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2、多去參加團體活動。孤獨的原因很多時候是缺乏朋友，不放我們就積極的參加一些集體活動，這樣容易結交很多朋友。朋友多了也就不會那么孤獨了，每天與朋友聯系，一起玩耍，一起聊天。這些都是容易消除孤獨的。
3、看看書打打游戲。孤獨的時候多看看書，打打游戲，做這些會讓我們轉移注意力，把注意力集中到所做的事情上，這樣也就容易忘記孤獨了。打游戲是一種不錯的方式，當然也可以聽聽歌，看看電影，電視劇等。
4、不要憂慮。很多時候的孤獨是來自憂慮，生活中我們要避免憂慮，憂慮會讓人不開心，感到生活的迷茫，孤獨也就隨之產生了。避免憂慮就要學會樂觀的生活態度。平時多去學習，培養樂觀的生活態度。
5、成家立業。很多時候孤獨感來自于單身太久了，而且對于事業也是一塌糊涂。這就需要依靠自己來解決了。成家立業，需要我們付出很多努力才能夠實現，所以，不要偷懶，不要給自己找借口，努力讓自己變得強大，擁有了屬于自己的事業，家庭也會變得美滿的。
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??小故事大道理??里面講的雖然都是一些小故事，但是這可比講1小時的“攻心為上”的大道理更重要。因為它里面不但有成功篇、心靈篇、幸福篇等多類故事，而且故事里還包含著意味深長的哲理。
書中有這樣的一個故事：
有一個自以為是的青年人，畢業了以后一直找不到工作。他覺得自己懷才不遇，對社會感到十分失望。痛苦絕望之下，他來到了大海，打算用此來了解自己年輕的生命。
正巧這時，有一個老人來到了這里。老人問他為什么要走上絕路。他說：“我自己不能得到別人和社會的承認，沒有人欣賞并且重用我，我的人生已經沒希望了?！?/p>
老人從地上撿起了一粒沙子，然后把它扔到地上，對他說：“把這粒沙子撿起來?！?/p>
“這根本不可能的！”年輕人大聲地說。
老人沒有說話，只是笑了一笑，接著從口袋里掏出一顆晶瑩剔透的珍珠，也把它扔到地上，又對它說：“你能把它撿起來嗎？”
“這當然可以！”
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這是那樣一群人，為了一份屬于自己的凈土，甘愿放棄物質上的滿足，這就是世世代代生活在特里斯坦？達庫尼亞島上的一群樸實勤勞的人們。在這里，沒有高科技物質的需求，也只是一個相對于其他城市落后的島嶼，但是，一群生活在哪兒的所有人們都一直躺在這一個大家庭的懷抱中，他們自食其力，勤勞，也只是依戀著這座“世界上最孤獨的小島”，因為這里是他們永遠的家。
在這里，似乎一切都是溫暖的，無論生活再艱苦，他們始終愛著這座小島，愛著他們那溫馨的家。
讀罷，我恍惚間掉下幾滴淚珠，大概是我想家了吧！我的家鄉離這里很遠，但是我和家緊緊地系在一起，就像鐵鎖和鐵鏈般那樣。我很小就離家了，但是我一直放不下屬于我自己的家，畢竟他曾經給予過我溫暖的懷抱。因為有家，我幸福。它是世上最富有的王國，最溫馨的地方。家，對于我們所有人來說，都是一個溫馨的字眼。而自從有了家這個詞，也就有了相應的漂泊，漂泊的終點卻是找到自己心靈的樂土??回家。的確，難怪有人說，萍水相逢，盡是他鄉之客。“回首家山三千里，望斷南天無雁飛”明確表達了多少人的思鄉之情。李白再飄逸，也會低頭思故鄉；杜甫再無私，也知道家書抵萬金；辛棄疾半夜里挑燈看劍，沙場秋點兵，也只是想光彩地回到幸福的家；李后主有恰是一江春水向東流的愁思，也只是對南唐故土一席安馨的懷念封建時代的文人們或許是因為前途，或許是因為戰亂，或許是因為其他的原因，常常漂泊在崇山峻嶺里，斜陽古道下，但當他們看到城市里的萬家燈火與大江上的零星漁光，或者看到蕪山野嶺的數縷輕煙，又怎么能不憶起美好的家，涌出萬般感慨呢？日暮鄉關何處是，煙波江上使人愁！
