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白細胞介素范文1
【關鍵詞】三磷酸腺苷結合盒轉運體A1 IL-18 IL-12 膽固醇流出
中圖分類號：R34文獻標識碼：B文章編號：1005-0515（2011）10-009-03
Influence of IL-18 and IL-12 on Cholesterol efflux
JIANG Hailu1 LI Tong2
(1. Cardiovascular Institute of Nanhua UniversityHunan Hengyang 421001 ；2. Shenzhen Second People’s HospitalGuangdong Shenzhen 518036)
【Abstract】Objective IL-18 and IL-12, mainly produced by activated macrophages, are multifunctional cytokines which have been found to be excessively expressed in inflammatory atherosclerosis lesions.This study was to investigate the changes of cholesterol efflux, ATP-binding cassette transporter A1 (ABCA1) mRNA and protein expression in THP-1 macrophage derived foam cells after treated by IL-18, IL-12, or both, and to discover the combined effects and mechanisms of IL-18 and IL-12 on the down-regulation of ABCA1 in foam cells. Conclusions These findings suggest that combined treatment with IL-18 and IL-12 can down-regulate the expression of ABCA1 mRNA and protein, promote the accumulation of lipid and decrease cellular cholesterol efflux in THP-1 macrophage derived foam cells.
【Keywords】ATP-binding cassette transporter A1 IL-18R IL-12 Nucleus factor-κB Cholesterol efflux
白細胞介素18（IL-18）和白細胞介素12（IL-12）是具有多種生物學功能的炎癥因子，近來發現兩者在動脈粥樣硬化（As）斑塊中過量表達。大量流行病學調查證實，血清IL-18水平與心血管疾病的風險呈正相關，提示IL-18介導了人體As病變的發生發展[1-3]。IL-12是一種與IL-18具有類似功能的炎性細胞因子，在As斑塊中，IL- 12與IL-18共表達[4]。本研究觀察IL-18及IL- 12作用下ABCA1表達及膽固醇流出的變化，為明確炎癥與RCT的關系提供新的理論依據。
1 資料與方法
1.1 細胞培養
THP-1細胞生長于含10%新生小牛血清的RPMI-1640培養液中，于37℃、5% CO2培養箱中靜置培養。培養液中加10 mmol/L的HEPES、1.0×105μ/L的青霉素和100 mg/L的鏈霉素，取對數生長期細胞進行實驗。在每次實驗前用160 nmol/L的佛波酯誘導THP-1細胞24 h，使其貼壁并轉化為巨噬細胞。
1.2 膽固醇流出實驗
膽固醇流出檢測按本實驗室的常規方法進行，THP-1細胞用0.2μCi/ml[3H]膽固醇在含有10%小牛血清RPMI-1640培養液共同孵育待細胞長至85%時，用PBS液洗滌細胞，置含脂蛋白的無血清RPMI-1640培養液中培養24小時。PBS液洗滌細胞，閃爍液裂解細胞后，用閃爍計數法檢測培養液和細胞中的[3H]膽固醇。膽固醇流出率用培養液中CPM除以總CPM(培養液CPM+細胞CPM)，再乘以100%來表示。
1.3 高效液相色譜分析
待細胞處理結束后，棄培養基，PBS洗3遍，加入細胞裂解液200μl，反復凍融3次裂解細胞，BCA法定量蛋白后，7.2%三氯乙酸沉淀蛋白，800×g離心10min，取上清進行膽固醇檢測,以豆甾醇為內標。取100μl上清液，加入8.9mol/L氫氧化鉀溶液200μl，水解膽固醇酯后為細胞內總膽固醇檢測樣品。各樣品分別與內標液混勻，用正己烷和無水乙醇抽提后，1.5mol/L的三氧化鉻進行氧化衍生并真空干燥，100μl 乙晴-異丙醇（80:20）溶解樣品，上樣于高效液相色譜儀。采用C-18柱，柱溫4℃，流速1mL/min，250nm紫外光檢測，膽固醇以峰面積定量，內標校準，以mg/g細胞蛋白為單位。
