霸道游戲范例6篇

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霸道游戲

霸道游戲范文1

1、首先將U盤插入電腦,電腦檢測U盤成功;

2、把游戲的安裝包放進U盤里;

3、雙擊安裝包,開始安裝,將安裝目錄選擇U盤,進行安裝;

霸道游戲范文2

湯唯的第一任男朋友是主演過電視劇《奮斗》、《我的青春誰做主》的朱雨辰,兩人都是彼此的初戀,他們從相識到相愛的過程充滿了浪漫色彩。那是1995年的春天,湯唯和朱雨辰在中戲表演系的杭州考場上第一次相見。那一天,一身紅衣不時低頭撥弄頭發的湯唯,無意間發現一個男孩正定定地凝視著自己,她的臉一下紅了,朱雨辰也因為第一次與異性對視而心跳加速。不久后,兩人在雨中再次邂逅,他們欣喜地發現,原來兩人同在一所學校。因為熱戀,兩人高考時雙雙落榜。第二年,朱雨辰順利考入中戲,遺憾的是湯唯再次落榜。失意中的湯唯帶著幸福小女人的甜蜜陪朱雨辰到北京上學,中戲旁邊胡同里300元包月的平房就是兩人愛的小窩。2000年,湯唯連續三年終于如愿考上了中戲。然而在那年高考前夕,兩人爆發了一次大的爭吵,湯唯冒雨離開,朱雨辰哭著去追,卻如何也遍尋不見。失蹤兩個禮拜后,湯唯打電話對朱雨辰說:“我們倆分手吧!”隨后,兩人各自在演藝圈開創了自己的天地,朱雨辰曾對好友表示,永遠不看《色?戒》,不看關于湯唯的任何新聞。

謝霆鋒∈做廚神老爸

謝霆鋒是出了名的二十四孝老爸,為了兩個寶貝兒子吃得好,他更是立志學做廚神。除了積極上網搜羅食譜外,他一天可能會逛五六次超市找材料,用心程度可見一斑。某次家里的菲傭對謝霆鋒說:“你煮的菜好味,但是餐具不夠漂亮!”于是謝霆鋒改日就帶著菲傭去高檔餐具店掃貨。

鄧麗君&林青霞∈互相拍

鄧麗君和林青霞是金陵女中的校友,鄧麗君是學姐,林青霞是學妹。兩人當年都對地中海有一種特殊情懷,曾多次結伴去地中海游玩。有一次途經地中海畔的里維拉海灘,鄧麗君心血來潮地問林青霞是否有膽量裸泳?林青霞回答:“如果你敢,我一定奉陪?!编圎惥f:“如果你敢,我哪有不敢?”在林青霞率先脫下內衣后,鄧麗君也卸下了心房,兩人不但暢游地中海,還互相給對方拍了十張的照片。事后擔心照曝光,林青霞專門請一名女性攝影師好友沖洗照片,且每版只洗一張,然后她和鄧麗君便相約一起把底片封存。

張惠妹∈慷慨大姐大

去年收入約4600萬人民幣的張惠妹,今年初大手筆砸下25萬元招待經紀公司的25位同事遠赴長灘島度假。張惠妹對工作人員向來慷慨,定下出游的地點是長灘島后,她立刻選中了當地最奢華的香格里拉度假村下榻。該酒店建筑在長灘島最美的一段沙灘旁,最便宜的房間一天也要2100元,而張惠妹住的別墅型房間一天則需8400元。度假期間,張惠妹某天下午突然通知所有人晚上到她房間開party。為了給大家營造一個熱帶風情的浪漫party,她請人在地板上灑滿了鮮花花瓣,各個角落都點滿蠟燭,僅2100元每瓶的香檳就足足點了八瓶。這場加碼的派對,一下子又令張惠妹的賬單多添了4萬元。

霸道游戲范文3

關鍵詞:霸道行為表現;小班幼兒;成因探析

中圖分類號:G613文獻標識碼:A 文章編號:1992-7711(2014)15-085-1隨著社會環境的巨變,計劃生育的普及,現在家庭中一般只有一個孩子,幼兒處于“獨生時代”。可每年的九月份,幼兒園都將迎來新入園的小班幼兒。幼兒離開家庭進入幼兒園是他們成長過程中跨出一大步。由于現在幼兒大部分是獨生子女,小霸王似的,不管什么好處和利益,就是自己得頭一份,別人都得讓著他,便養成了幼兒霸道的習慣,特別是小班的幼兒。

為什么幼兒會以自我為中心,存在較多的攻擊行為?

