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有核細胞計數范文1
【摘要】 目的 探討在胎盤和胎兒發生病理性變化時，母血中胎兒有核紅細胞(FNRBC)數量的變化，為母血中FNRBC計數在無創性產前診斷中的應用提供理論基礎和實驗依據。方法 對110例8～40孕周的婦女(60例正常妊娠，30例病理妊娠，20例胎兒異常)外周血進行單密度梯度離心，瑞氏染色和細胞計數，分析母血中FNRBC數量在病理妊娠和胎兒異常時的變化及其與孕周的關系。對有胎兒異?？赡艿牟±?，孕早期(8～12周)自然流產者行絨毛細胞核型分析，孕中期(13～24周)及晚期(25周以上)取流產兒和新生兒血進行染色體分析。結果 正常妊娠時，母血中FNRBC平均數量為(10.20±8.11)×103/L，病理妊娠和胎兒異常時母血中FNRBC平均數量為(23.09±12.42)×103/L和(38.93±14.87)×103/L，病理妊娠組和胎兒異常組與正常妊娠組相比差異有顯著性(F=25.927，q=4.236、10.674，P
【關鍵詞】 孕婦;胎兒有核紅細胞;產前診斷
[ABSTRACT] Objective To investigate the changes of the counting of fetal nucleated red blood cells (FNRBC) and their relationship with pathology of fetus and placenta， and provide rationale and experiment evidence for the application of FNRBC in noninvasive prenatal diagnosis. Methods This study consisted of 110 women with 8-40 weeks of pregnancy (60 with normal pregnancy， 30 with pathopregnancy， and 20 with fetal disorder). Counting of FNRBC in the maternal blood and its relationship with gestational weeks， pathological gestation and abnormal fetus were evaluated by single density centrifugation and Wrights staining. For suspected cases， in early pregnancy (8-12 weeks)， chorionicvilluscell karyotype analysis was done in those with spontaneous natural abortion; in the midtrimester (13-24 weeks) and the late pregnancy (over 25 weeks)， the abortus or newborn blood was collected for chromosome analysis. Results Of normal pregnacy， the average quantity of FNRBC in maternal blood was(10.20±8.11)×103/L; of pathopregnancy and abnormal fetus， it was (23.09±12.42)×103/L and (38.93±14.87)×103/L， respectively. The differences of FNRBC count between normal pregnacy and both pathopregnacy and abnormal fetus were significant (F=25.927;q=4.236，10.674;P
[KEY WORDS] Pregnant women; Fetus nucleated red cell; Prenatal diagnosis
利用母血中胎兒有核紅細胞(FNRBC)進行胎兒遺傳疾病的產前篩查是近年來新發展的一項非創傷性產前診斷技術，母血中FNRBC是目前最適合產前診斷的胎兒細胞，當胎盤解剖結構和功能的完整性破壞或母兒免疫異常時，其數量會發生異常。本文檢測了不同孕周母血中FNRBC數量的變化，探討病理妊娠時和胎兒畸形或(和)染色體異常時母血中FNRBC的變化情況，為母血中FNRBC計數輔助應用于產前預測病理妊娠和產前篩查胎兒畸形提供理論基礎和實驗依據。
1 對象和方法
1.1 研究對象
本院產科門診及住院孕婦110例，孕周8～40周，年齡28～40歲。包括正常妊娠60例;病理妊娠30例，其中子癇前期19例，胎兒宮內發育遲緩3例，妊娠期糖尿病5例，妊娠心臟病1例，習慣性流產2例;胎兒異常20例，其中死胎5例，神經管畸形6例，胃腸道畸形4例，肢體畸形3例，18/21三體2例。病理妊娠診斷按《婦產科學》(第6版)教材標準進行，胎兒異常診斷參照產前B超診斷及染色體檢查結果。排除貧血(HGb>100 g/L)及其他血液病。3組孕婦年齡和產次差異無顯著性(P>0.05)。見表1?！”? 各組孕婦年齡、孕周、產次比較
1.2 FNRBC檢測方法
所有病人均在創傷性檢查前采集外周靜脈血10 mL，置于EDTA抗凝管，室溫保存， 6 h內室溫下檢測。用密度為1.085、1.075 kg/L的Percoll細胞分離液在離心管中制成密度梯度，然后將外周血10 mL用生理鹽水等倍稀釋后，緩慢加入。室溫下以3 000 r/min離心30 min，分別收集上、中層分離界面細胞，以生理鹽水洗滌后，制成涂片，瑞氏染色。在光學顯微鏡下觀察FNRBC并計數。
1.3 胎盤絨毛細胞核型及胎血染色體分析
對有胎兒異常可能的病例，孕早期(8～12周)自然流產者行絨毛細胞核型分析，于孕中期(13～24周)及晚期(25周以上)取流產兒和新生兒血進行染色體分析。另取臍血1份、正常未育未孕婦女外周血標本2份分別作為陽性和陰性對照。
1.4 統計方法
應用SAS 10.0統計學軟件進行數據處理[1]，結果以±s表示，數據間比較采用方差分析，相關性檢驗采用Pearson相關分析。
2 結 果
2.1 正常妊娠、病理妊娠和胎兒異常時母血中的FNRBC計數比較
正常妊娠時，母血中FNRBC平均數量為(10.20±8.11)×103/L，病理妊娠和胎兒異常時母血中FNRBC平均數量分別為(23.09±12.42)×103/L和(38.93±14.87)×103/L，病理妊娠組、胎兒異常組與正常妊娠組相比較，差異均有顯著意義(F=25.927，q=4.236、10.674，P
2.2 各組孕婦不同孕期母血中FNRBC計數比較
在正常妊娠組，隨著妊娠時間的延長，母血中FNRBC檢出數逐漸增多，但各期之間比較差異均無顯著性(P>0.05)。病理妊娠組孕中期和孕早期相比FNRBC數量差異無顯著意義(F=17.325，q=2.112，P>0.05)，但與孕晚期比較差異有顯著性(q=9.827，P
2.3 母體外周血中FNRBC數量與孕周的關系
正常妊娠組和病理妊娠組的母血中FNRBC數量與孕周呈正相關(r=0.491、 0.500，P0.05)。
2.4 胎兒異常組胎盤絨毛細胞核型及胎血染色體異常與母體外周血中FNRBC數量的關系
子癇前期病人的胎盤絨毛切片中可見明顯的滋養細胞脫落現象，而此類病人母血中FNRBC數量則較正常妊娠時明顯升高。此外，光學顯微鏡下可見胎兒生長受限(FGR)病人胎盤絨毛滋養細胞數量減少，且細胞外基質沉積增多，說明其增殖活性明顯降低。正常核型胎兒母血中FNRBC的數量相對較少，大約每毫升有1～3個。在核型異常胎兒母血中FNRBC數量則明顯增多。胎兒異常時，母血中平均FNRBC的數量約為正常胎兒組的2～3倍，2例孕18/21三體胎兒病人達正常妊娠的6～9倍。
