前言：中文期刊網精心挑選了歡度中秋范文供你參考和學習，希望我們的參考范文能激發你的文章創作靈感，歡迎閱讀。
歡度中秋范文1
中秋節,又稱月夕、秋節、女兒節或團圓節,是流行于中國眾多民族與漢字文化圈諸國的傳統文化節日,下面是小編為大家整理的關于2021年歡度中秋節優秀作文，如果喜歡可以分享給身邊的朋友喔!
2021年歡度中秋節優秀作文1農歷八月十五，是我國傳統的中秋節，也是我國僅次于春節的第二大傳統節日。
中秋節的習俗很多，形式也各不相同，但都寄托著人們對生活的熱愛和對美好生活的向往。中秋節是人們一直都喻為最有人情味，最有詩情畫意的一個節日。有人說，每逢佳節倍思親，中秋節這一份思念當然會更深切，尤其是一輪明月高高掛的時刻。
說起中秋節，民間一直流傳著多個不同的傳說和神話故事，最為人熟悉當然是嫦蛾奔月，嫦娥偷了丈夫的不死仙丹，飛奔到月宮的故事也有許多說法。在較早的記載中，嫦蛾偷吃了仙丹，變成了癩蛤蟆，被叫月精，奔月后，嫦蛾住在月宮其實是一個寂寞的地方，除了一棵樹和一只兔子，就別無他物了。
每年農歷八月十五，是一年秋季的中期，所以被稱為中秋。在中國的農歷里，一年分為四季，每季又分為孟、仲、季三個部分，因而中秋也稱仲秋。八月十五的月亮比其他幾個月的滿月更圓，更明亮，所以又叫做“月夕”。此夜，人們仰望天空如玉如盤的朗朗明月，自然會期盼家人團聚。遠在他鄉的游子，也借此寄托自己對故鄉和親人的思念之情。所以，中秋又稱“團圓節”。
今天是中秋節，我和爸爸媽媽一起坐在陽臺上，吹著涼爽的秋風，一邊賞月一邊吃月餅。我問媽媽：“為什么中秋節要吃月餅呀?”媽媽就給我講了觀于中秋節的習俗。
每年8月15日，是傳統的中秋佳節。這是的中秋是一年四季的中期，所以被稱為中秋。在中國的農歷里，一年分為四季，每季又分為孟。仲。秀三個部分，因而中秋也稱仲秋。8月15的月亮比其他幾個月的月亮更圓滿，更明亮，所以又叫月夕，八月節。此夜人們仰望玉如盤的朗朗明月，自然會期盼家人團聚。所以又叫團圓節。
在我國，城鄉群眾過中秋都有吃月餅的習俗，俗話中有：“八月十五月正圓，中秋月餅香又甜?！痹嘛炞畛跏怯脕砑缼熢律竦募榔贰Ｔ嘛炓辉~，最早見于南宋吳自牧的《孟良錄》中，那是它也只是象菱花餅一樣的食品。后來人們逐漸把中秋賞月與品嘗月餅結合在一起，寓意家人團圓的象征。
2021年歡度中秋節優秀作文2今天是八月十五日，是什么日子呢?是中秋節!
中秋節可是我國傳統節日呢!我要好好地過這個象征著團圓的佳節。
夜幕降臨，在黑幕中一輪玉盤漸漸升起。啊!多么明亮的月亮，月亮映著一家團圓。
我和爸爸媽媽一起吃月餅，在中秋節里吃著月餅是多么甜蜜，滋潤人的心田，月餅也像月亮一樣，在中秋節里，是象征團圓。我們坐在桌邊上吃著飯，這樣真得很高興，平時父母都是早出晚歸，吃一頓飯要吃得很快，沒有能一起說說話，聊一聊天。可今天不一樣，平時不太搞笑的爸爸今天也開起了玩笑，還說笑話。吃完飯，我本想去賞月，但是媽媽說;“你還是先待會去吧，姥姥在家里，很孤獨，你去打個電話，和姥姥說說話。”我和姥姥在聊天中，我聽到姥姥笑得很高興，如收到最好的禮物。
我和爸爸媽媽一起看月亮。今天的月亮比其它幾個月出國的滿月更亮更圓。許多詩人給這明月作詩，里面都含有對家人、對親人的思念。對啊，每次見到這圓圓的月亮，都會想起親人和家人，又想起自己的孤獨，一種缺少愛的滋味，多么不好受。我覺得我是幸福的，也是幸運的。許多人因為工作忙，不能和家人團聚，只能仰望天上的明月。更可憐的是沒有父母的孤兒，他們不明白，為什么中秋節我就不能與家人團聚。
這個團圓的中秋，給多少人帶來幸福、美滿的回憶，我真想把時間永遠地停在那一刻。
2021年歡度中秋節優秀作文3中秋節，有許多的游戲活動，首先是玩花燈。中秋是我國三大燈節之一，過節要玩燈。當然，中秋沒有像元宵節那樣的大型燈會，玩燈主要只是在家庭、兒童之間進行的。
早在北宋《武林舊事》中，記載中秋夜節俗，就有‘將“一點紅”燈放入江中漂流玩耍的活動。中秋玩花燈，多集中在南方。如前述的佛山秋色會上，就有各種各式的彩燈：芝麻燈、蛋殼燈、刨花燈、稻草燈、魚鱗燈、谷殼燈、瓜籽燈及鳥獸花樹燈等，令人贊嘆。
