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初次見面范文1
今天,我正式參加了小荷寫作的暑假班。老師姓王,叫王玉清。
開始上課,老師拿出了一個方形的“禮物”,說:“同學們,我吶,今天要送你們一個見面禮。請你們猜一猜這里面是什么禮物呀?”
同學們開始猜想了,我第一個搶先答道:“是磚頭!”同學們把目光都凝聚在我身上,老師說:“真的嗎?在這里面真的是磚頭的話,我,也就忒狠心了把!”
老師又說:“你看!我兩個手指頭就能夾住它!”說著,就真的用兩個手指頭夾住了它!
然后老師又讓我們聽了聽里面的聲音,她拿著磚頭,在我們每一個同學的耳邊搖了幾下。我們都聽見了“沙沙沙,沙沙沙……”的聲音,都改變了剛才的想法。
但,我還是覺得那里面是塊磚頭??粗趵蠋熌且荒樕衩氐臉幼?,我的心里忽上忽下!
老師又問:“你知道這里面是什么嗎?”
“恩……是盒子!”
“那你呢,你知道這里面是什么嗎?”
“是……恩……是盒子里面裝著東西!”
“你呢?”
“你呢?”
……
但是,我的直覺一直告訴我:是磚頭!
終于,老師要打開那被厚厚的報紙包著的“禮物”了!
頓時,教師里鴉雀無聲。
打開了第一層報紙,但,還有一層。接著,老師又打開了第二層。啊哈!我猜對了,里面是塊磚頭!
我們最終的禮物是磚頭。
初次見面范文2
通過親戚,老鄉關系來拉近距離
由于親戚老鄉這類較為親密的關系會給人一種溫馨的感覺,使交際雙方易于建立信任感。特別是突然得知面前的陌生人與自己有某種關系,更有一種驚喜的感覺。故而,若得知與對方有這類關系,寒暄之后,不妨直接講出,這樣很容易拉近兩人的距離,使人一見如故。
現在許多大學里面,都存在一些老鄉會、聯誼會等組織,這些老鄉會、聯誼會就是通過老鄉關系把同一地方的學生召集在一塊,組織起來。同時也通過老鄉會來相互幫助、聯絡感情、加強交流。從人的心理上來講,每個人的潛意識中都有一種“排他性”,對自己的或跟自己有關的事物往往不自覺表現出更多的興趣和熱情:跟自己無關的則有一定的排斥性。因而在交談中這類關系的點出就使對方意識到兩人其實很“近”。這樣,無論對方位在你上或你下,都能較好地形成坦誠相談的氣氛,打通初次見面由于生疏造成的心理上的“設防”。同志就常用這種“拉關系”的技巧。建國后接見民主人士時,凡是與他有點親戚關系的,以及通過師生、故友的關系有些瓜葛的,往往是剛一見著面,沒出兩三句話,他就爽直地和盤托出其間絲絲縷縷的關系,在“我們是一家子”的爽朗笑聲中,氣氛親熱了許多,使被接見者倍感親切。
以感謝方式來加強感情
我的一個同學在跟一個高年級學生接觸時的頭一句話就是:“開學時就是你幫我安置床鋪的?!薄笆菃?”那個同學驚喜地說。接著兩人的話題就打開了,氣氛頓時也熱乎了許多。那個高年級同學的確幫過我們許多人,不過開學初人多事雜,他也記不得了。而我這個同學則恰到好處地點出了這些,給對方很大的驚喜,也使兩人的關系拉近了一層。一般說來,每個人都對自己無意識中給別人很大的幫助感到高興。見面時若能不失時機地點出,無疑能引起對方的極大興趣。因此,初次見到曾幫過自己的人時,不妨當面講出,一方面向對方表示了謝意,另外無形中也加深了兩人的感情。
從對方的外貌談起