3 討 論
3.1 母血中FNRBC的進入方式及數量
正常成人外周血中不存在FNRBC，妊娠后由于母體與胎兒之間有母胎輸血，FNRBC有可能通過胎盤進入母體循環。胎盤在母體胎兒間作為機械屏障和免疫屏障起著重要作用。由于FNRBC需通過胎盤屏障進入母體循環，所以它在母體循環中的數量與胎盤解剖結構和功能的完整性密切相關。此外，胎兒本身產生紅細胞的多寡，以及母體全身免疫和對胎兒的局部免疫狀態，都是影響母體循環中FNRBC數量的重要因素。胎盤解剖結構遭破壞，通透性增高，胎兒細胞濾過增多;胎兒由于低氧等因素造成紅細胞生成增加，母體血循環中FNRBC的數量也可能升高;胎兒細胞表面抗原與母體差異大，不能被母體耐受，導致母體對胎兒細胞的破壞和清除增加，母血中FNRBC的數量則可能減少。本文結果也反映和驗證了這些理論。
胎兒細胞在母體循環中出現的時間有個體差異，文獻報道母體外周血中檢出FNRBC的時間不一，但大多在7～12周[2]。從理論上講，胎兒細胞進入母血的最早時間是妊娠5周末，此時胎兒胎盤循環建立。此后大量絨毛生長，使母兒循環間的物質交換面積大大增加，進入母血的胎兒細胞數量明顯增加。在本研究中，我們最早在孕8周母血中發現FNRBC，較上述文獻報道的時間略微提前，可能與本實驗僅用了單密度梯度離心法及瑞氏染色，操作步驟少，減少了細胞丟失，更多地保持了細胞形態的完整性有關。但我們在正常妊娠組仍有3例未發現FNRBC，占4.41%，分析可能與樣本個體差異以及實驗中的各種影響因素有關。
3.2 母血中FNRBC數量與胎兒、胎盤生理性變化的關系
有學者認為，母血中FNRBC數量在孕12～14周左右最多[3]，其后隨孕周增長而逐漸減少。也有報道提出，母血中FNRBC數量與孕周無關[4]。本實驗中，我們對正常妊娠組、病理妊娠組和異常胎兒組孕婦孕早期、孕中期、孕晚期母體外周血進行檢測，結果顯示，正常妊娠組和病理妊娠組的母血中FNRBC數量與孕周呈正相關，母體循環中胎兒細胞的比例隨孕齡而增加。我們推測，雖然隨著胎兒發育成熟，胎兒血液中FNRBC在全血細胞中所占比例逐漸降低，但同時胎兒的血容量逐漸增加，與母體交換加快;而且隨著胎盤體積增大，使母兒間循環物質交換面積大大增加;此外，胎盤血流量隨妊娠進展而逐漸增加，這些可能是母血中FNRBC數量隨孕周顯著增加的原因。異常胎兒組母血中FNRBC數量與孕周無明顯相關性，可能與胎兒、胎盤發育異常，或樣本數量較少有關。
3.3 母血中FNRBC數量與胎兒、胎盤病理性變化的關系
KADA等[5]研究顯示，在子癇前期時，母血中FNRBC數量較正常妊娠時增加。我們的實驗結果與其一致。子癇前期病人妊娠生理免疫抑制反應減弱，胎盤絨毛滋養細胞有脫落現象，從而增加了胎盤屏障的通透性，使胎兒細胞進入母體增多。同時，子癇前期時，由于胎母間免疫平衡失調所導致的一系列胎盤絨毛和胎盤床血管的病理改變，導致胎兒宮內缺血低氧。因而， FNRBC也可以認為是一個慢性低氧的指標。低氧時，胎兒對氧和血紅蛋白的需要增加，促紅細胞生成素增加，產生并釋放不成熟紅細胞，胎兒血液循環中的FNRBC增多。所以，子癇前期時，胎兒由于宮內缺血低氧產生FNRBC增多;胎盤通透性增高，FNRBC由胎盤漏出增加，導致母血中FNRBC數量上升。
此外，本文的研究結果也顯示，在FGR時母血中FNRBC數量明顯增加，在孕中期平均(45.04±16.02)×103/L，遠遠高于同期各組水平。這可能與胎兒生長受限時，伴隨的慢性低氧和血紅蛋白增高，引起胎兒紅細胞生成和分化增強有關。另外，本文研究顯示，FGR時胎盤存在嚴重的滋養細胞數量降低，細胞外基質沉積增多。這種異常胎盤也可在子癇前期時發現，可以導致母胎運輸增加和更多的FNRBC進入母血。
本文結果還顯示，FNRBC在正常核型胎兒母血中數量相對較少，大約每毫升有1～3個。在核型異常胎兒母血中FNRBC數量則明顯增多。胎兒異常時，母血中平均FNRBC的數量約為正常胎兒組的2～3倍，2例孕18/21三體胎兒病人達正常妊娠的6～9倍。這可能與異常胎兒時，胎兒胎盤免疫損傷重，導致胎母血液交換明顯增加有關。此外，也與畸形或三體胎兒本身可產生更多FNRBC且壽命更長有關。PCR定量分析結果表明，非整倍體胎兒母血中胎兒DNA含量明顯增加。也有報道顯示孕13三體胎兒的母血中FNRBC增加[6]，與我們的實驗結果一致。提示母血中FNRBC計數可以作為預測胎兒染色體異常的一個輔助指標。
綜上所述，病理妊娠和胎兒異常時孕婦母血中FNRBC數量會發生明顯改變，母血中FNRBC計數可輔助應用于胎兒異常的產前篩查。建議有條件的地方可在孕8周開始對孕婦外周血FNRBC進行檢測，如每毫升大于20個時應加強對病理妊娠和胎兒發育異常的相關檢查， 做到及早預防。
【參考文獻】
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有核細胞計數范文2
關鍵詞 樹突狀細胞 流式細胞術 混合淋巴細胞反應
AbstractObjective:To induce and culture purity dendritic cells（DCs） of different maturation phase from human peripheral blood monocytes in vitro.Methods:The peripheral blood mononuclear cells were isolated from human peripheral blood with density gradient centrifugation.The first step was to work on a 7-day culture of monocytes in medium supplement with 100ng/ml rhGM-CSF and 5ng/ml rhIL-4,and the cells were actually immature.In the second step,the cells were cultured in the medium supplement with GM-CSF and TNF-α,and cultured until the 14th day.Mature DCs were obtained.Cells harvested were identified for their morphology by microscope,properties of DCs detected by FCM,function with MLR method.Results:Immature dendritic cells expressed CD1a molecules and costimulating molecules in middle level,HLA-DR in high level.In maturation phase DCs expressed costimulating molecules,HLA-DR molecules,CD83,and CD11c highly.These DCs could stimulate proliferation of allogenic T lymphocytes.Conclusion:The method to obtain DCs of different maturation phases from human peripheral blood monocytes is successfully set up.A number of DCs with high purity are obtained.
