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【摘要】
目的 探討癲癇大鼠放射治療中γ-氨基丁酸(GABA)及其受體的作用機制并選擇合理放射劑量。方法 利用慢性點燃癲癇大鼠對照組、放射1組、放射3組進行0、24、6Gy的X線放射，對放射2組、放射4組和放射5組行12Gy的X線放射，每組10只，對照組和放射1組、放射3組于放射后1h斷頭取腦，放射4組于放射后1天、放射5組于放射后1周進行斷頭取腦，并觀察放射5組其放射后癲癇發作情況，用氨基酸分析儀測定各組癲癇大鼠額葉皮層內的GABA含量變化，利用免疫組織化學方法觀察抗GABAA受體陽性率。結果 放射5組于照射后1周內癲癇在鼠未出現誘發癲癇發作。放射1組的GABA含量為(254.16±44.68)ng，GABAA受體陽性率為(39.56±7.22)%，均明顯高于對照組，12Gy照射后1h、24h、1周后均較對照組間GABA含量高，其中以24h最為明顯，分別為(252.09±33.89)ng，(348.73±56.00)ng和(258.02±62.95)ng?？笹ABAA受體陽性率在照射后1周內基本穩定于較高水平。結論 放射治療癲癇主要是通過發生快速而持續的GABA與GABAA受體變化發生作用，癲癇大鼠接受12Gy的放射治療較為合理。
【關鍵詞】 γ氨基丁酸 受體 GABA-A 癲癇 大鼠 X線
Abstract: Objective To investigate the role of GABA and GABAA receptor play in radiotherapy of epileptic rat， and to look for the appropriate dose of radiotherapy for epilepsy. Methods A chronic pentylenetetrazole chemical kindling rat model of epilepsy was reproduced， and the rats were pided for control group and radio groups 1 to 5 with 10 rats in each group. Control group， groups 1 and 3 were given 0， 24， or 6Gy X ray irradiation to the brain in turns， and groups 2， 4 and 5 were given 12Gy X ray irradiation， the rats in control group， groups 1， 2， and 3 were killed 1 hour， and group 4 was killed on day 1， and group 5 was killed in 1 week after radiotherapy. Content of GABA was measured by amino acid analyzer， and GABAA receptor changes were assessed by immunohistochemical staining in frontal lobe of the brain of rats in all groups. Seizure of rat in group 5 were recorded in 1 hour， 24 hours or 1 week after irradiation. Results The epileptic rats in group 5 didn't suffer from seizure after radiotherapy. In group 1， the quantity of GABA was (254.16±44.68)ng，and positive rate of GABAA receptor was (39.56±7.22)%， which were higher than those in control group， the content of GABA in rats received 12Gy X-ray radiotherapy were (252.09±33.89)ng， (348.73±56.00)ng and (258.02±62.95)ng in 1hour， 1day and 1 week after irradiation， and significant higher than that in control group， also， the positive rate of GABAA R in those rats were significant higher than that in control group. Conclusions The efficacy of radiotherapy for epileptic rat might be attributable to rapid and sustained change in GABA and GABAA receptors， and 12Gy appeared to be the appropriate irradiation dose for epileptic rat.
