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巨噬細胞范文1
關鍵詞:內毒素；信號傳導；內毒素結合蛋白；蛋白酪氨酸激酶
內毒素是革蘭氏陰性細菌細胞壁的組成成份，其化學本質為脂多糖，為細菌死亡或活躍繁殖時所釋放。LPS本身無毒性作用，但能夠刺激體內多種細胞合成并釋放眾多內源性生物活性因子而表現出生物學活性。
內毒素由結構和功能不同的四部分組成：0-物異側鏈、外核心、內核心和類脂A。類脂A是LPS的生物學活性組份，人工合成的類脂A具有LPS的所有生物學活性，因此，細胞對類脂A的識別必是LPS誘導細胞反應的起始步驟。不同革蘭氏陰性細菌來源的類脂A的化學結構高度保守，對其組成已了解得比較清楚。然而，對LPS的三維結構及具有活性的構象知之甚少，對其與脂多糖結合蛋白（LBP）和/或CD14結合時的構象更無研究。因為是它們介導了激活細胞的信號傳導，對這些復合物結構的研究會更有意義。信號由CD14介導從胞外傳到胞內后，最終將導致基因轉錄事件的發生，LPS至少使哺乳動物20種以上基因發生轉錄，只有充分認識此信號傳導途徑，才能綜合利用各種手段控制由內毒素引起的不良反應。
1 LBP的結構和功能
LBP的發現是近幾年來研究LPS如何刺激細胞過程中最重要的突破。1986年，Tobias等[1]首次從兔急性反應血清中分離純化出LBP，酶聯免疫吸附試驗表明LPS通過類脂A與LBP結合，核心多糖和0-抗原對其無影響，結合比例為1：1。人LBP是由肝細胞合成的單鏈多肽，糖基化后以60KDa的糖蛋白進入血流，合成受細胞因子和類固醇激素的調節。LBP與另外一種LPS/類脂A結合蛋白即細菌穿透增高蛋白（BPI）具有較高同源性，氨基酸序列分析表明LBP和BPI與其它脂類載體蛋白具有部分相同序列，可以斷定LBP是結合中級兩性分子并在親水環境中運輸這類分子的蛋白家庭一員。
LBP最重要的生物學功能是使LPS與CD14結合。它有兩個功能域，一個與LPS結合，另一個介導LPS與CD14的相互作用。BPI的LPS結合功能區位于氨基末端的25kDa片段，氨基末端的蛋白水解片段和切割突變片段都有結合LPS的功能。在這啟示下，現已發現LBP的氨基末端片段LBP1-197也顯示出與LPS的結合能力，然而，LBP1-197缺乏提呈LPS與CD14的能力，并且不能代替LPS刺激THP-1細胞株產生TNF-α，但能有效抑制LBP依賴的LPS與CD14的結合及刺激腹腔巨噬細胞產生TNF-α。雖然BPI與LPS結合的親和力大于LBP，但它不能促進LPS與CD14的結合，說明BPI缺乏參與LPS提呈的功能域或LPS與CD14的較大親和力抑制了此作用。
LBP能提高類脂A刺激腹腔巨噬細胞產生TNF-α的靈敏度和反應性，也能增強LPS誘導其它細胞因子和NO的產生。去除血漿中的LBP能抑制LPS激活細胞的功能，體內實驗也表明抗-小鼠LBP抗體能阻止LPS引起的小鼠死亡。但另一方面，LBP在LPS或革蘭氏陰性菌引起的免疫保護反應中起了至關重要的作用，LBP-/-小鼠對LPS或革蘭氏陰性菌的抵抗力明顯低于正常小鼠[2]?？梢姡琇BP在對LPS免疫應答中的作用是雙方面的。
2 CD14介導細胞激活的信號傳導
LPS-LBP復合物需進一步與CD14結合才能刺激細胞，使信號向胞內傳遞而表現出生物學活性。作為LPS受體，CD14以兩種形式存在：①由甘油磷脂酰肌醇尾巴（GPI）錨定在單核巨噬細胞表面（mCD14），②缺乏GPI的可溶性CD14（sCD14）。與GPI結合的CD14羧基端的具置尚未確定。sCD14有多條生成途徑，在磷脂酰肌醇特異的磷脂酶C作用下，CD14陽性細胞能釋放此分子；CD14也能通過蛋白酶從膜上降解；一種磷脂酶D也能催化CD14的釋放，但其作用還不清楚；CD14還可以由髓系細胞直接分泌。
LBP作為一種調理素，促進LPS與髓系細胞的結合。E-LPS和LBP混合，就和 單核巨噬細胞形成玫瑰花現象，預先用抗-CD14單抗或磷脂酰肌醇特異的磷脂酶C處理細胞就能阻止玫瑰花的形成，并且，當抗-CD14單抗事先加入全血中，再加入LPS，在一定濃度范圍內就無刺激產生細胞因子的能力。
雖然，LBP/CD14途徑的闡明，是對LBP刺激細胞機制認識的一個飛躍，但同時也提出了許多目前無法回答的問題。最根本的問題是：象CD14這種GPI錨定的分子，本身并不直接與細胞內其它分子交換信息，是如何介導信號傳導的？目前普遍認為LPS受體是多種分子的聚合體，而mCD14只是其中的配基結合亞單位，跨膜信號的傳遞由其它亞單位來執行?，F已有不少證據支持這一假說。Hazio[3]等發現，LPS誘導銅藍蛋白、LBP等急性時相反應蛋白的表達并不需要CD14的存在。但當LPS通過非CD14依賴途徑發揮生物學功能時，通常需要超一定劑量的高濃度?？?CD14單抗對LPS激活髓系細胞的抑制功能只有在低于一定濃度的LPS條件下有效。有人研究了表達GPI錨定的或膜整合形式的CD14的70Z/3細胞[4]，LPS對這兩種細胞都有激活功能，因此，GPI本身對CD14參與信號傳導并不重要，只使CD14與胞膜整合。
對sCD14的研究較少，一般認為它在LPS刺激內皮細胞、上皮細胞等本身無mCD14的細胞中起了一定作用[5]。
3 內毒素激活巨噬細胞的胞內信號傳導
在內毒素刺激細胞的胞內信號傳導途徑中，研究最多的是絲裂原活化蛋白激酶（MAPK），多種因素都能激活此途徑，尤其是多肽生長因子。LPS與CD14的結合導致蛋白酪氨酸激酶（PTK）的活化，從而激活下游的MAPK。一些實驗表明，PTK抑制劑能抑制LPS誘導巨噬細胞產生TNF-α、IL-β及其殺瘤細胞活性[6]。Src酪氨酸激酶家族成員p53/56Lyn（可能與胞膜相連）能被LPS激活，并導致其自身磷酸化一過性減少而后增加[7]。其它被LPS激活的酪氨酸激酶包括p58/64hck和p59c-fgr等。但最近，Meng等[8]發現hck-/-fgr-/-lyn-/-小鼠來源的腹腔和骨髓巨噬細胞對LPS刺激產生IL-1，IL-6和TNF-α的反應皆正常，他們認為，LPS可能是激活了其它酪氨酸激酶如p72syk等。Raf-1能和ras直接作用而激活MAPK，通過ras依賴或非依賴途徑，BAC-1.2F5巨噬細胞受LPS刺激導致Raf-1的快速磷酸化而活化，而酪氨酸磷酸化抑制劑，抑制Raf-1/MAPK的活化，表明它們的激活發生在PTK之后。