在廣州、香港等地，中秋夜要進行樹中秋活動，樹亦作豎，即將燈彩高豎起來之意。小孩子們在家長協助下用竹紙扎成兔仔燈、楊桃燈或正方形的燈，橫掛在短竿中，再豎起于高桿上，高技起來，彩光閃耀，為中秋再添一景。孩子們多互相比賽，看誰豎得高，豎得多，燈彩最精巧。另外還有放天燈的，即孔明燈，用紙扎成大形的燈，燈下燃燭，熱氣上騰，使燈飛揚在空中，引人歡笑追逐。另外還有兒童手提的各式花燈在月下游嬉玩賞。
在廣西南寧一帶，除了以紙竹扎各式花燈讓兒童玩耍外，還有很樸素的柚子燈、南瓜燈、桔子燈。所謂柚子燈，是將柚子掏空，刻出簡單圖案，穿上繩子，光芒淡雅。南瓜燈、桔子燈也是將瓤掏去而成。雖然樸素，但制作簡易，很受歡迎，有些孩子還把柚子燈漂入池河水中作游戲。
廣西有簡單的戶秋燈，是以六個竹篾圓圈扎成燈，外糊白紗紙。掛于祭月桌旁祭月用，也可給孩子們玩。
如今廣西廣東的不少地區，在中秋夜布置燈會，扎制用電燈照亮的大型現代燈彩，還有用塑料制成的各式新型花燈供兒童玩，但卻少了一份舊時燈彩的純樸之美。
另外南方還廣泛流傳著燒瓦子燈(或稱燒花塔、燒瓦塔、燒番塔)的游戲，在江西、廣東、廣西等地都有流傳。如《中華全國風俗志》卷五記：江西“中秋夜，一般孩子于野外拾瓦片，堆成一圓塔形，有多孔。黃昏時于明月下置木柴塔中燒之。俟瓦片燒紅，再潑以煤油，火上加油，霎時四野火紅，照耀如晝。直至夜深，無人觀看，始行潑息，是名燒瓦子燈”。廣東潮州的燒瓦塔，也是以磚瓦砌成空心塔，填入樹枝燒起火來。同時還燃煙堆，就是將草柴堆成堆，在拜月結束后燒燃。而在廣西邊疆一帶的燒番塔，亦類似這種活動，但民間傳說是為了紀念清代抗法名將劉永福將逃入塔中的番鬼(法國侵略者)燒死的英勇戰斗，頗有愛國的思想。福建晉江亦有“燒塔仔”的活動。
傳說這種習俗與反抗元兵的義舉有關。元朝確立后，對漢人進行了血腥的統治，于是漢人便進行不屈的反抗，各地相約中秋節起事，在寶塔的頂層點火為號。類似于峰火臺點火起事，這種反抗雖被打壓下去，卻遺存了燒寶塔這一習俗。這個傳說與中秋吃月餅的傳說有異曲同工之妙。
2021年歡度中秋節優秀作文4提起中秋節，誰都知道，“八月十五中秋節”嘛。可我們舟山人過中秋節卻在農歷的八月十六日。那么，我們舟山人過中秋節的習俗是什么呢?吃月餅、賞月、和家人團聚……這些都已成為我們舟山人必不可少的習俗。
在八月十六這一天，多數人家的餐桌上都會有一碗傳統小菜“芋艿鴨”。這是怎么一回事呢?傳說在很早以前舟山人不知有芋艿，到后來食用芋艿，這中間與明愛國將領抗倭有關。明嘉靖三十二年八月十六，瓊州參將俞大猷奉命在舟山圍殲倭寇，不料在離舟山不遠的海面上遭到襲擊。
幸虧俞大猷指揮有方，將部隊安全撤退到普陀山附近一個小島駐扎，只是運糧船被倭寇劫走，吃飯成了問題，當時實行海禁，島嶼上居民已被強迫遷走，島已變為荒島，部隊面臨糧草斷絕的困境。士兵們餓得發慌，遍地去找可吃之物，發現沼澤地里有種野生植物，根部長有球莖，于是便挖來煮著試吃。一吃味道很好，且又耐饑。俞大猷得知后發動大家都去采挖。就靠這種球莖，俞大猷的部隊渡過了難關。所以俞大猷把這種不知名的食物取名為“遇難”。第二天，俞得到情報，那些槍糧的倭寇在普陀集結，設計水陸夾擊大敗倭寇，普陀山潮音洞畔到今留有紀念明將抗倭石刻，上鐫“明嘉靖癸丑秋，副使李文進，參將俞大猷，都司劉恩至，督兵滅倭于此”字樣。
舟山人過中秋都有吃月餅的習俗，俗話中有：“八月十五月正圓，中秋月餅香又甜”。月餅最初是用來祭奉月神的祭品，“月餅”一詞，最早見于南宋吳自牧的《夢梁錄》中，那時，它也只是象菱花餅一樣的餅形食品。后來人們逐漸把中秋賞月與品嘗月餅結合在一起，寓意家人團圓的象征。
中秋節的習俗很多，形式也各不相同，但都寄托著人們對生活無限的熱愛和對美好生活的向往。
2021年歡度中秋節優秀作文5早晨，我從床上起來，看了一下日歷，啊!今天既然是中秋節。我馬上吃完了早飯坐在電視前，興奮地看著中秋的節目……
晚上，我吃完飯，就和爸爸媽媽一塊去陽臺賞月。金燦燦的晚霞好迷人呀，有點像一只也來賞月的狼。我看著看著，這只狼慢慢變成了白狼，哈，原來是我等待已久的月亮升起來了。
我抬頭仔細瞧著，一輪潔白無暇的明月懸掛在點點閃爍的夜空，此時，我不由得想起了李白寫的一首詩：“小時不識月，呼作白玉盤。又疑瑤臺鏡，飛向青云端?！?/p>
那月光多輕柔，猶如輕紗般撒向人間;那月亮多可愛，猶如白玉讓我們欣賞;那夜空多美，在月亮的襯托下，猶如人間仙境。你瞧，那月亮里灰暗的影子，不正是傳說中的吳剛在桂花下乘涼嗎?不遠處，美麗的嫦娥姐姐懷里正抱著一只惹人喜愛的玉兔呢?
