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刺猬的擁抱范文1
【摘要】 目的 觀察CIK細胞對自體、異體原代白血病細胞的殺傷作用，對G0期CD34+白血病細胞的細胞毒作用，及對正常骨髓造血干細胞的影響。方法 取急性白血病(AL)化療后、慢性粒細胞白血病(CML)慢性期及正常人外周血單個核細胞加入一系列細胞因子誘導培養CIK細胞，流式細胞儀檢測CIK表型，G帶法分析CIK細胞核型。凍存、復蘇后作為靶細胞，MTT法測定CIK細胞對自體、異體原代白血病細胞殺傷作用。AO染色法測定復蘇后G0期急性粒細胞白血病(AML) CD34+細胞比例及培養后CML CD34+細胞中G0期細胞比例。流式細胞儀檢測CIK細胞殺傷前后G0期CD34+細胞比例變化。半固體培養法檢測CIK細胞對正常骨髓CFUGM、BFUE集落形成的影響。結果 CIK細胞可從白血病患者外周血中獲得，來源于正常淋巴細胞，對自體原代白血病細胞有明顯殺傷作用，對G0期白血病細胞有明顯抑制作用，對正常造血干細胞無殺傷作用。結論 CIK細胞可作為清除殘留白血病細胞的有效工具。
【關鍵詞】 白血病；微小殘留?。籆IK細胞
完全緩解的白血病患者體內，常殘存耐藥的、處于靜止期的微小殘留白血病細胞，是復發的根源。本研究從白血病患者外周血中培養出的CIK細胞，不含有白血病干細胞，能有效殺傷G0期CD34+白血病干細胞，而且這種殺傷作用具有選擇性，不損傷正常造血干細胞，可以作為有效的免疫細胞來清除白血病患者體內的為微小殘留?。∕RD），值得臨床使用。
1 材料和方法
1.1 對象
本院血液科2005年1月至2008年10月15例急性白血病（AL）治療后完全緩解（CR）患者，5例慢性粒細胞白血?。–ML）慢性期患者，5例正常人。診斷均符合《血液病診斷及療效標準》〔1〕。
1.2 試劑和儀器
白介素(IL)1，英國Pepro Tech INC公司；IL2，沈陽三生公司；CD3抗體，美國PharMingen公司；干擾素(IFN)γ，英國Pepro Tech INC公司；CD3FITC單抗、CD56PE單抗、CD34APC單抗、IgGFITC單抗、IgGPE單抗，美國PharMingen公司；EPICS XL流式細胞儀，美國貝克曼庫爾特公司。
1.3 方法
1.3.1 CIK細胞的培養與測定
（1）CIK細胞的誘導與培養：取15例AL化療后CR患者、5例CML患者、5例正常人外周血分離單個核細胞，第1天加入IFNγ 1 000 μl/ml，第2天加入CD3單抗50 ng/ml、IL2 1 000 μl/ml、IL1 100 μl/ml，誘導培養CIK細胞。（2）流式細胞儀(FCM)檢測CIK細胞表型：在培養至第1、2、3周時，分別取105 CIK細胞，標記CD3FITC單抗、CD56PE單抗20 μl，對照管加入IgGPE、IgGFITC 20 μl，避光孵育20 min，用PBS洗滌后，再加1 g/L多聚甲醛固定，4℃避光保存，1 w內上機檢測。（3）染色體G帶法分析CIK細胞核型：取4例CML 患者、1例APL患者外周血單個核細胞培養至第3～4周CIK細胞5 ml(1×106/ml)，加秋水仙胺至終濃度0.03 ng/ml，置于37℃、5％ CO2孵箱中培育3 h后離心、低滲處理、預固定、離心、固定、離心、再次固定、離心、再固定，制備中期染色體標本，Gimsa 染色后鏡檢及攝影。
1.3.2 CIK細胞對急、慢性白血病細胞的殺傷作用