一、家庭教養方式不當的影響

幼兒處于獨生時代,幼兒成了家庭的中心,父母對孩子的過多保護與遷就,讓他成為了小魔王,唯我獨尊,什么事都要順著他自己,和同伴之間的交往也少,不會和同伴交往。

二、幼兒園環境的影響

幼兒園教師、同伴、環境對幼兒常見犯行為的影響。

1.教師的影響。幼兒教師的一舉一動都受到孩子的關注、模仿和影響,每個孩子都會跟著教師學,跟著教師唱,跟著教師玩,幼兒是最天真活潑,純潔可愛。

2.同伴的影響。幼兒同伴之間的相互作用又會影響幼兒社會行為的發展。當一個幼兒通過攻擊別人達到了某種目的時,其他的幼兒看到這種行為帶來的“好處“,也會去模仿這種行為,同伴榜樣的作用是引發幼兒攻擊行為的一個重要因素。

3.環境的影響。幼兒園是幼兒基礎教育的基地,環境如何對幼兒教育有著直接影響。幼兒為爭奪物品和空間是幼兒攻擊行為的最主要的起因,所以當幼兒園玩具數量不充足,活動場地不寬敞,設備不具備,幼兒活動受到限制,就會為擁有某個玩具、某塊場地進行爭奪,必然也就會發生攻擊、侵犯的行為,來達到自己的滿足和需求。

三、來自幼兒自身認知因素的影響

在學習中,我們嘗試到認知對幼兒常見犯行為的影響,認知在幼兒的攻擊行為中起著重要的中介和調節作用,幼兒在面對一個意圖不明的消極結果時,攻擊性幼兒容易把它歸因為同伴處于“壞孩子”的敵意造成的,于是便對同伴實施侵犯。

四、大眾傳媒的影響

隨著電視、電腦網絡的普及,看電視已經成為幼兒生活中不可缺少的一部分,過多的電視暴力影響到幼兒的心態,他們將暴力行為看作是解決問題的有效途徑,于是幼兒便會模仿電視中的暴力行為而在現實生活中加以應用,模仿,引發了幼兒的攻擊犯行為的發生。

五、生物因素的影響

心理學家托馬斯等人將嬰兒的氣質劃分為容易型、困難型、遲緩型三種:困難型嬰兒時常大哭大鬧,發脾氣,適應能力較差,這種氣質類型的嬰兒在其成長中易發生攻擊犯行為。

結合上述原因,筆者認為可以采取以下有效策略:

1.要為幼兒提供一個良好的家庭環境

家庭是幼兒成長的第一個搖籃。父母要學會尊重孩子,然后再去嚴格要求孩子,尤其每個家庭都有自己的期望和各自的價值標準塑造著孩子,因此要以正確、科學的方法去引導自己的幼兒,使其有良好的家庭和社會的教養。

2.老師要關心每一個孩子,為幼兒構建和諧溫暖的家園

幼兒園是幼兒成長是第二搖籃,幼兒老師要真誠地去愛一個孩子,老師要關心、尊重每一個幼兒,合理評價每個孩子。

3.對幼兒常見侵犯行為進行懲罰教育

在化解幼兒的攻擊犯行為時,應適當對孩子的攻擊行為實施恰當懲罰。懲罰必須說理,要讓孩子明白為什么要懲罰他,切忌暴力打罵造成恐懼心理,老師和家長可以采用“冷處理”的懲罰方式。但懲罰不能過于頻繁,每次持續的時間要適可而止,當孩子有悔意時,要及時撤去對孩子的懲罰。

4.利用媒體、網絡信息搭建溝通平臺

幼兒園應有目的地利用動畫、幻燈、投影、錄音、錄像等多種現代教育技術手段講解什么是幼兒常見犯行為,通過媒體捕捉周圍環境和藝術作品施教感化,使幼兒在直觀生動的媒體藝術欣賞中甑別善惡是非,提高幼兒是非對錯、好壞善惡的甑別能力。

5.家長要正確指導幼兒收看電視

現代幼兒看電視已成家庭常事,但電視中暴力行為往往引發幼兒的興趣和模仿,因幼兒分辨是非能力較差,易誘發幼兒的攻擊犯行為的產生,所以家長要為孩子選擇節目內容,要讓孩子多看一些知識性、趣味性的節目,陪孩子討論電視節目中暴露的問題,引導幼兒分清是非、美丑、善惡,讓自己的孩子知道應該學習哪些行為,哪些行為不該模仿。

霸道游戲范文4

【關鍵詞】VBA 防偽開票系統 用友軟件 數據導入

一、數據轉換接口的開發既具有必要性又具有可能性

增值稅防偽稅控系統是1994年國家稅務總局聯合航天工業總公司等部門研制開發的,作為國家金稅工程的重要組成部分,其在全國各企業中普遍使用。防偽開票子系統,是增值稅防偽稅控系統的四個子系統之一,是專門用于企業開具專用發票的應用軟件。然而,在V7.23.10之前的版本(以下簡稱舊版),防偽開票子系統在發票填開過程中只能采用手動填開的方式,且其開票數據不支持導出。因此,在銷售業務中,稅務會計需要將業務部門提交的開票信息輸入開票系統開具發票,銷售會計需要將已開具發票信息輸入財務軟件生成記賬憑證。原始數據的重復輸入造成工作繁瑣、效率低下、出錯率高等問題,同時也大大地消耗了企業的人力和時間。因此,設計一款數據轉換接口,實現開票系統數據直接導入財務系統生成記賬憑證,十分必要。