1.4 細胞白的提取
棄去培養基，用冰浴PBS（含PMSF）洗滌細胞三次，用細胞刮子從培養瓶壁上刮落細胞后收集到離心管中，1000轉離心5分鐘，去上清液，加1ml冰浴PBS（含PMSF），洗滌沉淀，并將細胞移至Ep管，4℃ 14000轉離心5min，棄上清，加入400μl冰凍的緩沖液A（10mM Hepes,1.5mM Mgcl2,10mM Kcl,1mM DTT,0.5%Np-40,100μg/ml PMSF）將細胞重懸，用移液槍將勻漿吹吸15-20次，冰上靜置15min后。4℃ 14000轉離心20sec，沉淀用冰浴緩沖液A洗一次，用不含Np-40的緩沖液A洗一次，同上方法離心，沉淀重新懸浮在0.5倍體積的冰浴緩沖液C（20mM Hepes,1.5mM Mgcl2,420mM Nacl,1mM DTT,0.2mM EDTA,100μg/ml PMSF）中。樣品用旋渦振蕩儀，振蕩20分鐘，14000g離心20秒，上清含細胞核提取物，放置于新的Ep管，加入等體積的冰浴緩沖液D（20mM Hepes(pH7.9), 100mM Kcl, 20%甘油, 1mM DTT, 0.2mM EDTA, 100μg/ml PMSF），立即冰凍－80℃保存。使用時，樣本與SDS緩沖液一起煮沸后，-20℃ 保存備用。
1.5 統計學分析
實驗所得數據采用均數±標準差（x±s）表示。用SPSS 12.0進行統計處理，組間比較采用方差分析及t檢驗, 以P＜0.05判定差異的顯著性。
2 結果
2.1 IL-18對THP-1巨噬細胞源性泡沫細胞ABCA1表達的影響
THP-1巨噬細胞源性泡沫細胞經不同濃度（0，2，20，200 ng/ml）IL-18處理24h后，提取細胞總RNA和蛋白，通過實時熒光定量PCR和Western blot測定細胞內ABCA1基因和蛋白質表達的變化。結果顯示，用IL-18單獨處理細胞，ABCA1 mRNA和蛋白表達無顯著變化（圖1）。
圖1 不同濃度IL-18對ABCA1 mRNA表達的影響（n=3）
*P＞0.05 vs 0ng/ml組
2.2 IL-12對THP-1巨噬細胞源性泡沫細胞ABCA1表達的影響
THP-1巨噬細胞源性泡沫細胞經不同濃度（0，0.2，2，20 ng/ml）IL-12處理24h后，提取細胞總RNA和蛋白，通過實時熒光定量PCR和Western blot測定細胞內ABCA1基因和蛋白質表達的變化。結果顯示，用IL-12單獨處理細胞，ABCA1 mRNA和蛋白質表達無顯著變化（圖2）。
圖2 不同濃度IL-12對ABCA1 mRNA表達的影響（n=3）
*P＞0.05 vs 0ng/ml組
3 討論
近年來，越來越多的研究證明動脈粥樣硬化（As）具有慢性炎癥疾病的病理生理過程，在As斑塊中大量的炎性細胞浸潤和炎性因子的表達促進斑塊的發生、發展和破裂[5]。流行病學調查研究顯示，高密度脂蛋白（high density lipid，HDL）水平與As相關的心血管疾病的風險呈負相關，其主要抗As的機制與HDL促進膽固醇逆向轉運（RCT）有關[6]。RCT是將外周膽固醇轉運到肝臟進行代謝的過程，其中HDL的主要成分載脂蛋白A-I（apolipoprotein A-I，apoA1-I）通過ABCA1促進巨噬細胞內膽固醇流出是RCT的關鍵環節[7]。最近的研究顯示，炎癥反應抑制體內RCT，可能為炎癥促進As提供理論基礎。然而，炎癥影響RCT的具體機制還有待進一步闡明，其中炎癥狀態下脂質轉運體ABCA1的表達變化可能是其關鍵機制[8-9]。ABCA1的表達受到多因素多水平的調控。在轉錄水平，多種促炎細胞因子，如TNF-α[10]、IL-1β[11]、C反應蛋白（CRP）[12]和IFN-γ[13]等通過LXR下調ABCA1的表達，從而抑制膽固醇的流出。在轉錄后水平，促炎蛋白，如LPS[14]、EPA[15]、鈣蛋白酶[16]和鈣調蛋白[17]等通過下調ABCA1的穩定性促進其降解，這些研究提示炎癥狀態下ABCA1的表達受到多種因素調節。
IL-18和IL-12是在As斑塊中過量表達的炎癥細胞因子，兩者的水平與心血管疾病的風險呈正相關[18-20]。IL-18屬于IL-1超家族成員，目前認為其是內源性和獲得性免疫炎癥反應的重要調節子[21]。IL-12由IL-12p40、IL-12p35兩個亞基組成的，其中IL-12p35普遍表達于各類細胞，而IL-12p40主要表達于免疫細胞。在靜止狀態下，各種細胞中的IL-12p35是很微量的，在免疫反應時，IL-12p40可大量合成[22]。IL-12具有類似于IL-18的功能，對IL-18的生物學功能具有協同效應，兩者的協同作用對于誘導IFN-γ等炎癥因子的表達[23, 24] 、啟動Th1反應[25, 26]和樹突狀細胞（DC）成熟[27, 28]等具有重要作用。雖然IL-18最初的功能被認為與誘導IFN-γ有關，然而最近的研究顯示IL-18具有多種促As的功能。生理狀態下，IL-18及其受體主要在血管平滑肌細胞和內皮細胞表達，炎癥細胞表達IL-18R相對較少。但在As斑塊中IL-18及其受體過量表達，尤其在巨噬細胞中表達明顯。在血管平滑肌細胞、內皮細胞和巨噬細胞中，IL-18誘導IL-6、IL-8、ICAM-1和基質金屬蛋白酶（MMPs）的表達，而且，與IL-12共同作用后，IL-18能促進平滑肌細胞IFN-γ的表達，這些作用對于As的形成具有重要意義[29]
