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納米無痕技術范文1
貝佳斯全新推出的“活力亮采系列”，不但繼續發揚其原有的礦物、活水成分，更融合先進納米科技、漢方草本及“細胞能量復合物”，易于吸收，并使肌膚迅速恢復光澤亮麗?；盍α敛擅滥w泥漿，是一款具深層凈化、補濕及促進新陳代謝的面膜。能幫助肌膚去除老化干澀的表皮；活力亮采修護露則采用納米科技配合兩種皮質有機肽，加強皮膚底層的緊致度及鎖水功能；活力亮采睛凝霜使雙目更加緊致、亮麗，其采用先進科技并融入“細胞能量復合物”及人參等；活力亮采極致精華乳能增強皮膚緊致度，更顯光澤、明凈、色澤均勻。
蘭芝雪凝新生精華露滋潤如雪肌膚
韓國領先護膚品牌蘭芝，特別針對整體抗老化，如細紋、皺紋、老化跡象等，研制出了新款護膚圣品。它通過按摩，能夠在15秒內提升面部線條，并通過刺激細胞蛋白質形成預防細紋和皺紋產生的抗老化精華露。即刻提升松弛的肌膚，令肌膚平滑柔嫩。
凝聚植物無限生命力的菁華化妝水
于眾人關注目光中全新登場的艾文莉萃籽活顏精粹化妝水，精選具有出色抵御氧化能力的龍眼籽與月見草籽提取物，并配合以精心提煉的純凈日本川芎根水，將蓬勃的生命能量傳導至肌膚內部，溫潤滋養肌膚。予以肌膚及至深層的眷顧，締造瑩潤透亮的健康肌膚。每天持續使用，能令干燥的肌膚保持水潤，富有瑩亮透明感。幫助肌膚戰勝因環境而生的各類壓力與苦況，使得肌膚時刻展現生機勃勃的生命力，孕育出躍動生命光華的活力肌膚。
寶迪佳亮白祛斑修護精華露閃亮上市
光導致皮膚的過早衰老，是因為結締組織中膠原蛋白和彈性纖維有了變化和皮膚細胞中的核心物質-DNA（脫氧核糖酸）減少了。在皮膚受到過度的強光照射或者是皮膚自我保護能力很弱的時候，皮膚就會變得粗糟，失去彈性，皺紋也會過早出現。寶迪佳研發隊伍注意到這一皮膚問題，從而運用高科技技術研制出創新的修護配方系列產品。獨特的活性成分的組合必能幫助并防止皮膚受到陽光的侵害。
法國 魅力匙讓完美肌膚輕松擁有
細滑無瑕的肌膚是愛美人士永恒的追求，然而季節更替、細微表情等外界因素均會給完美的肌膚帶來沖擊，留下難以磨滅的痕跡。法國mATIS魅力匙護膚品牌針對肌膚開始出現松弛、有皺紋和細紋，表情紋明顯、膚色不均勻的人士提供一個回復臉上青春神采的方法，配合最新科技創造出特效抗皺系列，其三重革命性專利成分，滲透到肌膚的各個層次，發揮更新、修復、除皺三重高科技力量，加速新生細胞的增殖并向表皮遷移，修復受損的組織使其恢復健康質感，撫平皺紋和細紋的同時，抹去歲月痕跡，呈現光彩照人、勻凈無痕的煥新容顏。
SISLEA革新科技新突破, 全方位終極對抗皺紋困擾
作為在全球享有盛譽的著名化妝品牌，Sisley希思黎多年來一直致力于全方位抗老化產品的科技研發，并始終在該領域占據不變的領先地位。Sisley希思黎傾力奉獻的SISLEA Daily Line Reducer抗皺活膚修顏精華液，即為SISLEA抗皺活膚駐顏系列產品的最新科技突破，它可全面對抗所有類型的皺紋現象，其獨有革命性抗皺配方，可直接作用于肌膚底層，通過“天然充填”而令皺紋減淺，并可迅速幫助肌膚恢復緊致、彈性和自然抵抗力。
朱麗葉?比諾什傾情詮釋蘭蔻立體塑顏系列
作為一名演技精湛的女演員，朱麗葉?比諾什是為數不多的在法國以及全世界都成為傳奇的女性。她勇往直前的演藝生涯讓她獲得了無數人的喝彩。她精通英語和法語，同時還涉足電影、歌劇、繪畫、舞蹈等領域。她的人生信念就是真理、力量和決心。一個值得欽佩和欣賞的女性，多年之后重新成為LANCME蘭蔻的代言人。她代言的蘭蔻立體塑顏系列，將問鼎東方市場，掀起知性女的魅力熱潮。
英國幸福職業排行美容美發業居前
英國倫敦城市行業協會最近公布了一個職業幸福指數排行榜，美容和美發業在最幸福的職業中高居前兩位。據報道，來自各行各業的1000人參加了民意調查。在幸福職業排行榜上名列第三位的是軍人，接下來分別是廚師長、售貨員、教師、營銷人員、會計師、秘書、自來水管道工、工程師、建筑師、新聞工作者。在排行榜上墊底的是建筑工人、銀行職員和保姆。而美容美發行業以開創時尚先鋒的姿態，遙遙領先位居前茅。
納米無痕技術范文2
抗衰老防曬產品
雖然抗衰老訴求早在2002年就出現在了防曬產品中,但是現在其訴求的市場語言更加具體、更加細化。通常,包裝和插頁都會提及抗氧化劑或抗自由基保護功效,現在在全球市場中,抗衰老理念已經進入了防曬市場中。
Lancaster為成熟肌膚推出的修色抗衰老多層修護瑩彩防曬霜SPF15(Sun Care Mature Skin Tinted Anti-Age Multi Protection SPF15)(35.60)據說專門為成熟肌膚設計,具有緊致、滋潤、多層保護等功效。這種用于面部和前胸的略有修色效果的防曬霜具有保濕功效,使人的肌膚在受到中度日曬的時候依舊能夠感覺舒適,同時它還可以預防黑斑的形成。該產品含有專利抗氧化合成物RPF(自由基預防劑),可以中和掉80%的自由基,從而減緩表面肌膚的老化。該產品中含有西瓜成分,能夠保持肌膚水分,而其中的美黑活化成分則可以使肌膚慢慢變成健康而持久的古銅色