防偽開票子系統的升級為數據轉換接口的開發提供了保障。實現數據導入,前提是獲得需要導入的數據。然而,舊版防偽開票子系統是不支持已開具發票數據導出的,為此,在防偽開票子系統接口領域,出現了許多商業化軟件。由于相關標準的缺失,各商業化接口價格差異較大,技術水平也良莠不齊,價格低的,納稅人擔心接口是否會對原系統造成損害,后續服務是否及時;價格高的,對于中小企業納稅人來講,是一筆額外的負擔。然而,隨著國家稅務總局2014年第17號公告的,這個問題得到了較好地解決。公告中指出,為進一步減輕納稅人負擔,優化納稅服務,國家稅務總局決定對納稅人使用的增值稅發票稅控開票軟件數據接口規范予以。根據公告的要求,新版的防偽開票子系統可以將已開具的發票數據從稅控開票軟件中導出(導出數據提供XLS和XML兩種格式),滿足納稅人內部管理信息系統與稅控開票軟件的銜接需要,數據接口規范的使得個人用VBA開發數據轉換接口的成為了可能。

用友U8軟件總賬工具提供了良好的數據導入接口。在用友U8軟件中,總賬工具是總賬系統中攜帶的一個應用子程序,它可以實現不同賬套或同一賬套不同機器之間的數據傳遞,總賬工具中的憑證引入功能可以按標準格式將TXT文本文件引入到憑證庫中。了解了標準格式TXT文件,用VBA技術將防偽開票系統導出的數據轉換成標準文件,即可實現數據的引入。

VBA 是Visual Basic for Application的簡稱,可用來擴展Windows應用程序(特別是Excel)的功能。Excel與VBA的結合,可以使大量重復、繁瑣的工作自動化,成倍地提高工作效率,在辦公自動化中應用廣泛。此外,VBA代碼并不需要逐句編寫,用戶可通過錄制宏來產生所需要的代碼,然后對錄制的代碼稍加修改便可得到自己需要的代碼,這大大降低了學習VBA的門檻。本文利用VBA處理表格方面的優越特性和易學性,將開票系統導出的XLS文件,加工處理后生成能夠直接導入用友U8軟件的標準格式TXT文件,實現開票數據的共享。

二、數據轉換接口設計思路

首先,先從“防偽稅控開票子系統”中導出開票數據。打開開票系統,點擊“報稅處理\抄報稅管理\開票數據導出”功能,系統彈出文件導出對話框,輸入月份、開票日期及購方信息等,點擊“確定”按鈕,在系統彈出的對話框中選擇導出文件存放路徑,輸入文件名,選擇保存類型為XLS,點擊“保存”按鈕即可完成數據導出,在導出文件存放路徑下可以查看到導出的文件。

從開票系統導出的數據表(以下簡稱數據表)結構如下:第1至第5行為納稅企業的基本信息;第6行為發票各項目的名稱,A~P列依次為:A發票代碼,B發票號碼,C購方企業名稱,D購方稅號,E銀行賬號,F地址電話,G開票日期,H單據號,I商品名稱,J規格,K單位,L數量,M單價,N金額,O稅率,P稅額;第7行及以下為所導出發票的具體數據。以第8行為例,列示數據如下:

A8:000001,B8:01002,C8:B公司,D8:11B,E8:X銀行,F8:XX市,G8: 2014-1-2,H8:00B,I8:商品2,J8:GG02,K8:EA,L8:10,M8:20.00,N8:200.00,O8:17%,P8:34.00

假設數據表所在工作表的名稱為“發票數據”,在VBA中表示為Sheets("發票數據")。“發票數據”的第6行顯示發票各項目名稱,如發票代碼、發票號碼等,表的第7行及以下是對應項目的值,如C8單元格表示票號為“01002”的發票所對應的購方企業為“B公司”,C8單元格的值在VBA中表示為Cells(8,3),Cells兩個參數8和3分別指單元格所在的行和列。根據“發票數據”中的數據,足以編制出對應的分錄,以第8行為例,假設出售商品2為XX公司主營業務,記入“主營業務收入”科目,XX公司設置“應收賬款”科目,該科目按客戶分類核算,則該分錄如下:

摘要:銷售B公司商品2#1002

借:應收賬款(1122)——B公司(11B) 234.00

貸:主營業務收入(6001) 200.00

應交稅費——應交銷項稅(22210105)

34.00

在該分錄中,“摘要”并不能直接獲取,它是將幾個單元格的值和一些其他字符重新組合而成,若以ZY表示摘要,則ZY=“銷售”&Cells(8,3)&Cells(8,9)&“#”&Right(Cells(8,2),4),&為字符串連接符號,Right函數用于取發票號的后四位。