每個人都對自己的相貌或多或少地感興趣,恰當地從外貌談起就是一種很不錯的交際方式。有個善于交際的朋友在認識一個不喜言談的新朋友時,很巧妙地把話題引向這個新朋友的相貌上?!澳闾裎业囊粋€表兄了,剛才差點把你當作他,你們倆都高個頭,白凈臉,有一種沉穩之氣……穿的衣服也太像了,深藍色的西服……我真有點分不出你們倆了?!薄罢娴?”這個新朋友眼里閃著驚喜的光芒。當然,他們的話匣子都打開了,我們不得不佩服這個朋友談話的靈活性。他把對方和自己表兄并提,無形中就縮短了兩人之間的距離,接著在敘說兩人相貌時,又巧妙地給對方以很大的贊揚,因而使這個不喜言談的新朋友也動了心,愿意與其傾心交談。
初次見面范文3
通過親戚、老鄉關系來拉近距離
由于親戚老鄉這類較為親密的關系會給人一種溫馨的感覺,使交際雙方易于建立信任感。特別是突然得知面前的陌生人與自己有某種關系,更有一種驚喜的感覺。故而,若得知與對方有這類關系,寒暄之后,不妨直接講出,這樣很容易拉近兩人的距離,使人一見如故?,F在許多大學里面,都存在一些老鄉會、聯誼會等組織,這些老鄉會、聯誼會就是通過老鄉關系把同一地方的學生召集在一塊,組織起來。同時也通過老鄉會來相互幫助、聯絡感情、加強交流。從人的心理上來講,每個人的潛意識中都有一種“排他性”,對自己的或跟自己有關的事物往往不自覺表現出更多的興趣和熱情;跟自己無關的則有一定的排斥性。因而在交談中這類關系的點出就使對方意識到兩人其實很“近”。這樣,無論對方位在你上或你下,都能較好地形成坦誠相談的氣氛,打通初次見面由于生疏造成的心理上的“設防”。同志就常用這種“拉關系”的技巧。建國后接見民主人士時,凡是與他有點親戚關系的,以及通過師生、故友的關系有些瓜葛的,往往是剛一見著面,沒出兩三句話,他就爽直地和盤托出其間絲絲縷縷的關系,在“我們是一家子”的爽朗笑聲中,氣氛親熱了許多,使被接見者倍感親切。
以感謝方式來加強感情
我的一個同學在跟一個高年級學生接觸時的頭一句話就是:“開學時就是你幫我安置床鋪的?!薄笆菃幔俊蹦莻€同學驚喜地說。接著兩人的話題就打開了,氣氛頓時也熱乎了許多。那個高年級同學的確幫過我們許多人,不過開學初人多事雜,他也記不得了。而我這個同學則恰到好處地點出了這些,給對方很大的驚喜,也使兩人的關系拉近了一層。一般說來,每個人都對自己無意識中給別人很大的幫助感到高興。見面時若能不失時機地點出,無疑能引起對方的極大興趣。因此,初次見到曾幫過自己的人時,不妨當面講出,一方面向對方表示了謝意,另外無形中也加深了兩人的感情。
從對方的外貌談起
每個人都對自己的相貌或多或少地感興趣,恰當地從外貌談起就是一種很不錯的交際方式。有個善于交際的朋友在認識一個不喜言談的新朋友時,很巧妙地把話題引向這個新朋友的相貌上?!澳闾裎业囊粋€表兄了,剛才差點把你當作他,你們倆都高個頭,白凈臉,有一種沉穩之氣……穿的衣服也太像了,深藍色的西服……我真有點分不出你們倆了?!薄罢娴?”這個新朋友眼里閃著驚喜的光芒。當然,他們的話匣子都打開了。我們不得不佩服這個朋友談話的靈活性。他把對方和自己表兄并提,無形中就縮短了兩人之間的距離,接著在敘說兩人相貌時,又巧妙地給對方以很大的贊揚,因而使這個不喜言談的新朋友也動了心,愿意與其傾心交談。
初次見面范文4
Z...Z....Z...
第二天龍馬很早起了床,踏上了去青春學園的路.可是不料卻在路上碰上了一個小偷,小偷正向龍馬沖了過來距離愈來愈近把龍馬推倒在了地上,這時一個頭前有兩根頭發的人跑過來了把龍馬扶了起來(這當然是我們樂于助人的大石學長了,呵呵!)龍馬還是面無表情(如果不這樣他就不是龍馬了)的說:"謝了.''接著便轉身拿起了自己的網球拍和網球朝小偷打了過去,小偷一下就暈了過去,沒過一會兒小偷就落入了法網.