Sisley推出的抗衰老防曬霜(Sunlea Age Minimizing Sun Care SPF 15)(115)據說可以預防衰老現象的產生,并可以保護肌膚不受日曬的傷害,但同時又不會妨礙美黑的效果。其中含有的合成物金酸漿花萼(酸漿屬)(Alkekengi's Calyx (physalis))、菱錳礦(rhodocrosite)以及維他命E都可以保護肌膚不受自由基的傷害。
瑞士護膚品牌Transyital在4月份的世界美容展上面向全球市場推出了兩種抗衰老防曬產品。抗衰老面霜(Global Anti-Age Face Cream SPF 30)是為面部和頸部設計的保護型液體防曬霜,它含有一種特殊的成分:全球抗衰老防曬系統(Global Anti-Age Sun Protection System)在提供UVA/UVB防曬的同時,還可以保護肌膚不受光老化的影響、預防色素沉淀、并保持肌膚水分平衡。據說該產品尤其適合那些易生紅血絲的敏感性肌膚。
Transvital針對男性消費者推出了全球抗衰老面霜(Global Anti-Age Face Cream SPF 20),這是一種針對面部肌膚的保護型液體防曬霜,其中含有小麥胚芽、酵母以及玻尿酸合成物。
New Concepts
美國Luzern Laboratories? Organic Cosmeceuticals宣稱將填補藥妝、有機產品、以及歐洲奢華化妝品直接的鴻溝。它推出了保護型面霜(La Defense SPF 30+)($50),這種100%的礦物質防曬霜可以保護膠原蛋白,使肌膚不受污染和自由基的破壞。該產品具有一種新型技術,能夠使膠原蛋白結合體不被日光分解。該產品含有認證的綠茶和蘆薈精華以及大豆和葵花籽油,可以幫助舒緩曝露于日曬的肌膚。其配方不含防腐劑和香精,可以在最大程度上減少肌膚未老先衰的跡象,預防黑斑的形成。
在英國,ZO1推出了運動版的無痕保護棒(Invisible Protection Stick SPF 30+)(10.95),這種手掌大小的保護油帶有一個嵌入式的豎鉤非常適合山地運動以及活潑的兒童,因為它可以直接使用而不用揉搓。該產品可以提供全波段的UVA、UVB紫外線保護,并含有微粒氧化鋅配方ZincClear。該產品涂抹在肌膚上以后變成透明色而不是白色。而且該產品防汗,并可以在高海拔的地方使用,能夠防止曬傷以及大風帶來的裂紋。這種保護油還可以用于眼部肌膚,并含有維他命A和E。
Sephora推出了可調式紫外線防曬霜(Adjustable SPF Sun Cream)(25),在一個瓶裝產品中能夠提供三種級別的防曬指數(SPF 15, 30, 50),適合面部肌膚和身體肌膚的不同需求,能夠滿足不同肌膚顏色、渴望日曬的程度以及/或不同家庭、不同朋友的不同需求。這種防水產品的配方中含有芒果脂和monoi油。
Colorescience推出的防曬霜(Sunforgettable SPF 30 Orb)($40)是一種防水粉末,據說在水中經過80分鐘后依舊可以防曬。該產品得到了肌膚癌基金會的推薦,證明其實一種有效的紫外線防曬產品。該產品具有三種顏色可供選擇。
天然防曬產品的發展
在2007年夏天,我們看到天然防曬產品中越來越多的使用了物理“礦物質”遮光劑,但是在這個夏季,天然產品中更多的含有有機活性成分而不是固定的物理性配方。
L'Occitane離開了它的起源地普羅旺斯,來到了巴西,打造出它的第一款防曬加美黑系列產品。L'Occitane do Brasil采用了一系列巴西的有機成分,100%使用礦物遮光劑。這款高效防曬霜(High Protection Sunscreen Veil)(19)為面部和眼部肌膚設計,不含化學濾光劑,能夠過濾UVA/UVB的紫外線,SPF值為30。這種質地輕薄的啞光色防曬霜非常適合戶外使用。其配方中含有來自Buriti棕櫚樹的有機植物油,富含抗氧化劑β-胡蘿卜素。
希臘品牌Apivita在2008年4月的國際美容展上推出了新的防曬系列。防曬身體噴霧(Sunscreen Body Spray SPF 30)的配方中含有有機橄欖葉精華、蜂膠、具有保濕作用的刺梨以及海茴香,可以增強肌膚自身的天然保護能力,并減緩光衰老。該產品不含防腐劑paraben、硅樹脂、丙烯成品,它為低變應元產品,并且防水。
Dr. Hauschka推出的防曬噴霧(Sunscreen Spray SPF 15)(22.50)可以提供物理防曬保護,它使用了精細的礦物顏料,不含化學濾光劑。該產品含有溫柏樹籽保濕精華、冰葉日中花(ice plant)以及鱷梨油。這種防曬噴霧適合敏感肌膚使用,它具有輕薄的乳狀質地,富含玫瑰果精華、橄欖籽油以及芝麻籽油,能夠柔軟肌膚。它不含人工防腐劑、色素或香精。