介導LPS信號傳導的另一種途徑是神經酰胺，它是由神經鞘磷脂酶催化神經鞘磷脂水解而生成。神經酰通過神經酰胺激活的蛋白激酶（CAK）而傳遞信息。CAK也能激活Raf[9]，這又提供了一條進入MAPK途徑的通道。LPS直接激活神經酰胺信號傳導途徑的依據有：①類脂A和神經酰胺結構相似，②神經鞘磷脂酶和透細胞性的神經酰胺類似物能誘導巨噬細胞對LPS的部分反應，③LPS依賴于CD14而激活CAK，④來源于C3H/HeJ小鼠（內毒素耐受）的腹腔巨噬細胞對神經酰胺無反應。
另外，PKC、C蛋白等信號傳導途徑在內毒素激活細胞中也起重要作用[6，10]。但由于內毒素生物學效應的多樣性、細胞來源的不一致性、檢測傳導途徑指標的不同及各種傳導途徑相互聯系，致使對其研究顯得十分困難。
4 與內毒素激活細胞有關的轉錄因子和反應元件
轉錄因子家族Ets由三十種以上蛋白質組成，存在于多種生物，DNA結合部分為位于羧基末端含85個氨基酸殘基的高度保守序列。Ets通過識別富含嘌呤的10對堿基對而調節目的基因的轉錄，TNF-α、IL-1β等多種LPS誘導的基因啟動子中存在Ets結合位點。目前已證實Ets-2、Elk-1可由LPS誘導，而它們恰好又是MAPK信號傳導途徑的作用點[11]，酪氨酸激酶抑制劑genestein能阻止LPS導致其磷酸化[12]。Ets家族的另一成員Pu.1只表達在巨噬細胞和B淋巴細胞[13]，因此，Pu.1有可能是介導巨噬細胞特異基因表達的轉錄因子。
許多LPS反應基因都有κB/rel轉錄因子家族識別的位點，核轉錄因子NF-κB通過識別保守序列5′GGG（ATrich）5CC3′在許多細胞中誘導多種基因的轉錄。NF-κB是調節 轉錄活性的多基因家族，其成員包括NF-κB1（p50）、NF-κB2（p52/p49）、RelA（p65）、c-rel和relB。保守區域rel控制其與DNA結合、二驟化和核移位。在靜息細胞中，NF-κB與其抑制因子IκB形成無活性的胞漿復合物，生長因子、絲裂原等使IκB磷酸化而使NF-κB釋放出來并進入核內，LPS激活巨噬細胞也是如此。IκB也是多基因家庭，至少包括MAD3/IκBα、IκBγ和bcl-3，它們與rel的結合有特異性。但僅是NF-κB的激活對內毒素刺激細胞的信號傳導是不夠的，LPS能激內毒素刺激細胞的信號傳導是不夠的，LPS能激活內毒素反應正常和內毒素耐受小鼠來源巨噬細胞的NF-κB，但只能使內毒素反應正常小鼠的巨噬細胞表達TNF-α和iNOS。最近，Xie[14]報道LREAA（一種脂多糖反應元件）結合蛋白的激活在LPS刺激巨噬細胞產生iNOS是必需的。其它轉錄因子，如NF-IL6等在LPS刺激細胞中的作用也有涉及，但其具體細節不清。
5 結語
由于LPS發揮生物學效應的配基的復雜性、新受體的發現、不同巨噬細胞反應的不同及與其它信號傳導途徑相互聯系，以至于對其激活細胞的信號傳導機制研究的進展并不令人滿意。許多信號傳導途徑并非LPS激活細胞所特有，而往往與其它信號傳導途徑相互交叉。目前迫切的任務是找到LPS激活細胞特有的信號傳導途徑，但如果巨噬細胞的基因調節是由多條途徑相互作用，這種努力也許將最終失敗。
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巨噬細胞范文2
【關鍵詞】小鼠；巨噬細胞；分離；培養；鑒定
0.引言
巨噬細胞是動物機體內重要的免疫細胞， 具有抗腫瘤和免疫調節等重要作用[1， 2] ， 被廣泛應用于體外免疫增強藥物的非特異性免疫功能評價[3] 。有很多文獻報到已能從多種組織和器官中分離純化巨噬細胞，但這些方法大多都是繁瑣、復雜，所需時間長且耗資較大。本實驗以小鼠腹腔巨噬細胞為研究對象， 探索建立一種巨噬細胞體外分離培養與鑒定簡便的方法。
1.材料與方法
1.1實驗對象
清潔級巴貝斯小鼠，體重在（30-32g），由蘭州大學實驗動物中心提供。
1.2實驗方法
1.2.1小鼠腹腔單核巨噬細胞的分離培養
隨機選取巴貝斯小鼠，腹腔注射不含小牛血清的RPMI-1640培養液5ml。輕柔小鼠腹部2-3min，靜置5-7min后將小鼠頸椎脫臼處死，至于解剖板上，無菌條件下打開腹腔，用注射器抽取腹腔液，離心5min （1000r/min），棄上清，用PBS洗滌2遍。再用含10%成牛血清的RPMI-1640培養液（0.1%雙抗溶液）調節至2×106ml-1，接種于培養瓶及6孔板，置37℃，5%CO2培養箱培養2h，棄上清。用不含小牛血清的RPMI-1640培養液洗滌2遍，然后加含有10%小牛血清的RPMI-1640培養液在37℃CO2培養箱中繼續培養[4]。倒置顯微鏡觀察細胞形態。
1.2.2巨噬細胞的觀察與鑒定
（1）臺盼藍染色計算存活率。
4%臺盼藍母液：稱取4g臺盼藍，加少量蒸餾水研磨，加雙蒸水至100ml，用濾紙過濾，4度保存。使用時。用PBS稀釋至0.4%。（也可買Gibco的成品）； 胰酶消化貼壁細胞，制備單細胞懸液，并作適當稀釋。染色：細胞懸液與0.4%臺盼藍溶液以9：1混合混勻。（終濃度0.04%） ； 計數：在三分鐘內，分別計數活細胞和死細胞。鏡下觀察，死細胞被染成明顯的藍色，而活細胞拒染呈無色透明狀。
（2）瑞氏染色計算細胞純度。
細胞涂片自然干燥后，用蠟筆在兩端畫線，以防染色時染液外溢。隨后將玻片平置于染色架上，滴加染液3-5滴，使其蓋滿涂片，大約1分鐘后，滴加等量或稍多的II液，用吸耳球輕輕混勻。沖洗：染色5-10分鐘用流水染液，待干。 結果觀察，將干燥后的血涂片置顯微鏡下觀察。先用低倍鏡觀察涂片，再用油鏡。
2.結果
2.1小鼠巨噬細胞的分離培養
（1）巨噬細胞的觀察與鑒定.