龍馬來到了青春學園在班上報了名就去了學校的圖書館.(因為龍馬要去那里查一些東西)便拿了一本書坐在手冢和乾的旁邊,只聽見有一個人在那里大聲的喧嘩,一直的吵鬧個不停,手冢正在專心致志的看著他的書,乾也正在看著他的書,龍馬也是不例外.他們三個一直都是忍著的,可是忍了很久那個人都沒有停,終于,他們三個人都忍不住了.首先是龍馬先說:"喂!你認為你說的話十分好聽嗎?''在場的人都哈哈大笑了起來.那個人決的十分的尷尬.接著又輪到了乾學長了,乾學長用他的一貫語氣說:"恩,現在你尷尬的機率是100%,還沒反映過來的機率是90%,......''說了一長串百分之幾百分幾把那個人搞的暈頭轉向了,最后,也是致命的一擊手冢用自己訓練隊員的口吻說:"給我跑操場30圈!''自然被乾學長搞的暈頭轉向的那的人就聽了手冢的話去跑了30圈操場,直到跑完了才反映了過來.
龍馬便來到了網球部,見到青學的王子們時,龍馬一臉吃驚的樣子,讓龍崎教練感到十分的困解......
初次見面范文5
原工作單位:團中央
時間 _ 2010年4月11日
采訪地點 _ 拉薩
有非常好的傳統和基礎,不僅僅是接受援助,在發生全國性災難時,人民也盡力地援助他人,讓我們這些干部深受教育和感動。
我來到,是進行共青團的工作,這也是黨的群眾工作的重要組成部分。3年來,我更加深切地感到在做好青少年思想政治教育引導工作的極端重要性和現實必要性。在做好青少年思想政治教育引導,最關鍵和緊迫的是加強愛國主義和民族團結教育。這個方面,汶川地震和西南干旱等罕見天災,就為我們提供了難得的教育機會。我們開展了廣泛的募捐活動,均收到了很好的效果。還記得2009年5月14日,在建材市場、太陽島、德吉路口、電信營業廳、賽康百貨等地,我們組織青年志愿者,從早十點至晚六點不間斷組織募捐,而路過的很多藏族百姓,紛紛慷慨解囊。日喀則市聯鄉,青年農牧民旦增將自己辛辛苦苦幾個月攢下來的130元錢,投到了募捐箱里面。他說,我們有困難的時候,內地省市為我們捐款捐物?,F在他們有困難了,我們也應該做點什么,雖然錢少了點,但是這也代表了自己的一點心意。
聯鄉45歲以下青年農牧民共1900余人,捐款5151元。捐款中有很多的零錢,我們數了很久。這種感人的場面在牧區隨處可見,團市委的同志們都是在含淚工作。這些工作不僅充分調動了各族青少年對中華民族和各族同胞的關愛之情,更是中華民族歸屬感、中華文化認同感、偉大祖國自豪感的有效強化和生動體現。這從另一個側面也讓我們看到了藏族同胞的善良與慷慨。
初次見面范文6
關鍵詞:H9亞型禽流感病毒;Fe3O4;免疫磁珠
中圖分類號:S852.65 文獻標識碼:A 文章編號:0439-8114(2016)10-2603-04
DOI:10.14088/ki.issn0439-8114.2016.10.038
Abstract: Avian influenza virus(AIV) was one of the major zoonotic pathogens which seriously harmful to the world poultry industry. AIV is excreted in the environment by AIV-infected birds and the trace pathogens were the potentially important source of infection but difficult to be monitored. In order to effectively monitoring the pathogens in poultry environment, the pretreatment for samples was very important. In this study, Fe3O4 nanoparticles with particle size about 30-100 nm were prepared, and the coupled with H9-HA monoclonal antibody and beads. The coupling efficiency was about 130 mg/g. The results showed that 200 μL immunomagnetic beads(IMB) at concentration about 5.6 mg/mL could isolate and purify 100 μL of AIV-H9 with hemagglutination titer for 28. It indicated that IMB could provide convenience to purify and enrich trace pathogens in of animal living environment, which will improve the efficiency of monitoring pathogens in the environment cooperating with other method.