防曬產品的美好未來預測
明年,美國聯邦政府認可的全新防曬產品評估系統將奏效,所以Mintel期望會看到很多防曬產品經過重新配方或/及重新命名。另外,具有防曬功效的化學成分和有益于肌膚健康(滋潤、修護等)的天然、有機成分將進一步結合。越來越多的產品將致力于修護DNA,很可能通過口服美妝品實現。納米技術也有望進一步主宰防曬產品市場。
英敏特國際集團(Mintel International Group)
英敏特信息咨詢有限公司(Mintel)是全球領先的快速消費品市場情報趨勢分析、消費品市場調查報告、媒體檢測、市場咨詢等一系列信息咨詢服務供應商。
納米無痕技術范文3
加入了潤光系統的柔感控光晶粒,靈活濾光并均勻反射,使肌膚呈現柔滑質感,而長效凝水因子,全天候深凝水分,肌膚即刻充盈水潤,能很好地遮蓋粗大的毛孔。
Dior迪奧凝脂無瑕防護粉底液SPF15/PA+500元
以紡織的尖端納米科技為靈感,在肌膚表面編織出清澈透明、輕薄透氣的隱形網,改善肌膚質地,同時高效反射光線。即便在皮脂分泌的情況下,也能保留最初色彩長達數小時。SPF指數也恰好能在秋冬季節適當防護。
Givenchy紀梵希感光皙顏粉底液SPF20/PA+++520元/25ml
常春藤萃取物能使肌膚自然恢復其清新柔嫩,皙顏復合物還含有高濃度的皂角苷,能幫助肌膚持續改善微循環,賦予肌膚紅玫瑰般的健康光澤,適合秋冬極易干燥的膚質?？梢圆捎檬种篙p拍的方式上妝。
Sisley希思黎植物輕柔粉底液780元/30ml
含梔子、菩提、歐錦葵等植物萃取物,有保護肌膚作用,更可提供持久、亞光、粉嫩的妝效,多角度反光劑可幫助降低肌膚表面細紋及瑕疵,有效柔化皺紋和細紋,適合偏油性肌膚。
Giorgio Armani阿瑪尼純凈持妝粉底液SPF20680元/30ml
因為采用了獨家的Micro-fil技術,所以粉質極其細膩,能讓色素微粒與虹彩因子長時間附著在肌膚上,妝容清透,而且后續的補妝也不會造成浮粉現象。
Clinique倩碧極致柔潤粉底乳液310元/30ml
蘊涵強效保濕劑,超凡滋潤能力堪比保濕面霜,雖然質地滋潤,但是防水、抗汗的功效也值得期待。乳霜的使用感,能營造肌膚水嫩的舒適感,可以配合粉底刷和手指涂抹均勻。
造型師最愛的粉底工具
造型師評審團
Leo 《華人大綜藝》幕后造型師
小葛 臺灣知名造型師,擅長歐系美妝
KIKI:擅長日系彩妝造型師&發型師
陳昱燕
黃奕御用造型師
淳子 畢業于東京HOOYLWOOD美容專門學校,經?；钴S于《美麗俏佳人》等節目中
最常用――半專業粉底刷
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支持理由:不管是專業人士還是自己在家化妝,都要準備一款粉底刷!妝效絕對可以媲美專業級化妝師。
最無敵使用方法:刷子一般用于液態粉底,用刷子打底的優點是輕薄均勻;缺點是干性皮膚使用不當容易起屑。可全臉使用,用粉底刷順著皮膚的紋理橫向輕刷,細微處可以稍微逆著毛孔輕刷,幫助粉底鋪均。
不建議選擇過于柔軟的刷毛,很易吸收粉底且涂抹不開較厚的粉底。好的底妝刷毛量比較多,不要選太小號的刷子。毛量厚重的刷子刷粉底才有牽扯力。推薦植村秀、Bobbi Brown的刷具,柔軟度適中,毛量也夠厚。推薦選擇羊毛材質以及尼龍材質的刷具。
M?A?C專業方形粉底刷191#380元
纖維、尼龍和羊毛的混合材質,適合質地較厚的粉底液、粉底霜等底妝產品。方形頭設計更有利于刷具在肌膚上的平穩著力。
Bobbi Brown粉底刷350元
軟硬適中的刷毛,適合各種粉底液,能打造水潤的粉妝效果。
TIPS
化妝師爆料:底妝廣告上模特非常通透的妝容,是用特制噴槍噴灑粉底上妝的,程序比較復雜。
最簡單――萬能手指
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支持理由:在無法控制粉底刷和海綿的使用方法時,用手指涂抹是最易學的方法。當然,用手也是最方便的選擇。
最無敵使用方法:用手指涂抹粉底雖然最簡單易學,但是,不要以為僅僅用指腹就能把粉底液涂抹均勻,方法錯誤的話,很可能反而涂出“搓泥”般的尷尬效果。造型師建議用中指和無名指緊靠,用輕拍的方法使粉底均勻,千萬不要單純來回涂抹,否則只會使粉底在肌膚上產生“拉扯”,底妝根本無法均勻?？梢岳檬种傅臏囟?將粉底更好地融合在皮膚上,眼部、痘痘、瑕疵使用手指來打底,可以更自然伏貼。取少量的粉底在虎口,然后用中指和無名指指腹在臉部輕輕點按推勻,不要忘記推勻發際線等連接部位,最后可以互相揉搓雙手,用溫熱的雙手輕按整個臉部,讓粉底更加貼合肌膚。這個方法適合膚質比較好的女性。
不支持理由:個人認為用手指涂抹根本達不到使底妝通透的效果。
TIPS 底妝達人QA
Q 如何化出亞光質感的妝效呢?
A 如果喜歡不泛油光的妝效,可以在面部輕掃一層不含亮光微粒的蜜粉加以定妝。不過亞光妝效其實并不適合亞洲女性偏黃偏黯淡的肌膚。
Q 整臉使用,如何控制粉底用量?