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白細胞介素范文2
【關鍵詞】白細胞介素12；乙型肝炎；抗病毒治療
【中圖分類號】R512.6【文獻標識碼】A【文章編號】1672-3783（2014）01-0353-01【前言】目前，全球乙型肝炎病毒慢性感染的人數超過了3.5億，35%-40%的慢性乙型肝炎終將轉化為肝硬化或肝癌。每年由乙肝病毒引起的死亡人數超過一百萬人。而中國是乙型病毒性肝炎的高發區，乙肝感染人數占全國人口的10%以上。由于HBV緩慢的病毒清除動力學和自發的基因變異性，慢性乙型肝炎的抗病毒治療在臨床上仍然是種挑戰。IL-l2 是由抗原提呈細胞所分泌的一種細胞因子，可促進Th1細胞發育，介導細胞毒活性和IFN-γ的產生，可抑制HBV復制，對慢性乙型肝炎患者有較明顯的抗HBV-DNA活性。近年來對乙肝的治療作用還包括做治療性疫苗佐劑，以IL-12作為佐劑的治療性疫苗，不僅能誘導機體產生特異性體液免疫反應，而且也誘導機體產生特異性持久的細胞免疫反應。本文擬就對IL-l2乙型肝炎的抗病毒治療（主要包括抑制病毒復制和做治療性疫苗佐劑兩個方面）以及乙型肝炎患者中IL-l2檢測的臨床意義的目前國內外研究的最新進展總結如下，并對用免疫調節劑治療慢性乙型肝炎提供新的思路。
1 IL-12的來源與本質
白細胞介素12（IL-12），最初稱作自然殺傷細胞刺激因子（NKSF）或細胞毒性淋巴細胞成熟因子（cLMF），是由巨噬細胞、B淋巴細胞等抗原遞呈細胞在免疫應答中產生的細胞因子。最早從EBV病毒轉染的人B淋巴母細胞系RPMI-8866和佛波酯刺激的人B淋巴母細胞系NC 37的上清液中純化和鑒定。IL-12是由分子量為35KD（P35）和40KD（P40）兩條多肽鏈經二硫鍵連接組成的異源二聚體分子。IL-12的P35和P40兩條多肽鏈分別是由兩種不同的基因編碼，單獨的P35和P40無生物活性，只有當兩個基因同時表達才產生有生物活性的IL-12[1]。IL-12 的生物學效應有促進Th1 細胞發育，抑制Th2 細胞發育，調節Th1/ Th2 細胞比例，誘導T 淋巴細胞和自然殺傷細胞分泌干擾素（ IFN-γ） ，增強細胞介導的免疫反應和自然殺傷細胞的溶解效應，促進特異性細胞毒性淋巴細胞（CTL） 增生，擴大CTL 的溶解反應。
2 IL-12對乙型肝炎的抗病毒作用
2.1 內源性IFN-γ的誘生
IFN-γ的產生細胞為CD4+CD8+T細胞，其次為NK細胞。IFN-γ不僅可增強NK細胞，CTL細胞的活性，而且可以誘導MHC-I和MHC-II分子的表達，擴大了免疫應答的識別階段，同時刺激IL-12的產生，從而增強宿主細胞的免疫反應。IL-12可促進Th1細胞發育，誘導T細胞和NK細胞分泌IFN-γ，增加CD8 T細胞的細胞毒活性，同時增強NK細胞的功能，促進細胞免疫功能[2]。 因而內源性IFN-γ的誘生在IL-12的抗HBV作用中具有有著重要地位和作用。熊仕秋等[3]研究顯示IL-12體外能增強慢性乙型肝炎患者的外周血單個核細胞產生IFN-γ，從而上調細胞免疫應答，以利于HBV從體內排除。IL-12的抗病毒作用主要是通過IFN-γ誘生實現的。鑒于IL-12的生物學功能及抗HBV作用機制，重組IL-12有望成為新的抗HBV藥物。陳瑜[4]聯合拉米夫定治療乙型肝炎，與單獨使用拉米夫定治療相比，拉米夫定與IL-12聯合治療的抗病毒活性更強。
2.2 TH1/TH2細胞平衡
TH1/TH2比例是影響機體持續感染和能否有效清除病毒的重要因素，如果Th1細胞占優勢，將促進細胞免疫，增強CD8+T細胞的活性，從而清除細胞內病毒，如果Th2細胞占優勢，將抑制細胞免疫，無法清除HBV病毒，而發生持續性的HBV感染。IL-12可激活NK細胞及細胞毒性T細胞，增強淋巴細胞的細胞毒作用。IL-12在T細胞中主要是作用于Th1細胞，它可增強Th1應答和抑制Th2應答，在調節Th1細胞分化上有重要作用.可誘導PBMC產生IFN-γ，促進細胞免疫反應[5]。欒廈[6]等認為，慢性HBV患者如應用IL-12治療，可使以Th2型體液免疫反應為主轉向Th1型細胞反應為主，恢復IFN-γ的產生，從而有利于HBV的清除。IL-12在 Th1細胞分化中具有決定作用，能特異性促進Th1細胞發育，誘導其產生IFN-γ、IFN-β等Th1型細胞因子，抑制Th2細胞活性[7]。這表明IL-12通過對內源性IFN-γ的誘生，促進TH1細胞亞群的發育，是IL-12抗HBV作用的重要機制之一。