（1）靶細胞（白血病細胞）制備：取上述患者初診時骨髓5 ml，肝素抗凝，以RPMI 1640按2∶1體積混合稀釋，將此稀釋液緩慢加入含有5 ml Ficoll的離心管中，2 000 r/min離心20 min后吸取單個核細胞層，以RPMI 1640清洗2次后，用含20%胎牛血清和10%DMSO的1640作為凍存保護液，程序降溫至-196℃液氮中保存。（2）靶細胞（白血病細胞）復蘇：從液氮中取出上述白血病細胞凍存管，迅速放入37℃水中，搖動使其盡快融化，吸出細胞懸液，注入離心管中，加入10 ml培養液混勻，1 000 r/min離心10 min，吸棄上清液，再重復用培養液洗1次；培養液稀釋細胞至1×106/ml，接種于培養瓶中，培養1～2 d，培養后臺盼藍拒染法計數活細胞＞95%后備用。（3）MTT法測定CIK細胞對原代急慢性白血病細胞殺傷作用：將白血病細胞濃度調至1×105/ml，效應細胞即CIK細胞濃度分別調至2×106/ml，5×105/ml，1×105/ml，即效靶比分別為20∶1、5∶1、1∶1。取96孔無菌培養板，實驗組加效、靶細胞各100 μl，靶細胞對照組（白血病細胞）加靶細胞、培養液各100 μl，效應細胞對照組（CIK細胞）加效應細胞、培養液各100 μl（每組設3個平行孔），置于37℃、5% CO2孵箱中培養4 h。孵育后，各孔加入MTT比色液20 μl，再置于37℃、5% CO2孵箱中培養4 h。孵育后，1 500 r/min離心10 min，棄上清，各孔加入DMSO有機溶劑150 μl，微量振蕩器輕微振蕩，待沉淀物充分溶解后，在酶聯免疫監測儀上檢測，按以下公式計算CIK細胞殺傷活性：
殺傷活性（%）=1-(實驗組OD值-效應細胞對照孔OD值)/靶細胞對照孔OD值×100%。
1.3.3 CIK細胞對G0期CD34+急慢性白血病細胞的殺傷作用
（1）CIK細胞對G0期CD34+急性粒細胞白血病細胞(AML)的殺傷作用檢測：取上述5例AML患者復蘇后白血病細胞1×105/ml，按效靶比10∶1加入自體CIK細胞，在37℃、飽和濕度條件下作用4 h，同時設置陰性對照組。將上述2組細胞標記CD34APC單抗后，甲醛固定2 h后，加入AO染色液2 ml在冰浴條件下染色10 min后上機分析。（2）CIK細胞對G0期CD34+慢性白血病細胞的細胞毒作用 ①直接免疫磁珠法富集CML患者的CD34+細胞 取上述5例CML患者肝素抗凝骨髓5 ml，經淋巴細胞分層密度梯度離心分離，將BMMNC懸浮于含5 mmol/L的EDTA 500 μl PBS中，先加入非特異性結合阻斷劑100 μl，6℃孵育20 min，緩沖液洗滌后懸浮于500 ml PBS中備用。將MiniMACS分離柱置于永久磁場的分離器上，以500 μl緩沖液洗柱后，將細胞懸液加于柱頂，然后以500 μl緩沖液洗柱4次；將分離柱移出磁場，加1 ml緩沖液于柱頂，加壓使CD34+細胞洗脫下來，離心，重懸于100 μl。取樣計數細胞，取富集后CD34+細胞1×105/ml，加入10 μl CD34單抗，避光孵育20 min，洗滌后通過FCM檢測。②體外培養法選擇CML白血病細胞：將富集的CD34+細胞以H5100調至1×106/ml，在37℃、保和濕度、CO2條件下培養3 d。③CIK細胞對CML CD34+干細胞中G0期細胞殺傷作用的測定 取培養后的CML CD34+細胞1×105/ml，按效靶比10∶1加入CIK細胞，在37℃、飽和濕度、5%CO2條件下作用下4 h，同時設置陰性對照組。將上述2組細胞標記CD34APC單抗后，甲醛固定2 h后，加入AO染色液2 ml，在冰浴條件下染色10 min后上機分析。
1.3.4 正常骨髓CFUGM、BFUE集落培養
一組取本院骨髓無轉移的實體瘤患者（3例）BMMNC 5×104/ml種入含有GMCSF、GCSF、SCF、EPO因子甲基纖維素半固體培養基，放置于37℃、5%CO2孵箱中培養，第14天計數CFUGM、BFUE集落數量。另一組按效靶比20∶1加入培養的自體CIK細胞，第14天計數CFUGM、BFUE集落數量。
1.4 統計學處理
采用樣本均數的t檢驗、方差分析。
2 結 果
2.1 CIK細胞的增殖
2.1.1 CIK細胞的增殖
隨著培養時間增加，CIK細胞數量明顯增多，見圖1。
2.1.2 CIK細胞表型分析
來源于AL緩解患者、CML患者的CIK細胞，隨著培養時間延長，CD3+細胞數量明顯增加，第3周分別達到(98.09±4.12)%、(97.29±3.55)%，CD3+CD56+細胞數量分別達到(30.28±11.74)%、(31.64±8.52)%，與來源于正常人CIK細胞(35±5)%無明顯差異（P＞0.05），圖2。
