Vibrio tubiashii)、副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、鯊魚弧菌 (Vibrio carchariae)為供試菌株,測定中草藥不同極性萃取部分的抑菌圈和最小抑菌濃度。 結果 夾竹桃葉、芒果葉、苦楝葉和羊蹄甲葉4種中草藥乙酸乙酯萃取部分對供試弧菌有很好的抑菌作用;苦楝葉和羊蹄甲葉石油醚萃取部分對副溶血弧菌有抑菌作用;芒果葉的水溶性部分對塔氏弧菌有很強的抑菌作用;枇杷葉提取物對4株弧菌均無抑制作用。結論 除枇杷葉外,其他4種中草藥可不同程度的抑制致病弧菌的生長,其抑制致病弧菌的活性成分有待于進一步研究。
【關鍵詞】 中草藥;弧菌;抑菌活性;最小抑菌濃度
Abstract:Objective To study the antibacteria activities of five herbs, to provide references for the safe drugs of aquaculture. Methods Using Vibrio coralliilyticus, Vibrio tubiashii, Vibrio parahaemolyticus and Vibrio carchariae as the tested bacteria, the inhibition zone and the minimal inhibitory concentration(MIC)were measured. Results The extracts, extracted with ethyl acetate from the leaves of Nerium indicum Mill., Mangifera indica Linn., Melia azedarach L. and Bauhinia purpurea could inhibit vibrio. And the extracts, extrated with petroleum ether from leaves of Melia azedarach L. and Bauhinia purpurea can inhibit Vibrio parahaemolyticus, too. The remainder extracts of Mangifera indica Linn.showed strong inhibition effect on Vibrio tubiashii. While the extracts of Eriobotrya japonica showed no inhibition effect. Conclusion Four of the five herbs show antibacteria activities and the study on active compounds should be done in future.
Key words:herb;Vibrio;antibacteria activity;minimal inhibitory concentration
隨著現代集約化和規?;a養殖的發展,養殖中水產動物感染細菌的幾率大大增加。為了預防水產動物疾病,大量抗生素類藥物被用作水產藥物。濫用抗生素使致病菌的耐藥性增加,藥物的有效性降低,同時也加劇了環境污染,殘留藥物降低了水產成品的品質,引發了市場對水產品安全性的質疑,降低了水產商品在國際貿易中的競爭力。因此,開發替代抗生素的高性能、無毒副作用、安全高效的抑菌藥物引起了廣大科研人員的關注。
本研究以夾竹桃(Nerium indicum Mill)、芒果(Mangifera indica Linn.)、苦楝(Melia azedarach L.)、羊蹄甲(Bauhinia purpurea)和枇杷(Eriobotrya japonica)等5種中草藥為研究對象,選取對水產品危害較大的4株致病弧菌為實驗菌株,旨在通過抑菌活性的篩選研究,獲得安全有效的天然抑菌藥物。
1 材料與方法
1. 1 儀器及試劑
主要儀器有DFT200型搖擺式高速中藥粉碎機(溫嶺市大德中藥機械有限公司)、RE52CS型旋轉蒸發器(上海亞星生化儀器廠)、LDZX40CI型立式自動電熱壓力蒸汽滅菌器(上海申安醫療器械廠)、150A生化培養箱(金壇市迅生儀器廠)、SWCJ1D型潔凈工作臺(蘇州蘇潔凈化設備有限公司)。所用試劑均為分析純。使用的培養基為2216E培養基。環丙沙星紙片為杭州天和微生物試劑有限公司產品。
供試菌種:溶珊瑚弧菌(Vibrio coralliilyticus)、塔氏弧菌(Vibrio tubiashii)、副溶血弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、鯊魚弧菌 (Vibrio carchariae)由南海水產研究所提供。