Key words: H9N2 subtype AIV; Fe3O4; Immunomagnetic beads
禽流感病毒(AIV)嚴重危害世界養禽業,是舉世矚目的重大人畜共患病原,近年來發生了數起不同血清亞型禽流感病毒感染人事件,為人類積極預防和控制禽流感的流行敲響了警鐘[1-4]。AIV主要通過感染禽的呼吸道、黏膜分泌物和糞便不斷排出,人和其他動物通過密切接觸病禽及其分泌物、排泄物和污染的環境而被感染[5]。自然界中,鳥和水禽的糞便以及養禽場的廢棄物和污水是潛在的主要傳染源,因此加強畜禽內外生活環境中AIV檢測,及時預警,更有助于AIV防控。但環境中組分復雜,一般情況AIV含量少,現有的AIV檢測方法,包括傳統的實驗室診斷方法(病毒分離和血清學方法)和分子生物學檢測技術很難適應畜禽生活內外環境中微量AIV的監測,直接檢測效率低下。因此,需通過有效分離純化技術分離純化或富集過程以提高檢測成功率。
免疫磁性微球(Immunomagnetic microspheres,IMMS),或稱免疫磁珠(Immunomagnetic beads, IMB),是免疫微球的一種,是表面結合有抗體的磁性微球。它兼具免疫反應的特異性及磁性分離的快速性。在磁力作用下,固液相的分離十分簡單,特異性抗原與其他物質可以迅速分離,省去離心、過濾、洗脫等繁雜操作,適合從復雜環境中快速有效地分離純化或富集病原微生物。
本研究擬合成磁性復合微粒,并通過表面改性、修飾,然后偶聯抗H9亞型禽流感病毒單克隆抗體,制備免疫磁珠,以期建立一種新的便捷、經濟、有效的方法分離、純化或富集禽流感病毒,提高畜禽生活環境中AIV的監測效率。
1 材料與方法
1.1 磁性Fe3O4的合成及其表面氨基化修飾
采用NaOH作為沉淀劑的化學共沉淀法合成磁性Fe3O4。在氮氣的保護下,將一定量的二價鐵鹽(FeCl2q4H20)和三價鐵鹽(FeCl3q6H2O)按照2∶3的摩爾比例混合,室溫條件下機械劇烈攪拌,逐滴加入適量的1 mol/L NaOH,反應30 min后,升溫到65~70 ℃熟化30 min。在N2的保護下進行磁分離,反復用超純水洗滌直至中性,最后定容室溫保存,備用。取適量70 ℃烘干至恒重,計算固體物含量(單位:mg/mL)。用掃描電子顯微鏡SEM表征Fe3O4樣品的平均粒徑、粒徑分布以及表面形貌。
制備Fe3O4-NH2:將300 mg左右Fe3O4納米粒子重懸于50 mL50%乙醇中,室溫超聲處理30 min,在機械劇烈攪拌的條件下(500 r/min)升溫至60 ℃,滴加3-氨丙基三甲氧基硅烷(APTS)1 mL,持續反應10 h。依次用無水乙醇和超純水洗滌,重復5次,最后用50 mL超純水重懸。
1.2 Fe3O4-NH2-mAb(抗H9-HA)制備
依次用NaHCO3(0.1 mol/L)和PBS(0.1 mol/L,pH 7.4)洗滌Fe3O4-NH2 3次,然后用PBS重懸,加入25%戊二醛1 mL,室溫下反應6 h后用PBS洗滌5次,再分散于PBS中,固相含量約為5.6 mg/mL。
取400 μL修飾后的磁珠懸液,加入4 mg/mL抗H9亞型禽流感病毒血凝素單克隆抗體(McAbH94C4)(由華中農業大學獸醫微生物與免疫學實驗室制備)適量,保持總體積為500 μL,并置于搖床室溫緩慢振搖12 h,測定OD280 nm,計算單克隆抗體最佳包被濃度,然后在添加適量抗體的情況下確定制備免疫磁珠最佳孵育時間。
1.3 免疫磁珠對禽流感病毒的吸附