2.1.3 染色體分析
G帶法檢測來源于有染色體異?；颊撸?例）的CIK細胞均為正常核型（圖3），表明CIK細胞為非白血病源性。
2.2 CIK細胞對原代急慢性白血病細胞的殺傷作用 見圖4。
2.3 CIK細胞對G0期CD34+原始白血病細胞的細胞毒作用
CIK細胞對G0期CD34+急性白血病細胞有明顯細胞毒作用，平均殺傷率47%。CIK細胞對CD34+慢性白血病細胞有殺傷作用（圖5、圖6），平均殺傷率66.73%。
2.4 CIK細胞對正常骨髓BFUE、CFUE集落形成影響
對照組與加入CIK細胞組的CFUGM集落數分別為150±16、145±20(P＞0.05)，BFUE集落數分別為68±5、68±8(P＞0.05)，表明CIK細胞對正常骨髓干細胞生長無明顯抑制作用。
3 討 論
近20年來，由于化療、造血干細胞移植及靶向治療的發展，急、慢性白血病的治療取得巨大進展，白血病的CR率已有明顯提高，急性白血病CR率可達60%～80%，大部分慢性期CML患者可獲得細胞遺傳學及分子生物學緩解，生存時間也明顯延長，但白血病5年長期生存率仍只有20%～30%，大部分患者因復發而死亡。目前許多研究者認為CR期間體內MRD是復發的主要根源。MRD是指臨床上達到CR，但體內仍有微量的、憑形態學方法無法檢測到的白血病細胞殘留。利用現代檢測技術RTPCR、FISH、FCM證實了在完全緩解的急、慢性白血病患者體內存在MRD。如何去除MDR，提高白血病患者長期生存率成為人們研究的熱點?；煙o法清除MRD，一方面由于殘留的白血病細胞高表達gp170蛋白，多為多藥耐藥，對化療藥物不敏感〔2〕；另一方面有研究者通過分析增殖相關標記物Ki67及P120，發現只有16%的殘留腫瘤細胞處于細胞周期中，大部分細胞靜止于G0期，抵制化療藥物的殺傷，這些細胞一旦能夠從G0期進入細胞周期，則持續增殖，導致白血病復發。目前治療MRD尚無理想方法。
近年來人們逐漸認識到MRD的根除在很大程度上依賴免疫系統。異基因造血干細胞移植后移植物抗白血?。℅VL）作用以及異基因造血干細胞移植后復發的患者，給予供者淋巴細胞輸注（DLI）能達到再次緩解也證實免疫細胞對殺滅白血病細胞起著很重要的作用〔3〕。本實驗探討應用過繼細胞免疫療法殺滅殘留白血病細胞的可行性。結果表明：①CIK細胞可從白血病患者外周血中獲得，來源于正常淋巴細胞，能夠在體外大量擴增，與來源于正常人的CIK細胞表型無明顯區別。②CIK細胞對自體AL白血病細胞及CML白血病細胞均有明顯殺傷作用。另外，CIK細胞能夠殺傷異體白血病細胞，與對自體白血病細胞的殺傷率相比無顯著性差異，提示CIK細胞以非MHC限制形式殺傷白血病細胞。③CIK細胞對G0期CD34+急慢性白血病細胞有明顯細胞毒作用。④CIK細胞對正常骨髓造血干細胞無明顯抑制作用。
參考文獻
1 張之南. 血液病診斷與療效標準〔M〕. 第2版. 北京：北京科學出版社，1998：336.
刺猬的擁抱范文2
關鍵詞：針刺；骨骼肌細胞；膜電位；細胞內記錄
中圖分類號：G804.2
文獻標識碼：A
文章編號：1007—3612（2012）07—0045-04
針灸治療骨骼肌損傷具有療效明顯、療程短、安全、經濟等特點，近年來也得到了廣泛應用。針刺對骨骼肌的治療作用機制研究也取得了一定的進展。關于針刺作用機制的研究主要有兩種觀點：其一是神經一體液論，認為針刺的作用是通過激發某些神經遞質的釋放，使舒血管神經的活動增強，或者是通過降低運動神經元的活動，從而解除肌肉痙攣，緩解肌肉疼痛。其二是外周機制論，認為針刺可以通過某些不依賴于神經體液的途徑而直接影響損傷肌肉結構與功能的作用機制。研究證明，針刺促進延遲性肌肉結構變化的恢復作用與針刺后骨骼肌細胞膜內鈣離子，鉀離子濃度改變有關。
目前，用針刺治療骨骼肌損傷均采用金屬針，那么非金屬針是否也能取得與金屬針一樣的治療作用？
用金屬針治療是否存在著電場或磁場的作用？本研究采用微電極技術，首先對單個骨骼肌細胞進行細胞內記錄，觀察其膜電位在長時間電刺激后的變化；并選用不銹鋼針和竹針分別對骨骼肌細胞進行針刺處理，觀察金屬針刺與非金屬針刺對骨骼肌細胞膜電位變化的作用是否存在差異，從而探討針刺治療骨骼肌損傷是否與針的材質有關。