A 一般大半顆黃豆大小就足夠了?？梢韵仍谑直成蠑D出合適的量,用粉底刷一點點掃上全臉即可。干燥的肌膚可以搭配保濕性滋潤乳液使用。妝前的隔離很重要,要等隔離霜完全被吸收后再上粉底才更均勻。
最細微――尖角海綿
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支持理由:比起粉底刷來,海綿更靈活,可以照顧到刷子無法企及的鼻翼、嘴角、眼尾等“犄角旮旯”。
最無敵使用方法:海綿在第一次使用時可將表面平剪掉,在使用時用涼水稍微浸泡然后用紙巾擠干,這個時候的海綿柔軟度是最好的,因為有水分,所以不會吸收太多的粉底導致浪費。海綿打底會使妝容顯得厚重,除非是特殊粉底(比如水粉狀粉底)必須配海綿使用外,一般可以在底妝上好的情況下,用海綿輕壓面部,這樣可以使底妝更加滲透伏貼,讓妝容透明感增加。還可以使用海綿來打腮紅,也是用輕壓的方式,這樣可以使腮紅由內而外透出來,更加自然。
針對皮膚有瑕疵或者干燥的肌膚,可以先打濕海綿,這樣可幫助更好地上妝。海綿的特殊造型,對于臉部凹凸的部分,例如鼻翼等地方,都可以方便地照顧到。
不支持理由:海綿直接蘸取粉底液,會被大量吸收。最好不以它為主要工具,先用刷子涂抹粉底,90%以上涂完后,再用海綿做輔助修飾工作。
Sephora絲芙蘭繽紛色彩雙面化妝海綿59元
適用于粉底產品上妝時使用。用海棉蘸取粉底產品,并由臉部中心開始緩緩向兩頰外側擦拭即可。
est嬡色菁華美顏海綿(粉底乳/霜專用)60元
具有良好的使用感,厚度、彈性非常適宜,建議使用前先揉捏幾下,使海綿更易于使用。
Make up for ever斜型海綿95元
斜角設計,可以使用在鼻翼、眼角等細小部位。
肌膚煩惱,粉底液一掃而過
煩惱1
毛孔&粗糙問題
上妝前可針對特別粗糙的部位,選用遮瑕度高的粉底產品或用液體遮瑕膏局部加強遮蓋。毛孔現象很明顯的話,上妝前先敷一層保濕或緊致的面膜,使皮膚角質柔軟后再上妝前乳。用粉底刷蘸取適量粉底液,沿著皮膚紋理輕刷,在比較粗糙的鼻翼周圍,用指腹輕按粉底液使其均勻覆蓋。
1. Revlon露華濃光感臻顏粉底液
248元/30ml
巧妙運用光學原理的“柔和焦點技術”修正肌膚瑕疵,光散射配方賦予毛孔真正的隱形遮蓋。
2. Chanel香奈兒純凈光采粉底液
475元/30ml
以氨基酸裹覆的色素,能在無粉質感的情況下,有效控制肌膚的泛油現象。完美的親膚性及抗潮濕性,使粉體色素得以均勻散布,使膚色均勻。
3. Guerlain法國嬌蘭金鉆柔霧粉底液SPF25/PA++520元/30ml
粉底配方中添加了金鉆光微粒,就像一面微棱鏡漫射光線,使肌膚的毛孔不再明顯。
4. Make up for ever清晰無痕粉底液455元/30ml
氨基酸色素使粉底液與皮膚有很強的貼合力,能均勻調節膚色并淡化皺紋,加入了能增加肌膚光澤度的絲膠,使粗糙的肌膚看似均勻光潔。
5. Orbis清亮粉底液169元/30ml
用半透明的漿狀美肌面紗將毛孔隱藏起來。無油粉體質感輕薄, 蜂王漿精華的保濕作用也改善了毛孔的粗糙問題。
煩惱2
干燥&細紋問題
最好在保濕滋潤功課后上粉底產品。使用保濕效果較好的粉液、粉霜,以少量多次的方法,用粉刷層疊上妝。如果使用蜜粉類定妝,則注意僅在T區、下巴等易出油部位稍微按壓一下即可,不必全臉用蜜粉定妝。在眼周不要使用蜜粉定妝,否則干紋現象會很嚴重。
1. Shiseido資生堂make up水潤乳粉膏380元/12g(粉盒另售120元)
雖然是固態,但兼具粉底液的持久保濕效果及粉餅的方便性與自然妝感,水覆型活力DE成分,改善干燥、缺水與粗糙感膚質。
2. Aqua Sprina雅呵雅絲睿凝時無瑕滋養粉底霜SPF16/PA++190元/30g
觸感豐盈水潤的乳霜質地,調整角質層水分環境,用后肌膚不易干燥、脫妝。
3. L'Oreal Paris巴黎歐萊雅絕配無瑕瑩露滋潤粉底液170元/30ml
這款富含透明質酸的粉底液能瞬間滋潤肌膚,產品中由于融合了精細柔滑微粒,非常容易抹勻,而且它獨特的有光感質地和偏粉的色系,尤其適合偏干、暗亞的膚質。
4. Elizabeth Arden伊麗莎白?雅頓絲潤粉底液SPF15290元/30ml
延續了凝時定格護膚系列中的“植物休眠素技術”,并采用了微礦柔焦科技,一舉消滅細紋的同時,還能保持肌膚光澤。
5. DHC緊致煥膚美容液粉底液(明亮膚色)258元/40g
美容液成分高達73%,濃稠、滋潤的質地容易與肌膚融合,適合有瑕疵、細紋的膚質。
煩惱3
色斑&黯淡問題
妝前先使用具有提亮效果的底妝乳增加肌膚的整體光澤度,比如BB霜、帶細微亮粉微粒的妝前乳液。先在有色斑且膚色黯淡的部位涂抹均勻后輕拍幫助吸收,再用遮蓋度較好的粉底產品或遮瑕粉底進行局部點拍式遮蓋。注意用指腹輕拍,不要來回涂抹,易導致花妝。
1. Yue sai羽西美肌柔潤粉底液200元/28ml
質地潤澤而保濕,適合亞洲女性的膚色,能提亮黯淡膚色,并且和原本肌膚色澤自然結合不顯生硬。
2. Laneige蘭芝雪紗防曬粉底液SPF26/PA+290元/30ml
觸感柔和并高度遮瑕,雪晶煥彩粉粒從不同角度反射光線,保持潔凈、明亮的妝容。稍微增加用量可提高遮瑕效果。
3. HR赫蓮娜炫彩光潤精華粉底乳液SPF15
1180元/30ml
富含“原光反射微球體網絡”的光透致亮復合液,萃取稀有Manganese葡糖酸錳,舒緩收緊的血管,深入促進肌膚的微循環,改善憔悴黯淡倦容。
4. La Prairie萊珀妮活膚亮顏粉底乳液SPF15
950元/30ml
能在肌膚表面形成一個即時的“柔光”焦點,淡化面部可見的色斑及細紋,刺激肌膚天然的自我修復能力。
5. Primavista映美煥采保濕粉底凝霜300元/30g
雖然質地偏厚,不過卻是一款適合干燥缺水肌膚的粉底霜,精華素一般的滋潤感以及專利亮顏粉體,創造光透柔滑質感的肌膚。