巨噬細胞體外培養24h觀察結果。如圖1
（2）臺盼藍染色結果。
從腹腔分離出來的巨噬細胞進行臺盼藍染色結果顯示巨噬細胞的成活率>95%，如圖2
（3）瑞氏染色結果。
從腹腔分離出來的巨噬細胞進行瑞氏染色結果顯示巨噬細胞的純度>98%，如圖3
圖1巨噬細胞體外培養24h觀察 圖2臺盼藍染色結果
圖3 瑞氏染色結果
3.討論及結論
巨噬細胞廣泛分布于體內，它不僅參與非特異性免疫，而且是特異性免疫中一類關鍵的細胞，參與集體眾多的生理和病理反應過程，如巨噬細胞的吞噬和消除病原微生物[5]，通過加工處理提成抗原，啟動特異性免疫應答[6]，以及巨噬細胞通過細胞凋亡清除吞噬的致病病原體等。由于腹腔巨噬細胞多游離存在于腹腔的腹水中，易于獲得，因此許多實驗室在進行基礎或配合臨床研究巨噬細胞功能及其與疾病的關系、或篩選免疫增強藥物和探討其作用機制時，往往選用小鼠腹腔巨噬細胞為研究對象。
雖然腹腔巨噬細胞的提取方法都是灌胃洗腹腔后，吸出含有巨噬細胞的灌洗液了，但具體操作略有差異[7]。預先注入的巨噬細胞刺激劑有淀粉溶液、肉湯、糖原等，以產生大量的巨噬細胞計入腹腔。雖然這些刺激劑能分離收集到大量的巨噬細胞，但注入的大分子抗原物質對巨噬細胞吞噬功能有一定的影響，獲得的巨噬細胞已不再是原體內巨噬細胞的基礎功能。本實驗提取巨噬細胞的方法是對文獻中方法的改進，關鍵在于活體腹腔注射不含血清的培養液，輕揉腹部后靜置幾分鐘，然后頸椎脫臼致死小鼠，無菌打開腹腔吸取腹腔液[4]。此方法相對處死小數后進行系列操作而言，洗出的灌洗液中混雜的白細胞少，提取局勢細胞的純度高，是一種簡便的小鼠腹腔巨噬細胞的分離方法，為巨噬細胞的相關研究奠定了基礎。
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巨噬細胞范文3
急性心肌梗死(AMI)的發生與冠狀動脈粥樣硬化(AS)斑塊不穩定密切相關，炎癥反應在不穩定斑塊的發生發展過程中起著重要作用，其中巨噬細胞遷移抑制因子(macrophage migration inhibitory，MIF)是近幾年的研究熱點。
1MIF的生物學特性
MIF是在結構上高度保守的，獨特的免疫調節因子，它具有許多趨化因子的功能，因此被歸類于“趨化因子樣功能”的細胞因子。它是一種強有力的炎癥前細胞因子，主要來自T細胞和單核巨噬細胞，同時，發生AS斑塊的內皮細胞和血管平滑肌細胞也能夠高表達MIF〔1〕，它是免疫和炎癥反應中的關鍵成分〔2，3〕。MIF活性的發揮需與多種胞內蛋白相互作用，而這首先需要MIF信號的跨膜傳遞?？寺”磉_和功能分析發現CD74是MIF的高親合力膜結合蛋白，起著MIF跨膜受體的作用。在重組可溶性CD74分子，MIF結合于其109-149氨基酸殘基部位，從而活化胞外絲裂原激活蛋白激酶(MAPK)信號傳導、細胞增殖分化和前列腺素E2的產生〔4，5〕。MIF生物學作用概括起來主要有以下幾方面：①作為致炎因子，抑制巨噬細胞的游走，促進巨噬細胞在炎癥局部的聚集、增生、激活及分泌一些細胞因子如白細胞介素-1(IL-1)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)等，以此來增強巨噬細胞對感染和組織損傷的反應能力〔6〕。②對抗調節糖皮質激素免疫抑制效應，與激素共同調節炎癥反應的強度。對抗糖皮質激素對外周血單核細胞合成釋放TNF-α、IL-1、IL-6、IL-8和花生四烯酸的作用，以及對抗激素在核轉錄因子(NF-κB/IκB)信號轉換通路中的效應，進而阻斷了其對炎癥因子表達的限制作用〔7，8〕。③維持CD3介導的T細胞增殖及炎性因子分泌，抑制自然殺傷(NK)細胞殺傷活力的潛能，參與免疫反應〔9，10〕。④作為膿毒