其次,需要了解用友軟件可識別的標準格式TXT文件。標準格式TXT文件內容如下:第1行數據“填制憑證,V800”,第2行及以下數據“日期,類型,憑證號,附件張數,摘要,科目,借方 ,貸方,數量,外幣,匯率,制單人,結算方式,發票號碼,發生日期,部門,個人,客戶,供應商”。

其中,“填制憑證,V800”是文件標識,表示該文件可被用友U8軟件識別且執行“填制憑證”功能,該標識對每一個TXT文件只有一個,位于文件第一行。標識以下是該文件所包含的會計分錄信息,其中:“日期”指填制憑證的日期,格式為“XXXX-XX-XX”;“類型”指憑證類型,值為“現”“銀”“轉”;“科目”指分錄中對應的科目編碼;“借方”“貸方”指借貸金額,每行數據只能包含“借方”“貸方”二者之一;“部門”“個人”“客戶”“供應商”均指該項對應編碼。在標準格式TXT文件中,每一行數據描述分錄中某一會計科目的各項信息,由此不難得出,上文中提到的會計分錄轉換成標準格式TXT文件如下:

20X4-1-2,"轉","1",1,"銷售B公司商品2#1002","1122",234.00,,,,,"張三",,"01002",,"","","11B","",

20X4-1-2,"轉","1",1,"銷售B公司商品2#1002","6001",,200.00,,,," 張三",,"",,"","","","",

20X4-1-2,"轉","1",1,"銷售B公司商品2#1002","22210105",,34.00,,,," 張三",,"",,"","","","",

通過以上的分析得出,對于“發票數據”中的每行數據,在產生的標準格式TXT文件中對應3行數據。考慮構造一個輔助表格(簡稱為輔助表),在該表格的第1行A~S列依次輸入:“日期”“類型”“憑證號”“附件張數”“摘要”“科目”“借方”“貸方”“數量”“外幣”“匯率”“制單人”“結算方式”“發票號碼”“發生日期”“部門”“個人”“客戶”“供應商”,假設其所在工作表名為“憑證”。“憑證”的格式已類似于標準格式TXT文件,只要調用VBA中文件操作的相關函數,依次將表中的數據寫入TXT文件中即可。

再次,考慮如何建立“發票數據”與“憑證”的聯系。不難看出,“發票數據”中的第7行數據,對應“憑證”中第2、第3、第4行數據,分析這種對應關系,得出“發票數據”中的第i行數據(i>=7),對應“憑證”中的第3*i-19,3*i-18,3*i-17行數據。以“日期”為例,“發票數據”中“開票日期”在G列,“憑證”中“日期”在A列,假定憑證填制日期為開票日期,對于“發票數據”中的第i行數據,則有:

Sheets(“憑證”).Cells(3*i-19,1)= Sheets("發票數據").Cells(i,7)

Sheets(“憑證”).Cells(3*i-18,1)= Sheets("發票數據").Cells(i,7)

Sheets(“憑證”).Cells(3*i-17,1)= Sheets("發票數據").Cells(i,7)

“=”為賦值符號,含義為將等號右邊的值賦給等號左邊。

再來看一下借貸方金額的表示,“發票數據”中 N7單元格對應“憑證”中H3單元格,P7單元格對應H4單元格,N7與P7單元格數值加和對應G2單元格,于是對于“發票數據”中的第i行數據,則有:

Sheets(“憑證”).Cells(3*i-19,7)= Sheets("發票數據").Cells(i,14)+Sheets("發票數據").Cells(i,16)

Sheets”憑證”).Cells(3*i-18,8)= Sheets("發票數據").Cells(i,14)

Sheets(“憑證”).Cells(3*i-17,8)= Sheets("發票數據").Cells(i,16)

同理,也可建立其他數據之間的對應關系。

最后,看一下如何將“憑證”中的數據輸出到TXT文件。VBA中的“Print #語句”可以將EXCEL中的數據順序寫入文件,具體語法可參考VBA書籍。對于“憑證”中每一行數據,連接規則是:同行中不同單元格數據用“&”連接,保證其在輸出TXT文件中位于一行;不同單元格之間以“,”分割,但若單元格值為字符串,則該單元格前后需添加“””。以Line2表示第2行數據,SDH表示"," ,SYH表示"""",則:

Line2 = Sheets("憑證").Cells(2, 1) &SDH

Line2 = Line2&SYH& Sheets("憑證").Cells(2, 2).&SYH&SDH

以此類推,通過循環賦值,可將第2行所有單元格的值賦給Line2,完成賦值后,使用Print#語句可將其輸出到文件。

三、數據轉換接口設計實例

以上分析厘清了接口制作的思路,并對制作過程中的關鍵點作了說明,為了更直觀地了解整個過程,下面提供一個簡化案例作為展示,對該案例,作如下假設:

1.XX公司每賣一批商品開具一張發票,開票系統中導出的工作表名稱為“發票數據”,“發票數據”所在工作簿含有名稱為“憑證”的工作表。

2.XX公司根據每張發票生成1張記賬憑證,憑證類型為“轉”,附件張數為2,填制日期為“開票日期”,制單人為“張三”。

3.XX公司出售商品為主營業務,主營業務科目編碼為6001,公司應收賬款按客戶分類核算,應收賬款科目編碼為1122,客戶編碼為“購方稅號”。

根據以上假設,做如下操作,打開存放開票信息的EXCEL表格,使用“Alt+F11”快捷鍵,進入VBA界面,點擊“插入\模塊”子菜單,在插入的代碼輸入窗口中輸入以下代碼:

Sub 數據轉換接口()

Dim Line_head As String

Dim sLine As String

Dim sFName As String

Dim iFNnumber As Integer

Const SDH As String = ","

Const SYH As String = """"

On Error Resume Next

sFName = "E:\憑證引入.txt"

sLine_head = "填制憑證,V800"

hmax = Sheets("發票數據").Range("A65 535"). End(xlUp).Row

With Sheets("憑證")

For i = 7 To hmax

.Cells(3 * i - 19, 6) = "2211"

.Cells(3 * i - 18, 6) = "6001"

.Cells(3 * i - 17, 6) = "22210105"

.Cells(3 * i - 19, 7) = Sheets("發票數據").Cells(i, 14)

.Cells(3 * i - 19, 7) =.Cells(3 * i - 19, 7) + Sheets("發票數據").Cells(i, 16)

.Cells(3 * i - 18, 8) = Sheets("發票數據").Cells(i, 14)

.Cells(3 * i - 17, 8) = Sheets("發票數據").Cells(i, 16)

.Cells(3 * i - 19, 14) = Sheets("發票數據").Cells(i, 2)

.Cells(3 * i - 19, 18) = Sheets("發票數據").Cells(i, 4)

For j = 0 To 2

.Cells(3 * i + j - 19, 1) = Sheets("發票數據").Cells(i, 7)

.Cells(3 * i + j - 19, 2) = "轉"

.Cells(3 * i + j - 19, 3) = i - 6

.Cells(3 * i + j - 19, 4) = 2

.Cells(3 * i + j - 19, 5) = "銷售" & Sheets("發票數據").Cells(i, 3)

.Cells(3 * i + j - 19, 5)= .Cells(3 * i + j - 19, 5) & Sheets("發票數據").Cells(i, 9)

.Cells(3 * i + j - 19, 12) = "張三"

Next j

Next i

iFNnumber = FreeFile

Open sFName For Output As #iFNnumber

Print #iFNnumber, sLine_head

t = 2

Do

sLine = .Cells(t, 1) & SDH

sLine = sLine & SYH & .Cells(t, 2) & SYH & SDH

sLine = sLine & SYH & .Cells(t, 3) & SYH & SDH

sLine = sLine & .Cells(t, 4) & SDH

sLine = sLine & SYH & .Cells(t, 5) & SYH & SDH

sLine = sLine & SYH & .Cells(t, 6) & SYH & SDH

sLine = sLine & Format(.Cells(t, 7), "0.00") & SDH

sLine = sLine & Format(.Cells(t, 8), "0.00") & SDH

sLine = sLine & .Cells(t, 9) & SDH

sLine = sLine & .Cells(t, 10) & SDH

sLine = sLine & .Cells(t, 11) & SDH

sLine = sLine & SYH & .Cells(t, 12) & SYH & SDH

sLine = sLine & .Cells(t, 13) &S DH

sLine = sLine & SYH & .Cells(t, 14) & SYH & SDH

sLine = sLine & .Cells(t, 15) & SDH

sLine = sLine & SYH & .Cells(t, 16) & SYH & SDH

sLine = sLine & SYH & .Cells(t, 17) & SYH & SDH

sLine = sLine & SYH & .Cells(t, 18) & SYH & SDH

sLine = sLine & SYH & .Cells(t, 19) & SYH & SDH

Print #iFNnumber, sLine

t = t + 1

Loop Until IsEmpty(.Cells(t, 1))

End With

Close #iFNnumber

End Sub

點擊“保存”按鈕,關閉VBE界面,點擊“開發工具\代碼\宏”,在彈出的對話框中選中“數據轉換接口”,點擊“執行”,即可看到處理后的工作表,并且在E盤下找到“憑證引入.txt”文件。利用VBA的封裝技術可以將以上的代碼封裝成dll文件或EXE文件,注冊后即以按鈕的形式存在于EXCEL選項卡中,點擊按鈕即可實現相應功能,在此不作詳述。

點擊“用友U890\系統服務\總賬工具”,打開總賬工具界面,在“數據源\文件數據”處選擇“E:\憑證引入.txt”,雙擊“憑證引入”,即可將憑證引入到用友軟件中。

四、小結

本文利用Excel VBA在處理表格方面的優越特性,將新版防偽開票子系統導出的數據加工處理,生成了能直接導入用友軟件的標準格式TXT文件,減輕了會計人員賬務處理的負擔。然而,針對該問題本文更多地是提供一種處理思路,雖然文中給出了一個案例的完整代碼,但所用案例建立在眾多假設之上。在實際會計業務中,這些假設不一定全部滿足,需要具體問題具體分析。盡管如此,本文提出的處理思路仍具有重要的理論價值和應用價值,各企業可根據企業的實際情況,結合VBA的強大功能,設計出適合于自己企業的數據轉換接口。

參考文獻

[1] 郭剛.Excel VBA 入門與應用典型實例[M].北京:北京希望電子出版社,2009.