粉底液的好搭檔――妝前乳
完美的底妝,妝前是否用對隔離產品很關鍵,很多讀者會遇到粉底液“搓泥”現象,造型師的解釋是:沒有選擇正確的底妝產品,所以才會和粉底產生“排斥”反應。妝前乳的關鍵:易被肌膚吸收、質地柔滑、遮蓋毛孔,以及幫助粉底液更好地貼合肌膚。
1. Impress IC印象之美 集中護理活力美肌妝前底乳SPF12/PA+280元/30g
令干燥的肌膚柔滑細膩,提高粉底的附著力與持久度,淡雅芳香營造令人放松身心的愉悅氛圍。
2. Shu Uemura植村秀泡沫隔離底妝液SPF30/PA+++(米色)380元/65g
能掩蓋紅血絲的米色,適合不均勻的膚色,輕薄力不增加后續底妝的壓力,新配方中突破性的透明質酸成分,增加肌膚水潤感。
納米無痕技術范文4
關鍵詞：基因組編輯；CRISPR-Cas9；豬；基因功能；網絡調控
中圖分類號：R34；S828 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2016）24-6510-07
最新的CRISPR（Clustered regularly interspaced short palindromic repeats）分類表將其描述為三大類型和多個亞型，結合生物化學與分子遺傳學方法揭示了不同CRISPR-Cas（CRISPR associated protein）類型的特征[1]，其中II型系統Cas9比其他更為簡便?；贑RISPR-Cas9系統的作用原理，研究人員模擬細菌的成熟crRNA和tracrRNA，在體外人工合成gRNA（guide RNA），同樣可以達到特異地切割靶標DNA，從而將該系統簡化成核酸酶Cas9和人工合成的sgRNA兩個組分，在靶標位點導致所期望的插入、刪除或替換，由此開創了新型基因編輯技術，這是該系統的“基因工程功能”。更進一步地，通過點突變得到缺乏核酸酶活性的Cas9突變體，命名為dCas9。突變的dCas9可在gRNA的引導下，實現與DNA結合，但不能切割DNA。而dCas9具有融合異源模塊的結構域，利用dCas9這3點特性，將其與一系列具有功能的異源模塊融合，實現不同研究目的：轉錄激活與抑制、探索未知基因及其調控元件的功能、全基因組掃描等，這是該系統的“基因調控功能”。不論是基因工程/基因調控，其工作過程是相同的：gRNA通過序列互補原則將核酸酶帶到基因組特定位點，使其與靶標結合。不過，基因工程與基因調控是利用Cas9蛋白的不同形式，包括野生型Cas9與人工突變的dCas9蛋白，以實現各自目的[2，3]。該技術能夠快速地構建遺傳改造的動物，使得在過去要花費數月或數年的工作現在只需幾周完成。CRISPR技術與PCR技術類似，正在給生物工程研究帶來革命性的改變，從各個方面影響著生命科學的發展[4]。目前基因組編輯CRISPR-Cas中也主要是應用Cas9系統，下面簡稱“Cas9系統”。
2013年初以來，Cas9系統的快速創新及其拓展應用，使其成為可替代ZFN和TALEN的第三代基因組編輯工具。2013年Science雜志將Cas9系統選為年度十大突破之一（亞軍）；2014年美國加州大學伯克利分校生物化學家Doudna博士和德國的Charpentier博士因此共同獲得了美國硅谷“科技突破獎”與“阿爾珀特獎”；2015年被Science雜志評選為年度十大突破之首；2016年具有小諾貝爾獎之稱的蓋爾德納國際獎授予了三位科學家：Doudna，Charpentier和麻省理工學院的張鋒三位博士。幾大公司看好Cas9系統的成果商業化前景。Editas Medicine、Intellia Therapeutics和CRISPR Therapeutics等公司已經收到數億美元的投資。例如，2015年比爾?蓋茨等大佬宣布為促進基因編輯技術的蓬勃發展，共投資1.2億美元參與基因編輯公司 Editas Medicine的B輪融資，Cas9先驅之一張鋒是該公司的聯合創始人。Editas Medicine計劃于2017年采用基因編輯療法對先天性黑蒙癥進行臨床試驗，這是一種罕見的視網膜疾病，基因突變可能導致眼睛中的感光細胞逐漸消失。據麻省理工W院Broad研究所網站最新報道，農業生物技術巨頭杜邦（DuPont）公司宣布對Caribou Sciences公司進行投資，且將獲得其專利在農作物使用的獨家授權。而Caribou Sciences是Cas9技術首創之一Doudna博士實驗室的附屬公司。目前，杜邦公司正在溫室中種植Cas9編輯的玉米、大豆、水稻和小麥，期望在5～10年內出售Cas9技術的產品。位于明尼蘇達州圣保羅的動物生物科技公司Recombinetics正在開發同類動物，包括無須抑制牛角生長的牛和不需要被的豬。2016年6月底，美國國立衛生研究院（NIH）顧問委員會批準了一項申請：利用Cas9系統強化依賴于患者T細胞（一種免疫細胞）的癌癥療法。由于其易用性和通用性，Cas9已經被世界各地的實驗室用來改寫基因組和重塑細胞，其在醫學和農業領域的潛在應用是無窮無盡的，它將開啟該行業新一波的產品浪潮和利益追逐。根據瑞士洛桑附近的咨詢機構IPStudies介紹，全球已有超過860項CRISPR專利，平均每天新增加一項專利。世界許多遺傳學家和生化學家普遍認為，Cas9系統可對所有的生物進行改造，這是一項可改變生命未來的偉大技術，當然，該技術也面臨許多倫理挑戰。
1 CRISPR-Cas9系統的拓展性應用研究
最初的Cas9只能實現剪切的基因工程功能（CRISPR1.0版本）。每次只能執行一種功能的dCas9是CRISPR2.0。現在研究人員將突變dCas9蛋白與一系列具有功能的異源模塊融合，成為能夠執行多重功能的CRISPR3.0。這種平臺能夠執行復雜的程序，適用于研究基因網絡機理和更深入探討復雜性狀/疾病[5]。
1.1 同時激活多基因表達/同時抑制多基因