血癥的重要介質，與TNF-α、IL-1β一樣，MIF是炎癥反應中的重要介質，它可以通過抑制糖皮質激素的抗炎效應而使炎癥反應和抗炎反應之間達到平衡〔6〕。Mitchell等〔11〕給小鼠行脂多糖(LPS)腹腔注射，與野生型小鼠相比，MIF基因缺失小鼠的腹腔巨噬細胞生存率明顯降低，表達的細胞因子也顯著減少。盡管兩種巨噬細胞表達的NO水平未見明顯差別，但NO仍被認為是MIF基因缺失巨噬細胞凋亡增加的最重要原因。NO可促使細胞內p53蛋白的聚集，顯著增強凋亡，MIF則可對抗NO的上述作用。2003年Leng等〔4〕研究發現，MIF可能通過與細胞膜表面蛋白CD74的細胞外基團結合，激活MAPK家族成員之一的細胞外信號調節激酶(ERKl/ERK2)傳導通路發揮作用。Mitchell等〔11〕也證實，MIF可快速和持續磷酸化激活ERKl/ERK2 MAPK信號轉導途徑，使處于生長靜止期的成纖維母細胞(NIH/3T3)活化增生。研究發現，MIF基因缺失小鼠體內的巨噬細胞對LPS和革蘭陰性細菌如傷寒沙門菌反應低下，細胞因子分泌減少，體內的傷寒沙門菌濃度高，而對缺氧等刺激的反應卻不受影響，這可能與MIF上調Toll樣受體4(TLR-4)的表達有關，提示MIF可以促進保護性的T輔助細胞
的免疫反應〔12〕。⑤參與腫瘤的發生，刺激腫瘤生長和腫瘤血管的形成〔13〕。腫瘤抑制因子p53主要從兩方面來阻止不適當的細胞增殖：誘導細胞分裂周期停止和凋亡。MIF通過拮抗myc活性誘導的P53依賴的凋亡來保持巨噬細胞的存活及促炎功能的抑制，使病理細胞生長加快，炎癥擴大。因此，MIF促細胞生長的特性可能是參與多種炎癥性疾病病理過程的重要機制之一〔11，14〕。
2MIF與AMI
MIF在AS中的表達是在研究高膽固醇血癥兔時首次被發現的，在兔的整個腹主動脈存在各個階段的廣泛病變〔15〕。有研究報道稱MIF能夠激活趨化因子受體(CXCR2)和CXCR4，因此能促使炎性細胞如單核細胞和T細胞的募集〔16〕。Bernhagen等在小鼠身上研究發現應用中和抗體抑制MIF的作用，可以減少斑塊內單核細胞和T細胞的數量并減緩斑塊的進展〔16〕。目前研究發現MIF能夠誘導單核細胞和T細胞向AS病變區聚集，可以調節血管平滑肌細胞的遷移和增殖，促進病變巨噬細胞向泡沫細胞轉變并增加細胞外基質金屬蛋白的降解，MIF的這些作用可能促進病變的發展，導致斑塊的不穩定〔15〕。最近的文獻報道〔17〕，糖皮質激素可以影響促進AS的發生的某些因子的表達，MIF作為一種糖皮質激素誘導分化的前炎性細胞因子，在AS的發病機制中起了相當重要的作用。Lin等〔15〕發現無論在AS早期的脂紋階段或是在后期的斑塊形成階段，血管內皮細胞(ECS)和血管平滑肌細胞(VSMCs)都能表達MIF mRNA，并有MIF蛋白水平的增加，MIF在巨噬細胞聚集的病變部位高表達，還能誘導血管內皮細胞表達細胞間黏附分子-1(ICAM-1)，因此MIF的上調可能在巨噬細胞的黏附，向內皮的遷移、聚集尤其是轉化形成泡沫細胞中起作用。余文輝等〔18〕觀察了AMI患者37例，不穩定型心絞痛(UA)患者26例，穩定型心絞痛(SA)患者39例，接受經皮腔內冠狀動脈成形術(PTCA)患者26例，有非典型胸痛而冠狀動脈造影正常的對照組31例。這幾組病人分別在發病第1、2、3天抽取血樣，用ELISA法檢測MIF水平。結果發現在發病第1～3天，AMI病組與SA組、UA組、PTCA組、對照組等比較，AMI病組血漿MIF水平明顯高于其他病組(P
3小結
MIF不僅在AS的形成過程中發揮著重要作用，在疾病的進展，斑塊的穩定性方面也可以通過調節各種炎癥反應起著至關重要的作用;另外，MIF基因的多態性與AMI易感性也有著一定的相關性，因此測定MIF在體內的表達水平對預測疾病的發展、指導疾病的治療方面有著重要意義。心血管疾病特別是AMI業已成為威脅人類生命健康的嚴重疾病，對此國內外學者不斷的進行研究，發現炎癥在疾病的發生發展過程中有著至關重要的作用。MIF具有趨化因子的功能，能夠促進單核細胞和巨噬細胞向AS病變部位聚集、活化，釋放一系列的炎性因子，從而導致疾病不斷進展，斑塊破裂發生AMI，進而威脅人類的生命，但是其在AMI發生發展過程中的作用機制以及它們作為AMI的預測指標乃至潛在的治療耙點仍不很確定，有待于進一步的研究。
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18余文輝，周小梅，溫文川，等.急性心肌梗死病人血漿巨噬細胞移動抑制因子水平變化的研究〔J〕.中國免疫學雜志，2004;20(8)：575-7.