Key words: GABA; receptor，GABA-A; epilepsy; rats; X-rays
臨床發現放射治療對癲癇發作可能有抑制作用，但其作用機制尚不明確。在癲癇的發作與治療機制中γ氨基丁酸(gamma-aminobutyric acid，GABA)占有主導地位，本研究旨在通過觀察X線照射對大鼠皮層內GABA和GABA A型受體(GABA A type receptor，GABAAR)α1亞單位含量的影響，探討放射治療癲癇的有效性及其可能的作用途徑。
1 資料與方法
1.1 實驗動物與分組
清潔級SD (Sprague Dawley)大鼠60只（本院實驗動物中心提供），6～7周齡，體重(200±10)g。第一次實驗40只，隨機分為對照組、放射1組、放射2組、放射3組，第二次實驗在前次實驗基礎上選擇合理的放射劑量對其余20只大鼠進行放射，隨機分為放射4組、放射5組。
1.2 儀器與試劑
戊四氮（pentetrazole， PTZ）、兔抗GABAAR α1亞單位抗體（G4416）購自美國Sigma公司、液體DAB酶顯色試劑盒和酶標抗兔多聚復合物購自福建邁清公司，混合氨基酸標準液購自日本味之素公司、日立#2622-SC樹脂氨基酸分析柱、日立L-8500氨基酸分析儀。
1.3 癲癇模型建立［1］
所有大鼠均每日上午9：00～10：00時給予PTZ 35mg/kg腹腔注射，連續1個月，注射后觀察20min，癲癇發作分級標準參照Racine的方法。放射前所有大鼠及放射4、5組取樣前1h均進行腹腔注射PTZ，放射5組在放射治療后第4天再進行腹腔注射PTZ 1次。
1.4 放射治療
用氯胺酮與速眠新（2∶1）混合液腹腔注射（0.8mg/kg）對所有大鼠進行麻醉，麻醉后1h內利用垂直X線對大鼠頭部進行放射，放射1組劑量為24Gy，放射2、4、5組均為12Gy，放射3組劑量為6Gy，對照組劑量為0Gy。
1.5 組織標本采集［2］
1～3組照射后1h內進行斷頭取腦，放射4組照射后24h進行取腦，放射5組照射后1周進行斷頭取腦，取出大腦后用濾紙吸去血液，腦組織置于膠片包裹的冰面上。
1.6 組織勻漿和GABA含量分析
取下左側額葉組織150mg放入勻漿管中并加入1.5ml磺基水楊酸，勻漿管置于0℃水中利用超聲勻漿器破碎，在4℃低溫高速離心機（1 5000r/min）離心15min，取上清液0.5ml，置于-81℃低溫冰箱保存，1周內完成氨基酸含量分析。將樣品融化后，用針頭式濾器（0.45μl）過濾樣品，在日立氨基酸分析儀上進行GABA測定，進樣量為10μl，緩沖液流速0.4ml/min。
1.7 病理切片和免疫組織化學分析
取0.5cm×0.5cm大小右側額葉組織，石臘包埋4μm膠片(APES+丙酮)切片，常規脫蠟至水，0.3%過氧化氫溶液封閉處理10min，PBS溶液沖洗3次，微波抗原熱修復10min，PBS液沖洗3次。然后分別加入一抗抗GABAAR α1亞單位抗體（1∶200稀釋），室溫1h 孵育，PBS液沖洗3次，然后加入二抗酶標抗兔多聚復合物30min，PBS液沖3次，DAB加過氧化氫混合液顯色，5min后水沖洗，蘇木素復染細胞核，酒精梯度脫水，二甲苯透明后中型樹膠封片，鏡檢分析。陽性細胞率為在10個高倍鏡（10×40倍）時同一視野內陽性細胞數/同類細胞總數。
1.8 統計學分析
用SPSS 10.0統計軟件進行統計分析，測定數據用（±s）表示，樣本間按成組資料進行方差分析（F檢驗），然后進行Q檢驗組間比較。
2 結果
2.1 癲癇模型的建立及生存情況
大鼠出現Racine 3級以上發作在開始注射后的7～25天開始，至1個月時所有大鼠均在停藥3天后重新注射PTZ可以出現3級以上發作，主要表現為雙上肢陣攣、坐起、全身抽搐、跳起陣攣等癥狀。放射4、5組X線治療大鼠在麻醉后3h恢復正?；顒优c飲食，無死亡，觀察過程中未記錄到癲癇發作情況。
2.2 不同劑量X線放射后GABA含量的測定
對氨基酸分析試測定放射1、2、3組與對照組間的GABA含量變化情況見表1。其中放射1、2組較對照組GABA含量高差異均有顯著性。表1 不同放射劑量GABA含量及抗GABAARα1亞單位陽性率(略)