1 材料和方法
1.1 實驗動物 蟾蜍，體重40～50g，雄性，取其半腱肌分離出兩束肌細胞作為實驗標本。
1.2 標本制備 按常規方法破壞蟾蜍的腦和脊髓，剪除軀干上部及內臟，剝去下肢皮膚，置于任氏液內；用鋼針固定下肢，除去下肢大腿的縫匠肌，大收肌、大內直肌和小內直肌后，找到長腱肌肉一半腱肌。在盡量保持長腱情況下將半腱肌摘出，用針固定遠心端的脛骨基端側肌腱和近心端的坐骨側肌腱于硅膠墊上。于解剖顯微鏡下，用鐘表鑷子剝去結締組織及肌外衣，再剝掉表面幾層肌細胞，直至剩下左右兩束，每束約20個左右的肌細胞為止。將剩下的兩束完整的、兩邊均附著在肌腱上的肌細胞束用針在肌腱處重新固定好，放置半小時后進行實驗。
1.3 細胞內記錄 實驗隨機選取其中一束肌細胞為對照肌，另一束為實驗肌。采用細胞內微電極技術，記錄骨骼肌細胞膜電位。微電極的尖端直徑小于0.5μm，充灌3mmol/L氯化鉀溶液，電極電阻10～15MΩ。主要儀器：MEZ-8201直流放大器；VC-10記憶示波器；SEN-7301電子刺激器（以上均為日本光電公司產品）；XC-603型微電極推進器、垂直式微電極拉制器和二道生理記錄儀（國產）。電刺激參數：刺激強度2～4V，波寬50ms，時間45min，頻率2Hz。實驗組在刺激停止后即刻，采用微電極推進器將不銹鋼針或竹針沿肌束方向斜推進入骨骼肌細胞束內進行針刺。兩種針的直徑相近，約為0.5mm。實驗在室溫（24℃）條件下進行。需要明確的是斜刺并非將針刺人肌纖維單個細胞內，因為兩種針的直徑遠大于肌細胞。實驗觀察的是（有或無）斜刺的同一條肌束中，肌纖維的靜息電位的變化；針刺前后記錄的肌纖維也并非相同的纖維。但是由于實驗中的其他條件（同一塊肌肉、浴液溫度、酸堿及離子環境等）控制都一樣，各組靜息電位的變化是源于處理方式（有無針刺及使用的是竹針還是不銹鋼針）的不同。
1.4 統計學分析 采用SPSS11.0統計軟件進行數據統計分析。為了統計方便，去掉膜電位的負號，以絕對值表示，單位：mV（毫伏）。其絕對值變小即表示細胞的膜電位降低，向去極化方向發展。其絕對值變大即表示細胞的膜電位增高，向復極化方向發展。各組數據均以Mean±SD表示。
2 結果
2.1 骨骼肌細胞膜電位隨時間的變化 實驗開始后，隨機選取兩肌束中肌細胞進行靜息膜電位記錄，觀察記錄開始、靜置任氏液內1h和2h后膜電位的變化?？梢姡?h之內，膜電位沒有顯著變化（圖1）。
2.2 金屬針和非金屬針針刺對骨骼肌細胞膜電位的影響
2.2.1 長時間電刺激對骨骼肌細胞膜電位的影響實驗肌和對照肌在電刺激45min后，于無針刺處理、單純休息10min的情況下，對比兩束肌細胞實驗前后膜電位的變化及幅值，見表1和圖2。
2.2.2 不銹鋼針和竹針針刺對長時間電刺激誘發的骨骼肌細胞膜電位變化的影響 在電刺激45min后，對實驗肌即刻進行不銹鋼針或竹針刺處理，對照肌無針刺處理，單純休息10min的情況下，對比肌細胞膜電位的變化及幅值，見表1和圖2。
3 分析與討論
針刺療法是我國傳統醫學臨床治病的主要手段之一。在治療肌肉疾患和促進肌肉功能恢復方面，針刺療法占有重要的地位。從進針的角度看，目前在治療肌肉疾患時所使用的針刺方法主要有直刺和斜刺兩類（直刺時針與皮膚約呈直角，斜刺時針與皮膚間有一定的傾斜角）?，F有資料表明，兩種針刺方法均有較好的臨床療效，也有人已注意到在治療某些肌肉疾患時，斜刺比直刺效果更為顯著。斜刺阿是穴對肌肉損傷治療作用的臨床和實驗研究發現，往往在針刺后數秒到幾分鐘內就會出現條索軟化、疼痛消失、功能恢復的明顯療效。電鏡下觀察，針刺可使損傷肌肉超微結構的紊亂恢復正常，同時使肌肉收縮蛋白的免疫標記密度和相應的收縮結構改變得到改善。有文獻報道，大負荷斜蹲后骨骼肌細胞出現z線扭曲、肌原纖維等改變；而直刺和斜刺均可減少這些變化，在對Z線扭曲的作用上斜刺優于直刺。本實驗根據臨床及實驗研究，選用斜刺方式。