3 IL-12與乙型肝炎疫苗
IL-12是誘生免疫應答的最佳細胞因子，啟動細胞介導的免疫反應。以IL-12作為佐劑的治療性疫苗，不僅能誘導機體產生特異性體液免疫反應，而且也誘導機體產生特異性持久的細胞免疫反應。王翠玲[8]等人研究顯示HBsAg僅能誘導慢性乙型肝炎患這PBMC產生非常低水平的免疫應答，表現為產生低水平的IFN-γ，而IL-12和HBsAg聯合刺激乙型肝炎患者PBMC，通過產生高水平IFN-γ激活乙型肝炎患者特異性細胞免疫， 若將IL-12和HBsAg聯合組成特異性治療型疫苗期待其能激活乙型肝炎患者特異性細胞免疫， 這對于與HBV感染的治療可能是非常有效的途徑。觀察編碼鼠IL-12的真核表達載體對HBVDNA疫苗誘導BaLb/c小鼠免疫應答的影響，IL-12的真核表達載體能夠提高小鼠對DNA疫苗的免疫應答[9]。趙平[10]等人的研究也表明了IL-12增強HBV融合抗原DNA疫苗在小鼠誘導的細胞免疫應答，這些研究證實DNA疫苗的細胞及體液免疫原性以及細胞因子對免疫應答的促進作用，為臨床預防及HBV感染提供了新思維。
4 IL-12在HBV感染者血清中檢測的臨床意義
研究證實，機體免疫功能紊亂，尤其是T淋巴細胞亞群與細胞因子的調節失調與慢性肝病的發生發密切相關[11]。對乙型病毒性肝炎患者血清IL-12含量進行了檢測，可以探討它們在乙型肝炎患者血清中的變化規律及其與肝功受損的關系，以便為臨床診療和預后提供依據。李素梅[12]探討了血清部分白介素水平與乙型肝炎病變的關系，發現血中白介素水平是判斷乙肝病毒感染者免疫狀態及進行治療的重要指標。用IL-12與IL-4比值作為患者Th1/Th2應答比值，可以得知慢性肝炎患者組出現了明顯的Th1/Th2失衡。Th1應答亢進而Th2應答受抑，導致機體無法有效清除HBV病毒，炎癥持續反應。HBV感染類型多樣，通過檢測HBV感染者血清IL-12水平，了解其在不同HBV感染中的可能存在的差異，可以探討其臨床意義。血清IL-12水平可以在一定程度上反應慢性HBV感染狀態下機體的細胞免疫狀態，與慢性乙肝病人肝臟炎癥活動有關，急性期血清IL-12低水平提示低水平IL-12可能與肝炎活動有一定的關系，將其列為HBV常規檢測有一定的意義[13]。此外，HBV在體內大量復制作用于單核細胞、巨噬細胞、樹突狀細胞在內的抗原遞呈細胞（APC）產生IL-12，IL-12具有多種生物學活性，IL-12能誘導新生CD4 T細胞分化為Th1細胞，PBMC IL-12水平與慢性乙肝病人肝臟炎癥活動有關[14]，血清IL- 12和IL-2水平可考慮作為無癥狀攜帶者抗病毒治療指征，慢性乙型肝炎活動與血清IL-12水平低下有關，血清IL-2水平升高與肝炎活動有關，其升高主要參與促進HbeAg/HBeAb血清轉換[15]。因此IL-12在HBV感染者血清中檢測具有重要的臨床意義。
5 展望
乙型肝炎病毒（HBV）感染是全球性的公共衛生問題。目前HBV感染尚無理想的治療措施，IL-12是抗原呈遞細胞（APC）產生的一種細胞因子，在免疫應答中有重要作用，可用于乙型肝炎的治療 ，在乙型型肝炎病毒感染的早期，IL-12通過對IFN-γ的早期誘導，抑制早期病毒復制與激活細胞毒性T淋巴細胞，阻止疾病近一步發展IL-12增強NK細胞和細胞毒性T淋巴細胞應答及引起IFN-γ產生的能力表明可能具有抗病毒活性因為IL-12對HBV感染表現出治療活性。IL-12在乙肝病毒轉基因小鼠的應用，證明了它增強機體細胞免疫功能或作為佐劑能增強乙肝DNA疫苗的預防和治療效，目前國外已將IL-12應用于慢性乙型肝炎病人I期II期臨床治療，取得了一定的療效[16]，提示IL-12及其細胞因子家族在抵御HBV感染中起著十分重要的作用.因此IL-12對于治療慢性乙型肝炎有潛在的應用價值。為臨床預防及治療HBV感染提供了有效手段。但是，要真正應用到臨床，還需進一步深入研究。
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白細胞介素范文3
IL21在發揮生物學活性過程中與IL2、 IL4、 IL7、 IL9和IL15等細胞因子受體共用γ鏈[1], 均屬于γc（共同γ鏈）依賴性細胞因子家族成員。近幾年的研究, 對IL21的生物學活性有了深入的認識, 它可以廣泛調節T細胞、 B細胞、 NK細胞和骨髓細胞的功能, 在自身免疫性疾病、 變態反應性疾病和抗腫瘤免疫中扮演重要角色, 因此具有潛在的臨床研究價值。本文中主要綜述了IL21對三大免疫細胞T、 B和NK細胞的生物學調節作用, 為理解其在疾病過程中扮演的角色以及為將來用于疾病的生物治療提供指導意義。