歡度中秋范文2
一年一度的促銷大好機會"中秋節"即將到來,另外今年又和2011年一樣,中秋節和國慶節相距甚近,對于商家來說,更具挑戰意義.因此,能否搞好本次活動,對是否能達到整年度的銷售目標等都顯得尤為重要,同時抓住消費者的消費心理,在中秋,國慶期間,最大限度的提高人流量,提升人氣,擴大商場的銷售額,勢必提高愛家各分店的市場占有率,增加iga的美譽度.
以下為本次活動的策劃方案,以供參考:
二,活動主題:"喜迎國慶 歡度中秋"
三,活動時間:2011.09.05 — 2011.10.7
四,活動目的:
1)以"中秋節,國慶節"為契機,通過策劃一系列活動,進一步宣傳企業的整體形象,提高企業在顧客及供應商中的知名度和美譽度;
2)借助"中秋節","國慶節"等節日的到來,策劃實施一系列大型促銷活動,刺激消費群,吸引目標消費群及潛在的消費群,最大限度地擴大銷售額;
3)通過策劃一系活動,加深愛家超級廣場與消費者的相互了解與情感溝通;
擴大企業知名度,進一步樹立愛家"關愛社區居民 共建溫馨家園"的社會形象.
五,活動對象:顧客,供應商,員工
六,活動廣告語:
七,活動廣告語:
1)喜迎國慶 歡度中秋
2)月圓中秋 情系iga
3)情滿月圓 舉國同慶
4)中秋佳節 iga濃您家鄉情!
5)中秋合家歡 佳節大獻禮
6)望月懷遠 花好月圓
7)每逢佳節倍思親 iga為您送溫情
8)禮情款款 歡度佳節
9)熱烈慶祝60周年!
10)愛是摯誠 家乃至親
11)品質,服務,物有所值!
12)關愛社區居民 共建溫馨家園
七,活動布置與宣傳
(一)場內外布置
1,場外:
1)巨幅:各分店根據物業實際尺寸聯系制作,內容為中秋節各項主題促銷活動和全場月餅優惠大酬賓的信息;
2)展板:主要公布此次各項主題促銷活動的所有內容,傳達活動信息,吸引顧客;
3)櫥窗玻璃:設計制作中秋節及國慶節的主題櫥窗廣告,增加節日的喜慶氣氛;
4)大門口上方懸掛大紅燈籠.
2,場內:
1)吊旗紙:設計制作以傳統佳節"中秋節"及國慶節為主題的一款吊旗紙,烘托喜慶的節日氣氛,美化賣場環境;
2)牌樓:采購部聯系供應商提供贊助中秋牌樓,置于月餅一條街,突出月餅區域特色布置;
3)收銀臺布幔:收銀臺使用紅色布幔布置,突出喜慶氣氛;
4)手工吊旗紙:在賣場顯眼的區域,制作各種主題促銷內容的手工吊旗紙;
5)全場懸掛紙紅燈籠布置賣場,制作"月餅一條街"宣傳牌,突顯傳統的特色,美化購物環境;
6)根據賣場實際情況,適當設計制作一系列廣告宣傳牌,美化賣場,傳達信息.
(二)活動宣傳
1,海報4期:
第一期:中秋1期手招,時間9月3日—9月16日,a4,4p彩色;
第二期:勞保品百貨周手招,時間9月10日—9月23日,a4,4p彩色;
第三期:中秋節2期手招,時間9月17日—9月30日,a3,12p彩色;
第四期:國慶節手招,時間9月24日—10月7日,a3,12p.
2,場內廣播:商場內廣播滾動式宣傳中秋國慶的酬賓信息,刺激顧客的購買欲望,增加銷售額.
3,堆頭促銷:場內特別推出 "月餅一條街","旅游食品一條街",并配上叫賣,方便顧客選購,刺激顧客消費,在場內形成熱鬧喜氣的購物氣氛.
4,人員廣告:所有人員必須充分了解此次開展的促銷活動,做好每一位顧客的活動解釋工作;
《1》
5,報紙廣告:6期.