有關針刺對運動性損傷肌的促恢復作用在人體及動物實驗中均得到證實。除電鏡對骨骼肌超微結構的觀察外，屈竹青等對針刺前后細胞內鈣、鎂、鈉、鉀等離子的分析及細胞膜、肌漿網膜ATP酶活性的測定也發現，針刺的作用是通過細胞膜Na-Ca交換，促使細胞內增多的Ca2+外排而完成的。針刺的作用機制目前認為可能是通過加強收縮蛋白的組裝、合成，使損傷肌肉的結構與機能恢復正常，同時使疼痛緩解。盡管對于針刺作用機理的研究很多，但是關于針刺對細胞電學特性方面影響的研究十分匱乏。本研究即采用電生理學的微電極技術，于蟾蜍骨骼肌細胞上證實了長時間電刺激可以誘發其細胞膜電位向去極化方向發展，斜刺具有促進長時間電刺激后骨骼肌細胞膜電位恢復的效應。而且不論是金屬針（不銹鋼針）還是非金屬針（竹針）均有此效應，二者的作用元顯著性差異，提示針刺治療骨骼肌損傷的作用效果并非源于金屬針的電場或磁場作用。
本研究所采用的實驗標本是從一塊骨骼肌上分離出的兩束肌細胞。首先我們觀察了在無電刺激、無針刺的條件下，于任氏液內單純放置1～2h，骨骼肌細胞膜電位的變化。如圖1所示，肌細胞膜電位并無明顯變化。說明我們后續實驗中將整個時程控制在兩小時內，來觀察長時間電刺激引起的骨骼肌細胞膜電位的變化，以及針刺對長時間電刺激后骨骼肌細胞膜電位變化的影響作用是可行的。
我們的實驗發現，長時間電刺激后，骨骼肌細胞膜電位降低，向去極化方向發展，如表2所示。這一研究結果與國外一些學者的研究結果是一致的。例如，Sigward使用大白鼠的比目魚肌和趾伸肌，利用電刺激的方式誘發肌肉標本運動至疲勞，并采用微電極技術直接觀察了對照組和電刺激組的膜電位變化，發現電刺激肌肉收縮至疲勞可使肌細胞膜電位降低，即使膜電位向去極化的方向發展。關于長時間電刺激后，引起的骨骼肌細胞膜電位降低，向去極化方向發展的機制仍在探索中。Sigaard的研究發現，長時間電刺激后引起的骨骼肌細胞膜電位降低的同時，肌細胞內鉀離子濃度也降低，因此他認為二者之間存在聯系。我國學者也發現長時間電刺激后骨骼肌細胞膜內離子濃度及酶活性均發生變化。因此，我們實驗中所發現的長時間電刺激后骨骼肌細胞膜電位向去極化方向發展，很可能也與肌細胞內離子濃度的變化有關，但仍需進一步探討。
本研究發現，經過45min電刺激后，給予其中一束肌細胞針刺處理，另一束肌細胞元針刺處理的實驗條件下，兩束肌細胞的膜電位變化幅度之間出現顯著性差異。進行不銹鋼針針刺處理的肌細胞膜電位變化幅度是（12.83±2.74）mV，而無針刺處理的肌細胞膜電位變化幅度卻是（28.05±2.88）mV。經檢驗，兩者之間存在顯著性差異。竹針針刺組的研究結果也發現，進行竹針針刺處理的肌細胞膜電位變化幅度是（14.14±4.04）mV，也與無針刺處理的肌細胞膜電位變化幅度之間存在顯著性差異。但是，不銹鋼針和竹針兩個處理組之間不存在顯著性差異。針刺后膜電位出現恢復，恢復程度在不銹鋼針針刺組和竹針針刺組分別達到85.18%和84.32%。這說明長時間電刺激后對骨骼肌細胞進行金屬針刺或進行非金屬針刺的處理，均有促進肌細胞膜電位恢復的作用，使骨骼肌細胞膜電位向復極化方向發展，但是效果無明顯差異。因此，我們可以推斷目前常用的金屬針刺對骨骼肌損傷的治療作用并非由于金屬針的電場或磁場作用引起。
刺猬的擁抱范文3
關鍵詞：單獨收費 衛生材料 申報 管理
一、實行醫院單獨收費的醫用特殊一次性衛生材料價格申報制度的背景
2004年10月11日，甘肅省物價局、衛生廳下發了《甘肅省醫療服務價格改革方案》（甘價費[2004]231號）。該方案以引入市場競爭機制為切入點，建立和完善適應社會主義市場經濟發展要求的醫療服務價格管理體制和價格形成機制。其目標是整頓醫療服務價格秩序，理順醫療服務價格關系，規范醫療服務價格行為，推動醫療衛生體制改革，建立合理的醫療機構補償機制，減輕群眾不合理的醫療費用負擔，促進醫療機構健康發展?；谶@一目標，省物價局、衛生廳在確定了醫療服務項目名稱、項目內涵、計價單位、說明、基準價的同時，確定了單獨收費的醫用特殊一次性衛生材料目錄。
二、單獨收費的醫用特殊一次性衛生材料價格申報范圍