關鍵詞：白細胞介素 21 免疫調節 B細胞 NK細胞 T細胞
1 IL21及其受體
1.1 IL21 成熟人IL21的相對分子質量（Mr）是15000, 由131個氨基酸形成四螺旋束狀結構域, 與IL2、 IL4和IL15結構具有同源性。IL21基因與IL2和IL15基因位于相同的染色質區域, 定位于4q26q27區, 與IL2基因只相距約180 kb[2]。IL21主要來源于活化的CD4+T細胞[2]。Wurster等[3]觀察到, 起初在Th1或Th2極化條件下刺激的C57BL/6鼠T輔助細胞前體可微量表達IL21, 一旦分化為Th2細胞后可穩定表達IL21細胞因子且不受IL4和IFNγ的干擾, 但在Th1細胞中沒有看到IL21mRNA的轉錄, 因此他們認為IL21是Th2細胞因子的一種。Coquet 等[4]最近發現用antiCD3/CD28聯合CD1d限制性鞘糖脂抗原（α半乳糖苷神經酰胺）刺激的NKT細胞比通常的CD4+T細胞分泌更高的IL21, 表明NKT細胞可能是潛在分泌IL21的重要細胞, 通過分泌IL21介導對B、 T、 NK細胞和自身的免疫調節。這與IL21在免疫反應發生早期（固有免疫階段）就能發揮相應生物學調節效應的理論推斷相符合。
1.2 IL21R 早期Ozaki等[5]克隆了一種新的白細胞介素受體（NILR）, 發現它與IL2Rβ鏈高度相關, 與IL4Rα鏈基因相臨, 位于16號染色體。經ParrishNovak等后來鑒定為IL21R亞單位, 是一種新的Ⅰ型細胞因子受體, 并發現它包含4個保守的半胱氨酸殘基, 一段TrpSerXTrpSer基序, 一段IL2Rβ鏈高度保守的氨基酸序列。人IL21R是一個由獨有的IL21R亞單位（IL21Rα）和γc (common γchain) 組成的復合體[1]。其中IL21R亞單位為配體識別部位, γc為信號傳導單位。IL21R通常廣泛表達于T細胞、 B細胞、 NK細胞和一些骨髓細胞及角化細胞表面[1, 2]。同IL2、 IL4、 IL7、 IL9和IL15相似, IL21活化JAK家族蛋白酪氨酸激酶JAK1和JAK3, 其中JAK1結合IL21R亞單位, JAK3結合于共同γ鏈。與其他γc家族細胞因子不同的是, 這兩個激酶主要介導IL21依賴的STAT1和STAT3的活化, 而不是STAT5A和STAT5B的活化[1, 6, 7]。最近對IL21介導增殖的分子機制的研究表明, IL21R胞質區酪氨酸510（Y510）可以有效的介導STAT1和STAT3磷酸化, 從而介導完整的增殖效應, 但并不引起STAT5的磷酸化。STAT1/STAT3基因雙敲除鼠的CD8+T細胞對IL21+IL15刺激的增殖反應明顯減弱。研究還觀察到MAPK和PI3K通路被特異抑制因子阻斷后IL21介導的增殖即被阻斷, 表明至少有JAKSTAT、 MAPK和PI3K傳導途徑參與了IL21介導的信號傳導[8]。
2 IL21對B細胞的免疫調節
2.1 IL21對B細胞的增殖和凋亡的調節 B細胞的增殖和凋亡對維持體內B細胞的穩態至關重要, IL21在對B細胞的生長調節方面發揮了不可替代的作用。早期ParrishNovak 等發現IL21聯合 antiCD40 mAb可誘導人外周血B細胞的增殖[2], 但對antiCD40 mAb介導的C57BL/6鼠primary B無此作用[9]; 另一方面又抑制antiIgM和IL4誘導的人外周血B細胞[2]或鼠primary B細胞的增殖[9]。Hao等觀察到IL21對B淋巴細胞生物學效應存在多態性, 表現在IL21能分別誘導antiCD40活化的C57BC/6鼠B細胞凋亡和antiCD40活化的BALB/c鼠B細胞的增殖, 這因不同種系來源的B細胞而異; 其次IL21對不同活化狀態的B細胞介導不同的生物學活性。如對于LPS和CpG DNA通過TLRs4和TLRs9受體途徑活化的B細胞, IL21主要介導其凋亡和生長抑制作用; 經antiCD40或antiCD40+antiIgM共同刺激的B細胞, IL21可介導其增殖[10]。IL21雖然能促進antiCD40或antiIgM單獨活化的B細胞增殖但作用都很弱[10, 11], 甚至介導anti
白細胞介素范文4
【關鍵詞】 心房顫動；白細胞介素-18；炎癥
作者單位：730030 甘肅省蘭州大學第二醫院心內科
通訊作者：白鋒
心房顫動（atrial fibrillation， AF） 是臨床上最常見的心律失常之一， 但目前AF的確切發病機制仍不清楚。近來有越來越多的證據表明炎癥在房顫的發生和發展中起著重要的作用。白細胞介素-18（IL-18）是一種重要的促炎癥因子， 主要由巨噬細胞產生， 能誘導免疫細胞產生多種細胞因子， 如干擾素-γ（IFN-γ）、白細胞介素-12、粒-巨噬細胞集落刺激因子、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）等， 調節體內炎癥及免疫反應。與冠心病、心力衰竭等心血管疾病的發生密切相關。已有研究顯示超敏C反應蛋白（hs-CRP）、白細胞介素-6（IL-6）、TNF-α等炎性介質與AF有一定的相關性[1-3]， 但IL-18做為一種新型的炎癥因子與AF的關系， 目前鮮有報道。本文旨在觀察AF患者IL-18血清水平的變化， 探討炎癥與AF的關系。