6,電視廣告:3期
八,活動內容
第一波:教師節 (2011年9月4日——9月10日)
1)桃李滿園 師恩永存
活動時間:2011年9月10日
活動內容:為慶祝教師節的到來,答謝廣大老師對人類社會作出的巨大貢獻,
活動當天凡憑教師證和身份證即可到愛家服務臺免費領取柚子一個,每人限領一份,送完即止.
2)教師節,愛家為您傳情達意
活動時間:9月4日—9月7日
活動內容:活動期內,在愛家購物的學生,可免費獲得祝福賀卡一張(您只要在卡片上寫上您想對您的老師所說的話,iga將于9月9日前將您的祝福寄到您的老師處).每單 限送1張賀卡.(促銷組負責購卡,郵寄)
第二波:中秋節 (2011年9月11日——9月28日)
3)中秋情滿iga 購物即送"iga親情電話卡"
活動時間:2011年9月11,12,17,18,19,24—28日(10天)
活動內容:也許您與親人,朋友分別了幾個月或者幾年,中秋節到了,別忘給自己的親人,朋友撥個電話問候一下.活動期間凡在我商場購物滿38元的顧客朋友,均可憑購物電腦小票到商場服務臺免費領取面值8元的"iga親情電話卡"一張,每單限送兩張,使用"iga親情電話卡"可免費撥打長途電話,每天限量贈送,送完即止.
4)iga中秋燈謎會
活動時間:2011年9月27日,28日(兩天)
活動內容:活動當天,凡在iga消費的顧客朋友憑電腦小票均可參加中秋猜燈謎的游戲,猜中者獎精美禮品一份!采購部負責落實猜迷禮品,促銷部負責活動現場的布置與活動現場的組織.
5)濃情中秋 好禮相送
活動時間:2011年9月25日——28日(兩天)
活動內容:
a,凡于9月25日,26日兩天在我商場一次性購物滿28元即送迷你月餅一個,每人每單限送1份(自制月餅,60克).
b,凡于9月27日,28日兩天在我商場一次性購物滿28元即送柚子一個,每人每單限送1份.
以上贈品每天限送200個,送完即止.
6)中秋月餅一條街
活動時間:2011年9月10日——9月28日
活動內容:活動期間推出以中秋月餅,補品,保健品,節日禮藍等商品集中陳列,突出一條街的展示特色,以此營造喜慶的節日氣氛,方便顧客選購.促銷組負責做好"中秋月餅一條街"的布置與場內外的宣傳,采購部與門店負責商品資料的落實與陳列.
7)大宗購物
活動時間:2011年9月10日——9月28日
活動內容:今年不制作八折卡,改做郵信的格式,不寫明多少折,僅是提醒顧客凡到我商場大宗購物,與我們聯系,可享受特別優惠.
第三波:國慶節 (2011年9月29日——10月7日)
8)"歡慶中秋,國慶 購物抽大獎" 送金月餅
活動時間:2011年9月10日——10月7日
活動內容:為回報廣大顧客朋友,凡于活動期間在我商場一次性購物滿18
元,均可憑電腦小票到商場顧客服務中心參與"購物抽獎中金月餅"活動,您僅需填寫好您的姓名,聯系方式,身份證號碼,投入到抽獎箱內,即可有機會免費獲得我商場送出的價值3000元的金月餅一個.
9)中秋國慶 愛家送大禮
活動時間:2011年9月17——9月30日
活動內容:在公司第四期促銷手招(中秋2期手招,時間:9月24日—10月7日)封面上印刷中秋,國慶現金券,現金券面值10元,凡顧客拿到我們的手招,剪下現金券到我商場購物滿100元可使用一張,直接省8元現金,購物滿200元可使用兩張,現金券不可兌換現金.『 2
10)買99元送30元現金
活動時間:2011年9月31日——10月7日(八天)
活動內容:為慶祝國慶節的到來,回報廣大顧客朋友,活動期間,凡在iga購買服裝,鞋類商品滿99元即可返回30元現金,滿198元可返回60元現金,多買多返,依此類推,歡迎廣大顧客朋友前來選購.(注:此時剛好到了換季的時候,又正值國慶,顧客也為選擇在哪里購買服裝而憂郁不決的時候,吸引顧客,不讓顧客外流,拉動人流,推動銷售).
11)黃金周 旅游商品大展銷
活動時間:2011年9月25日——10月7日
活動內容:活動期間推出以戶外旅游小食,護膚品套裝等為主的30款特價商品集中陳列,突出國慶旅游特價商品的優越性,促進銷售.分部采購部與百貨部負責落實旅游商品資料與陳列,促銷部負責落實現場布置與場內外的宣傳.
12)九州同慶國慶日
活動時間:10月1日至10月3日
活動內容:由采購部聯系供應商到門店搞場外促銷活動,活躍場內外氣氛.