霸道游戲范文5

一、幼兒在游戲中常見的心理問題及成因

1.自私的心理。幼兒在游戲中常常有自私心理,這種心理的表現是:本該大家共同玩的玩具由(她)本人獨自占有;別的小朋友要玩時,便攻擊對方。造成這種心理問題的原因主要有兩個方面:一是人的本能所致。人一生下來,就有許多種本能的欲望。自私就是一種近似于一種本能的欲望而隱藏在人的心靈深處。二是客觀環境所致?,F在的孩子由于多是家中的“獨苗”,來自物質和心理上的關心過多,久而久之,孩子便以家庭中的“中心人物”自居,逐漸形成了“唯我獨大、唯我獨尊”的心理特征。一旦這種心理形成,便會在生活中表現出來。

2.無意識的心理。3~6歲的幼兒在游戲過程當中,常常有無意識的心理。這種心理主要表現為:順從他(她)人意志;不按照玩具的規則行事,亂擺亂放。這種心理的形成有兩個原因:一是幼兒正處于身體的成長發育期,精力集中時間較短,多數時間都處在一種身心放松的無意識狀態。二是游戲較難,使幼兒由精力集中變成了放任自流。于是,思考被瞬間放棄,無序就成了樂趣和好玩。

3.無聊的心理。幼兒在游戲過程當中,有時也會產生無聊的心理,這種心理主要表現為:面無表情,不愿動手;心不在衍,動作緩慢;個別孩子表現為煩躁、哭泣。形成這種心理有兩個原因:一是游戲形式、樣式老化,簡單重復,令他(她)興趣索然。二是由于現如今豐富的玩耍方法和多樣化的視覺刺激,使他(她)有更多的要求,如看電視、玩電腦、手機等。

4.忌恨的心理。有這種心理的孩子不多,個別單親家庭的孩子有這種心理。這種心理主要表現為:看到別的小朋友忘情地玩玩具時憤恨不滿,并伺機搶奪他人玩具;當別的小朋友將玩具擺搭好而他沒有擺上時,將別人的搶過來據為己有,或將別人搭好的玩具破壞掉。形成這種心理的原因主要是受到的關愛很少,或受到父母常常吵架的影響,心理發生扭曲。

二、在游戲中進行心理疏導的方法

1.自主分配法。這種方法主要是針對自私心理的。就是在進行玩具游戲前,凡是需要平均分配的玩具,都由小朋友自主去拿,小朋友拿完后,由老師評價小朋友誰拿的多、誰拿的少,并讓小朋友說明為什么,這樣經過多次反復后,就能使小朋友懂得禮讓的道理,從而消除自私心理。

2.單人游戲法。這種方法主要是針對無意識和無聊心理的,主要解決精力集中和興趣問題。首先讓大家共同玩,再單獨玩。這種方法主要適用于智力方面的游戲,如擺積木等,使每個孩子都有思想上的壓力,從而達到精力集中的目的。

3.特殊關懷法。這種方法主要是針對有忌恨心理的孩子的。在玩游戲時老師對其特殊關照,或擇機對其進行表揚,有時,還讓他(她)幫助其他小朋友進行游戲,從而消除他(她)的隔閡心理,逐漸糾正他(她)扭曲的心靈。

三、在游戲中進行心理疏導需要注意把握的問題

1.處理好程序性教學與創新性教學的關系。程序性教學是指按照教學大綱完成教學任務;創新性教學是指在教學大綱范圍內,進行教學創新,高標準地完成教學任務。教師在備課過程中,要按照教學任務的要求,積極動腦筋,把最新的富有創意的東西植入到游戲教學中,最大限度地運用最新的科技手段進行教學,把那些陳舊的、過時的游戲快速淘汰掉,提倡教師自己編排游戲和制作游戲道具,這樣才能更好地完成教學任務。