根據《甘肅省醫療服務價格改革方案》（甘價費[2004]231號）文件規定，“單獨收費的醫用特殊一次性衛生材料是指用于對患者診療過程中必須使用而又事先無法確定其數量、規格、型號且價值較高的一次性衛生材料。其具體范圍是《甘肅省醫療服務價格改革方案》附件三《甘肅省省級醫療機構醫療服務價格》中“除外內容”所限定的范圍。”在臨床實踐中，單獨收費的醫用特殊一次性衛生材料可能達成百上千種之多，例編碼為3315的肌肉骨骼系統手術，其除外內容為內、外固定材料。一所三級醫院所經常使用的內、外固定材料的品種一般有幾十種，加上規格、型號和生產廠家的不同，其價格就有可能達到上千種。所以在申報時必須認真細致，物價管理人員還要和藥械科保持密切的聯系，在源頭上控制住單獨收費的醫用特殊一次性衛生材料價格申報工作。并嚴格區分單獨收費的醫用特殊一次性衛生材料和非單獨收費的醫用特殊一次性衛生材料，盡可能使申報工作做到不重不漏。
三、單獨收費的醫用特殊一次性衛生材料價格申報程序
（一）確定范圍
范圍的正確是做好申報工作的前提。申報內容要嚴格控制在《甘肅省醫療服務價格改革方案》附件三《甘肅省省級醫療機構醫療服務價格》中“除外內容”所限定的范圍之內。
（二）嚴格執行醫療用品招標制度
為確保衛生材料的質量、價格符合規定，必須嚴格執行醫療用品招標制度，杜絕偽劣產品進入醫院，保證醫療安全；增強價格透明，把解決群眾“看病難、看病貴”落到實處。
（三）整理、歸集齊全，按程序申報
先由物價管理員會同藥械部門相關人員整理、歸集需申報的單獨收費的醫用特殊一次性衛生材料的名稱、規格、型號、計價單位、單價、生產廠家等基本內容后，由物價管理員擬文造表，經主管院長簽發，報物價局、衛生局申請備案。物價局、衛生局批復同意備案后方可作為單獨收費的醫用特殊一次性衛生材料。
四、單獨收費的醫用特殊一次性衛生材料日常管理的難點和解決辦法
（一）隨著市場經濟環境和供求關系的變化導致的價格變化
根據甘價費[2004]299號文件精神，“以后當其價格變動時，醫療機構或商家（商）必須事先到同級價格、衛生行政主管部門進行申報登記。”但因其品種、規格型號繁多，價格波動較大，給申報工作帶來一定難度。這就要求對申報工作建立長效機制，物價管理人員在日常工作中要做到眼勤手勤，隨時掌握其價格變化，盡可能使申報工作做到不重不漏。
（二）隨著臨床診療水平發展和科技進步導致的品種變化
隨著臨床診療水平發展和科技的進步，越來越多的新技術、新產品將應用于臨床診療活動中，同時，必然會淘汰一些衛生材料，這就要求物價管理人員隨時掌握醫療市場行情和信息，科學評估醫院臨床診療水平和新技術、新業務的開拓能力，給藥械部門采購人員提供科學的預測數據，使醫院的經濟免遭損失。
（三）日常收費管理
醫療體制改革的指導思想是“用比較低廉的費用提供比較優質的服務”，切實解決群眾“看病難、看病貴”的問題，然而，當前的醫療補償機制不竟合理，政府投入又嚴重不足，醫療市場競爭日趨激烈，致使許多醫院自定標準、自立項目、重復收費現象屢禁不止，醫療體制改革成困擾國家的一大難題。本次醫療服務價格改革是醫療體制改革的一部分，其目的是根本解決這一難題。為保證醫療服務價格改革的順利進行，必須隨時檢查醫院的收費行為，尤其是臨床科室給患者記賬時，對單獨收費的一次性材料是否進行了單獨收費，或者對包含在項目內涵內的衛生材料是否又進行了單獨收費。
總之，單獨收費的醫用特殊一次性衛生材料價格申報是一個新的課題，是醫療服務價格改革的重要組成部分，是切實解決群眾“看病難、看病貴”的關鍵因素，只有認識深刻，操作規范，執行嚴格，才能保證醫療體制改革的順利進行，才能把解決群眾“看病難、看病貴”的目標落到實處。
參考文獻：
刺猬的擁抱范文4
他們有自己的秩序，有自己的文明。在他們的社會里，有一個傳統——每一只刺猬都必須經過“成熟的考驗”，是否合格，是由星球上年紀最大的一只老刺猬來認可的。
沒有通過考驗的刺猬，會被放逐到星球另一端的沙漠中去生活。
背背一出生，媽媽就告訴了他這個傳統，“通不過成熟的考驗，是不會有出息的?！眿寢屵@么說。
背背很好奇，它去問那只老刺猬，“老爺爺，什么叫成熟呀？”
老刺猬很老了，整個星球上，背背只看見老刺猬的刺是白色的，其他刺猬的刺都是黑色的。