為何，我們不去珍惜自己的家呢？我們滿腔熱血，可是家依然是我們那份牽掛啊。不變的，是戀家情，我們無論在哪里，都不能忘記家??！不變的愛戀，是留給家的；永遠的眷戀，是屬于家的。我感同身受，離家如此之久，是得回家看看了。
在我看來，“家”是一種與生俱來的情結，在平常時無從察覺，到陌生處全涌上心頭。家，故鄉，是一個人一輩子無法消去的烙印。長大了，總要離家這時的家的感覺再不是媽媽不勝其煩的嘮叨，而升華成一種記憶，一種氣味，在他鄉不如意時蒙上眼簾的一層霧。
“家是溫暖的港灣，是我們永遠的歸屬地”。
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有一次，媽媽給我買了一本書，名字叫《小故事，大道理》。媽媽對我說：“你讀了這本書以后，一定會喜歡上它的。”聽了媽媽的話以后，我就趕緊讀起了這本書。
看了這本書以后，我明白了，一件小小的事中，可以領略到一個非常大的道理。我明白了真善美，假惡丑。我還懂得了我們生活在這個世界上，一定要有愛心、友誼、樂觀、自信、理想、目標、智慧、奮斗、勇氣、寬容、理解、美德、責任。??！這是一本多么好的書，它告訴了我們很多在課本里學不到的知識。我想：我一定要珍惜好這本書。
從那以后，我一拿到這本書，心里就有說不出的興奮……
山西省太原市清徐縣職工子弟二校五年級一班 侯翔
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納契本是一條被拋棄了的軍用犬，但是因為它的堅強與不退縮，是他當上了犬王。在生活中，很多人碰到一點小的挫折就會退縮，看過《孤島野犬》后，我明白不管遇到了多大的挫折，都要堅強的面對困難，不退縮。下面為大家精心整理了一些關于《孤島野犬》讀后感，請您閱讀。
《孤島野犬》讀后感1《孤島野犬》是日本著名作家椋鳩十的著作，這本書講述了在一個孤島上三個關于野犬的故事。
椋鳩十筆下的《孤島野犬》中，我最喜歡的是野犬“納契'的故事，書中描寫生動有趣，野犬的形象栩栩如生，仿佛把你帶入了這座海邊孤島，有一種身臨其境感覺。在《孤島野犬》里，原本所飼養﹑訓練的一群狼犬，因為軍隊撤退而被遺棄了。他們沒有野外生存能力，被一群野狗所攻擊，逐一被撕咬吞食。唯有“納契'生存下來，他憑著以往的訓練及勇敢和智慧，迎接各種挑戰，后來成為野犬之王。
椋鳩十總是把故事寫的非常好看，好讀，把一個感人至深的故事寫得淺顯易懂。就像許多寓言故事一樣，故事明了，道理深刻?！豆聧u野犬》作者不僅僅描寫的是野犬，更深刻的述說了一個道理：在困難面前，在挫折中，更要有堅韌不拔的精神。
在困難面前，是要努力向上呢?還是退縮不前呢?其實古往今來，有很多名人用他們的行動和成就為我們選擇了答案。當我們讀起《假如給我三天光明》時，書中海倫.凱勒所遭遇的不幸和面對的巨大困難震撼著我們的心靈，但她那不屈不饒的奮斗精神又給我們的留下了十分深刻的印象。我國漢代的司馬遷在經受刑罰和牢獄之災的磨難中沒有放棄，以人們難以想象的精神和毅力，寫出了名垂千古的歷史巨著《史記》。世界著名數學家華羅庚，年輕時期因病造成左腳終身殘疾，但他沒有灰心喪氣，而是把痛苦與艱辛統統拋在腦后，用勤奮和智慧一心在數學王國的海洋中劈波斬浪。無數的事例告訴我們在困難面前在挫折中，要勇敢，堅韌的去戰勝它。
每個人都會遇到各種各樣的困難，有學習上的困難、有生活上的困難。比如學習中遇到難題，當你絞盡腦汁想出一道又會有一道，當請教老師弄懂了一道又碰到另一道。這時就覺得苦悶、煩躁。有時寫作文，總會是無從下筆不知寫什么好，心里著急上火可就是寫不出來。還有成長中遇到的挫折，生活中遇到的困難等等，最終都要靠自己去解決。“困難與折磨對于人來說，是一把打向坯料的錘，打掉的應是脆弱的鐵盾，鍛成的卻是鋒利的鋼刀"。面對困難和挫折決不能退縮、逃避和抱怨，而是要勇敢面對，用堅韌和智慧去解決它。在學習中，不懂的就要多問，遇到問題要多思考，要背的內容一定要下功夫背出來，要練習的題目就應該多練習。不好的地方就要努力多做，一直到做好為止。