KeyWordsdendritic cells;flow cytometry;mixed lymphocyte reaction（MLR）
樹突狀細胞（dendritic cells，DCs）是溝通天然免疫和獲得性免疫的橋梁，對于免疫反應的啟動、進展以及免疫耐受的誘導至關重要［1，2］。很多學者應用體外大量擴增DCs，然后用腫瘤抗原沖擊后回輸患者治療腫瘤，取得一定效果［3］。然而外周血中的含量也僅占單個核細胞總量的0.5%～1.0%，難以分離和純化。本研究采用細胞因子（GM-CSF、IL-4、TNF-α）聯合培養，在促成熟期不再加入IL-4的方法，獲得成熟DCs。
資料與方法
一般資料：外周血：健康男性成人獻血者，晨起空腹抽取肘靜脈血。
主要試劑：重組人白細胞介素4（rh IL-4，Peprotech公司）；重組人粒細胞-巨噬細胞集落刺激因子（GM-CSF，廈門特寶生物公司）；CD1α-FITC、CD80-FITC等單克隆抗體（BD公司）；DMSO（Sigma公司）。
方法：①DC的誘導培養：在離心管內加入體積比為1:1.5的淋巴細胞分離液和肝素化的新鮮稀釋血液，離心25分鐘，吸取界面層單個核細胞，用生理鹽水洗滌2次，棄上清獲得人外周血單個核細胞。將獲得的單個核細胞用含10%自體血清的RPMI1640完全培養基將所得細胞重懸，混勻，調整細胞濃度為（2～3）×106個/ml，以1ml/孔加入24孔培養板中。將培養板置入37℃、5%CO2培養箱中，孵育6小時后，吸棄培養上清，祛除非貼壁細胞，即可獲得貼壁的DC前體細胞。將獲得的貼壁細胞用每孔加入含rhGM-CSF（100ng/ml）和rhIL-4（5ng/ml）的RPMI1640完全培養基1ml，隔天半量換液，A組培養至7天收集細胞，B組培養至7天換培養液即含rhGM-CSF（100ng/ml）和TNF-α（10ng/ml）的RPMI1640完全培養基1ml，隔天半量換液，培養至14天收集成熟DC細胞。培養期間用倒置相差顯微鏡下動態觀察細胞形態變化和細胞生長趨勢。②DCs表面相關表型的檢測：將不同時期的DCs用PBS調至106/ml，加入離心管，每管20μl/106個細胞，加FITC標記的CD80、CD86、CD1a和PE標記的CD83、HLA-DR及APC標記的CD11c單抗，4℃冰箱避光孵育30～60分鐘，PBS洗滌，用600μl PBS重懸細胞待測。③混合淋巴細胞反應：效應細胞制備，取異體的健康人外周靜脈血，經上述方法獲得PBMC，貼壁法獲得非貼壁細胞，即為同種異體淋巴細胞。刺激細胞制備，培養7天和14天的DCs組，按刺激細胞:應答細胞（DCs:同種異體淋巴細胞）1:10、1:100及1:1000的比例加入96孔培養板，各100μl，每個樣品設3個復孔，混合培養4天后，1000r/分，離心5分鐘，棄去上清120μl，每孔加入5g/L的MTT 20μl，37℃、5% CO2條件下孵育4小時，1000r/分，離心5分鐘，棄去全部上清，每孔加入DMSO 100μl，微型振蕩10分鐘，酶標儀490nm處測各孔吸光度（A）值，結果以3個復孔的均值表示。
統計學方法：使用SPSS統計學軟件進行方差分析，以X±S表示。
結 果
DCs形態學觀察：PBMC經2小時貼壁后，有部分細胞懸浮，多為B淋巴細胞和外周血DCs；當加入GM-CSF、IL-4過夜培養后，貼壁細胞數量較少，體積小；誘導2天，貼壁細胞伸展，呈高度多形性；培養5天，細胞形態不規則，粗細不等的毛刺多而密，呈現典型的DCs形態；第7天時正常組DC表面突起更加明顯；當加入TNF-α后，成簇現象明顯增多，并且大量突起交織；但隨著時間的延長，梭形細胞減少，個別細胞開始增大變圓，在培養14天，幾乎所有DCs均逐漸增大變圓，出現懸浮趨勢。對于在7天之后未加TNF-α的A組細胞未出現B組細胞的成熟現象。結果見圖1、2。
圖1 第7天
流式細胞術檢測細胞表面標志結果：按DCs常規培養7天后，再次檢測DCs的特異標記，達到成熟水平；誘導14天后，DCs的成熟標記的表達量均高于7天組的表達量（P＜0.05），而DCs的CD1a標記的表達量兩組比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。見表1。
混合淋巴細胞反應：7天組的DCs由于沒有完全成熟，促進T細胞增殖的作用不明顯，但經過促成熟因子TNF-α刺激后的DCs，達到完全成熟后，DCs明顯促進同種淋巴細胞增殖（P＜0.05），并且隨著DCs濃度的下降增殖效果減弱。見表2。
討 論
本實驗利用其外周血取材簡單方便的優點，從中獲得PBMC，在反復實驗的過程中發現單核細胞屬于貼壁細胞，然而在隔天換液的時候仍有較多的懸浮細胞，這些懸浮的細胞大多是B淋巴細胞，因此經長時間的貼壁培養加上在換液時將懸浮細胞祛除，便得到較多的純度較高的單個核細胞分化而來的DCs。經過GM-CSF、IL-4聯合誘導后，可以從每100ml外周血中獲得9×106個未成熟的樹突狀細胞。由于IL-4在誘導過程中主要抑制培養體系中中性粒細胞和巨噬細胞生長，并維持DCs的未成熟狀態。因此，在培養7天后本實驗就用GM-CSF和TNF-α聯合在誘導7天至其成熟，這樣既節省了培養成本，又能獲得成熟的DCs。
本實驗結果表明人外周血誘導獲得的DCs在形態學上完全符合不成熟、成熟的典型形態即樹突樣的突起以及后期變大變圓；表面分子的表達情況，在未成熟期時，DCs中度表達CD1a、CD80、CD86、CD83、CD11c、及HLA-DR；經過TNF-α誘導后，DCs成熟后，高表達CD80、CD86、CD83、HLA-DR及CD11c，對于樹突狀細胞表面表達的CD1a分子，在培養體系中加入TNF-α前后，期表達量變化不明顯，可與其他表面分子共同作為區分未成熟DCs與成熟DCs表面標志物；通過混合淋巴細胞反應進一步驗證了未成熟DCs只有較弱的激活T細胞的能力，經TNF-α誘導后變為成熟DCs就具有了強大的激活初始型T細胞的能力。
DCs的來源成為很多研究的瓶頸，本實驗從簡單方便的外周血中用細胞因子誘導出大量功能性的成熟DCs，為研究DCs的作用以及臨床應用奠定了基礎。
圖2 第14天
參考文獻
1 Casas R,Skarsvik S,Lindstr？m A,et al.Impaired maturation of monocyte-derived dendritic cells from birch allergic individuals in association with birch-specific immune responses［J］.Scand J Immunol,2007,66（5）:591-598.