1. 2 供試藥材及預處理
供試藥材為廣東常見的5種植物的葉,供試的5種植物分別是夾竹桃(Nerium indicum Mill)、芒果(Mangifera indica Linn.)、苦楝(Melia azedarach L.)、羊蹄甲(Bauhinia purpurea)、枇杷(Eriobotrya japonica)。5種供試植物均采自廣東藥學院藥用植物園,原植物均經藥用植物教研室嚴寒靜副教授鑒定。供試植物葉片陰干后粉碎成粗粉備用。取供試藥材粗粉各20 g,用60%(φ)乙醇回流提取90 min后濾過,濾液減壓濃縮至50 mL后,依次用等體積石油醚、乙酸乙酯萃取。將3種萃取液分別減壓濃縮至1 g/mL(以生藥計),即得石油醚萃取部分(Ⅰ)、乙酸乙酯萃取部分(Ⅱ)和水溶部分(Ⅲ)。
1. 3 病原菌的分離和菌懸液制備[1]
將4株供試菌分別劃線接種于平皿培養基中,于28 ℃培養24 h后,挑選單個菌落轉接于斜面培養基中,28 ℃培養24 h后,用2 mL 0.9% NaCl溶液進行洗脫即制得所需菌懸液。
1.4 紙片法抑菌試驗
按無菌操作規程[2],吸取4株供試菌懸液各0.1 mL,分別加到平板培養基上并涂布均勻。將預先滅菌烘干并浸蘸定量藥液的濾紙片(直徑為5 mm)平貼在含菌培養基上。同時用浸有相應溶劑的濾紙片做對照。每份樣品做3份,結果取平均值。28 ℃倒置培養,并于12 h和24 h觀察抑菌效果,測定抑菌圈的直徑。以環丙沙星為陽性對照。
1.5 試管稀釋法測最低抑菌濃度
采用試管稀釋法,以相應溶劑作對照,測定有抑菌活性的藥液的最低抑菌濃度(MIC)。每種提取物為一組,每組取無菌試管12支,于第1管中加入1.0 mL濃度為2×105 CFU(colony forming units)/mL的菌液,在2~10管中每管加入1.0 mL 濃度為1×105 CFU/mL菌液,在第1管內加入中藥濃縮液1.0 mL,充分混勻后取1.0 mL放入第2管,混勻后再取1.0 mL放入第3管,第1管內的藥物濃度為原液的1/2,第2管為第1管的1/2,其余類推,直至第10管,每種藥物的第11管作菌液對照(僅加菌液不加中藥),第12管作藥物對照(僅加中藥不加菌液),以能抑制細菌生長(培養后培養基仍清亮)的最小藥物濃度為其MIC。
2 結果與分析
2.1 紙片法抑菌試驗結果
見表1。由表1數據可知,陽性對照環丙沙星對4株菌均有抑制作用,而中草藥提取物只對溶珊瑚弧菌、副溶血弧菌和塔氏弧菌3株菌產生抑制作用。其中,夾竹桃葉、苦楝葉和羊蹄甲葉對副溶血弧菌和溶珊瑚弧菌有抑制作用;芒果葉對溶珊瑚弧菌和塔氏弧菌有抑制作用;枇杷葉對4株供試致病菌均無抑制作用。比較不同提取部位抑菌作用可知,乙酸乙酯提取部分的抑菌活性較明顯,苦楝葉、芒果葉、夾竹桃葉和羊蹄甲葉乙酸乙酯萃取部分均產生抑菌圈;石油醚萃取部分的抑菌結果顯示,苦楝葉、羊蹄甲葉石油醚提取部分能產生抑菌圈;水溶性部分只有芒果葉產生抑菌圈。分析不同供試菌敏感性發現,副溶血弧菌和溶珊瑚弧菌兩株供試菌對夾竹桃葉、苦楝葉和羊蹄甲葉提取物均敏感,能產生不同大小的抑菌圈;塔氏弧菌只對芒果葉的水溶性部分敏感;鯊魚弧菌對中草藥提取物則完全不敏感。表1 5種植物不同萃取部分的抑菌圈(略)注:石油醚萃取部分簡稱為I,乙酸乙酯萃取部分簡稱II,水溶部分簡稱III。
2.2 試管稀釋法測定最低抑菌濃度結果
見表2。由MIC數據可知,芒果葉提取物對溶珊瑚弧菌和塔氏弧菌的MIC最低,表明芒果葉提取物在質量濃度為12.5 mg/mL(以生藥計)時即可完全抑制兩菌的生長??嚅~和羊蹄甲提取物對溶珊瑚弧菌和副溶血弧菌的MIC均為50.0 mg/mL(以生藥計),夾竹桃對溶珊瑚弧菌和副溶血弧菌的MIC為25.0 mg/mL(以生藥計)。其他組分的MIC均大于200 mg/mL。表2 5種植物不同萃取部分的最小抑菌濃度(略)注:“+”表示MIC>200 mg/mL
3 討 論
弧菌(Vibrio)因菌體有一個弧狀彎曲而得名,廣泛分布于自然界中,水環境中較多,對人、魚、蛙及其他動物均有致病性,其中霍亂弧菌和副溶血弧菌是引起人類細菌性食物中毒的首要食源性致病菌。目前,從海水、淡水和養殖水體中分離鑒定出弧菌(Vibrio)共有100多種,其中多數是致病菌,嚴重危害人類的食品安全。本研究所用供試菌鯊魚弧菌和副溶血弧菌也是《美國臨床微生物手冊》記載的人類致病菌。通過研究發現,鯊魚弧菌對5種中草藥均不敏感,而其他3種致病弧菌均有敏感中草藥,說明該菌具有對抗普通抑菌藥物的生長機制,應對其機理展開進一步的研究。