巨噬細胞范文4
近年來，隨著人們對創面愈合認識的深化，臨床多采用外用生長因子促進創面愈合，有一定效果，但仍缺乏安全有效的加速創面愈合的積極措施［1］。中醫藥對于難愈性創面組織修復的療效顯著［2－3］。在長期臨床實踐中，用灸法治療慢性難愈性創面取得了較好的效果，在加速創面愈合的同時還能夠降低其病理性瘢痕的形成［4－5］。我們曾報道溫和灸可縮短難愈性創面的愈合時間，改善創面組織修復的微循環［6］，但關于灸法降低難愈性創面病理性瘢痕形成的作用機制尚不完全明確。本實驗旨在通過制造慢性難愈性創面模型，觀察溫和灸對慢性難愈性創面修復組織表面巨噬細胞數和Ⅰ、Ⅲ型膠原含量的影響，初步探討溫和灸減少慢性難愈性創面瘢痕形成的可能作用機制。
1材料與方法
1．1實驗動物選用健康成年雄性清潔級SD大鼠80只，體質量200～220g，由河北醫科大學實驗動物中心提供（合格證號：1006107）。隨機分成4組，即溫和灸治療組（以下簡稱為溫灸組）24只、TDP治療儀治療組（以下簡稱為TDP組）24只、模型組24只、正常組8只。單籠飼養，恒溫，自然光照，喂食正常飼料和飲水。實驗動物的使用及操作方法均經河北醫科大學實驗動物管理委員會審核批準。
1．2儀器與試劑艾灸專用鼠盒［7］（專利號：201120193244．8）；單頭溫灸器、無煙艾粒（河南南陽臥龍漢醫艾絨廠）；TDP治療儀（中國重慶巴山儀器廠）；FD12－158J正置金相顯微鏡（桂林方天光學儀器有限公司）；RM2125型LEICA切片機（德國LEICA公司）；CMIAS98A圖像分析系統（北京航空大學圖像中心）。注射用氫化可的松琥珀酸鈉（天津生物化學制藥有限公司）；濃縮型DAB試劑盒、免疫組化染色試劑盒（北京中杉金橋生物科技有限公司）；膠原蛋白Ⅰ抗體（COL1－18）：sc－8784、膠原蛋白Ⅲ抗體（COL3－15）：sc－8781試劑盒（美國胡佛斯有限公司）。
1．3模型制備大鼠常規飼養1周后，除正常組外，各組大鼠以鹽酸氯胺酮（150mg／kg）腹腔注射麻醉，造模區（腰椎正中偏上）剪毛，用直徑20mm的塑料瓶蓋在造模區標記造模面積，新潔爾滅酊棉球皮膚消毒，沿標記線剪去皮下組織至肌筋膜，建立全層皮膚缺損開放性創面模型［8］229－230，止血，消毒紗布敷料覆蓋傷口。除正常組外，自造模次日起，各組大鼠大腿根部肌肉注射氫化可的松琥珀酸鈉100mg／kg，隔日1次，共注射7次，制成慢性難愈性創面動物模型［9］。
1．4各組處理方法自造模次日起，溫灸組大鼠置于自制艾灸專用鼠盒中，用單頭溫灸器距離創面或穴位15cm，溫和灸創面局部及雙側“腎俞”“足三里”穴［10］各15min；TDP組大鼠置于鼠盒中，用TDP治療儀距離創面或穴位15cm，照射創面局部及雙側“腎俞”“足三里”穴各15min；模型組及正常組大鼠均置于自制鼠盒中15min，每日1次，不做治療。各組大鼠分別于治療后第7、10、14天各取8只，脫頸處死后，自創面邊緣至創面中心，取大約0．5cm×0．5cm的創面肉芽組織，進行指標檢測。
1．5觀察指標及檢測方法修復組織表面巨噬細胞數的測定：取創面組織40μm石蠟切片，HE染色，每張切片400倍光鏡下采集5個視野的圖像，統計巨噬細胞數，求平均值。修復組織Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白含量的測定：取創面組織40μm石蠟切片，脫水、酶消化處理、COL1A1、COL3A1抗體處理、免疫染色，每張切片400倍光鏡下采集3～4個視野的圖像，用CMIAS98A圖像分析儀對Ⅰ、Ⅲ型膠原蛋白平均吸光度進行測定。
1．6統計學處理實驗數據均用均數±標準差（x珚±s）表示，采用SPSS13．0統計軟件進行統計分析，樣本均數間比較用單因素方差分析，兩兩比較采用LSD法，P＜0．05為差異有統計學意義。
2結果
2．1各組大鼠創面修復組織表面巨噬細胞數（見圖1)與正常組相比，溫灸組、TDP組、模型組創面修復組織巨噬細胞數均明顯增多（P＜0．05）；在治療第7天，溫灸組表面巨噬細胞數多于模型組（P＜0．05），溫灸組與TDP組比較差異無統計學意義（P＞0．05），TDP組與模型組比較差異無統計學意義（P＞0．05）；在治療第10天，溫灸組、TDP組表面巨噬細胞數均多于模型組（P＜0．05），且溫灸組多于TDP組（P＜0．05）；在治療第14天，溫灸組、TDP組表面巨噬細胞數均較模型組減少（P＜0．05），且溫灸組少于TDP組（P＜0．05）。
2．2各組大鼠創面修復組織Ⅰ型膠原的表達（見圖2）大鼠創面修復組織Ⅰ型膠原蛋白表達的平均吸光度，在治療后第7天，溫灸組、TDP組均較模型組升高（P＜0．05），溫灸組與TDP組比較差異無統計學意義（P＞0．05）；在治療后第14天，溫灸組、TDP組均較模型組升高（P＜0．05，P＜0．01），溫灸組高于TDP組（P＜0．01）。
2．3各組大鼠創面修復組織Ⅲ型膠原的表達（見圖3）大鼠創面修復組織Ⅲ型膠原蛋白表達的平均吸光度，在治療后第7天，溫灸組、TDP組均較模型組高（P＜0．01），溫灸組與TDP組比較差異無統計學意義（P＞0．05）；治療后第14天，溫灸組、TDP組均較模型組高（P＜0．01），溫灸組高于TDP組（P＜0．01）。
2．4各組大鼠創面修復組織Ⅰ、Ⅲ膠原蛋白比值Ⅰ、Ⅲ膠原蛋白的比值，在治療后第7天，與正常組比較，模型組顯著升高（P＜0．05），TDP組明顯低于模型組（P＜0．05）；在治療后第14天，與正常組比較，模型組仍明顯升高（P＜0．05），溫灸組、TDP組明顯低于模型組（P＜0．05，P＜0．01），溫灸組與TDP組比較，差異有統計學意義（P＜0．05）。見圖4。
巨噬細胞范文5
基金項目：國家自然科學基金（81101410，81160233）；江西省自然科學基金（20122BAB205002）
作者單位：330006 南昌，南昌大學第一附屬醫院重癥醫學科（劉芬、江榕、曾振國、聶成、趙寧、黃彩雪、夏亮、錢克儉），腫瘤科（李勇）
通信作者：錢克儉，Email：
【摘要】目的 觀察脂多糖 （lipopolysaccharide， LPS） 刺激大鼠肺泡巨噬細胞NR8383后乙酰膽堿酯酶 （acetylcholinesterase， AChE） 的表達變化，為研究膽堿能抗炎通路的調控提供新的實驗依據。
訪法 將體外去致熱源培養的NR8383細胞分為對照組及LPS （1 μg/mL） 刺激組，于刺激后3、6、12、24 h各時間點分別離心收集上清液及細胞沉淀，采用酶聯免疫吸附法 （enzyme-linked immunosorbent assay， ELISA） 測定上清液中腫瘤壞死因子-α （tumor necrosis factor-α， TNF-α） 的變化，實時定量PCR檢測細胞中AChE mRNA的表達改變，蛋白質免疫印跡法 （Western blot） 檢測細胞中AChE蛋白的表達變化，乙酰膽堿酯酶T-CHE測試盒檢測上清液中AChE活性的變化。組間多重比較采用單因素方差分析，進一步采用LSD-t檢驗進行兩兩比較，P