有核細胞計數范文3
隨著我國油氣管道事業的蓬勃發展，油氣管道的腐蝕與防護問題越來越受到人們的重視。長輸天然氣管道主要采用的陰極保護措施為強制電流保護法，陰極保護日常的維護維修成本上升成為日常管道保護的重要課題。
本文詳細闡述了長輸天然氣管道陰極保護常見問題分析和處理。
主題詞：腐蝕陰極保護問題分析處理
中圖分類號：U473文獻標識碼： A
1.陰極保護原理簡介
外部電源通過埋地的輔助陽極、將保護電流引入地下，通過土壤提供給被保護金屬，被保護金屬在大地中仍為陰極，其表面只發生還原反應，不會再發生金屬離子化的氧化反應，腐蝕受到抑制。而輔助陽極表面則發生丟電子氧化反應。因此，輔助陽極本身存在消耗。
強制電流陰極保護驅動電壓高，輸出電流大，有效保護范圍廣，適用于被保護面積大的長距離、大口徑管道。也是目前新投用油氣管線所采用的陰極保護方式。
2.陰極保護站設備及常見問題處理
2.1恒電位儀常見故障排除
序號 故障現場 原因 處理方法
1 開機無輸出，指示燈不亮，數字面板表不顯示。 ⑴電源開路
⑵輸入保險管斷或穩壓電源變壓器保險管斷。 ⑴查輸入電源并重新接好。
⑵更換保險管。
2 輸出電流、輸出電壓突然變小，儀器本身“自檢”正常。 參比失效或參比井土壤干燥或零位接陰線斷。 更換參比、重埋參比或接好零位接陰線。
3 輸出電流突然增大，恒電位儀正常。 ⑴水或土壤潮氣使陽極電阻降低。
⑵與未保護管線接觸
⑶絕緣法蘭兩邊管道搭接。 ⑴可以暫時不改變裝置，夏季季電阻會回升。
⑵對未保護管線采取措施
⑶對絕緣法蘭處不正常搭接進行處理。
4 無電壓、電流輸出，“保護電位”比“控制電位”高，聲光報警20S后切換到恒電流工作?！白詸z”正常。 ⑴參比電極斷線。
⑵參比電極損壞。
⑶預控值電位比自然電位低或太接近自然電位。 ⑴更換參比。
⑵更換參比。
⑶適當抬高預控值電位―在機后串接一個電阻
5 輸出電壓變大，輸出電流變小，恒電位儀正常。 ⑴陽極損耗。
⑵陽極床土壤干燥或發生“氣阻”。 ⑴更換陽極
⑵夏季定期對陽極床注水。
6 有輸出電壓，無輸出電流，聲光報警20S后轉入恒電流狀態，恒電流也無法工作，儀器“自檢”正常。 一般是現場陽極電纜開路, 不排除陰極線被人為破壞。 重新接線。
7 故障現象同上，但儀器“自檢”也不正常。 機內輸出保險管熔斷。 更換保險管。
8 儀器無法輸出額定電流，到某一電流值儀器報警，“控制”電位比“保護”電位高,20S后轉到恒流工作。 ⑴限流值太小。
⑵限流環節故障：反向放大器IC6、IC7壞。 ⑴調節比較板有關參數將限流值放寬
⑵更換IC6、IC7
9 輸出電流、輸出電壓最大，電位顯示“1”（滿載）報警20S后，轉入恒流。 現場和控制電位偏差超過5mv，比較器IC1壞或阻抗變換器IC9壞。 更換比較板上的IC1或IC9
2.2交流CBZ－3/B型陰極保護控制臺典型故障排查
現象：控制臺在工作擋工作時恒電位儀輸出變化劇烈，保護電位從0.9V到1.8V間斷變化，一段時間后，儀器自動切換到恒流工作狀態，持續一段時間后自動切換回恒電位狀態，恒電位儀輸出又劇烈變化，開另一臺機出現同樣現象。
排查：從控制臺后接線板上拆下遠控通斷“＋”、“－”兩線，用萬用表測量無遠控信號。恒電位儀開“自檢”正常，短接控制臺場效應開關管V8，恒電位儀可在自動擋正常工作。
判斷：控制臺出現故障。
檢修：經查時間控制板D5外控隔離模塊和D1晶振4060同時損壞，更換這兩個模塊后故障消除。
2.3輔助陽極常見問題及處理
按照規范要求陽極地床接地電阻應小于1歐姆，如果恒電位儀運行時輸出電壓與電流之比明顯加大，即輸出電壓很大，而輸出電流很小，說明輸出回路電阻加大了。如果陽極電纜與恒電位儀、陽極地床間接觸良好，說明陽極地床接地電阻較高，可在地床附近澆水降阻，驗證，不合格應從新埋設。
2.4參比電極常見問題及處理
如果發現通過長效參比電極所測的電位與便攜式參比電極所測的電位有很大偏差或恒電位儀的“保護電位”比“控制電位”高，說明長效參比電極內CUSO4溶液流空或參比電極接線斷路，應立即更換。應定期向參比電極井內注水，保證參比電極與土壤接觸良好。
2.5 RTU閥室、場站內陰極保護設備及常見問題處理
2.5.1電位傳送器典型故障維護介紹
（1）遠傳顯示的管道電位與實際值E有較大偏差或無顯示。
首先用數字電壓表接在“管地電位輸入”接線端子兩端，測得的管道電位的實際值為E，然后用電流表串接“電位信號輸出”接線端上測得的電流值經換算后與電壓值E相等，說明電位傳送器工作正常，問題出在電位傳送器與RTU間的接線、RTU、通信及接受器上，請相關人員檢修。
若用數字電壓表接在“管地電位輸入”接線端子兩端，測得電壓值為E，然后把管地電位輸入的（+、-）從接線端子上拆下，測量兩端電壓為E1（E遠小于E1）。要檢查電位傳送器內接地端的壓敏電阻、放電管是否短路，造成陰保電流在進入電位傳送器后從接地端流失，如果是要立即更換（100＃閥室的例子）。此現象多發生在雷雨過后，雷雨后要及時對電位傳送器進行檢修維護。
（2）遠傳顯示的管道電位值抖動
若抖動幅度較小、頻率較快，多是由于并在“電位信號輸出”接線端上300µ濾波電容損壞造成的，應及時更換。
若振幅較大（達幾百毫伏），多是由于該處管道受到雜散電流干擾，造成管道電位波動。如果雜散電流影響到陰極保護效果，應及時組織排流。
2.5.2避雷器常見問題及處理
從遠傳顯示得知或在測試時發現參比對管道電位明顯變化，未達到保護值，而參比對接地極的電位接近參比對管道電位，當拆下避雷器，用萬用表電阻蜂鳴檔測避雷器兩端的電阻，若蜂鳴器鳴響、避雷器電阻接近零，說明避雷器已經短路，要立即更換。
2.5.3接地電池
保護器也可采用接地電池，它是由平行靠近的一對犧牲陽極棒組成，中間用絕緣墊塊隔開周圍用介質充填，用兩根與絕緣接頭兩端的管道分別連接的VV-0.6/11×16mm2電纜，通過測試樁短接片與雙根陽極棒的引出電纜分別相連。
如西氣東輸管道采用的接地電池是鋅陽極材料的，這種陽極材料的開路電位為-1.05V，相對于鋼鐵的有效電位差小，只有0.2～0.25V，鋅陽極的消耗率為11kg/A.n。