九,費用預算:(見附表)
十,活動操作:
1)活動總負責:iga
2)組成人員:各部門負責人
歡度中秋范文3
一、思維角度變化與空間轉換特點（以經典圖形為例）
（1）從透視、側視到俯視、斜視。學生習慣于識讀完整可透視且是側視狀態的地球經緯網圖，實際教學中則需要進行多方位、多視角的經緯網識讀訓練，如圖1所示。
■
（2）從立體到平面?，F實狀態的地球運動圖是立體、動感的，而表現在練習試卷上則往往是平面、靜止的圖像。正確進行二者之間的轉化是學習地球運動必備能力之一，如圖2所示。
（3）從整體到局部。通常教學過程中演示的是地球的整體，而命題者往往會選取地球經緯網的局部考查思維轉換能力。在解答局部光照圖時通常要把它放入整體的太陽光照圖中去理解，如圖3所示。
（4）由運動到靜止。任何一幅地球光照圖都反映地球在運動軌道上某一時刻某一點上的光照情況，把運動中的每一刻看作靜止的圖示來解答，同時又把靜止的圖片放入動態的公轉與自轉過程中理解，二者缺一不可。
（5）由中緯到高低緯。我國絕大多數地區位于北半球中緯度，很多光照實例都反映中緯度情況。在正確認識中緯度地區光照變化規律后，逐步引申嘗試探討理解低緯度（赤道附近）和高緯度（極地地區）太陽光照及其變化規律，真正實現知識遷移和靈活運用，如圖4所示。
■
（6）從理論到實際?；R為能力、化理論為實踐，能把所學知識在生活實踐中進行驗證，并能解釋身邊相關自然現象（如影子朝向、太陽高度、房屋走向、日出日落時間等），不僅是理解與掌握知識的體現，同時也能使理論基礎不斷加強，個人相關能力進一步提升。
【例1】從圖5推測甲圖所示地區所處的大致緯度是-----，該地正午時刻人影的朝向是----，乙圖所示四個地區的大致緯度是甲----、乙----、丙----、丁----。
【例2】北京時間下午3時，某興趣小組在本地借助太陽的位置用手表確定正南方向（表面朝上）。圖6所示四種方法正確的是____。
■
【例3】表1所示為6月22日三個地區日出日落時刻（表內為北京時間），判斷三個地區所在經、緯度范圍。
■
二、地球光照教學突破方法
歡度中秋范文4
1. 月是故鄉明,餅表思親情! **中秋月餅
2. 傳統風范,回味無限!**中秋月餅 3. 月色柔和的涼爽中秋. **中秋月餅
4. 十五團圓合家歡,中秋月餅話神仙! **月餅
5. 每逢佳節倍思親,中秋之月大團圓! **月餅
6. 月是故鄉明,**月餅表濃情! **月餅
7. 月圓中秋,人圓月下.xxxxx 月餅,送給你最真情的邂逅.
8. 佳節共賞天上月,中秋一品人間情. xxxxx 月餅,送給你最真情的中秋 .
9. 月圓全國,品嘗甘旨.xxxx 月餅,你中秋的最好選擇.
10. 一份好心情, 盡在品味中 .xxxxx 月餅,送給你最真情的人的生活品味!
11. 海角共此時 嬋娟
12. 海上生明月 海角共此時
13. 中秋合家歡 佳節大獻禮
14. 伴著一輪明月，就可以浪漫平生，嫡親月餅——月亮代表你的心
15. 月是故鄉明，情是親人濃，一份嫡親好禮轉達永恒的祝福!
16. 中秋神州慶，帝牌催銷風暴!
17. 雙節連壁、喜慶回饋——民主國生日燭光里的中秋濃情
18. 喜迎國慶、歡度中秋
19. 平分秋天的景色——**月餅迎國慶催銷勾當
21. 三喜臨門——『賀中秋 『迎國慶 『**隆重開幕
22. “歡喜三重奏”--中秋國慶喜邂逅 小家大家共歡喜
23. 禮情款款 歡度佳節
24. 歡喜國慶歡喜頌 全堂彩禮樂翻天
25. 花好月圓夜的世界 中秋情濃意更濃
酒類中秋催銷廣告語：
1. 品華夏五千年干紅，傳華夏五千年文明
2. 中秋團圓金六福酒
3. 常飲勁酒，精力抖擻(勁酒)
超市中秋催銷廣告語：
1. 喜迎國慶 歡度中秋
2. 月圓中秋 情系 iga
3. 情滿月圓 舉國同慶
4. 中秋佳節 iga 濃您家鄉情!
5. 中秋合家歡 佳節大獻禮
6. 望月懷遠 花好月圓夜
7. 每逢佳節倍思親 iga 為您送溫情
8. 禮情款款 歡度佳節
9. 同喜同賀中秋國慶，同歡同樂精彩華聯
10. 名月賀中秋——出名的牌子月餅大聯展
11. 歡喜在華聯，情濃意更濃
歡度中秋范文5
【關鍵詞】 葡萄球菌B型腸毒素
Screening inhibitor of Staphylococcal enterotoxin B from random circular 7mer peptide library displayed on phage
【Abstract】 AIM: To obtain the specific peptide which can bind with SEB and inhibit SEBs enterotoxin activity by panning from the random circular 7mer polypeptide libraries. METHODS: The affinity of peptide and the competitive activity of the synthetic peptide with that of antiSEB monoclonal antibody (McAb) were detected respectively by PhageELISA and competition ELISA. Animal experiment was performed to assess the suppressive effect of the screened peptide on the toxicity of SEB and its enterotoxin. RESULTS: The circular 7mer peptide obtained by panning suppressed the multiplication of spleen lymphocytes in mice. At the ratio of 160:1 (SEB: synthetic 7mers peptide)， the peptide protected the little cats from attack of enterotoxin and the survival rate of mice treated with the screened peptide was significantly higher compared with that of the control group. CONCLUSION: The obtained peptide specifically combines with SEB and suppresses its enterotoxin activity， which paves the way for the development of SEB inhibitors.