霸道游戲范文6

關鍵詞: Bcl-2;砷化物;凋亡;雄黃;白血病,髓樣,慢性

摘 要:目的 研究Bcl-2和Bax在硫化砷誘導的K562細胞凋亡中的表達,探討其在硫化砷誘導的細胞凋亡中的作用. 方法 K562細胞經一定劑量硫化砷作用特定時間后,MTT法檢測細胞生長、增殖狀態,光鏡及透射電鏡下觀察細胞形態及凋亡情況,S-P免疫組化染色檢測Bcl-2、Bax的表達并進行圖像分析. 結果 硫化砷對K562細胞生長增殖有時間劑量依賴性抑制作用;175~1400μg?L-1 硫化砷作用18~144h后,K562細胞出現凋亡細胞的形態學改變;免疫組化染色表明K562細胞低表達Bcl-2蛋白(A值為0.152±0.023,陰性對照A值0.108±0.012),硫化砷處理后對其表達無明顯影響(A值為0.138±0.028,P>0.05).硫化砷作用后,Bax蛋白的表達量A值由0.240±0.013增加到0.316±0.021(P

Keywords:proto-oncogene proteins c-Bcl-2;arsenicals;apoptosis;realgar;leukemia,myeloid,chronic

Abstract:AIM To study the expression and the effects of Bcl-2and Bax protein in apoptosis of K562cell induced by ar-senic sulfide.METHODS After being incubated in culture medium containing variable levels of arsenic sulfide,cell growth and proliferation of K562cell was analyzed with MTT assay;apoptosis was detected with cell morphology by light and transmission electron microscopy.The expression of Bcl-2and Bax protein was determined with S-P immuno-histochemical stainning and imaging analysis.RESULTS After the treatment,cell growth and proliferation of K562cell was inhibited in a dose-and time-dependent manner.Morphologically,after treatment with175to1400μg?L-1 of arsenic sulfide for18to144h,K562cells presented some features of apoptosis.The baseline Bcl-2expression of K562cell was very low(A:0.152±0.023)while the absorbance(optical density)value(A)of negative control was0.108±0.012.No significant difference was found after the treat-ment(A:0.138±0.028)(P>0.05),but the expression of Bax protein in K562cells co-cultured with arsenic sulfide(A:0.316±0.021)was increased,compared with the untreated(A:0.240±0.013)(P

0 引言

雄黃在我國傳統醫學中有悠久的歷史,主要成分為硫化砷(As4 S4 和As2 S2 ).近年來國內學者將其用于治療惡性血液病,取得一定進展[1-3] .用單味雄黃或含雄黃的復方如青黃散、慢粒片等治療慢性粒細胞性白血?。–ML)獲得了較好的療效[1] .我們研究發現硫化砷能誘導CML細胞株K562細胞凋亡,與張晨等[4] 的報道一致.但其進一步機制目前未見報道.Bcl-2和Bax是重要的凋亡相關蛋白[5-7] ,為探討其在硫化砷誘導的K562細胞凋亡中的作用,進一步闡明硫化砷治療CML的機制,為硫化砷臨床應用提供理論依據,我們研究了Bcl-2和Bax在硫化砷誘導的K562細胞凋亡中的表達.

1 材料和方法

1.1 材料 雄黃購自西安中藥集團(產自湖南),經酸洗、水飛法炮制后,溶于RPMI1640(Gibco)培養液,滅菌分裝,取樣用原子吸收光譜法作砷(As)含量測定,用時以完全培養液稀釋.MTT和二甲基亞砜(DMSO)均購自Sigma公司.MTT溶液配制同文獻[8] .鼠抗人Bcl-2,兔抗人Bax均為Maxim Biotech,Inc產品,UltraSensitiveTM S-P Kit購自福州邁新生物技術開發公司.K562細胞是一種建株于慢性髓細胞白血病急性變患者骨髓細胞的細胞株[9] ,將細胞以2×108 ?L-1 密度接種于含或不含藥物的新鮮RPMI1640完全培養液[內含100mL?L-1 小牛血清(杭州四季青產),100×103 U?L-1 青霉素,100×103 U?L-1 鏈霉素]中,在37℃、飽和濕度、含50mL?L-1 CO2 培養箱中進行培養,隔日換液以保證細胞密度在(2~5)×108 ?L-1 .

1.2 方法

1.2.1 細胞形態學觀察 培養細胞經不同濃度硫化砷溶液作用一定時間后,涂片,分別進行Wright染色及HE染色,光鏡下觀察細胞形態及凋亡情況.取1×106 細胞,經戊二醛、四氧化鋨固定后脫水,浸透,EPON812包埋,超薄切片,鈾及鉛雙重染色,透射電鏡觀察.

1.2.2 MTT法檢測細胞生長增殖狀態 將對數生長期細胞以2×108 ?L-1 密度接種于96孔板,試驗組加入等體積含各濃度硫化砷的培養液,對照組加入等體積培養液,每組設4個平行孔,并各設空白孔(即只加入藥液和培養液,不加細胞)以調零.分別在培養18,42和70h后,加入MTT20μL,繼續培養4h,離心,棄去上清,加入DMSO150μL,混勻,570nm處測A值.細胞生長抑制率=(1-處理組A值/對照組A值)×100%.重復3次取平均值.