根據這種接地電池的特點，若發現接地電池測試樁處的保護端電位較平常明顯降低，非保護端電位卻升高。而當拆開接地電池與管道的連接片后測量，如果管道保護端的電位恢復到正常保護值，接地電池的電位降為―0.9V以下，非保護端電位為自然電位，說明接地電池失效，應立即更換；若接地電池電位為-1.05V,保護端和非保護端的電位值正常，可能是接地電池短路，應立即維護。
4.總結
由于長輸天然氣管道陰極保護系統點多、線長，給陰極保護效果判斷、故障分析處理帶來困難，故掌握科學分析、判別的方法是必要的。這樣會大大縮短故障判別和處理時間，還會節約大量費用。近幾年新投用的極保護系統自動化程度較高，要按照規定的要求對陰極保護系統進行檢查、維護；要仔細排查故障隱患，及時整改；尤其是雷雨過后要及時檢查、維護，確保陰極保護率達到100％，提高管道的防腐效果，延長管道使用壽命，進一步保障石油天然氣管道輸配系統的安全平穩運行。
參考文獻
[1]俞蓉蓉，蔡志章。地下金屬管道的腐蝕與防護[M]。北京：石油工業出版社，1998:51-53。
有核細胞計數范文4
【摘要】目的探討急性早幼粒細胞性白血病并發中樞神經系統白血病。方法回顧2005年1月至2011年1月收治的急性早幼粒細胞性白血病并發中樞神經系統白血病患者34例進行研究總結。護理重點，注意鞘內化療的術前，中，后的護理，加強化療的護理，加強病情觀察，并配合醫生積極對癥處理和精心護理，提高患者生命質量。結果34例急性早幼粒細胞性白血病并發中樞神經系統白血病患者29例完全緩解，完全緩解率85.29%。結論急性早幼粒細胞性白血病并發中樞神經系統白血病發生在白血病的任何時期，鞘內注射化療是預防和治療急性早幼粒細胞性白血病并發中樞神經系統白血病的主要方法。
【關鍵詞】：中樞神經系統白血病鞘內化療護理
急性早幼粒細胞性白血病是由于白血病細胞直接播散或血液轉移進入中樞神經系統而引起的腦膜及腦實質白血病細胞局限性或廣泛性浸潤[1]。腦脊液中葉酸含量比血漿中高3倍，有利于白血病細胞的增殖，經過一段時間中樞神經系統的白血病細胞增殖到一定數量，便引起急性早幼粒細胞性白血病并發中樞神經系統白血病，而隨著，骨髓復發通常會接踵而至。由于血腦屏障的存在，大多數的抗白血病藥物不能通過血腦屏障，少數藥物雖能達到腦脊液，但藥物濃度過低，不足以殺滅白血病細胞，鞘內注射化療是預防和治療急性早幼粒細胞性白血病并發中樞神經系統白血病的主要方法[2]
1資料與方法
1.1一般資料本組病例來自2005年1月至2010年1月收治的急性早幼粒細胞性白血病并發中樞神經系統白血病患者34例。其中男20例，女14例；年齡14～49歲；治療前并發中樞神經系統浸潤8例，治療中發生9例，緩解后發生15例，復發APL并發中樞神經系統浸潤2例。
1.2診斷依據全部患者均有中樞神經系統癥狀和體征（尤其以顱內壓增高為主）；腦脊液壓力增高，>0.02kPa或>60滴/min；白細胞>0.01×109/L；涂片見到白血病細胞；蛋白>450mg/L或潘氏試驗陽性，排除其他原因造成的中樞神經系統或腦脊液的相似改變[3]
1.3臨床表現及輔助檢查頭痛、頭暈30例，視力障礙10例，言語不清6例，惡心、嘔吐19例，肢體無力麻木9例；頸項強直19例，克氏征、布氏征陽性15例，腦脊液檢查壓力增高24例，潘氏試驗陽性30例，白細胞增高30例，腦脊液涂片找到白血病細胞32例。
1.4治療本組病例均采用維甲酸60～100mg/d，分次口服誘導至緩解，以阿糖胞苷100～150mg/d鞏固強化方案治療。甲氨蝶呤10mg加地塞米松5mg，生理鹽水溶解后邊稀釋邊緩慢注射于鞘內，隔日1次，至腦脊液恢復正常，再鞏固3～5次，以后每次入院化療時注射1次，維持3年，部分MTX效果欠佳的患者聯合阿霉素-C50mg緩慢鞘內注射，有占位性體征加作放療。
1.5結果
34例急性早幼粒細胞性白血病并發中樞神經系統白血病患者29例完全緩解，完全緩解率85.29%，5例死亡，死于骨髓復發化療未緩解引起的出血、感染，死亡率14.70%。
2護理
2.1鞘內注射護理
2.1.1術前護理
2.1.1.1心理護理由于腦膜白血病多發生在疾病的緩解期，一旦發生，對病人及家屬均是沉重打擊，病人多有不同程度的悲觀，對治療產生疑慮，針對此情況，由護士向其做解釋工作，宣傳以往治療成功的病例，講明鞘內注射的必要性，消除其恐懼心理，樹立戰勝疾病的信心，配合治療.
2.1.1.2術前準備備好鞘內注射所需的物品，藥物，協助病人擺好，取去枕側臥位，后背與床沿齊平，屈頸抱膝，使脊柱盡量前屈，增加椎間的寬度，對個別因顱內高壓或全身化療出現頭痛，嘔吐病人，可用恩丹西酮等藥物防止嘔吐.
2.1.1.3術中護理
嚴格執行無菌操作規程，密切觀察生命體征的變化及有無心慌，肢體麻木等情況，記錄腦脊液的性質，量，協助醫師留取標本送檢，特別要注意多留取1mL腦脊液以檢查白血病細胞.
2.1.1.4術后護理
2.1.1.4.1觀察有無并發癥發生頭痛：由于腰椎穿刺術后腦脊液易從針孔外滲，使腦脊液壓力降低引起頭痛，因此，術后病人去枕平臥4～6h，不能耐受長時間臥床者，適當協助轉動身體1～2次，翻身時不能抬高頭部，對部分惡心，嘔吐者特別注意保持呼吸道通暢，本組病例中只有4例出現頭痛，口服藥物后疼痛緩解.發熱：白血病病人易發生感染；鞘內注射阿糖胞苷后部分病人有發熱，密切注意體溫的變化，每2～3h測量一次.本組病例中有6例鞘內注射阿糖胞苷后6～8h內體溫升高至38.0e左右，經口服藥物，飲水等處理，體溫逐漸降至正常，胃腸反應：21例出現不同程度惡心，嘔吐，食欲差，與應用化療藥物有關，遵醫囑給予恩丹西酮8mg靜脈推注，指導病人少食多餐，進食易消化清淡營養豐富的食物.
2.1.1.4.2滲血，滲液情況觀察穿刺后12h內注意局部有無滲血，滲液，保持紗布干燥，滲液較多者查明原因對癥處理，并告知病人24h內不宜淋浴.
2.1.1.4.3避免交叉感染病人長期化療，機體抵抗力降低容易引起感染因此，病室應保持空氣新鮮，按時開窗通風，每日紫外線消毒2次，每次30min，減少探視人員，注意口腔及肛周衛生，減少感染機會.