本研究所選5種中草藥是我國嶺南地區資源豐富、廣泛易得的藥材。本研究結果表明,除枇杷葉外,其他4種均有抑制致病弧菌的作用。比較文獻結果發現,夾竹桃粗提物對大腸桿菌、糞腸球菌等的MIC為0.5 g/mL[3],本研究結果表明夾竹桃乙酸乙酯萃取物對溶珊瑚弧菌和副溶血弧菌的MIC僅為25mg/mL。MIC結果差異的產生可能與以下2個因素有關:①菌種不同,敏感性不同。本研究采用的是水產養殖中的致病弧菌,而文獻所用供試菌為桿菌和球菌;②藥材的提取方法不同,本研究采用粗提后再萃取的方法處理藥材,一定程度上精制了樣品,去除了干擾,而文獻中藥物的處理方法僅為水提處理。本研究中,芒果葉的乙酸乙酯萃取物和水溶性部分分別對溶珊瑚弧菌和塔氏弧菌有較好的抑菌作用,說明萃取法可以有效地將不同活性的成分分開,比較文獻所用的水煎煮法[4],萃取法的優勢在于將不同極性的成分進行了粗分,為進一步研究活性成分提供了依據。實驗結果表明,苦楝葉和羊蹄甲葉分別對溶珊瑚弧菌和副溶血弧菌具有較好抑菌作用,苦楝葉的抑菌功效與其清熱燥濕的作用相符合,而羊蹄甲根的抗菌活性成分已被分離獲得[5]。
此外,本研究采用環丙沙星為陽性對照藥,實驗發現環丙沙星對4株弧菌有廣泛且明顯的抑菌作用,說明該4株菌對環丙沙星較敏感且沒有產生耐藥性。雖然環丙沙星對4株弧菌的抑菌作用優于中草藥提取物,但由于其成分和作用機理單一,臨床上已有耐藥菌出現。因此,不宜在水產養殖過程中長期用藥。相比之下,中草藥提取物由于成分復雜,作用機理不統一,較難產生耐藥菌,有較高的實際應用價值,有必要進一步開發。
【參考文獻】
[1]劉廣鋒,周世寧,徐力文,等. 雜色鮑幼苗“急性死亡脫落癥”病原菌分析[J]. 中國水產科學,2006:13(4):655-661.
[2]俞樹榮. 微生物學和微生物學檢驗[M]. 2版. 北京:人民衛生出版社,1997:452-457.
[3]譚宏亮,黎鵠志. 夾竹桃葉水提取物抑菌作用研究[J]. 宜春學院學報,2007,29(4):70-71.
中藥提取物范文6
關鍵詞: 天然提取物;抗氧化活性;DPPH法
中圖分類號:R931
文獻標識碼:A文章編號:1672-8513(2010)03-0204-03
On the Efficiency of Six Natural Extracts as DPPH Radical
Scavenger and Their Antioxidant Activity
LIN Shiyun1,WANG Jiong1,FENG Guiquan1,2,HUANG Xiangzhong1,YANG min
(1. School of Chemistry and Biotechnology, Yunnan University of Nationalities, Kunming 650500, China; 2. The Acetic Acid Branch Company, Daqing Oil-field Chemical Co. Ltd., Daqing 163411, China)
Abstract:
Using the antioxidants in lilac, honeysuckles and other four natural extracts, this experiment determined their antioxidant activity by virtue of DPPH method. And by comparing them with ascorbic acid and thiourea and using the DPPH clearance rate as the evaluating indicator to evaluate the sample’s ability to clear free radicals, this experiment also compared each extract’s ability to clear the free radicals. It proves that these natural extracts are capable of clearing DPPH, among which the lilac extract is the most effective.
Key words:
natural extract; antioxidation activity; DPPH method
天然藥物對人體的疾病往往具有很好的治療、預防等藥理作用和保健功能,自然界中的蔬菜、水果、花和谷物中存在具有多種生物活性的天然產物,特別是一些天然藥物在抗氧化性、清除自由基作用方面有突出的表現,這對預防疾病和治療疾病,提高人民身體健康都產生著積極的作用[1-2].研究表明,自由基與機體的許多功能障礙和疾病的發生密切相關.因此,研究自由基的檢測方法并探討物質對自由基的清除作用具有重要意義[3].
目前對自由基清除劑的研究方法[4-8]主要有2類,一類是體外模型,另一類是體內模型,其中DPPH是體外模型中最常用的方法.本文用DPPH法研究6種藥物提取物的抗氧化性和對自由基的清除活性.
1 材料與方法
1.1 儀器、試劑與材料
儀器:UV/VIS2802PCS型分光光度計(尤尼柯儀器有限公司);7230G紫外分光光度計(上海精密科學儀器有限公司);E01140型電子分析天平.