2.3 放射后不同時間內的氨基酸含量變化
氨基酸分析試測定12Gy放射后1h、1天、1周后與對照組間的氨基酸含量變化。其中放射各組均較對照組GABA含量高、抗GABAARα1亞單位陽性率高，且差異均有顯著性，以放射后1天（4組）最為明顯。見表2。表2 放射后不同時間GABA含量及抗GABAARα1亞單位陽性率 (略)
2.4 免疫組織化學結果
陽性細胞時GABAARα1亞單位存在于神經膠質細胞內，表現為核呈深棕色染色。陽性細胞率見表1，表2。
3 討論
對腦腫瘤、血管畸形等疾病引起的癥狀性癲癇的放射治療后發現癲癇癥狀有不同程度的好轉，從而提示放射治療對癲癇發作可能有抑制作用。Regis［3］用γ刀治療16例顳葉癲癇的患者，隨訪1年中81%達到完全緩解，且除1例出現無癥狀性視野缺損外無明顯并發癥，但Srikijvilaikul［4］報道5例顳葉癲癇患者利用Regis同樣的方法進行20Gy放射治療，2例術后1年內死亡，另外3例均無效。所以放療治療癲癇的有效性及其可能的作用機制有待進一步研究。
GABA能神經元占大腦神經元的40%，當GABA含量下降超過40%時就可能出現癲癇發作?，F有的抗癇藥物也多是通過GABA產生作用，如苯二氮艸卓、苯巴比妥、丙戊酸是通過增加GABA的抑制，而新的抗癇藥物的研究方面更加突出GABA的作用［5］，如氨己烯酸、加巴噴啶則、噻加賓等。GABA主要的作用是通過與突觸部位的GABA受體結合而產生中樞興奮的抑制作用，癲癇發作除了與GABA含量有關外還與GABA受體有關。GABA-R有多種類型［6～8］，其中主要包括A、B、C三種類型，Nishimura［6］等在電刺激癲癇持續狀態和化學點燃的大鼠動物模型中都發現GABAAR的早期和持續的下降(43%～78%)，而B受體卻有不同程度的升高，說明變化的最主要的是A受體。在A型受體中，又有很多的亞單位組成，Macdonald等［7］發現原發性強直—痙攣性癲癇與GABAAR的基因突變有關，而且不同亞單位的突變與不同的發作類型有明顯的相關性。Ni等［8］發現在癲癇大鼠中不論是單次發作還是多次發作組中均有GABAAR α1亞單位的減少。本研究也選用了α1亞單位。
所以如果X線放射的方法使神經元中的GABA或者GABAARα1亞單位含量增加都可能產生抗癇作用。本研究顯示癲癇大鼠在接受12～24Gy放射治療后表現為GABA和GABAARα1亞單位含量的增加，而在6Gy的放射并不引起GABA的明顯變化，說明在12～24Gy的X線放射都可能產生抗癇作用。長期效果的觀察中發現GABA或者GABAARα1亞單位含量增加都可以在放射后24h達到高峰，并維持在較高水平達到1周以上，特別是GABAARα1亞單位在放射后1周內基本無明顯的含量變化。而通過動物的癲癇發作情況也證實在治療后癲癇未再見有自發或誘發的癲癇發作，與GABA和GABAARα1亞單位的增加結果相一致，說明這兩個因素可能參與了X線照射后產生的抗癇作用，而且在早期就產生抗癇作用且維持時間較長。Ananeva等［9］認為低劑量照射后GABA的受體結構變化可能是影響突觸電活動的主要因素。
放射治療的劑量存在比較大的爭議，尚不能確定多大的放射劑量對腦組織產生影響可以消除或減少癲癇的發作。Sun［10］在大鼠的海馬癲癇模型上進行10、40Gy的放射治療，發現40Gy組在放電頻率和持續時間上都明顯減少，而10Gy組效果不良。低劑量對腦組織無明顯的細胞學的改變，而大劑量可以達到150Gy，此時則可引起明顯的組織壞死和腦水腫，在癲癇治療中應選擇一個最低有效劑量，達到治療的同時降低或避免腦組織損害。本研究中選擇了6、12、24Gy三組劑量，發現后兩組病例較對照組有明顯的GABA和GABAARα1亞單位的增多，而兩組間差異無顯著性，且12Gy放射組中的這兩者的增多也可能維持較長時間，所以12Gy應當是一個較為合理的癲癇治療劑量，但對于大鼠治療劑量與人類劑量間的關系尚待進一步研究。
參考文獻
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光棍節，光棍節，還真是到了那天就光棍??！我無奈的抿了抿嘴。我看不透我的內心，我不知道我喜不喜歡他，但是，真的分了之后就感覺挺遺憾的吧。又成了一個人。如果當時能忍忍，現在何必這么痛苦。
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后來，我見到那個混頭了，很吊的樣子，帶著學妹，身后跟著幾個兄弟，那男的很帥，個子還比學妹要高一些。學妹看到我自然一笑。后來我們就不怎么聯系了，學妹面臨畢業季，我面臨學業抉擇。
再后來，聽說他們兩個人分手了。這在我的意料之中。學妹上q告訴我，那個男的提的分手，他們好了37天，學妹大哭了一場，我特地到她家去安慰她。