有核細胞計數范文5
【摘要】 目的 觀察瘢痕灸對腫瘤化療腸道黏膜損傷的治療作用及其對黏膜免疫中腸道集合淋巴結(PP結)及固有層中淋巴細胞(LPL)亞群的影響。方法 運用給小鼠原位接種C-26結腸癌并重復灌胃環磷酰胺，建立腫瘤化療腸道黏膜損傷的模型，瘢痕灸處理17 d，觀察瘢痕灸對瘤重、抑瘤率及PP結面積的影響，分離腸PP結內的淋巴細胞，用免疫熒光染色及流式細胞儀分析黏膜免疫各部位T淋巴細胞亞群的變化。結果 環磷酰胺組瘤重顯著降低，抑瘤率約為37.59%；環磷酰胺加灸組瘤重與環磷酰胺組比較無統計學意義。荷瘤及環磷酰胺都可顯著降低PP結面積，明顯增加PP結內CD3+和CD8+細胞百分比，降低LPL中CD4+細胞百分比。而瘢痕灸可明顯減輕環磷酰胺對PP結面積的影響(P＜0.01)。瘢痕灸還能使荷瘤和環磷酰胺作用下顯著減少LPL中的CD4+細胞百分比顯著增加(P＜0.05)，但對LPL中的CD8+細胞百分比及PP結中的CD3+、CD4+、CD8+T細胞亞群無明顯影響。結論 荷瘤及環磷酰胺可明顯抑制腸道黏膜免疫功能，而瘢痕灸能減輕荷瘤及環磷酰胺對PP結及LPL中某些T細胞亞群的影響，改善黏膜免疫抑制狀態。
【關鍵詞】 瘢痕灸；黏膜免疫；腫瘤；環磷酰胺；小鼠
Abstract：Objective To explore the effect of scarring-moxibustion on Peyer’s patch and T cells subsets of intraepithelial lymphocyte of tumor-bearing mice with cyclophosphamide. Method The mucosal immune deficiency model was made by in site inoculating C-26 colon carcinoma with repeated intragastric administration of cyclophosphamide. The mice were treated with scarring- moxibustion for seventeen days after inoculation. The area of Peyer’s patch were measured， and T cells subsets of Lamina propria lymphocyte (LPL) were separated and detected by immunofluorescence test and flow cytometer. Result Tumor weight of tumor-bearing group was higher than cyclophosphamide group significantly (P＜0.01). The tumor inhibition ratio of cyclophosphamide was 37.59%. The area of Peyer’s patch of intestine in tumor-bearing group decreased significantly. The amounts of CD4+ cell of LPL was decreased in the tumor-bearing group and cyclophosphamide group. Scarring-moxibustion could significantly increase the area of PP and the amounts of CD4+ cell of LPL (P＜0.01， P＜0.05)， while had no effect on CD8+ cell of LPL and T cells subsets in Peyer’s patch. Conclusion Scarring-moxibustion can improve the mucosal immune defective caused by tumor and cyclophosphamide.
Key words：scarring-moxibustion；mucosal immunology；tumor；cyclophosphamide；mice
黏膜損傷是癌癥常規治療(即標準劑量化療)中常見的毒副反應，臨床又稱黏膜炎。黏膜損傷不但會引起疼痛，嚴重影響患者的生活質量并降低治療效果，還是患者并發感染的重要危險因素。因此，近年來黏膜炎越來越受到人們的重視。權威機構發表的報告認為，黏膜炎不僅是放化療作用于上皮干細胞引
起的局限于黏膜上皮的毒性反應，更是黏膜下的其他細胞和細胞外基質都參加的一個復雜的過程[1]。目前，有關化療時小腸黏膜屏障功能的病理形態學研究已基本明確，但對于瘢痕灸治療荷瘤機體化療所致黏膜炎的黏膜免疫機制還未見報道。本研究以環磷酰胺多次灌胃的荷瘤小鼠為模型，研究瘢痕灸治療化療所致黏膜損傷的黏膜免疫機制。
1 實驗材料
雌性BALB/c小鼠，3周大，75只，中國醫學科學院實驗動物研究中心提供，清潔級，體重(16±2)g，許可證號：SCXK(京) 2000-0006。C-26結腸癌瘤株：中國醫學科學院藥物所韓銳研究員惠贈。FITC標記的抗小鼠CD3，PE標記的抗小鼠CD4， PE-cy5標記的抗小鼠CD8，eBioscience公司產品(購自晶美公司)。
2 實驗方法
2.1 分組
隨機分為4組：假手術組、荷瘤模型組、環磷酰胺組、環磷酰胺加灸組，每組15只。
2.2 腫瘤細胞接種
選取生長良好的C-26結腸癌瘤組織，按腫瘤(g)∶生理鹽水(mL)為1∶3比例勻漿，調整細胞數為5×107/mL。環磷酰胺組及環磷酰胺加灸組小鼠在麻醉狀態下打開腹腔，將20 μL C-26腫瘤細胞(共1×106)接種于盲腸漿膜下，縫合腹壁，造成荷瘤C-26結腸癌模型。假手術組在同樣條件下開腹，盲腸漿膜下注射20 μL生理鹽水。
2.3 給藥及施灸方法
假手術組從接種后至處死為止，每日0.9%氯化鈉溶液200 μL灌胃。環磷酰胺組及環磷酰胺加灸組從接種后第1－12日，給予0.9%氯化鈉溶液200 μL灌胃，第13－17日，每日給予環磷酰胺200 μL(總計量為5 μg)灌胃。在此基礎上環磷酰胺加灸組于造模接種次日開始在小鼠背部正中線下1/3處(相當于命門穴處)施治，施灸局部剃毛露出皮膚，使用艾絨制成半米粒大艾炷，放置于穴位相對部位，用線香點燃，每日1壯，連續施治17 d。
實驗過程中荷瘤模型組、環磷酰胺加灸組小鼠各有1只死亡，環磷酰胺組小鼠有2只死亡，均死于腫瘤及化療所致的惡液質。