結果 與對照組相比，TNF-α的含量在LPS刺激NR8383細胞后3 h開始顯著上升 （P
結論 LPS刺激大鼠肺泡巨噬細胞后，AChE的表達增加，提示其可能參與肺泡巨噬細胞炎癥反應的調控；LPS刺激后24 h，AChE mRNA仍處于高表達水平，AChE蛋白及活性卻下降，提示在肺泡巨噬細胞炎癥反應中可能存在AChE轉錄后水平的調控。
【關鍵詞】乙酰膽堿酯酶；脂多糖；肺泡巨噬細胞；炎癥反應；膿毒癥
Changes of acetylcholinesterase expression in alveolar macrophages stimulated by lipopolysaccharide Liu Fen， Jiang Rong， Li Yong， Zeng Zhenguo， Nie Cheng， Zhao Ning， Huang Caixue， Xia Liang， Qian Kejian. Department of Critical Care Medicine， the First Affiliated Hospital of Nanchang University， Nanchang 330006， China
Corresponding author： Qian Kejian， Email：
【Abstract】Objective To observe the changes of acetylcholinesterase （AChE） in rat alveolar macrophages NR8383 stimulated by lipopolysaccharide （LPS） in order to provide a novel experimental evidence for studying the regulation of the cholinergic anti-inflammatory pathway.Methods The NR8383 cells cultured with pyrogen-free in vitro were divided into control group and LPS （1 μg/mL） stimulation group. Culture supernatants and cell pellets were collected by centrifugation at 3 h， 6 h， 12 h and 24 h after stimulation， respectively. The level of tumor necrosis factor-α （TNF-α） in the supernatant was assayed by using enzyme-linked immunosorbent assay （ELISA）. The expression of AChE mRNA in cells was detected by using real time quantitative RT-PCR， The level of AChE protein in cells was analyzed by using Western blot， The activity of AChE in the supernatant was measured by using True Choline esterase assay kit （T-CHE）. One-way analysis of variance （ANOVA） was used for comparisons between two groups， and LSD-t test was performed for further comparison， and difference was statistically significant at P < 0.05. Results The level of TNF-α began to increased significantly at 3 h after stimulation of NR8383 cells with LPS （P
【Key words】Acetylcholinesterase； Lipopolysaccharide； Alveolar macrophage； Inflammatory response； Sepsis
乙酰膽堿酯酶（acetylcholinesterase， AChE）是一種特異性催化水解神經遞質乙酰膽堿 （acetylcholine， ACh）的酶[1]。最近有研究表明炎癥反應時迷走神經末梢通過釋放ACh可與巨噬細胞上的α7煙堿型乙酰膽堿受體（α7 nicotinic acetylcholine receptor， α7nAChR）相互作用，減少腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α， TNF-α）等促炎因子的釋放，形成一條膽堿能抗炎通路調控炎癥反應[2-3]。AChE因其水解抗炎介質ACh的作用，成為研究炎癥反應的新靶點。但AChE在肺泡巨噬細胞炎癥反應中的表達變化未見文獻報道。本研究以脂多糖（lipopolysaccharide， LPS）刺激大鼠肺泡巨噬細胞為炎癥反應模型，觀察并分析炎癥反應時AChE在肺泡巨噬細胞中的表達變化，為研究膽堿能抗炎通路的調控提供新的實驗依據。
1材料與方法
1.1 材料
大鼠肺泡巨噬細胞株（NR8383）購自中國科學院細胞庫；Ham’s F-12K培養基、LPS（E. coli， O111： B4）購自美國Sigma-Aldrich；胎牛血清購自美國Gibco；大鼠TNF-α ELISA檢測試劑盒購自上海森雄科技實業有限公司；TRIzol、實時定量PCR引物購自美國Invitrogen；PrimeScript逆轉錄試劑盒，SYBR實時熒光定量試劑盒購自大連TaKaRa；山羊抗大鼠乙酰膽堿酯酶多克隆抗體購自美國abcam；小鼠抗大鼠β-actin單克隆抗體購自美國anbo；辣根酶標記兔抗山羊IgG、辣根酶標記山羊抗小鼠IgG購自北京中衫金橋生物技術有限公司；乙酰膽堿酯酶T-CHE測試盒購自南京建成生物工程研究所。
1.2細胞培養