1 資料與方法
1. 1 一般資料 2010年10月至2012年3月蘭州大學第二醫院心內科入選的陣發性AF患者36例， 持續性AF患者52例。（陣發性AF是指AF發作可自行停止且持續時間不超過7天；持續時間超過7天則為持續性AF，包括永久性AF。）另納入30例本院年齡、性別與AF組匹配的但無AF人群作為對照組（均需符合排除標準）。對所有研究象均詳細采集病史， 進行體格檢查、血常規、生化和12導聯心電圖檢查。排除標準：冠心病、瓣膜性心臟病、嚴重心功能不全（NYHA分級IV級）、其他心律失常、電解質紊亂、肝腎功能嚴重受損（ALT>正常3倍， 血肌酐>265 μmol/L）、有急/慢性感染性疾病、自身免疫性疾病、甲狀腺功能異常、惡性腫瘤、半年內有手術史、半年內有腦卒中史、正在服用糖皮質激素或非甾體類抗炎藥（阿司匹林除外）者。
1. 2 心臟彩超檢測 應用多普勒心臟超聲測定左房直徑（LAD）和左室射血分數（LVEF）。
1. 3 血樣采集與檢測 空腹12小時后早上6～7時從肘前靜脈抽取外周靜脈血。全血以4000 r/min離心20 min后取上清等量分裝后保存在-20℃冰箱， 一次性結凍測定。血清IL-18水平采用ELISA法檢測（試劑盒購自日本MBL公司）。血清hs-CRP測定采用免疫比濁法（試劑盒購自芬蘭Orion Diagnostica Oy公司）， 以上測定嚴格按說明書進行。應用JHF7-3000血常規檢測儀按實驗室標準檢測外周血白細胞（WBC）。
1. 4 統計學方法 采用SPSS17.0統計軟件對數據進行分析， 結果以x-±s 或者百分率表示。組間率的比較采用卡方檢驗；組間均數比較采用單因素方差分析或Welch檢驗；相關性采用pearson相關分析。以P
2 結果
2. 1 三組心臟超聲結果比較持續性AF組LAD較對照組和陣發性AF組均增大（P
2. 2 三組血清IL-18、hs-CRP和WBC比較 持續性AF組血清IL-18、hs-CRP較對照組和陣發性AF組均升高（P
2. 3 血清IL-18水平與其他指標的相關性 AF患者血清IL-18水平與hs-CRP水平、LAD及年齡具有相關性。見表3。
表3 血清IL-18水平與其他指標的相關性
危險因素 r P
年齡 0.289
LAD 0.359
LVEF 0.101 >0.05
hs-CRP 0.638
WBC 0.098 >0.05
3 討論
有資料表明， AF在發達國家的總發病率為1.5%-2%， 我國的患病率約為0.77%；其發生卒中與充血性心力衰竭的風險分別是正常人群的5倍與3倍， 給現代社會帶來了醫療、社會、經濟等一系列挑戰。近年來， 炎癥因素作為AF發病機制之一， 已經引起人們極大的關注。有研究發現心房細胞及間質的炎癥過程可直接引起膜電位的波動， 形成觸發活動， 導致心律失常。另外炎癥反應可能不僅參與了AF的誘發， 還引起了心房的結構重構及電重構[4， 5]。本研究發現持續性AF和陣發性AF患者血清IL-18水平明顯升高。IL-18通過JNK和p38 MAPK信號通路誘導AP-1 （activator protein 1）、NF-κB（nuclear factor kappa-light-chain-enhancer of activated B cells）及其他轉錄基因表達， 進一步促進前炎癥因子IL-6等及基質金屬蛋白酶表達[6]。而這些因子又與AF存在一定的相關性[1，7]。本研究還發現血清IL-18水平與hs-CRP水平呈正相關性， 而hs-CRP可以由IL-6在炎癥過程中誘導產生， 它作為探討炎癥與AF關系的觀察指標， 已有大量的報道[1， 2 ，8]。這些研究說明IL-18可能是AF發生、發展過程中重要的促炎因子， AF患者血清IL-18高表達， 并可能與其他的炎性因子一起參與了AF的形成機制。
綜上所述， 本研究顯示持續性AF和陣發性AF患者血清IL-18水平明顯升高， 提示IL-18可能與AF有關， 參與了AF發生和發展， 為AF治療提供新的靶點。不過大多數房顫的發生、發展是一個多因素的、復雜的、長期的過程， IL-18在其中的作用有待進一步闡明。
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白細胞介素范文5
【關鍵詞】 IL18；急性排斥反應
【中國分類號】 R74.1 【文獻標識碼】 A【文章編號】 1044-5511（2012）02-0159-01