Chavez等[2]設計了三方轉錄激活子（VP64-p65-Rta）融入dCas9，可探討一連串基因回路對生物過程（比如組織發育或疾病發生）的影響，也可以精確指導干細胞分化，生成再生醫學所需的移植器官。Konermann等[6]應用改造后的Cas9系統成功激活了十個基因，包括長非編碼RNA（LncRNA）。這些基因轉錄效率得到了兩倍以上的增長，該研究的意義在于，人們可以用這一技術在活細胞中有效啟動任何基因表達[7]。Cas9系統已被成功地用于同時干擾小鼠2個基因和敲除猴與蠶的兩個基因[8，9]。多位點編輯將促進多方面研究，包括上位效應的檢測和基因組中物理距離非常接近的多基因操作。Ma等[10]同時靶向基因家族的多成員（多至8個位點），突變率平均為85.4%。Zalatan等[11]應用架RNA（scaffold RNA，scRNA），成功在酵母中重新定向了一個復雜的多分支的代謝通路，其中一些基因被激活，另一些基因被抑制（CRISPRa/i）。多基因的組合控制可以幫助人們靈活操縱細胞中的通路，例如，改寫細胞命運或者設計代謝通路。Cheng等[5] 報道其CRISPR 3.0版本是Casilio，該系統可結合多個蛋白模塊，包括基因激活、基因抑制、染色體熒光標記、組蛋白乙酰轉移酶等，以實現不同的目的。
1.2 運用Cas9實施表觀遺傳學編輯
Kearns等[12]報道dCas9-組蛋白脫甲基酶LSD1 在鼠胚胎干細胞中靶向轉錄因子Oct4的遠端增強子，抑制Oct4轉錄并失去多能性。許多酶能以不同的機制催化DNA去甲基化，其中，TET（Ten-Eleven Translocation dioxygenase）雙加氧酶家族有3個成員：TET1、TET2和TET3，催化的5-甲基胞嘧啶氧化，可啟動DNA的去甲基化。Xu等[13]首先向傳統sgRNAs中插入兩個拷貝的噬菌體MS2 RNA元件，構建了修飾后的sgRNA2.0，這有利于Tet1催化結構域（TET-CD），與dCas9或MS2外殼蛋白融合，以靶向基因位點。結果證明，dCas9/sgRNA2.0指導的去甲基化系統能有效地將靶基因去甲基化，可顯著上調靶基因的轉錄，包括RANKL、MAGEB2或MMP2，而且這結果與它們啟動子中相鄰的CpG島的DNA去甲基化密切相關。類似的工作與結果也由Choudhury等[14]報道于模式抑癌基因BRCA1啟動子。這些結果不僅可以幫助我們理解在特定背景中DNA甲基化如何調節基因表達的機制，而且也使我們能夠控制基因表達與功能，并帶來潛在的臨床效益。表觀遺傳效應模塊的匯總詳見文獻[15]。
1.3 運用Cas9開展高通量全基因組遺傳學篩選
全基因組 CRISPR 篩選克服了傳統遺傳篩選的缺點，可應用于幾乎任何細胞系和任何遺傳背景下的篩選[16]。應用其進行遺傳篩選的基礎是蛋白Cas9修飾后的多種形式融合和sgRNA文庫。構建Cas9高通量篩選的文庫有兩種：陣列文庫和混合文庫。（1）細胞系中開展遺傳學篩選。Wong等[17]創建了Cas9與CombiGEM結合的平臺技術，可展望，該平臺有著廣泛的應用前景，加速系統鑒定控制人類疾病表型的遺傳組合，并轉化到新藥物組合的發現。（2）體內開展遺傳學篩選。Ma等[18]將活化誘導胞嘧啶核苷脫氨酶（AID）與dCas9融合成為dCas9-AIDx，在慢性粒細胞中靶標BCR-ABL，鑒定了賦予細胞伊馬替尼抗性的已知突變和新突變。Zhu等[19]開發了配對的gRNAs（pgRNAs），產生大片段缺失，應用這種高通量方法確定了51條功能性的lncRNAs，并驗證了其中的9個。該方法使科學家們能夠快速識別哺乳動物非編碼元件的功能。
1.4 光遺傳學加CRISPR調控基因表達與靶DNA切割
東京大學和杜克大學基于光誘導的CRY2（色素）和CIB1（蛋白），開發出相似的光遺傳學+CRISPR系統，其目的是利用光來開啟和關閉基因表達，同時賦予時空控制和可逆性[20-22]。
1.5 通過熒光標記的dCas9對DNA實施標記
Deng等[23]w外構建“dCas9/熒光素”復合物作為探針，可視化基因組位點完全沒有引起DNA變性，稱為Cas9介導的熒光原位雜交（CASFISH）。dCas9/sgRNA能夠在近著絲粒區、著絲粒、G富集端粒和編碼基因等位點快速而有效地進行重復DNA元件標記，也適用于初生組織切片的檢測。這種技術具有快速、有效、破壞性較少與成本低的特征，為基礎研究和遺傳學診斷增加了一種非常有潛力的工具。
1.6 CRISPR-Cas9系統同時實現基因工程和基因調控的雙重功能
Kiani等[24]開發了Cas9系統一個新策略，能夠同時實現基因組工程和基因調控的雙重功能。其使用經過改造的gRNA和Cas9蛋白，在切割特定基因的同時調控其他基因的表達。這一技術大大增強了基因組編輯和基因調控的功能性，幫助我們進一步操縱細胞，以揭示重要生命過程背后的復雜機理，比如，癌癥耐藥性和干細胞分化，或者幫我們設計更高級的人工基因回路。更進一步地，雙重功能Cas9可以促進基因工程菌株（例如大腸桿菌）大規模生產化合物和燃料。
1.7 多順反子基因
Xie等[25]將tRNA與gRNA結合起來，開發合成了一個多順反子基因，以提高Cas9系統的靶向能力和多重編輯效率，能夠在水稻中高效實現多重基因組編輯和染色體片段刪除（可達到100%）。Qi等[26]設計多個tRNA-gRNA單元，在玉米中的研究表明，該系統不僅增加靶向位點數目，也能更有效和準確地缺失染色體片段，這對基因功能的完全消除特別是lncRNAs的研究很重要。同時還表明，在一個表達盒中可容納多達四個tRNA-gRNA單元，用來修飾同一基因家族中的不同成員或同一代謝途徑中的不同調控基因。
1.8 Cas9系統應用于多能干細胞