所用細胞培養物品均行去致熱源處理。將大鼠肺泡巨噬細胞NR8383培養于含15%去致熱源胎牛血清的Ham’s F-12K完全培養基中，置于大氣壓下37 ℃、5% CO2的恒溫濕培養箱中培養。2～3 d更換一次培養基，當細胞融合至80%以上時進行傳代。
1.3 實驗分組及處理
將NR8383細胞按1×106 個/mL密度接種于六孔板中，每孔2 mL。實驗分為對照組及LPS刺激組，將終質量濃度1 μg/mL的LPS加至LPS刺激組培養基中，于刺激后3、6、12、24 h各時間點分別離心收集上清液及細胞沉淀，上清液用于TNF-α及AChE活性檢測，細胞沉淀用于提取總RNA及總蛋白。
1.4 肺泡巨噬細胞上清液中TNF-α蛋白濃度的檢測
采用酶聯免疫吸附法（ELISA）測定上清液中TNF-α質量濃度，遵照ELISA試劑盒檢測說明書進行操作。
1.5 肺泡巨噬細胞中AChE mRNA表達的檢測
采用TRIzol試劑提取細胞總RNA，通過瓊脂糖凝膠電泳鑒定所提的總RNA質量，紫外分光光度計測定總RNA在260 nm和280 nm處光密度值，以確定濃度及純度。參照PrimeScriptRT reagent Kit逆轉錄試劑盒說明書進行逆轉錄反應，10 mL反應體系。反應條件：37 ℃ 15 min，85 ℃ 5 s。參照SYBR Premix Ex TaqTM Ⅱ試劑盒說明書進行實時定量PCR反應，20 mL反應體系。反應條件：95 ℃ 30 s；95 ℃ 5 s，60 ℃ 30 s，40個循環。在ABI StepOne定量PCR儀上進行擴增反應，選取β-actin作為內參照，采用2-ΔΔCt 方法計算AChE mRNA的相對表達量。
1.6 肺泡巨噬細胞中AChE蛋白表達的檢測
采用蛋白質免疫印跡法（Western blot）檢測AChE蛋白表達。細胞經RIPA試劑冰上裂解后提取總蛋白，通過BCA法測定蛋白濃度，加入2×上樣緩沖液后沸水中水浴變性5～10 min。各取20 μg/孔，進行10% SDS-PAGE垂直凝膠電泳分離（濃縮膠電壓80 V，分離膠電壓120 V），隨后電轉移至NC膜上（電流100 mA，時間1.5 h）。5% 脫脂奶粉封閉1 h，一抗（山羊抗大鼠AChE抗體1∶200，小鼠抗大鼠β-actin抗體1∶3000）4℃孵育過夜。TBST洗膜后，加入辣根過氧化物酶標記的二抗（兔抗山羊1∶10 000，山羊抗小鼠1∶3000）室溫孵育1 h，TBST洗膜后，滴加免疫熒光化學發光法發光底物，曝光，顯影。以β-actin為內參照，分析條帶灰度值。
1.7 肺泡巨噬細胞上清液中AChE活性的檢測
收集上清液按乙酰膽堿酯酶T-CHE測試盒操作說明書進行反應測定，AchE活性 （U/mL）=（測定管OD值-對照管OD值）/（標準管OD值-空白管OD值）×標準品濃度 （1 μmol / mL） ×樣本測試前稀釋倍數。
1.8 統計學方法
采用SPSS 17.0軟件處理數據，結果以均數±標準差（x±s）表示，不同時間點多個均數多重比較采用單因素方差分析，若差異具有統計學意義，不同時間點均數兩兩比較則進一步采用LSD-t檢驗。以P
2 結果
2.1 肺泡巨噬細胞上清液中TNF-α的濃度變化
LPS（1 μg/mL）刺激NR8383細胞后，通過ELISA檢測上清液中TNF-α的變化，結果顯示，與對照組相比，TNF-α的含量在LPS刺激后3 h開始顯著上升（P
2.2 肺泡巨噬細胞中AChE mRNA的表達變化
LPS（1 μg/mL）刺激NR8383細胞后，采用實時定量PCR方法檢測AChE mRNA的相對表達變化，結果顯示，在LPS刺激后3 h、6 h、12 h、24 h，AChE mRNA的表達水平與正常對照組相比分別上調（3.19 ± 0.44）倍（P
2.3 肺泡巨噬細胞中AChE蛋白的表達變化
LPS（1 μg/mL）刺激NR8383后12 h、24 h，對細胞AChE蛋白采用Western blot方法進行分析，結果如圖3A所示，在LPS刺激后12 h，AChE 蛋白條帶比對照組條帶增粗，顏色加深；在LPS刺激后24 h，與對照組相比，AChE 蛋白條帶變細，顏色變淺。條帶經灰度值分析，AChE/β-actin灰度比值結果如圖3B所示，對照組、LPS 12 h、LPS 24 h灰度比值分別為（1.05 ± 0.02），（1.37 ± 0.01），（0.65 ± 0.05） ，P
2.4 肺泡巨噬細胞上清液中AChE活性的變化
LPS（1 μg/mL）LPS刺激NR8383后12 h、24 h，通過乙酰膽堿酯酶T-CHE測試盒對細胞上清液AChE活性進行測定，結果顯示，對照組AChE活性為（2.64 ± 0.85 ）U/mL，LPS刺激后12 h AChE活性為（6.14 ± 1.13 ）U/mL （P
3 討論
LPS是革蘭氏陰性菌外壁的主要成分，它可以通過作用肺內巨噬細胞表面Toll樣受體4（Toll-like receptor 4， TLR4），依次磷酸化一系列蛋白激酶，最終活化核轉錄因子-κB（nuclear factor kappa B， NF-κB），引起多種炎癥因子如TNF-α基因轉錄，啟動炎癥反應，導致膿毒癥肺損傷，甚至急性呼吸窘迫綜合征（acute respiratory distress syndrome， ARDS）發生[4-6]。本研究結果顯示LPS刺激大鼠肺泡巨噬細胞后TNF-α大量釋放，表明成功誘導肺泡巨噬細胞炎癥反應模型。堿能抗炎通路是一條神經免疫調節通路，由傳出迷走神經、神經遞質ACh和α7nAChR組成，炎癥反應時迷走神經釋放的ACh與巨噬細胞上α7nAChR 結合，通過細胞內信號通路轉導，阻礙NF-κB的活化，抑制促炎因子釋放，從而減輕炎癥反應[7]。在內毒素血癥、膿毒癥休克、缺血-再灌注損傷等均有研究表明膽堿能抗炎通路發揮著重要的作用[8-9]。Sun等[10]研究發現在LPS誘導的RAW264.7巨噬細胞和小鼠中，膽堿能激動劑尼古丁通過上調miR-124的表達水平，降低白細胞介素-6（interleukin-6， IL-6）等炎癥因子的表達。AChE是一種特異性水解ACh的酶，它不僅存在于神經元細胞中，也存在于免疫細胞上，其中巨噬細胞表達最豐富[11]。炎癥反應時巨噬細胞分泌的AChE將迅速水解ACh，阻礙ACh的抗炎作用，因此AChE成為調控炎癥反應的新靶點。研究表明使用膽堿酯酶抑制劑可減輕膿毒癥動物炎癥反應，如膽堿酯酶抑制劑加蘭他敏可通過抑制中樞AChE活性，降低LPS動物模型的血清TNF-α和IL-6水平及提高生存率[12]。另外有研究發現血清膽堿酯酶可能參與了老年人全身炎癥反應綜合征的發生和發展過程，并且對該類患者的預后有一定的預測作用[13]。但膽堿能抗炎通路在ARDS中的調控作用及機制尚不確定。