人類白細胞抗原是具有高度多態性的同種異體抗原，其化學本質為一類糖蛋白，由一條α重鏈和一條β輕鏈非共價結合而成。其肽鏈的氨基端向外，羧基端穿入細胞質，中間疏水部分在胞膜中；隨著人類白細胞抗原基因配型技術的廣泛應用和新型高效低毒免疫抑制藥物的不斷出現，腎移植的近期成功率有了很大提高；如何早期發現或預測急性排斥反應的發生，對于提高移植物的遠期存活率具有重要意義；筆者通過動態監測腎臟移植術后患者血清IL18在急性排斥反應、 感染及環孢素A(CsA)中毒中水平的改變，以探討在腎移植急性排斥反應早期診斷和鑒別診斷的意義。
1.臨床資料
選擇2003年-2009年間在我院接受同種異體腎移植患者36例的病歷資料，男29例，女7例， 年齡20-59歲，原發病為慢性腎小腎炎、 多囊腎等。選擇健康人群中12例作為對照組，根據臨床表現、 實驗室檢查、 腎穿活檢病理檢查和多普勒超聲檢查結果將患者分為腎功能穩定組、急性排斥反應組、感染組和CsA中毒組。
2.檢測方法
患者于術前一天、術后一天、 三天、 五天、 七天、 十天、十四天、二十一天空腹抽取靜脈血3 mL，對發生急性排斥反應、 感染及CsA中毒的患者于確診時采血，2 h內3 000 r/min離心10 min, 取上清置-70℃保存至檢測。血清IL18測定用BIO rad 550型酶標儀，采用ELISA法按照試劑盒說明操作；數據資料均以x±s表示，組間比較采用配對t檢驗，P
3.檢測結果
根據臨床表現、輔助檢查及腎穿活檢結果，在36例腎移植患者中，18例術后腎功能保持穩定，無相關并發癥發生；12例在術后1月內發生了急性排斥反應；5例出現不同程度的感染；4例出現CsA中毒現象。在對所有患者術后血清IL18水平監測結果發現，在腎功能穩定組中，血清白細胞介素18水平一般于術后第1天即有升高，在術后第7天達高峰，隨后逐漸下降，10 d左右即趨于穩定；而在急性排斥反應組中，其血清白細胞介素18水平術后10 d仍維持在高水平為（1086.42±264.65）ng/L，與腎功能穩定組比較（283.35±56.62）ng/L，差別有顯著性意義(P
4.討論
當移植了他人的腎臟，這種"非己"的器官存在于受者體內，于是受到體內以淋巴細胞為主的免疫活性細胞的"攻擊"。這就是醫學上所稱的排斥反應。排斥反應大致可分為四種：超急性排斥反應、加速性排斥反應、急性排斥反應及慢性排異反應。超急性排斥確實可以稱為一種"超級"排斥。它來勢兇猛，大多數于吻合血同管開放后幾分鐘至幾小時發生，也有人稱之為"手術臺上的排斥反應"。移植的腎臟突然變軟,由紅變紫，并很快停止排斥。僅少數病人可延遲發生，但也只限于移植后的24小時內。超急排斥一但發生，目前尚無治療辦法，一經確定診斷應切除移植腎。 加速性排斥反應指術后3-5天內發生的排斥反應。病員表現為體溫升高、尿少、血壓升高、移植腎腫脹壓痛、病情進行性發展、血肌酐迅速上升，病員需透析。其余病員開始治療時有所改善，但停藥后又復發，全身反應加重，移植腎區持續脹痛，腎功能不見好轉，應盡快切除移植腎。急性排斥反應是臨床上最多見的一種排斥反應。發生于腎移植后第6天至術后3-6個月內，特別好發于移植后3個月內，以第5周發生率最高。據統計，腎移植后3個月內有30%的病員至少發生一次急性排斥。這段時間病員要按時隨訪、復查。抗排斥藥，尤其是環抱素不得輕易改動，絕對聽從醫生指導。主要表現為：發熱、尿少、血壓升高、血肌酐上升。對于急性排斥反應有時與突然變換抗排斥藥有關。如環抱素+強的松+硫唑嘌呤，未重疊使用，有時則是與迅速減藥有關。另外,不可忽視的是感染也可誘發急性排斥。對付"急排"的方法：大劑量甲基強的松龍沖擊，抗淋巴細胞球蛋白或抗胸腺細胞球蛋白及專門特異性地針對排斥有關的T細胞的單克隆抗體。慢性排斥反應是指排斥反應發生在手術6個月以后。"慢排"的發生一般與以下幾個因素有關：白細胞血型配合不理想、腎移植后早期發生多次的急性排斥、環抱素劑量長期不足、高脂血癥等。主要表現為：內生肌酐清除率下降，以及多尿和低比重尿，甚至無尿。對于慢性排斥反應的治療措施有：①調整免疫制劑、短程激素沖擊；②抗凝，抗血小板聚集；②擴張腎血管。其中調整抗排斥藥物包括：環抱素、FK506、強的松、霉盼酸酯、硫唑嘌呤、環磷酰胺、百令膠囊、雷公藤制劑等。當然，同樣的藥在不同的病員身上會出現不同的效果，這就要因人而異了，最終還是要聽取醫生的建議。總之，病員術后出現排斥反應，要及時去醫院治療，不可耽誤治療時間。一定要尊重科學，定期復查，才能確保移植腎功能的持久、正常。