試劑:DPPH溶液(日本東京化成株式會社生產,AR,紫色結晶);無水乙醇;磷酸二氫鉀, 氫氧化鈉、抗壞血酸、硫脲等均為分析純.
材料: 蘆薈、丹參、黃芩、金銀花、甘草、丁香提取物(巨邦植物原料有限公司).
1.2 實驗方法[9-10]
準確稱取DPPH試劑0.035g,用95%乙醇(分析純)溶解,并定量轉入500mL容量瓶中,用95%乙醇定容,搖勻得濃度為0.1777mmol/L DPPH貯備液,置于冰箱中冷藏備用.
在10mL比色管中依次加入4.0mL 0.1777mmol/L DPPH溶液和4.0mL pH=6.88標準混合磷酸鹽緩沖溶液混勻, 再加入一定量抗氧化劑溶液,蒸餾水補充體積至10.00mL 刻度,充分混勻,10min后用1cm比色皿在517nm波長處測吸光值(A),分別加了不同抗氧化劑量反應后吸光值記為Ai,不加DPPH只分別加了不同抗氧化劑量及緩沖溶液反應后吸光值記為Aj,不加抗氧化劑只加DPPH及緩沖溶液反應后吸光值記為Ac.按式(1)計算自由基清除率(K):
K(%)=1-Ai-AjAc×100%.(1)
2 結果與分析
2.1 不同種類的天然藥物提取物與DPPH反應的時間關系[11]
選取2種天然藥物提取物:丁香和金銀花提取液稀釋成0.5,1,2mg/mL與DPPH溶液反應,與實驗室常用的抗氧化物質:抗壞血酸,硫脲作對照,測定不同時間DPPH剩余量.實驗中 DPPH初始濃度為0.07108mmol/L.
從圖1~4中,我們可以得出結論:4種藥物對DPPH的消除作用時間確定在10min以內,因為在10min以內,不管抗氧化劑加入量多少,DPPH的剩余率呈大幅度下降,4min后接緩;在清除DPPH的效果中,清除率最大的藥物是抗壞血酸,其次為硫脲,最后為丁香,這主要是由于抗壞血酸、硫脲為純藥品,而且純度是分析純,效果要好于一般的提取物,本實驗所用丁香、金銀花為天然藥物,成分相對于前2種藥物成分復雜,因此抗氧化作用不如前二者好.
2.2 不同藥物清除DPPH自由基效果比較[12]
從圖5可以得出結論:各藥物對DPPH的清除率與各藥物的加入量均呈近似線性關系.隨著藥物加入量的增加,藥物對DPPH的清除率K不斷增大;從圖5中可以看出這幾種物質單位質量清除DPPH自由基能力的大小順序為:抗壞血酸、硫脲、丁香、金銀花、蘆薈、甘草、丹參、黃芩.
3 結語
通過測定蘆薈、丹參、黃芩、金銀花、甘草、丁香6種天然藥物和抗壞血酸、硫脲2種純藥對DPPH自由基的清除率,并比較清除率曲線可以得出:抗壞血酸、硫脲、丁香3種藥物對DPPH自由基的消除效果要好于其他藥物,丁香因其為天然藥物,可以作為一種安全、無毒的抗氧化劑來使用.
參考文獻:
[1]黃春.黃酮類化合物在不同氧化體系中的抗氧化作用研究[J].食品與發酵工業.1996,(3):46-53.
[2]張德權.生物類黃酮的研究及應用概況[J].食品與發酵工業,1999,(6):52-57.
[3]HALLIWELL B, GUTTERIDGE J M C.Free radicals in biology and medicine[M].Oxford:Charendon press,1985.
[4]彭長連,陳少薇,林植芳,等.用清除有機自由基DPPH活性法評價植物抗氧化能力[J].生物化學與生物物理進展,2000,27(6):658-661.
[5]周嘉偉.衰老的自由基學說與抗衰老中藥的研究[J].天津藥學,1997,9(2):41-44.
[6]陳聽映,莫椒茜.茶多酚――優良的抗氧化自由基清除劑[J].茶葉,1998,24(4):217-218.
[7]鄭德勇,安鑫南.叢生竹葉提取物的成分與清除自由基的能力[J].福建林學院學報,2004,24(3):193-196.
[8]貝玉祥,郭英,范逸平,等.訶子多酚清除活性氧自由基及體外抗氧化作用研究[J].云南民族大學學報:自然科學版,2009,18(1):51-54.
[9]彭長連,陳少薇.用清除有機自由基法評價植物抗氧化能力[J].生物化學與生物物理進展,2000,27(6):658-661.
[10]鄭德勇,安鑫南.竹葉提取物清除DPPH自由基的測定方法[J].福建農林大學學報:自然科學版,2005,34(1):59-62.