2.4 檢測指標與方法
瘤重及抑瘤率的計算：打開腹腔，剝離腫瘤，稱重。
抑瘤率(%)＝(1－實驗組的平均瘤重/假手術組的平均瘤重)×100%
記錄腸道集合淋巴結(PP結)面積，制備PP結淋巴細胞懸液：取出全部小腸，用含5%NCS的D-Hank’s液沖洗腸腔。肉眼觀察PP結，記錄個數和面積，并剪下PP結。用機械力擠壓的方法得到PP結淋巴細胞懸液，并用300目的尼龍網濾過，去除殘留組織和雜質。
小腸黏膜固有層淋巴細胞(LPL)的分離：預熱的離心管中加入含有0.1%Ⅱ型膠原酶的1640培養液10 mL。將經過消化液消化振蕩后的小腸移入離心管中，放入恒溫箱中，于37 ℃孵育40 min。取出離心管充分振蕩，用300目的尼龍網過濾。濾液離心1 min(1 000 r/min)，去除上清，加入含5%NCS的1640培養液，調整體積至5.4 mL，再加入100%percoll至9 mL，充分混均后成為40%細胞percoll混懸液，用巴式毛細吸管在試管底部輕輕加入1 mL 70%percoll，使兩層液體間形成清晰的界面，制成percoll梯度分離液。600 g、25 ℃離心20 min。收集40%與70%percoll界面間的細胞，用含5%NCS的D-Hank’s培養液洗3次，即為LPL。
分別用FITC、PE、PE-cy5標記的抗小鼠CD4、CD8、CD3單抗對分離的PP結淋巴細胞及LPL進行免疫熒光染色(用量參照產品說明書)。用D-Hank’s將所分離的小腸黏膜淋巴細胞濃度調整為5×106個/mL，按1 μL/106個細胞量加入熒光抗體， 室溫下避光40 min，之后用生理鹽水洗一遍，上流式細胞儀進行檢測。收集4 000個細胞用于數據分析。
3 統計學方法
采用SPSS10.0統計軟件，獨立樣本t檢驗進行數據分析。4 結果(見表1～表4) 表1 各組小鼠瘤重及抑瘤率比較（略）注：與荷瘤模型組比較，P＜0.01(下同)表2 各組小鼠PP結面積比較（略）注：與假手術組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與環磷酰胺組相比，##P＜0.01(下同)表3 各組小鼠PP結中CD3+、CD4+及CD8+細胞檢測結果（略）表4 各組小鼠LPL中CD4+、CD8+ 細胞檢測結果（略）
5 討論
現代醫學研究發現，成人黏膜面積為400 m2，不僅有物理和化學的防護功能，同時也是一個復雜的免疫系統。黏膜免疫系統是由包括腸道、鼻、眼、泌尿生殖道和直腸黏膜及某些外分泌腺(如唾液腺、乳腺等)黏膜相關的淋巴組織共同構成的一個免疫體系。黏膜部位是機體免疫系統的第一道防線，而黏膜免疫系統也是機體中最大的免疫器官。
本實驗以環磷酰胺多次灌胃的荷瘤小鼠為模型，研究瘢痕灸治療化療所致黏膜損傷的黏膜免疫機制。首先我們觀察了各組小鼠的瘤重并計算了荷瘤模型組、環磷酰胺組及環磷酰胺加灸組的抑瘤率，結果表明，環磷酰胺對腫瘤有明顯的抑制作用，而瘢痕灸對未經化療及化療后的瘤重都無影響。各組小鼠腸道PP結面積的比較顯示，荷瘤小鼠受腫瘤影響，腸道PP結的面積明顯減少，且隨腫瘤的增大而減小。
環磷酰胺組腸道PP結的面積進一步減少，說明環磷酰胺進一步抑制了荷瘤小鼠本已受損的黏膜免疫功能。這與周氏[2]報道的環磷酰胺可誘導PP結數目減少的情況相一致。可見，環磷酰胺可導致腸黏膜免疫功能障礙，而這種功能障礙可能也在化療所致的黏膜損傷中扮演了重要角色。
臨床研究表明，針刺某些穴位不僅可以提高機體免疫反應，增強防病能力，而且能減輕放療、化療不良反應，延長患者生存期[3]。黃氏[4]曾觀察到化療后大鼠胃黏膜變薄，胃黏膜淺層上皮均有程度不同的剝脫現象。針刺足三里后針灸組動物腸黏膜上皮壞死較化療組減輕、表層黏膜剝脫及纖維組織增生率少于化療組，且病變程度也輕。說明針灸可有效減輕化療的毒性作用，保護胃腸黏膜。王氏也報道了針灸對化療引起的胃腸道毒副作用及黏膜炎有良好的治療作用[5]。本實驗結果也顯示環磷酰胺加灸組PP結面積明顯高于環磷酰胺組，能明顯改善LPL中因荷瘤及環磷酰胺化療導致的CD4+細胞百分比下降，恢復LPL中正常的CD4+細胞百分比。說明瘢痕灸可明顯改善環磷酰胺造成的黏膜局部免疫功能嚴重抑制，這可能是其調節黏膜免疫的作用機制之一。
參考文獻
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[3] 李忠仁.實驗針灸學[M].北京：中國中醫藥出版社，2003.195.
有核細胞計數范文6
[關鍵詞] 雙歧桿菌；黏附素；內毒素血癥；自由基；細胞間黏附分子
[中圖分類號] R644 [文獻標識碼] A [文章編號] 1673-7210（2016）06（b）-0012-04
全身炎性反應綜合征和多臟器功能障礙綜合征時，腸道既是啟動器官，也是最易受損的靶器官。內毒素是革蘭陰性菌細胞壁的主要成分之一，其主要化學成分為脂多糖（Liposaccharide，LPS）。當來自于腸道和感染部位的內毒素大量進入體內引起大量氧自由基生成，可導致腸黏膜損害，完整性受到破壞。黏附素是微生物表面的一類生物大分子，通常為蛋白質或糖蛋白，與微生物的黏附可能密切相關。目前對雙歧桿菌黏附素的研究尚較少，本實驗采用腹腔注射LPS法建立內毒素血癥大鼠模型，觀察雙歧桿菌分泌型黏附素對內毒素血癥大鼠腸道自由基和細胞間黏附分子（intercellular adhesion molecule，ICAM-1）濃度變化的影響，以評價其在內毒素血癥時對腸黏膜屏障損傷的保護作用。
1 對象與方法
1.1 主要試劑和材料
青春型雙歧桿菌株1027經API20A及TAB系統（英國）和多次生化鑒定確定。LPS（E.coli.O111∶B4 Sigma公司）；超氧化物歧化酶（Superoxide dismutase，SOD）、丙二醛（Methane dicarboxylic aldehyde，MDA）及髓過氧化物酶（Myeloperoxidase，MPO）檢測試劑盒均購自南京建成生物工程研究所；大鼠ICAM-1酶聯免疫吸附試驗（Enzyme-linked immuno sorbent assay，ELISA）試劑盒購自上海百蕊生物科技有限公司。
1.2 實驗方法
1.2.1 雙歧桿菌分泌型黏附素的提取、純化 將雙歧桿菌接種于硫乙醇酸鹽液體培養基，置入厭氧培養箱37℃培養48 h，離心收集培養上清液，經過飽和硫酸銨沉淀，Superdex 75柱凝膠過濾，Q-Sepharose FF離子交換層析后，收集第1峰的成分，相對分子質量為16 000[1]。凍干保存。