1.3.1 免疫磁珠的封閉 用0.1 mol/L的PBS(pH 7.4)洗滌免疫磁珠,去除未包被的單抗,然后重懸于2倍原體積的含5%的BSA的PBS中,4 ℃封閉過夜。取適量免疫磁性微粒加入相同量的HRP羊抗兔抗抗體,37 ℃溫浴40 min,用PBST洗滌液清洗3次,后加入TMB顯色,10 min后進行磁性分離,移取200 μL上清液放入加有50 μL終止液(1 mol/L HSO4)的酶標條測定OD450 nm。同時設未封閉免疫磁珠和空白對照。
1.3.2 免疫磁珠的生物活性測定 取適量用5%BSA封閉好的免疫磁珠分裝入1.5 mL塑料離心管中,然后加入HRP標記的特異性羊抗鼠酶標二抗,37 ℃溫浴40 min。用PBST洗滌液洗滌3次,后加入顯色液100 μL,10 min后進行磁性分離,上清液轉移至ELISA板,加入50 μL終止液,測定OD450 nm。
1.3.3 免疫磁珠吸附病毒與病毒洗脫 AIV-H9標準抗原和NDV標準抗原(購自哈爾冰獸醫研究所)按標準方法稀釋后取100 μL置于1.5 mL離心管中,分別加入不同劑量免疫磁珠和氨基化磁珠,將病毒和免疫磁珠混勻后放于37 ℃溫箱中反應30 min,期間再適當晃動數次。磁性分離固、液相,液相保留,與后續的固相洗脫液進行血凝試驗。磁性分離的固相用PBS洗滌3次,然后用1%NaCl(100 μL)重懸,室溫放置15 min,進行磁性分離,棄固相保留液相,進行血凝試驗。
2 結果與分析
2.1 合成磁性Fe3O4粒子及氨基化修飾
掃描電鏡SEM觀察Fe3O4納米粒子間表現出了一定的相互吸引作用,單個Fe3O4的粒徑約為30~100 nm(圖1)。取10 mL合成的懸浮液于干燥的表面皿中,棄上清液后置于70 ℃干燥箱中烘干至恒重,約為0.10 g,因此,合成磁珠的濃度約為10 mg/mL。
Fe3O4經硅烷化修飾后,取6 mL經70 ℃烘干后,固體物含量為33.6 mg,因此獲得的硅烷化后磁珠的濃度為5.6 mg/mL。
2.2 免疫磁珠
采用戊二醛兩步法在Fe3O4納米粒子表面固定單克隆抗體。Fe3O4-NH2經戊二醛處理后,加入適量AIV-H9的HA單抗,在室溫下將單克隆抗體與Fe3O4納米粒子進行偶聯。磁珠與單抗室溫反應6 h基本上達到了飽和,OD280 nm趨于穩定(表1)。而一定量的磁性粒子隨著加入單抗量的增加,磁珠吸附抗體的量增多,當抗體達到一定的劑量后,偶聯到磁珠表面的抗體不隨著抗體加入量的增加而增加,磁珠吸附力達到飽和狀態(表2,圖2)。制備的免疫磁珠偶聯單抗的量大約為130 mg/g[364.4 μg/(5.6 mg/mL×0.5 mL)]。
5%BSA對免疫磁珠具有良好的封閉效果。在封閉前后的免疫磁珠懸液中加入HRP羊抗兔抗抗體,經洗滌和顯色后,測定OD450 nm,結果顯示封閉前后磁珠的OD450 nm分別為2.232和0.086,空白對照為0.069。免疫磁珠經BSA封閉后,依次加入特異性HRP標記抗體和顯色底物后,檢測OD450 nm約為1.953,說明免疫磁珠具有較好的生物活性。
2.3 免疫磁珠吸附病毒及洗脫
比較尿囊液被免疫磁珠吸附前后對1%雞紅細胞的凝集程度,100 μL的血凝價為28的病毒液的病毒50%被100 μL免疫磁珠吸附,100%被200 μL免疫磁珠吸附(圖3A)。因此,當免疫磁珠為200 μL時,能使100 μL血凝價為28的病毒液的病毒完全被吸附。免疫磁珠不能吸附NDV(圖3B),說明免疫磁珠具有一定的特異性。