【Keywords】 staphylococcal enterotoxin B; peptide library; screening; inhibitor
【摘要】 目的： 擬通過生物淘選從噬菌體表面展示環狀7肽肽庫中篩選出與葡萄球菌B型腸毒素(Staphylococcal enterotoxin B， SEB)結合并能抑制該毒素毒性效應的特異性短肽. 方法： 采用PhageELISA來鑒定所得目的肽的親和性；利用競爭ELISA研究合成肽與SEB mAb競爭結合SEB的情況；通過動物實驗考察其抑制SEB的超抗原特性和腸毒活性情況. 結果： 篩選所得短肽在一定濃度范圍內可以抑制SEB對鼠脾淋巴細胞的激活；合成肽與SEB質量比160∶1下，合成肽可較好地抑制SEB對乳貓的腸毒活性，并對SEB引起的小鼠致死具有明顯保護作用. 結論： 得到了能與SEB特異結合并能抑制SEB超抗原特性和腸毒活性的短肽.
【關鍵詞】 葡萄球菌B型腸毒素；肽庫;篩選;抑制劑
0引言
葡萄球菌B型腸毒素(Staphylococcal enterotoxin B， SEB)［1］是超抗原(SAg)家族的主要成員之一，該毒素可以造成食物中毒，嚴重時甚至導致致死性休克. SEB中毒后缺乏特異的治療手段，因此研究SEB的特異高效抑制劑具有重大的意義. 我們利用固相篩選方法，即以SEB作為親和靶標蛋白，從環狀7mer肽噬菌體文庫中篩選到與SEB結合，并能抑制該毒素毒性效應的噬菌體克隆. 結果表明，所篩選環狀7mer肽在細胞水平上可抑制SEB對小鼠脾細胞的激活，在整體動物水平上對SEB導致的毒性具有一定保護作用.
1材料和方法
1.1材料
環狀7mer肽噬菌體文庫( Random circular 7mers peptide library displayed on phage)為New England BioLabsInc產品; M13噬菌體單鏈DNA提取試劑盒為Qiagen公司產品； SEB單克隆抗體由本室保存; DGal(D半乳糖)為Sigma產品；抗M13噬菌體mAb、CM Sepharose FF為Amesham產品; BCA蛋白定量試劑為Pierce產品.乳貓BALB/C實驗動物由軍事醫學科學院豐臺實驗中心提供并飼養.
1.2方法
隨機肽庫的擴增、定量按照所附試劑盒說明書進行；純化按QIAprepM13 Handbook進行. 親和靶標蛋白SEB的分離純化與定量按文獻［2］方法進行. 依據優勢噬菌體陽性克隆序列合成相應的多肽，由軍事醫學科學院六所合成， 并進行了多肽純化和脫鹽處理，合成多肽的純度達95%以上. 將純化的SEB與0.1 mol/L NaHCO3(pH 8.6)相混合， 制成質量濃度為1 g/ L的溶液，取100 μL混合液加于酶聯條微孔進行包板固定，于4℃過夜；次日棄包被液后，加200 μL濃度為 50 g/L BSA于酶聯孔中進行封閉，37℃結合2 h，間隙振蕩；棄封閉液，取100 mL/L TBST液200 μL洗滌6次，間隔為5 min/次，然后將10 μL肽庫原液加于含有100 μL TBST的酶聯孔中，室溫輕搖過夜;次日棄未結合的噬菌體，取100 ml/L TBST 200μL洗滌10次，間隔為3 min/次，最后加80 μL洗脫緩沖液，室溫輕柔吹打10 min后，將洗脫得到的噬菌體轉入微量離心管中，立即加入15 μL 1 mol/L TrisHCL(pH 9.1)進行中和. 將所得噬菌體進行感染、擴增、純化后進行下一輪篩選. 在后續的篩選中TBST的濃度增為500 mL/L. 隨機挑取第3輪噬菌體單克隆進行培養后進行PhageELISA分析及DNA序列測定. 將SEB包被酶聯板，經30 g/L BSA封閉后加入培養好的單克隆上清，采用PhageELISA法檢測SEB與噬菌體的結合情況. ssDNA的提取按照QIAprepM13 Handbook進行，純化好的ssDNA送往上海博大基因公司進行序列測定.
1.2.1活性測定① 采用競爭抑制ELISA考察多肽與SEB的結合情況， SEB包被量為25 μg. 取100 g/L mAb 100 μL，分別與噬菌體單克隆上清200， 100， 50， 25， 0 μL，其中不足200 μL的以8.5 g/L NaCl補齊，然后加兔抗鼠抗體標記的HRP顯色，A450 nm比色，觀察競爭效果. 結果判斷的依據為A值下降，說明多肽抑制了mAb的結合. ② 以鼠脾淋巴細胞為靶細胞，采用噻唑藍（MTT）法評價合成肽對SEB超抗原的體外抑制活性.