1.2.3 免疫組化檢測Bcl-2,Bax表達 按照Ultra-SensitiveTM S-P Kit說明書操作.細胞滴片經H2 O2 阻斷過氧化物酶活性后,以非免疫性動物血清封閉,分別與一抗(鼠抗人Bcl-2,兔抗人Bax)室溫下孵育60min,先后與生物素標記的二抗及鏈親和素-過氧化物酶孵育,DAB顯色,蘇木素復染,光鏡下觀察.以上各步驟均在室溫下進行,各步驟間均以pH7.4的PBS充分漂洗,每次染色均設陰性及陽性對照.結果用北航CMIAS真彩色病理圖像分析系統處理,用吸光度平均值(A)代表染色強度.

2 結果

2.1 細胞的形態學觀察 175~1400μg?L-1 硫化砷作用18~144h后,Wright及HE染色均可見凋亡細胞:細胞體積縮小,細胞核固縮、濃染,斷裂成小團塊分散在胞膜周邊,而細胞膜完整.透射電鏡下可見在細胞膜及核膜均完整的情況下,核染色質邊集,沿核膜邊緣形成月牙狀電子密度增高區.

2.2 K562細胞生長和增殖 MTT實驗發現,硫化砷對K562細胞生長、增殖有明顯抑制作用,且此作用呈現明顯的劑量及時間依賴性(Tab1).

表1 雄黃對K562細胞生長和增殖的抑制率 略

2.3 Bcl2和Bax的表達 Bcl-2蛋白借其末端一個由19個氨基酸組成的疏水性羧基末端與膜相連,定位于細胞膜、內質網、線粒體膜及核膜上.免疫組化染色表明K562細胞Bcl-2蛋白表達很低,硫化砷處理對其表達無明顯影響(Fig1).圖像分析測陰性對照A值為:0.108±0.012,K562細胞Bcl-2蛋白基礎表達量A值為0.152±0.023,硫化砷處理后A值為0.138±0.028,無顯著性差異(P>0.05).Bax蛋白主要定位于細胞質,K562細胞經硫化砷處理后,Bax染色強度明顯增加(Fig2).圖像分析測定硫化砷處理前后,Bax蛋白表達量A值分別為0.240±0.013和0.316±0.021,差異顯著(P

3 討論

已有的研究發現CML發病與凋亡受抑有關[9,10] .我們發現,硫化砷在175μg?L-1 及以上濃度時能抑制K562細胞的生長、增殖并誘導其凋亡,說明在一定劑量下,硫化砷可通過抑制細胞增殖、誘導凋亡而起作用.現已發現許多基因與細胞凋亡有關,包括bcl-2家族、Apo-1/Fas(CD95)、c-myc、白細胞介素-1β轉化酶(ICE)家族(即Caspases家族)、p53等.這些基因在凋亡過程中起著不同的作用.Bcl-2蛋白家族是凋亡的主要調節者,其家族成員包括抗凋亡蛋白Bcl-2,Bcl-XL ,Mcl-1,Al/Bfl-1和凋亡蛋白Bax,Bcl-XS,Bak,Bik和Bad.這些蛋白彼此形成二聚體,它們之間的比率影響著腫瘤細胞對各種凋亡刺激因子的敏感性或抗性,最終決定細胞的生死存亡[7,11] .其中研究最多的是Bcl-2和Bax.Bcl-2(B cell leukemia/lymphoma-2)基因最早是從小鼠B細胞淋巴瘤中分離出來的,其編碼的蛋白質由239個氨基酸殘基組成,Mr 26.由于Bcl-2能夠抑制許多因素介導的細胞凋亡,而引起人們的極大關注[12,13] .Bax與Bcl-2具21%同源性,由192個氨基酸殘基組成,Mr 21.Bax/Bax二聚體在體內過量表達時,可促進細胞凋亡.Bcl-2行使其功能是通過與Bax形成異二聚體機制的.半胱氨酸蛋白酶(caspases)原通過與凋亡誘導蛋白Apaf-1的NH2 -末端區域結合而激活,抗凋亡蛋白如Bcl-XL 則可直接與Apaf-1結合,抑制它同caspases原的交聯,從而抑制caspases-9的激活[14] .而Bax則可直接拮抗Bcl-XL 的作用,它可把Apaf-1從Bcl-XL 的結合中釋放出來,從而激活cas-pases,發生自身催化的化學反應,引起線粒體膜電位下降,細胞內活性氧物質升高,降解,激活內源性核酸內切酶,引起降解,形態上可見的凋亡出現[7] .

圖1 - 圖2 略

我們發現,K562細胞低表達Bcl-2蛋白,與文獻[6] 報道一致.硫化砷處理后對K562細胞Bcl-2蛋白表達無明顯影響,而Bax蛋白在硫化砷作用后表達明顯增加.據此可認為,在硫化砷抑制K562細胞生長增殖并誘導其凋亡的過程中,Bax蛋白通過上述途徑起了重要作用.由此推想,可否用基因轉染等方法增強Bax蛋白的表達,來增加K562細胞對硫化砷等凋亡誘導劑的敏感性,這將是很有意義的.

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