誘導型多能干細胞（induced pluripotent stem cells，iPSCs）可無限地自我更新，而不會喪失分化成所有細胞類型的能力，且繞過了免疫排斥的障礙。iPSCs在再生醫學中具有良好的前景，是用于致病突變原位校正的一種理想細胞群。將CRISPR應用到iPSCs中為糾正遺傳缺陷疾病開辟了一條新途徑，因為iPSCs很難采用傳統的基因打靶策略進行操作，尤其是蛋白質介導的基因組編輯方法[27-30]。
1.9 染色體大片段和lncRNA編輯
Shechner等[31]介紹了以CRISPR-Cas9為基礎的基因組靶向技術展示：CRISPR-Display（CRISP-Disp），將gRNA-ncRNA融合，能將大片段非編碼RNA帶到特定DNA位點，同時不影響dCas9的功能。CRISP-Disp系統可容納約4.8 kb的RNA結構域，這相當于天然lncRNA的長度。除了lncRNA以外，研究人員還對各種天然和人工非編碼RNA進行了測試，表明gRNA可以偶聯多個非編碼RNA結構域，這些結構域可同時且獨立起作用。CRISP-Disp可用來解決如下問題：一個lncRN段是如何調控基因表達的？是這個片段的轉錄本在起作用，還是它本身的序列在起作用？揭示lncRNA在表觀遺傳學修飾、染色質重塑或者轉錄調控中做出的貢獻。該系統除了研究非編碼RNA機理外，對合成生物學來說，CRISP-Disp的靈活性、模塊化和多重化特性是很有吸引力的。用CRISP-Disp招募RNA-蛋白復合體到特定位點，可以設計出復雜的基因調控回路。Yoshimi等[32]開發出了兩種基因改造新技術：lsODN（long single-stranded oligodeoxynucleotide）和2H2OP（Two-hit two-oligo with plasmid）），來完成相對較長的DN段，如GFP（Green fluorescent protein）序列的靶向基因敲入，提高基因編輯的效率。第一種方法是利用lsODNs作為靶向供體。第二種方法是共同注射兩個gRNAs作為“剪刀”切割基因組DNA和供體質粒DNA中的靶位點，兩個短ssODNs作為“漿糊”連接切割位點的末端。利用開發出的兩種基因改造方法，該研究小組成功實現了高效、精確敲入GFP基因，導入了近200 kb的大片段基因組區域，這是采取傳統方法不可能做到的。并用人源基因替代了大鼠基因，構建出了基因人源化的動物。這兩種基因敲入方法將會提高遺傳工程改造的效率。研究人員高度期待這些遺傳工程生物將用于藥物研發、轉化和再生醫學等廣泛的研究領域。
1.10 研究蛋白質工程
Hess等[33]開發了一種稱為重利用體細胞超突變的原位蛋白質工程新技術，命名為CRISPR-X。研究人員利用dCas9召集胞嘧啶氨酶（AID）變異體，其攜帶有經過MS2修飾的sgRNAs，能特異地誘變內源靶標，限制脫靶傷害。它能產生不同點突變的多樣文庫，同時靶向多個基因組位點，結果從中找到了引發Bortezomib耐藥性的已知和新突變。還利用超活化AID變異體，同時誘變了轉錄起始位點上游和下游的位點。這些結果均表明 CRISPR-X是一種強大的工具，能幫助科學家們創建復雜的原始遺傳突變文庫，分析完善蛋白質工程。
2 CRISPR-Cas9系統在豬中的研究進展
Cas9系統出現之前，已經有文獻報道了其他技術的基因組編輯豬[34]，現在利用Cas9系統的報道層出不窮。這里重點綜述Cas9系統在豬研究中的進展，因為豬不僅提供肉食，同時其在生理學、免疫學和基因組學上與人高度相似，器官大小也比嚙齒動物有優勢。
2.1 功能基因研究
Su等[35]合成sgRNA時用豬U6啟動子代替人U6啟動子，獲得更佳的打靶效率；Wang等[36]顯微注射Cas9 mRNA和sgRNA至豬原核期胚胎，篩選出打靶效率最高的sgRNA；He等[37]將攜帶GFP和紅色熒光蛋白（RFP）的Cas9質粒先后轉染豬胎兒成纖維細胞，通過雙重熒光篩選提高打靶成功效率；吳金青等[38]應用SSA（Single-strand annealing）報告載體，使Cas9系統對豬胎兒成纖維細胞的打靶效率提高5倍左右。八聚體結合轉錄因子4（OCT4）是參與調控胚胎干細胞自我更新和維持其全能性的重要轉錄因子之一。Kwon等[39]研究表明Cas9系統可針對孤雌胚胎實現基因OCT4的敲除和敲入。Lai等[40]構建了一個豬OCT4的報告系統，其內源性OCT4啟動子可直接控制RFP，因此熒光能準確地顯示內源性OCT4的激活，并獲得了在內源性OCT4基因啟動子下游具有tdTomato基因敲入的豬胎兒成纖維細胞（PFF）系。Cas9系統編輯的PFFs被用作體細胞核移植（SCNT）的供體細胞，在SCNT胎兒的囊胚和生殖嵴中檢測到了強大的RFP表達，并制備了兩頭有生命力的基因編輯豬。
2.2 提高生產性能
肌肉生長抑制素（Myostatin，MSTN）基因對肌肉生長發育具有重要調控作用。Crispo等[41]、Cyranoski[42]、Wang等[43]和張冬杰等[44]利用Cas9系統獲得了MSTN基因的雙等位基因敲除豬。湖北省農業科學院畜牧獸醫研究所Bi等[45]應用Cas9系統制備了無選擇標記的MSTN基因敲除克隆豬。首先，利用Cas9系統介導的同源重組敲除豬初生細胞中MSTN的一個等位基因。然后，用Cre重組酶來切除選擇標記基因，有效率為82.7%。免疫印跡顯示，克隆豬MSTN大約有50%的降低，同時肌原性基因在肌肉中的表達有所增加。組織學顯示，肌纖維數量增加，但是肌纖維大小保持不變。超聲波檢測顯示，最長肌大小增加，背部脂肪厚度降低。該研究提供了一種可靠的途徑用于家畜良種生產，也提出了一種策略來減少潛在的生物學風險。中國農業科學院北京畜牧獸醫研究所的李奎教授領導研究團隊，首次利用Cas9系統獲得了位點特異性的基因敲入豬模型[46]，得到一個新的基因組“安全港”位點：pH11位點，通過Cas9系統分別在細胞、胚胎和動物體內的該位點插入了大于9 kb的基因片段，實現了穩定高效的基因表達。