1.2.2 實驗動物和分組 4～6周齡健康SD大鼠72只，購于上海斯萊克實驗動物有限責任公司（實驗動物合格證號：0051443），清潔級，雌雄不限，體重220～300 g。采用簡單隨機抽樣法將實驗動物分為3組：模型組（24只）：腹腔注射LPS（5 mg/kg），造模前后正常喂養；雙歧桿菌黏附素預處理組（24只）：建模前7 d開始給予正常喂養加黏附素5 mg/（kg?d）灌胃，第8天腹腔注射LPS（5 mg/kg）后繼續黏附素5 mg/（kg?d）灌胃直至處死動物；對照組（24只）：腹腔注射生理鹽水（1 mL/kg），造模前后始終給予正常喂養。建模成功判斷標準：腹腔注射LPS后，除人為處死外，SD大鼠7 d內不因其他原因死亡。
1.2.3 標本的采集和處理 各組分別于腹腔注射LPS后6 h及1、4、7 d麻醉下腹腔切開，迅速取出小腸末端距回盲部5 cm的回腸組織，生理鹽水沖洗后，液氮保存備用。
1.2.4 SOD、MDA、MPO和ICAM-1的測定 回腸組織SOD活性采用黃嘌呤氧化酶法，硫代巴比妥酸法檢測MDA的含量，分光光度法測定MPO活性。應用ELISA法測定腸道ICAM-1的變化，具體操作嚴格按照試劑盒說明進行。
1.3 統計學方法
采用SPSS 17.0統計學軟件進行數據分析，計量資料數據用均數±標準差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，組間兩兩比較采用LSD-t檢驗，以P < 0.05為差異有統計學意義。
2 結果
模型組各時點回腸組織中SOD含量均明顯低于對照組，差異有統計學意義（P < 0.05），雙歧桿菌黏附素預處理組除注射LPS后6 h時點外，其余各時點回腸組織中SOD含量雖較對照組有所降低，但差異無統計學意義（P > 0.05）；而注射LPS后1、4、7 d后雙歧桿菌黏附素預處理組回腸組織中SOD含量均較模型組明顯升高，差異均有統計學意義（P < 0.05）。模型組各時點回腸組織中MDA、MPO含量均明顯高于對照組，差異有統計學意義（P < 0.05）；雙歧桿菌黏附素預處理組各時點回腸組織中MDA、MPO含量雖較對照組有所升高，但卻明顯低于模型組，差異有統計學意義（P < 0.05）。見表1。
腹腔注射LPS后，模型組各時點回腸組織中ICAM-1表達均明顯高于對照組，差異有統計學意義（P < 0.05），雙歧桿菌黏附素預處理組各時點回腸組織中ICAM-1表達雖較對照組有所升高，但卻明顯低于模型組，差異有統計學意義（P < 0.05）。見表1。
3 討論
腸道在多器官功能障礙的發生發展中起重要作用[2]，它不僅是阻止腸腔內細菌、毒素等有害物質侵入體內的重要屏障，也是調節機體應激反應、生成炎癥介質的重要器官。當發生內毒素血癥時，腸黏膜屏障受損，其機制可能與缺氧、炎癥介質釋放、氧自由基增多、細胞凋亡等有關[3-5]，此時可發生大量細菌、內毒素移位，從而導致多器官功能衰竭，甚至死亡[6]。
雙歧桿菌是一種人體腸道中最重要的生理菌，目前關于其在減輕內毒素血癥、調節脂質代謝、抑制氧化損傷、減輕腸道炎性反應、保護腸屏障功能等方面的作用特點已有較多報道[7-10]。但雙歧桿菌活菌制劑也存在一些不足之處，比如制造與保存活菌制劑的難度較大，由于局部氣體和生長底物的不足，活菌難以足量繁殖，且如果該菌穿過腸壁，還可能促進敗血癥的發生等[11-13]。無細胞制劑則可有效克服以上缺陷，因此，我們嘗試應用從雙歧桿菌培養上清液中純化出的一種分子量為16 kD的蛋白質[14]――雙歧桿菌分泌型黏附素，觀察其對腸黏膜屏障的保護作用，結果發現：雙歧桿菌分泌型黏附素可抑制內毒素對腸上皮細胞的損害作用，對缺血-再灌注后大鼠腸黏膜屏障也具有防護作用，能減輕腸缺血再灌注損傷[15-16]，但雙歧桿菌分泌型黏附素是否可抑制腸道氧自由基生成尚不清楚。本實驗采用腹腔注射LPS法建立內毒素血癥大鼠模型，觀察雙歧桿菌分泌型黏附素對內毒素血癥大鼠腸道自由基和ICAM-1的濃度變化的影響，評價雙歧桿菌分泌型黏附素對內毒素血癥時腸道損傷的保護作用。
當發生內毒素血癥時，氧自由基大量生成，與生物膜中的脂類物質發生作用，導致脂質過氧化反應，產生大量包括MDA在內的醛類產物，造成生物膜系統損傷和細胞內氧化磷酸化障礙，導致腸黏膜屏障損傷[17-19]。MDA可降低細胞膜流動性，使細胞通透性增加，可作用于細胞膜上的蛋白質分子，使之變性，促進炎性滲出和水腫，是腸組織的脂質過氧化物的代表性產物。MDA含量的高低可能在一定程度上反映了氧自由基對組織、細胞損傷的程度。MPO是一種主要存在于中性粒細胞中的酶，在單核細胞和巨噬細胞中也少量存在。MPO含量的多少可間接反映組織炎癥浸潤程度，可作為評價腸道炎癥嚴重程度的指標[20]。SOD是一種源于肌體的活性物質，能消除生物體在代謝過程中產生的有害物質，如清除氧自由基，抑制組織中的脂質過氧化反應，穩定細胞膜，維持細胞內氧自由基處于一種無害的低水平狀態。SOD的活力高低可反映機體清除自由基的能力。本研究發現：LPS模型組各時點腸組織MDA、MPO含量均顯著高于對照組，而SOD含量則均明顯低于對照組，說明內毒素血癥時氧自由基和脂質過氧化引起的氧化損傷可能是造成腸黏膜損傷中的機制之一；使用雙歧桿菌分泌型黏附素預處理后，各時點回腸組織中MDA、MPO含量明顯低于LPS模型組，SOD含量雖較對照組有所降低，但卻明顯高于LPS模型組，使機體清除氧自由基的能力增強，減輕了腸黏膜的病理損傷，從而達到保護機體腸道正常生理功能的目的。
ICAM-1是一類位于細胞膜表面的糖蛋白分子，是位于血管內皮細胞表面的一種重要黏附分子，體內分布廣泛，在炎癥和免疫反應中發揮重要作用。組織局部黏附分子表達上調是中性粒細胞黏附、激活的基礎，而中性粒細胞過度激活可導致組織損傷[21]。本實驗中，大鼠腹腔注射LPS后，腸道組織ICAM-1表達上調，使中性粒細胞聚集，釋放炎癥介質，加重腸組織損傷。雙歧桿菌分泌型黏附素預處理后，ICAM-1表達下調，說明雙歧桿菌分泌型黏附素可能通過抑制ICAM-1的生成或釋放，降低中性粒細胞聚集，減少炎癥介質的釋放，從而發揮對腸道的保護作用。
綜上所述，在大鼠內毒素血癥腸損傷模型中，大鼠腸組織MDA和MPO含量增加，SOD活性下降，使腸組織內氧自由基生成過多或清除能力下降，引起脂質過氧化反應，造成氧化損傷，可能是內毒素血癥腸損傷的發病機制之一。雙歧桿菌分泌型黏附素可通過提高SOD活性進而抑制脂質過氧化損傷，同時通過抑制ICAM-1介導的炎性反應在一定程度上維護了腸黏膜屏障功能的穩定。雙歧桿菌分泌型黏附素可能對防治腸源性感染發展為多器官功能衰竭，減少機體的繼發損傷起到一定的作用。
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