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后來要和冬雪找對象的那個男孩就去了冬雪的老家，養育冬雪成人的爸爸媽媽和冬雪表明了想法，那個男孩也同意，就這樣就算是把婚事定下來了。決定等秋后冬雪去那男孩家。冬雪太小，那時根本不懂考慮以后，和那男孩也沒有怎么相處，就這樣的把終身大事決定了。這一草率決定導致冬雪一生的痛苦。那個男孩在冬雪老家住了幾天，準備回家了，冬雪送他去車站的時候，那男孩給了冬雪二斤糧票，五元錢，冬雪高興的收下了。
那男孩回去以后，冬雪下地也不受氣了，村里人都說冬雪和她親生媽媽認了，也有了婆家了。人都羨慕不已，對冬雪一改以前的做法，做活也很照顧，也不提冬雪是地富子弟了。
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我媽咪準得說:“這要我閨女,敢這么丟人現眼,我就往派出所銷戶去。”這話是我在心里揣摩的,我媽咪這人渾身錚錚鐵骨,女八路一樣,看不慣一切歪風邪氣。
半天,我問身旁邊嗑瓜子邊看電視的媽咪:“以您這老紅娘的眼光,今天有能成的嗎?”媽咪說:“這不就是娛樂節目嗎?有正經人嗎?人家根本不缺對象,來玩兒的。”
透徹!仔細看看那些名媛,光說長相,層次就挺多樣的,有一女的滿臉橫肉一絲笑容沒有,身上還裹著套美聲唱法歌唱家的行頭。也有長得漂亮的,當眾表示不圖物質就要感情,說話都是王菲版“我愿意為你”的味兒,軟綿綿的調調,上來男的都選擇她,但這閨女誰都看不上,依然場場屹立于節目之中。傻子都能看出這就是個托兒啊,黑婚介的慣用招數,可一旦上了電視,打110都沒用。
我分析了一下,來參加這節目找對象的,都是剛從錢眼兒里撈上來的,估計回去全能拿個精算師資格證。
我那天看見一小伙有來砸場子的苗頭,滿嘴小品腔兒,穿得倒西裝革履。他找對象有仨條件,其他兩條我忘了,因為相比火爆的這條,那兩個條件太普通了。那男的說,女的必須年薪在兩百萬到三百萬之間。這時候,眾多女賓搶答,有涵養的還舉手示意主持人自己有話要說。把情緒的東西剔除,罵大街的語言不算,總結成為一句話:“有病吧你?”是夠有病的,跑這趟雷來了,就算真有這想法,一般騙子也不直接說,法制頻道不總給咱提醒嗎?
在這節目里倍兒有名的一女的說:“寧愿坐在寶馬里哭,也不愿坐在自行車上笑?！碧寡宰约合矚g奔馳和寶馬,交過的男友七八個僅是零頭,時不時就對看不順眼的男嘉賓來句“聽你說話,我就覺得你欠抽”,還有女的說:“我要選擇的是男人中的精英,精英中的人才,人才中的王子”。人家要豪宅,要求男朋友月薪必須二十萬,甚至握手的價錢也得二十萬。
我媽看得倍兒美,最后用簡潔語言點評了一下所有女嘉賓:“這些人,怎么有點神似坐臺小姐?節目應該歸掃黃辦管管?！?/p>
從這一檔婚托兒當道,假戲真做的紅娘節目看,現代人的價值觀可見一斑。女的是滿腦子帥哥、寶馬、豪宅、富二代,她們巴不得不努力,不奮斗,一切的一切最好都由男人提供,等著吃現成的。男的呢,雖然不那么裸,但眼睛里也沒那么純凈,希望女的也有錢,要吃要喝要浪漫要美貌,還得多要幾個孩子,當眾藐視計劃生育國策。
節目結束的時候,我媽咪邊倒瓜子皮兒邊說:“這些人也成年了,怎么不知道尊重人呢?”
關燈,睡覺。
【原載2010年第6期《報
找對象吧范文6
感覺最后我們兩個人都到過彼此曾經有過的生活都在曾經參與了我們的生活，都在曾經對我們的時光造成了一定的影響，在那一段時光里面留下了彼此的腳印。所以現在一定是抹不掉過去對自己的影響了，包括以后可能時間會淡化我們對彼此的感情，我們對現在這一份失去的難過?？墒钱敃r對方來過我們的生活中，這也是對我們以后的一些選擇造成了一定的影響。
我想一定會的一定就是這樣子的，就像自己看那些文章，雖然最后他們都從失去前任的難過中走出來了，可是他們終究還是會把前任和現任做對比，自己有在想，如果我遇到的不是行政那樣子的人，那現在自己看到的那些文章，可能他們所選擇的對象就不是那樣子的了，畢竟總是會不自覺的就拿兩個人做對比吧，那多少也是因為前面來過的那一個人，對自己現在的一些選擇造成了一定的影響。
我覺得對我的話肯定也是會的，畢竟自己現在都會想著，以后找對象的時候就不要找，像他這樣子的了，就不要找這種自己很喜歡，但是卻不夠愛自己的人，會覺得以后在感情中就不要刻意的去隱藏自己的情緒，要找那些心思細膩的人，可以感受到我情緒的人，可以在我提早說晚安的時候，請問起我究竟是怎么了？多給一些心理上的陪伴吧。
感覺挺悲哀的，那一段失敗的經歷最后成了抹不掉的記憶，成了對我們人生中抹不掉的影響。希望最后我們所做出的選擇都沒有錯吧，都可以讓我們開開心心快快樂樂的，雖然說有的時候自己會覺得他要是沒有最終跟我在一起，他怎么可以開開心心快快樂樂的呢？他會真的喜歡另一個人嗎？他會真的把完全全部的溫柔都放到另一個人身上嗎？