分化簇 163（Cluster of differentiation 163，CD163）被認為是豬繁殖與呼吸綜合征病毒（PRRSV）的受體基因，分化簇1D（CD1D）是一類抗原遞呈因子。Whitworth等[47]利用Cas9系統分別敲除CD163和CD1D的基因編輯豬；經過藍耳病毒株攻毒后CD163雙等位基因敲除豬未表現出臨床癥狀，具有良好的抗藍耳病能力。中國農業科學院北京畜牧獸醫研究所利用Cas9系統進行抗PRRSV和抗豬傳染性胃腸炎（PEDV）的CD163和CD13雙基因編輯豬的制備，正在開展相關驗證鑒定工作。這些研究在養豬業引起了高度關注。
2.3 研究人類疾病的動物模型
豬是人類醫學研究極佳的動物模型。vWF（von Willebrand factor）的基因是引起人血管性血友病的主因。Hai等[48]應用Cas9系統靶向豬vWF外顯子，目的基因插入/缺失突變效率達到 68.8%（11/16）；單等位基因突變和雙等位基因突變的vWF抗原水平均極顯著低于野生型個體（P
再如，去除所有主要淋巴細胞的豬是研究人X-染色體連鎖的嚴重聯合免疫缺陷（SCID）患者病毒感染和免疫受損發病機理的理想動物模型。破壞IL2RG的豬比嚙齒動物敲除IL2RG模型更接近于SCID表型。Lei等[50]利用Cas9系統快速生成雙基因RAG2/IL2RG敲除豬，成功建立了人諾如病毒（HuNoV）感染的免疫缺陷的豬模型，因為RAG2/IL2RG缺陷豬缺乏B細胞、T細胞和自然殺傷細胞。Yu等[51]成功地通過Cas9系統在滇南小型豬產生人類DMD疾病動物模型。
2.4 醫學生物反應器
豬除了作為人類疾病模型外，也可作為生產人類需要的產品反應器。例如，賴良學課題組利用精確Cas9系統對豬胰島素基因進行了無痕定點修飾，3頭可以分泌人胰島素的克隆豬，其中2頭完全分泌人胰島素，而不含豬胰島素；另一頭既分泌人胰島素也分泌豬胰島素。牛泌乳量大、乳汁活性蛋白的產量高，因此其乳腺是理想的生物反應器，Peng等[52]通過CRISPR技術建立了人血清白蛋白的生物生產器。人成纖維細胞生長因子2（hFGF2）是一種多功能生長因子，在促進組織生長發育、新血管形成和參與組織修復過程中起著重要的作用，但其在人體內的表達量較低。Jeong等[53]借助Cas9系統將該基因導入到牛成纖維細胞的β-casein基因內含子中，為獲得表達hFGF2蛋白的基因編輯牛奠定了基礎。谷氨酸棒桿菌是工程化應用傳統方法（同源重組）批量生產氨基酸的重要生物機體。Cleto等[54]采用CRISPRi降低該菌的基因PGI和PCK的表達高達98%，降低基因PYK高達97%，從而大大增強了L-賴氨酸和L-谷氨酸產品滴度的比率。這種新谷氨酸代謝工程方法只需要3 d時間，表明CRISPRi可用于快速且有效地代謝途徑改造，而不需要對基因缺失或突變。
2.5 異種器官移植
據不完全統計，全世界大概有200萬人需要器官移植，而器官捐獻的數量遠遠低于需求數量[55]。尤其是老齡化和慢性疾病的多發，更加導致供體器官嚴重不足。豬被認為是人體異種器官來源的首選動物，因為豬與其他哺乳動物比較，無論從器官大小、生理結構和基因組相似度都更接近于人，因此，上世紀90年代應用豬生產人類器官項目一度在全球受到追捧，但受阻于豬內源性逆轉錄病毒（Porcine endogenous retrovi-ruses，PERVs）造成的重大醫療風險。哈佛大學利用Cas9系統對豬腎細胞系PK15中所有62個拷貝的PERV pol（多聚酶）基因敲除，使內源性病毒傳遞給人的風險降低了1 000倍以上[56]。該研究掃除了豬器官用于人體移植的安全障礙，為全世界亟需器官移植的上百萬病人帶來希望，也重新燃起了大家對異種器官移植的信心。
免疫排斥反應是豬器官移植另一障礙。α-1，3-半乳糖基轉移酶（GGTA1）基因與異種器官移植后的超急性免疫排斥反應顯著相關，Sato等[57]在豬胎兒成纖維細胞中通過Cas9系統獲得了GGTA1雙等位基因敲除的細胞系。Li等[58]針對3個與免疫排斥相關的基因GGTA1、胞苷單磷酸N-乙酰神經氨酸羥化酶（CMAH）和異紅細胞糖苷酯合成酶（iGb3S）基因，共轉染靶向這2個或3個基因的CRISPR/Cas9-PX330構質粒，最終獲得了敲除單個基因及同時敲除2個或3個基因的胎兒或仔豬。利用類似的方法，Estrada等[59]對豬肝臟細胞分別敲除GGTA1、GGTA1/CMAH和GGTA1/CMAH/β4GalNT2（β-1， 4-N-乙酰半乳糖胺基轉移酶2）基因。
3 CRISPR-Cas9系統的前景
CRISPR-Cas9系統在如此短的時間內極大地推動了生物學的各個方面研究，例如基因功能解析、基因治療、人類疾病動物模型、生物生產反應器和農業動植物優質遺傳育種。該技術生成的產品，定向改變但不含外源基因/片段，在驗證其安全性的基礎上，這種經過“基因組編輯”的產品更容易被消費者接受。理論上它不會帶來健康或環境方面的風險，但是否應該受到轉基因相關法律的約束，美國和歐盟的態度不一致。作為新興的基因組編輯技術，有必要進一步完善其特異性、脫靶效應和輸送方法，以及如何更好地激活細胞自身的同源重組，并探索新型基因組編輯技術及其應用，例如，新CRISPR-Cpfl系統[60]、新型NgAgo系統[61]；無序列限制的DNA編輯新工具[62]、納米顆粒技術[63]等等。
r業動植物改良從來都是一個漫長而繁瑣的過程，而如今，科學家因為有了CRISPR技術能夠快速而輕松地實現。近兩年，許多實驗室將這種工具應用在動植物和微生物中，以期獲得更高產、更適應環境和更優質的品種。有理由相信，CRISPR-Cas9系統將更好的服務于人類，包括動植物育種。
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