本研究中，通過檢測對照組AChE mRNA、蛋白的表達及AChE活性均證實AChE在大鼠肺泡巨噬細胞中存在表達。更為重要的是，本研究觀察到LPS刺激肺泡巨噬細胞后12 h，AChE mRNA、蛋白及活性均較對照組升高，這說明LPS誘導的肺泡巨噬細胞炎癥反應能引起AChE的表達增加，提示其可能參與肺泡巨噬細胞炎癥反應的調控；刺激后24 h，AChE mRNA仍處于高表達水平，但AChE蛋白及活性均低于對照組，這與de Oliveira等[14]對人急性白血病單核細胞細胞株（the human acute leukaemia monocytyc cell line， THP-1）的研究結果一致，提示在肺泡巨噬細胞炎癥反應中可能存在AChE轉錄后水平的調控。
轉錄后調控通常是由成熟mRNA的5’或3’ 端非翻譯區（untranslated region， UTR）與相應蛋白或microRNA等相互作用，介導mRNA的出核轉運、翻譯起始及降解等過程，從而調節基因的表達。近來有研究[15-16]對小鼠和人初級巨噬細胞的研究發現AChE是miR-132的靶基因，miR-132能靶向作用AChE mRNA的3’UTR，抑制AChE蛋白翻譯表達，加強膽堿能抗炎通路作用從而使炎癥消退。筆者的前期研究表明LPS刺激肺泡巨噬細胞能引起miR-132表達上調。因此筆者推測肺泡巨噬細胞中AChE轉錄后水平的調控可能與miR-132有關，但仍有待今后進一步實驗證實。
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巨噬細胞范文6
關鍵詞：巨噬細胞：Exosomes；透射電鏡；超速離心
中圖分類號：Q28
文獻標識碼：A
文章編號：1007-7847（2014）04-0283-03
Johnstone等研究網織紅細胞發育時，發現網織紅細胞成熟過程中會分泌出一種囊泡狀物質，于是分離純化了該物質并命名為Exosomes。目前研究認為Exosomes由細胞內多泡體（muiti-vesicular body， MVB）與細胞膜融合后，釋放到細胞外基質中的一種直徑約30～100nm的膜性囊泡，這些小囊泡具有呈遞生物相關抗原與免疫治療作用的特性。
巨噬細胞是目前功能最強的抗原呈遞細胞，能刺激初始型T細胞增殖，激發機體免疫應答。巨噬細胞分泌的Exosomes主要表達MHC分子、共刺激分子及特異性抗原肽，并能將抗原刺激信號運送到抗原遞呈細胞（antigen-presenting cells，APC）或T淋巴細胞從而誘導特異性免疫應答，發揮重要的免疫調節作用。近些年來Exosomes在免疫調節、腫瘤治療、疫苗開發等方面的作用已經引起科研人員的極大關注并已經展開了許多基礎與臨床研究。
但由于Exosomes直徑一般在30～100nm內，很難從細胞上清中分離及獲得純度較高的Exo-somes。本文主要利用低溫超速離心方法收集巨噬細胞分泌的Exosomes，并對其形態學與生物學特性進行初步的分析鑒定，為后續實驗研究奠定了實驗技術基礎。
1材料與方法
1.1材料
人單核白血病細胞系THP-1來自武漢大學保藏中心。
1.2試劑及儀器
RPMI-1640培養基、胎牛血清購自美國Hy-clone公司，CD80、ICAM-3、HSP-70抗體購自美國Santa Cruz生物技術公司、佛波酯（12-鄰-14-烷酰佛波醇-13-乙酸酯，PMA）購自德國默克公司，Cocktail蛋白酶抑制劑購自長沙海揚生物技術公司、蔗糖、磷鎢酸均購白南京金斯瑞生物技術公司。
美國Beckman超速離心機；日本日立透射電子顯微鏡；美國Forma Scientific CO2細胞培養箱；倒置顯微鏡（Olympas）；中國六一垂直電泳儀。
1.3 細胞培養
THP―l細胞于含10%胎牛血清的RPMl-1640培養基中，37℃，5% CO2飽和濕度環境中培養48h后，0.1mmol/L PMA誘導THP-1細胞24h，使其分化形成巨噬細胞。
1.4Exosomes收集
收集巨噬細胞上清液，4℃，4000r/min，離心20min，保留上清；4℃，10000r/min，離心45min，保留上清；4℃，32000r/min，離心60min，保留沉淀，9%蔗糖溶液200μL、lOOx蛋白酶抑制劑2μL溶解沉淀；4℃，40000r/min，離心45min保留沉淀，9%蔗糖溶液50μL、lOOx蛋白酶抑制劑lμL溶解沉淀，-80℃保存備用。
1.5Exosome透射電鏡鑒定
取10μL新鮮Exosomes溶液，3%磷鎢酸染色5min，將Exosomes滴于銅網膜，65℃烤干，透射電鏡下觀察其形態大小并拍照保存分析Exo-somes提純質量。
1.6Western blot
Bradford方法測定Exosomes蛋白濃度；配制10%SDS-PAGE電泳凝膠，將變性后的蛋白質按50μg的蛋白質總量上樣電泳，然后通過電轉移法將蛋白質轉至PVDF膜上，以免抗人CD80、I―CAM-3、HSP-70抗體作為一抗，辣根過氧化物酶標記的二抗進行免疫反應，凝膠成像系統觀察拍照。
2結果
2.1佛波酯（PMA）誘導THP-1分化成巨噬細胞
THP-1細胞培養48h后細胞密集度達80%后的生長情況，THP-1細胞經0.1mmol/LPMA誘導24h后，分化形成梭形巨噬細胞（圖1），分化形成的類巨噬細胞具很強的吞噬功能。
2.2透射電鏡鑒定Exosomes
10μL新鮮Exosomes溶液，與3%磷鎢酸2μl染色5min后，Exosomes溶液輕輕滴于銅網膜，65℃烤干，透射電鏡下觀察Exosomes形態學特征（圖2A），并利用NanoSight統計系統分析Exosomes溶液中囊泡直徑大小，并繪制曲線（圖2B）。
2.3Exosomes膜蛋白表達
CD80、ICAM-3和HSP-70 3種蛋白質在不同細胞來源的Exosomes上均有表達，目前認為這3種蛋白質可以作為Exosomes的特征蛋白質。Western blot研究分析巨噬細胞分泌的Exosomes膜上CD80、ICAM-3、HSP-70的表達（圖3）。
3討論
近年來，越來越多的實驗結果證明：樹突狀細胞和腫瘤細胞產生的Exosomes具有顯著的免疫調節功能，可轉運腫瘤抗原至抗原提呈細胞，誘導細胞毒性T-淋巴細胞反應，產生和增強抗原特異性免疫應答；Exosomes的非細胞性及其不易被體內環境誘導喪失活性、無繁殖能力、穩定性高、體積小易清除、儲藏時間長等優點，使Exosomes有可能成為一種很有潛力的新型無細胞治療性腫瘤疫苗。目前法國科學家研究的樹突狀來源的Exosomes腫瘤疫苗已經進入臨床I期，并且尚未發現任何副作用。Bard等研究報道，腫瘤來源的Exosomes亦可誘導有效免疫應答，如惡性滲出物（胸水、腹水）中的Exosomes同樣含有腫瘤抗原和抗原提呈分子，可以誘導產生抗腫瘤一細胞反應。