1.2.2動物實驗① 幼貓腹腔接種保護實驗： 所用幼貓體質量約為450 g. 將純化SEB 5 μg溶解于5 mL生理鹽水，制成實驗對照用液；合成肽與SEB按160∶1質量比進行混合用藥. 實驗用量為每只4 mL，在5 h內發生嘔吐、腹瀉者為陽性. 單純使用SEB的組稱為對照組，使用合成肽與SEB的組稱為實驗組. ② 合成肽對小鼠的保護實驗［3］： 實驗所用動物為體質量18~22 g的雌性BALB/c小鼠，隨機分為4組，每組8只，分別為單純使用SEB組、使用致敏劑D半乳糖（DGal）組、使用SEB+ DGal+synthetic 7mer peptide組與使用SEB+ DGal組. 合成肽與SEB的比例按照160∶1進行混合用藥，SEB用量5 μg/鼠. 致敏劑D半乳糖（DGal）母液濃度為20 mg/鼠.
統計學處理： 應用SPSS統計軟件，利用單樣本t檢驗對單克隆原種親和性進行分析， 合成肽對小鼠的保護抑制利用成組設計多樣本比較的秩和檢驗進行分析，以P
2結果
將本室重組表達的蛋白進行CMFF離子交換層析. 純化產物進行SDSPAGE分析，可獲得高純度的SEB(Fig 1)， 為證明噬菌體肽庫淘選的有效性，即有富集現象出現，需計算每輪淘選產量，每次加入噬菌體數固定. 通過3輪淘選發現，隨著淘選次數的增加，出現了富集，噬菌體環狀7肽肽庫第3輪比第一輪的產量高出1.375倍. 經過3輪親和篩選，隨機挑選14個分隔良好的單克隆制備原種，進行PhageELISA鑒定，以高出陰性對照5倍的單克隆作為陽性克隆，結果如Fig 2，其中15為陰性對照. 對噬菌體單克隆原種A450進行單樣本t檢驗，t0.05/2（13）=2.160＜t=10.85， P＜0.05，相對于陰性對照A450，噬菌體單克隆原種A450具有顯著性差異. 從以上結果可以看出，經過3輪篩選噬菌體得到了明顯富集，可見親和篩選的方法是有效的，已得到與SEB特異結合的短肽. 選取10個陽性克隆進行測序 ，推導出相應的氨基酸序列. 即為噬菌體外源蛋白與噬菌體外殼蛋白融合展示的環狀7肽. 通過篩選得到的陽性克隆序列具有很好的一致性，均為CLPRQSSFC.
2結果
2.1合成肽對SEB超抗原作用的體外抑制活性合成多肽的純度達實驗要求，質譜分析測定的分子量與理論值相符，說明合成的多肽結構正確，合乎測試要求，可用于生物學活性的檢測和評定. 將與SEB高親和力的噬菌體單克隆原種培養上清做系列稀釋，與SEB單抗進行競爭抑制ELISA實驗，結果在一定稀釋梯度內競爭抑制呈線性上升(Fig 3). 這說明篩選所得短肽與SEB結合位點與SEB mAb結合位點一致. 以鼠脾淋巴細胞為效應細胞，MTT法測試，SEB在低濃度下，合成的短肽抑制效果較為明顯，隨著SEB濃度的遞增，這種抑制作用逐漸減弱（Fig 4）.
2.2動物實驗結果幼貓腹腔接種后1 h左右，對照組出現嘔吐、腹瀉、精神萎靡、行走困難癥狀；18 h后，幼貓開始飲水進食，并恢復好動習性；而實驗組則無上述癥狀的出現. 顯示，合成肽可以保護幼貓免受SEB腸毒毒性攻擊，證明篩選所得環狀7肽有效. 為進一步證明肽的有效性，將合成的肽與SEB混合進行動物實驗. 結果如Fig 5，秩和檢驗χ2=18.459， P＜0.05，可認為利用肽進行保護組存活率優于單純使用DGal+SEB組，在用藥后的10 h內，這種保護作用尤為明顯，隨著用藥時間的延長，保護作用逐漸減弱. 結果證明，篩選所得肽在一定時間范圍內對SEB具有明顯的抑制作用.
3討論
肽庫技術是引入組合策略和模擬進化思想，建立起的一種篩選藥物先導化合物的新方法. 從噬菌體表位隨機肽庫中篩選藥物先導化合物，可以快速篩選生物活性肽，這一方法具有傳統的藥物篩選方法無法比擬的優越性［4］.
PhageELISA檢測結果顯示，單克隆原種多數A450 nm比陰性對照高出9~10倍，而一般認為高出陰性對照5倍即為陽性，且篩選得到的單克隆序列具有很好的一致性，因此以固相的SEB進行親和篩選是成功的，這也與文獻報道相符［5，6］. 利用SEB單抗進行競爭抑制，在一定濃度范圍內，抑制效率基本呈線性關系，這就說明篩選得到的短肽與SEB的結合位點和單克隆抗體與SEB的結合位點重疊. 已有實驗證明，SEB可促進脾淋巴細胞增殖［7］，而在本實驗中，SEB的超抗原活性體外實驗證明，在一定濃度范圍內合成肽可以抑制脾淋巴細胞的增殖，這就間接證明合成肽對SEB具有較好的抑制作用，這也與文獻報道相一致［8］. 幼貓腹腔實驗顯示，合成肽對SEB的腸毒活性有較強的抑制作用. 小鼠的致死實驗表明，合成肽可以延緩小鼠死亡時間，表現出一定保護作用. 在用藥的10 h內，保護組小鼠沒有出現死亡，而實驗組存活率僅為25%，但隨著時間的延長，保護作用的減弱估計與合成短肽半衰期短，在體內不穩定，易受體內環境影響發生降解有關.