除了背背，背背的刺是藍色的。
老刺猬瞇著眼睛，看著背背漂亮的藍色的刺說：“孩子，成熟這個東西是說不清楚的，只有自己成熟的那天，你才會懂?！?/p>
“那我什么時候才能通過成熟的考驗呢？”背背一知半解地問。
“嗯……孩子，當你的刺變成黑色的時候，再來找我，我會告訴你的?！?/p>
老刺猬似乎很疲倦，說完就閉上眼睛睡了。
背背不是很懂，但他很快就忘了這件事，開心地在樹林里玩起來。
二
背背長得很快，他的刺仍然是藍色的。
他偶爾也會看到別的小刺猬的刺不是黑色，但他們總是很快就變成了黑漆漆的。
背背有時候挺擔心的，但他只要一看到晴的天、白的云、綠色的樹林、跳躍的小鳥就會把一切煩惱忘個一干二凈，他喜歡自由，熱愛生命。
背背覺得每一天都是充滿希望的，什么事也不用擔心。
背背總是一個人跑到樹林里曬著陽光，一邊唱著好聽的歌，一邊在草地上打滾。
好快樂地過一整天。雖然每次他這樣開心地回家總會被媽媽罵，但背背還是偷偷地樂著，他不明白為什么媽媽總是不喜歡他做這些快樂的事，也不明白為什么每次媽合肥論壇我的最愛眼里都會有那么擔憂的眼神。
背背不管，背背覺得生命那么美好，怎么可以不快樂的過呢？
一天又一天，背背仍然是一只漂亮的藍色的刺猬?？鞓返男〈题?/p>
三
背背戀愛了。背背愛上了一只叫晶晶的小刺猬，晶晶很愛聽背背唱歌，每次背背坐在晶晶身邊唱起為她寫的歌，晶晶就會微笑著梳自己烏黑烏黑的刺，陪背背一起享受自由的空氣。
晶晶第一次對背背說我愛你的那一個晚上，背背興奮得一夜沒睡。
可是晶晶有時候很煩惱，因為她和背背都沒有通過成熟的考驗，她可不想到星球另一頭的沙漠里去生活，她很擔心。
可背背不，背背覺得只要能和晶晶在一起，無論在哪里都是幸福的。
晶晶為此會跟背背吵架，背背每次都很難過，因為他愛晶晶，他不想晶晶煩惱，可是他認為晶晶不該把成熟看得比他們的愛情還重要。
背背相信晶晶是真的愛他，所以他把一生一世都放到了這場愛情里。
四
背背和晶晶都是刺猬。他們的身上都長滿了會傷人的刺。
每一次他們緊緊擁抱的時候，都會刺傷對方。
可是背背和晶晶不怕，他們年輕，他們不怕痛，只怕失去愛情。
于是他們一次又一次緊緊擁抱，一次又一次給彼此留下傷口。
背背很心疼，背背不愿傷害晶晶。而且晶晶因為成熟的考驗，最近一直不開心。
背背決定為晶晶做一件事。因為背背愿意為晶晶做任何事。
在一個濃濃大霧的深夜，背背咬著牙，一根一根，把自己身上漂亮的藍刺，全都拔了下來。
好痛啊。但背背不哭。背背是一只勇敢的小刺猬。
第二天，背背就這樣裸露著身體光溜溜地去找晶晶。
晶晶看見背背在風里瑟縮的樣子，心疼地哭了好久。
背背卻笑著，因為他再也不會刺傷晶晶了。
他們又一次緊緊擁抱。
五
背背被刺傷了，傷得很重。因為他太用力地抱緊晶晶，可是他忘了晶晶身上濃密的刺。
背背被幸福之后跟隨而來的巨大痛苦驚呆了，但背背仍然緊緊擁著晶晶，因為晶晶還在流淚，因為背背寧愿被刺傷，也不愿看晶晶流淚，他不愿意放開晶晶，背背等這一天等了好久，只為等這一次不會傷到晶晶的擁抱。
背背只要晶晶幸福，背背心甘情愿地承受這痛楚。
可是晶晶流著淚，用力地，放開了手。
晶晶其實也很愛背背，但她再不愿意彼此傷害。
背背為了她去掉了所有會傷害到她的刺，背背對愛情的執著真的讓她好感動，但晶晶無法做到，晶晶從來也不曾想過要拔掉身上的刺，那該有多疼?。?/p>
晶晶覺得這段愛情太痛苦，晶晶流著淚，用力地，放開了手。
背背失去了他一生中最深愛的女孩。
六
在那一天夜里，背背默默地，找出他所有藍色的刺。
背背用黑色的漆，把刺全都涂成黑色，重新按到自己身上，黑色的刺刺破傷口，比拔下來的時候更痛。
背背按回一根刺，就回憶起一天和晶晶共同度過的日子，每回憶到一次快樂的往事，就流一滴淚，無聲地哭泣。
背背照著鏡子，已經認不出自己。他只覺得全身無力，他睡下、夢醒、哭泣，再睡、再夢、再醒、再哭泣…………
背背的淚，流了一整夜。全身都濕了，心也濕了。
終于，背背變成了一只黑色的刺猬。一只傷心的黑色刺猬。
七
背背又去找那只老刺猬。
路上，他聽說，晶晶已經通過了成熟的考驗。
背背見到了老刺猬，老刺猬看著背背烏黑的刺，對背背說：“你已經成熟了，孩子。你通過了成熟的考驗?！?/p>