尋找一種較為特異的、無創檢查方法對于診斷移植急性排斥反應尤為重要。有文獻報道［1］在急性腎臟排斥反應中，存在有IL7、IL16、IL18等炎性細胞因子的高表達。因此我們選擇監測腎移植患者血清白細胞介素18水平的變化，探討其在診斷移植排斥反應中的作用。血清白細胞介素18主要由活化的T、B淋巴細胞、NK細胞、Th1細胞等分泌產生，并與多種腎臟疾病、自身免疫病的發生發展密切相關［1］。腎移植術后1周內，血清白細胞介素18水平的增高是機體應激反應引起血清白細胞介素18這種應激蛋白分泌增加，與移植腎有無功能關系不大。然而發生急性排斥反應時，體內免疫活性細胞受異體腎臟抗原激活，可以釋放血清白細胞介素18 ，促進B淋巴細胞活化、增殖，促進CTL的分化及NK細胞的殺傷活性，而血清白細胞介素18水平在排斥反應癥狀出現前1-3 d即可升高，因而具有一定的預測作用，可為急性排斥反應的治療贏得了時間。本組12例急性排斥反應患者中，術后1周血清白細胞介素18仍維持高水平，應用MP沖擊治療后血清白細胞介素18降至腎功能穩定組水平，排斥反應逆轉，而難治性排斥反應患者經OKT3沖擊治療或切除移植腎后血清白細胞介素18水平也逐漸下降，從而提示血清白細胞介素18在腎移植急性排斥反應的發生、治療中具有重要意義。
白細胞介素范文6
[關鍵詞] 白細胞介素-10；反復自然流產；絨毛；蛻膜
[中圖分類號] R714.21 [文獻標識碼] A [文章編號] 2095-0616（2013）21-11-03
反復自然流產是一種常見的妊娠并發癥，發病原因極其復雜，約50%的患者病因不明，已被公認與免疫有關 [1]，其中Th1/Th2細胞因子與反復自然流產關系密切[2-3]。白細胞介素-10（IL-10）是一類主要由Th2細胞分泌的細胞因子，國內外已有不少學者研究了反復自然流產患者外周血中IL-10的變化[4-6]，關于反復自然流產患者蛻膜和絨毛組織中IL-10蛋白表達的研究不多。我們的研究對反復自然流產患者蛻膜、絨毛組織中IL-10的蛋白表達進行定位和半定量分析，以進一步探討自然流產發生的免疫機制，為臨床治療提供理論依據。
1 資料與方法
1.1 一般資料
選取2010年3月～2011年2月在包頭醫學院附屬醫院婦產科門診就診的反復自然流產患者30例作為實驗組，年齡22～40歲，平均（28.8±6.3）歲。實驗組入選標準：既往2次或以上自然流產病史；無染色體、解剖、內分泌異常和感染、自身免疫性疾病。隨機選取同期正常早孕的人工流產者30例作為對照組，年齡20～38歲，平均（27.5±5.3）歲，孕齡6～10周，既往均有生育健康子女，無自然流產、死胎、死產史，B超提示胚胎發育正常，無染色體疾病和其他系統疾病。收集刮宮后絨毛和蛻膜組織，生理鹽水清洗樣本，然后用10%甲醛溶液固定，經脫水、透明、浸蠟、包埋制成蠟塊保存。
1.2 主要試劑
免疫組化SABC試劑盒，兔抗人IL-10多克隆抗體， DAB顯色試劑盒購于武漢博士德生物工程有限公司。
1.3 免疫組織化學染色
將蠟塊切為6μm厚的組織切片，經脫蠟和水化；0.3%雙氧水-甲醇室溫孵育20min，以阻斷內源性過氧化物酶的活性；加入檸檬酸緩沖液，放入微波爐中蒸煮3min，使抗原位點暴露出來；滴加兔抗人IL-10抗體工作液（1100），陰性對照用PBS代替一抗，4℃過夜；加二抗后置于37℃溫箱中30min；加SABC后置于37℃溫箱中30min；DAB- H2O2室溫顯色，蘇木素復染細胞核，脫水、透明、封片。
1.4 圖像處理
實驗組和對照組各30例，每例取絨毛組織切片和蛻膜組織切片各2張，應用捷達801圖像分析系統進行分析，分別于絨毛組織的滋養層細胞、蛻膜組織的蛻膜細胞、腺上皮細胞隨機取2個單位面積，測量平均光密度作為測量數據。
1.5 統計學分析
數據采用SPSS10.0軟件進行統計分析，計算平均值與標準差，結果以（）表示，實驗組與對照組組間進行t檢驗，P
2 結果
2.1 IL-10蛋白在絨毛和蛻膜中的組織學定位
在蛻膜組織中，實驗組和對照組的蛻膜細胞和腺上皮細胞胞質內均有棕黃色陽性反應顆粒。在絨毛組織中，實驗組和對照組IL-10蛋白的表達主要定位于絨毛滋養層細胞的胞質內，呈綜黃色顆粒，兩組陽性反應強弱不等。見圖1～4。
2.2 IL-10蛋白在絨毛和蛻膜中的半定量結果
在蛻膜組織中，實驗組IL-10的蛋白含量相對降低，與對照組比較有顯著差異（P
3 討論
目前許多研究結果表明T輔助細胞亞型Th1、Th2 細胞因子平衡與妊娠結局密切相關。正常妊娠表現為一種特殊的Th2現象，Th1處于一種抑制狀態，當發生向Th1型細胞因子的偏離時，可能會導致自然流產[7-8]。
IL-10是一類主要由Th2細胞分泌的具有抗炎和抗過敏作用的細胞因子， 具有蛻膜組織的抗炎和抑制免疫活性的作用。近年來的研究發現， IL-10與妊娠的生理病理過程有密切的聯系。Izzo研究顯示在妊娠早期IL-10與子宮內膜對胚胎植入的容受性形成有關，防止對滋養層細胞和胎兒的繼發損傷，維持了正常妊娠的順利進行[9]。邵劍春等[10]研究發現正常妊娠者外周血的IL-10高于非妊娠者，而反復自然流產患者外周血的IL-10水平低于健康組。本實驗顯示IL-10蛋白主要定位于絨毛組織的滋養層細胞及蛻膜組織的蛻膜細胞、腺上皮細胞的細胞質內，在反復自然流產者的絨毛組織和蛻膜組織中IL-10蛋白表達相對含量明顯低于正常妊娠婦女，其結果與李靜等[11-12]研究結果一致，反復自然流產患者早孕絨毛組織及蛻膜組織IL-10表達的下降，可能使細胞免疫增強，滋養層細胞植入異常，影響胚胎的正常發育，而導致早期自然流產。