參考文獻
［1］ 雷祚榮著. 葡萄球菌和葡萄球菌素病［M］. 北京： 中國科學技術出版社，1992: 1992.
［2］ 姜永強，寧保安，鄭玉玲，等. 重組葡萄球菌B型腸毒素超抗原的制備及抗腫瘤活性分析［J］. 細胞與分子免疫學雜志，2002; 18(4): 323-326.
Jiang YQ， Ning BA， Zheng YL， et al. Preparation and antitumor activity analysis of recominant SEB ［J］. Chin J Cell Mol Immunol， 2002;18(4):.323-326.
［3］ Miethke T， Wahl C， Heeg K， et al. T cellmediated lethal shock triggered in mice by the superantigen staphylococcal enterontoxin B: critical role of tumor necrosis factor ［J］. Exp Med， 1992;175:91-98.
［4］ 秦鑫，趙寧，張英起，等. 人轉鐵蛋白受體結合肽的噬菌體肽庫篩選與鑒定［J］. 第四軍醫大學學報， 2004; 25（12）：1117-1119.
Qin X， Zhao N， Zhang YQ， et al. Isolation and identification of a novel peptide binding to human transferrin receptor from phage display library ［J］. Fourth Mil Med Univ， 2004;25（12）：1117-1119.
［5］ Goldman ER， Pazirandeh MP， Mauro JM， et al. Phagedisplayed peptides as biosensor reagents ［J］. Mol Recognit， 2000;13(6):382-387.
［6］ Wang G， De J， Schoeniger JS， et al. A hexamer peptide ligand that binds selectively to staphylococcal enterotoxin B: Isolation from a solid phase combinatiorial library ［J］. Pept Res， 2004; 64(2):51-64.
［7］ 陳鈺，彭虹，尉承澤，等. 超抗原SEB在同種異體細胞移植小鼠中誘導的免疫耐受及其特征［J］. 細胞與分子免疫學雜志，2002;18(2):101-103.
Chen Yu， Peng H. Immunotolerance and its characteristics induced by SEB in mice receiving allogenic cell transplantation ［J］. Chin J Cell Mol Immunol， 2002; 18(2):101-103.
歡度中秋范文6
又是一年國慶節，花開一片片！國慶又逢中秋，我衷心祝福我心中的你心情愉快，開心的時刻永遠都在。上帝賜給人類的愛是永恒的。
把握時令，創造時運；成龍成鳳，要有自信；態度端正，不要賣命；身體要緊，不要生病；好吃好玩，歡度國慶！
淡照霜飛的是一絲銀菊，書寫秋空的是一片月華，溫潤心田的是一抹恩愛，緣系今生的是一世情緣。國慶佳節，盼望與你相聚！
十一遇見了神洲龍行！人遇喜事精神爽，國慶中秋雙喜臨門，祝福網民網蟲們節日快樂！
舉國歡慶齊歡暢，在這個國家的節日里！國慶中秋雙雙慶，在這個特別、美好、難忘的日子里，讓我們全部的華夏子孫共祝愿祖國盛！家團圓！人幸福！
對你的思念像裊裊的輕煙不絕如縷，對你的祝福如潺潺的流水伴隨一生一世，國慶放長假，何不一起出去happy？
剛剛送走了中秋的笑臉，又迎來了國慶的喜悅！愿你在這雙重喜慶的包圍下永遠幸福、快樂??！
山美，水美，人更美，全國人民是一家。不同的民族，同一個中國。母親的生日，同喜同喜。
工作是做不完的，身體可是累得垮的，健康是生命的本錢。多多善待自己吧！國慶節假期你該歇歇了
共度佳節，舉國歡慶，軍民一家親！在這舉國共慶的日子，祝我的家庭與國家的日益繁榮相伴，祝福你，我的朋友。
我們是龍的傳人，龍的后代，龍的子孫！讓我們這些龍的子孫，共同歡度偉大祖國的節日！
你聽見了那首來自東方的歌了嗎？慶國慶，大家齊歡樂，五十六個民族共歡騰，愿我們的祖國欣欣向榮！
美麗的國家，美麗的神洲。美麗的日子里祝福美麗的人一切都好！
祝福你爸爸，祝福你媽媽！沒有國，哪有家；沒有家，哪有你我。讓我們同祝愿國圓家圓，家和國興！
你又想起了那首歌了嗎？在這舉國歡慶的日子里。今天是你的生日我的祖國，清晨我放飛一群白鴿，為你銜來一枚橄欖枝……祝福您的生日，我的中國。
龍騰虎躍在神洲！歡度國慶，共度中秋！在這美好日子里，讓我用最真摯的祝福伴您度過。祝：萬事大吉，心想事成！
神洲大地，男女共祝國慶節！國慶國慶普天同慶，中秋中秋家家團圓，祝愿你在這個平和幸福的年代里節日快樂！身體健康！