每一只刺猬都來祝賀背背，背背知道晶晶不會來，可是背背仍然等了很久。
然后背背忍著心底的痛，向大家微笑，大家都很高興地看著背背偽裝的快樂。
“這孩子將來一定會有出息的?！泵恳恢怀墒斓拇题歼@么說。
刺猬的擁抱范文5
一條魚靜靜地游過來，游到了刺猬的心中，揉碎了水草里的夢。
“為什么你總是那么憂郁呢？”魚默默地問刺猬。
“我憂郁嗎？”刺猬輕輕地笑了。
魚溫柔地注視著刺猬，默默地撫摸著魚的憂傷，輕輕地說：“讓我來溫暖你的心?！?上帝啊，魚和刺猬相愛了！
上帝說，你見過魚和刺猬的愛情嗎？
刺猬說：“我要把身上的刺一根根拔掉，我不想在我們擁抱的時候刺痛你?！濒~說：“不要啊，我怎么忍心看你那一滴滴流淌下來的鮮血？那血是從我心上淌出來的?！贝题f：“因為我愛你！愛是不需要理由的。” 魚說：“可是，你拔掉了刺就不是你了。我只想要給你以快樂……” 刺猬說：“我寧愿為你一點點撕碎自己……” 刺猬在一點點拔自己身上的刺，每拔一下都是一陣揪心的疼，每一次的疼都在魚的心上。魚渴望和刺猬作一次深情的相擁，它一次次地騰越而起，每一次的縱身是為了每一次的夢想，每一次的夢想是每一次跌碎的痛苦。
魚對上帝說：“如何能讓我有一雙腳，我要走到愛人的身旁？” 上帝說：“孩子，請原諒我的無能為力，因為你本來就是沒有腳的。”
魚說：“難道我的愛錯了？” 上帝說：“愛永遠沒有錯?！?魚說：“要如何做才能給我的愛人以幸福？”
上帝說：“請轉身！” 魚毅然游走了，在遼闊的水域下，魚閃閃的鱗片漸漸消失在刺猬的眼睛里。
刺猬說：“上帝啊，魚有眼淚嗎？”上帝說：“魚的眼淚流在水里。”
刺猬的擁抱范文6
第一次在《仙劍奇俠傳3》中看到她，她飾演的角色是堂堂唐家大小姐唐雪見。在劇中，她刁蠻任性，我對她沒有太大的印象。后來，我又在《宮》中見到了她，我才知道她原來叫—楊冪。
楊冪在《宮》中演的角色叫晴川，她聰明機智活潑開朗，與八阿哥馮紹峰上演著穿越時空的戀情，讓我記憶猶新。后來，我慢慢的了解了她：她出生在北京，小時后十分頑皮父母便讓她參加了“小明星培訓班”。4歲時，她幸運的參加了《唐明皇》，在劇中她飾演咸宜公主。5歲的楊冪又在《武狀元蘇乞兒》中飾演蘇燦（周星馳飾演）的女兒。1992年，她與六小齡童合作主演的《猴娃》曾獲得第十四屆“飛天獎”少兒電視連續劇二等獎。15歲時，楊冪在同學的建議下把自己的照片寄給了《瑞麗》時尚雜志社，被編輯選中后做起了雜志模特。16歲，楊冪被李小婉簽入旗下的榮信達公司。2004年，18歲的楊冪接演《神雕俠侶》里的郭襄一角2005年，楊冪在央視大戲《王昭君》的選角中，擊敗范冰冰、李冰冰、高圓圓等國內一線演員，出演女主角王昭君。2008年7月7日，楊冪加盟新版《紅樓夢》劇組，飾演“晴雯”一角。仙劍奇俠傳三》劇組與新《紅樓夢》劇組再三商議后，最終成功“借”到了楊冪。在拍攝這兩部電視劇的同時楊冪還跨拍電視劇《暗香》。楊冪自己表示：《仙劍奇俠傳三》成為了她演藝心態上的一個轉折點。隨著《仙劍奇俠傳三》的熱播，楊冪的人氣再次高漲，博客點擊量以每分鐘兩百多次的速度激增，“蜜蜂”更是以每日上百的數量在不斷壯大。[43]2009年，楊冪又在《美人心計》中飾演了絕色殺手莫雪鳶，網友贊她為“最感人丫鬟”。2010年，楊冪又接拍了多部電視?。骸妒髌妗?、《洪武大案》、《京城四少》、《我們同是一家人》以及《宮》；同時還在電影《孤島驚魂》和《人魚帝國》中出演角色。2011年，穿越劇《宮》開播后一直穩居中國同時段收視率第一。楊冪還憑借《宮》入圍第17屆上海電視節“白玉蘭獎”最佳女演員；以及2011年被正式納入白玉蘭”頒獎環節的“最具人氣女演員”獎，并最終成為此獎項登臺領獎的第一人。
光輝的背后是無限努力。2011年是冪姐最忙的一年，這一年冪姐接拍了11部電視。被稱為新生代勞模，每天的檔期也排得滿滿的。每天的睡眠不足三個小時。記得在拍《北愛》的戲時，楊冪冒著寒風在零下十幾度的水里拍戲，第二天，在化妝室里化妝時，楊冪當場昏倒，被送往醫院，據說發燒到了41度。但她還堅持拍戲。
2012年，冪冪的首張專輯《親冪關系》終于出版了??！“蜂蜜”們都愛不釋手……