免疫磁珠吸附病毒后經1%NaCl洗滌后,取上清液進行血凝試驗,結果與處理前的血凝效價基本一致(圖3C),說明病毒從免疫磁珠上解離下來。
3 小結與討論
禽流感是重要的人畜共患病原,嚴重危害中國畜禽業發展和公共衛生安全。目前,國內非常重視流感感染病例的檢測,并研發許多靈敏、特異和快速的檢測方法,如ELISA、RT-PCR、quality RT-PCR等。但是流感病毒感染主要通過密切接觸病禽排出的呼吸道分泌物、糞便及其污染的環境而感染。梅玉發等[6,7]用實時熒光定量RT-PCR方法監測證實,2011-2012年湖北省十堰市城鄉市場中禽類與外環境中(沖洗水、污水、禽類糞便及籠具表面等)常年流行著H5和H9等多種亞型禽流感病毒。方正斌等[8]和崔小波等[9,10]連續對2011年和2012年鄖縣禽流感高危職業人群及外環境進行禽流感監測,發現鄖縣家禽屠宰點外環境為人感染禽流感的高風險場所,存在H9、H5(包括HPAIV)等多種亞型污染。由此可見,湖北省內養禽場內外環境中常年存在多種AIV污染情況,而AIV主要通過密切接觸感染的禽類及其分泌物、排泄物,受病毒污染的水等被感染。因此,加強養禽環境監測對進一步加強AIV及其他畜禽病原的防控工作具有重要意義。
環境中組分復雜、影響檢測效果的因素未知,加之病原含量可能微量,直接影響病原監測的效率。免疫磁珠富集技術具有快速、特異性強和有助于降低原有檢測手段的檢測限的優勢。本研究利用AIV-H9 HA單抗初步建立AIV-H9分離純化技術,該方法具有一定的特異性,能富集微量的病原。人們曾將100 μL血凝價為24的AIV-H9標準檢測抗原加入到10 mLPBS溶液中,然后用制備的免疫磁珠進行吸附富集,結果富集的病原經洗脫后測定血凝價為23,表明制備的免疫磁珠對病原的純化富集率超過50%。張馨元等[11]將胎球蛋白分別與羧基化和氨基化修飾的磁球進行偶聯,制備成生物磁珠,分別可以富集檢測到108和1015倍稀釋的AIV-H5N1病毒液,富集的禽流感病毒依然具有生物活性。本研究由于試驗條件的原因沒有用活的AIV-H9病原在試驗條件下模擬環境模型,但用類似的方法利用NDV多克隆抗體制備免疫磁珠可以從尿囊液中純化病毒(資料未顯示)。由于AIV血清亞型眾多,因此利用流感病毒分型抗原或者AIV病毒多克隆抗體制備免疫磁珠的應用潛力更大。
免疫磁珠的特異性與封閉條件密切相關。未經封閉的磁珠由于表面正電荷作用具有很強的非特異性吸附力,對細菌的非特異性吸附率達98%以上[12]。本試驗中,發現免疫磁珠對HRP標記的羊抗兔抗體具有很強的吸附能力,而5%的BSA具有良好的封閉效果。同時也發現磁珠非特異性吸附力與介質的性質和pH環境有一定的關聯。當介質為0.01 mol/LPBS(pH 7.4)和水時非特異性吸附很強,而且免疫磁珠在保存一定時間后磁珠出現了嚴重的聚沉現象,而在0.1 mol/LPBS(pH 7.4)中磁珠的非特異性吸附減少,另外加入0.5%的BSA有助于增加免疫磁珠的分散性和穩定性。因此,建議應用免疫磁珠處理樣品時加入適量的BSA有助于提高免疫磁珠的處理效率。
在試驗中,人們對免疫磁珠吸附病毒后的洗脫條件進行了摸索,發現離子濃度和pH對其洗脫效率的影響較大,最后確定1%NaCl作為最佳的洗脫條件,但在試驗過程中發現洗脫效率不太穩定。因此,在這方面還需要進一步完善。但是,本研究證實了制備的免疫磁珠能特異性吸附H9禽流感病毒,這為環境中禽流感病毒樣品的檢測提供了一種便捷的預處理方法。
參考文獻:
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