克服困難，戰勝挫折，就像上山登臺階，只要堅持不懈，堅韌不拔就一定能到達頂峰。
《孤島野犬》讀后感2近期，我讀了一本書，這本書就是《孤島野犬》。非常好看，里面的故事內容，別說有多精彩了，這本《孤島野犬》是我最喜歡的一本動物小說了，我很樂意推薦這本書給大家看，希望這本《孤島野犬》對你，對他人都有益處。
《孤島野犬》說的是甑島浮于東海之上，是屬于鹿兒島閑的一座孤島，里面一直住著令人感到懼怕的野狗群。它們像狼一樣，常常成群結隊的襲擊家畜，村民們經常不勝其憂。
《孤島野犬》向我們訴說了三位野犬之王：納契、亞瑪和阿卡。
納契是一條勇敢、強壯又漂亮的狼狗，它不僅勇敢、強壯、漂亮，他還很聰明哩!它會跳高、跳遠、攀爬，這些是普通狗做不到的，因為納契是一只軍用犬，所以，這些高難度動作，它樣樣精通，它還會巧用戰術，因為被主人拋棄，它只好在野外生活，靠自己活下去，最終，以自己的聰明才智存活下來，并當上了前所未有的`野狗之王。
亞瑪和阿卡都是一條野性十足的野狗，后來被人類收養，但因為它們總是傷害人或家畜，所以，它們才不得不與主人“骨肉分離”，回到大自然的懷抱，這讓它們成了野犬之王。
這本《孤島野犬》里，上演了一幕幕的悲劇和歡喜，讓人情不自禁的讀起來，書中感人的地方躲著呢!祝你看得開心 。
《孤島野犬》讀后感3假期里，我讀了非常有趣的動物小說《孤島野犬》，《孤島野犬》的作者是日本鳩十，他是日本有名的動物小說家，兒童文學家，他寫的同類的書還有《山大王》、《月輪熊》。
《孤島野犬》這本書講的是在日本的鹿兒島上有一個叫三吉的小販和野狗亞瑪的傳奇經歷。亞瑪是條兇猛的野狗，在掉進陷阱被三吉救出，三吉收養了亞瑪并馴服了它，從此三吉和孤僻的亞瑪就建立了深厚的感情。
在一次冒險的時候，三吉遇到狼群的襲擊，亞瑪和狼展開了殊死搏斗，亞瑪因此受傷，這樣他倆的感情就加深了。有一天，亞瑪遇見了讓它中了陷阱的青年，亞瑪立即撲了過去，把青年咬昏了過去，警方知道了以后就叫三吉把狗殺死，萬般無奈下，三吉決定將亞瑪放走，最后在一個孤島的海邊把亞瑪放走了。
幾年之后，三吉突然很想念亞瑪，他跑回孤島，但是在森林沒有找到亞瑪，正當他在回家的路上，一大群野狗包圍了他.....突然野狗隊伍中傳出嚎叫聲音，野狗的首領來了，它久久地凝視著三吉—原來是亞瑪，它已經是野狗的首領，亞瑪認出了三吉，并放過了三吉后頭也不回的地跑回茫茫的森林。
這篇讓人最感動的地方是，在三吉準備放亞瑪回森林，無論三吉怎樣打亞瑪，亞瑪的眼眶里充滿淚水，悲傷地看著三吉，被三吉放了幾次后都跟了回去，最后三吉只得偷偷地把亞瑪拋棄在孤島上。看到這里，我的心里充滿了悲傷，為三吉，為亞瑪，他們之間深厚的友誼打動了我，他們互相信任，互相關心，迫于壓力被分開，但他們互相思念著，我被深深感動，無論人和人之間，還是人和動物，友誼是多么可貴啊，我們一定要珍惜。
《孤島野犬》讀后感4最近讀了《孤島野犬》，感受到了很多不一樣的溫情。
它是一個忠誠的野犬，它是一個聰明機智的野犬，它是一個分的清是非的野犬。在孤島野犬這本書里，講述了它一個個離奇而驚險的故事。
在鹿兒島附近，有一個名叫三吉的小販。有一次，當他再次去鹿兒島做生意時。他發現兩個年輕人抓到了一條好狗。于是，三吉就把它買了下來。三吉對它照顧的無微不至，漸漸的，他與狗漸漸的熟悉了，并給它取名叫亞瑪。它簡直就成為了三吉的親人。
三吉每天都帶著他去一起買東西，一起玩耍?？墒?，好景不長。有一天，三吉正與別人談話時，亞瑪碰見了把它抓住的年輕人。狠狠地咬了過去，結果，年輕人住了三個星期的院。村里人都想把亞瑪給殺掉，而三吉卻毫無辦法。想讓它重歸大自然，可是亞瑪卻不舍得。于是，三吉想了個萬無一失的辦法，把亞瑪放到了野外。
讀了這本書，我覺得亞瑪非常的忠誠，它不肯離開自己的主人，它每天都幫著三吉干事情，而且，它還救了三吉一條命。它機智勇敢，當他獨自一人的面對兩條野狗，它采取戰術，咬對方的交心，把兩只兇猛的野狗給趕跑了?？纯次移綍r的表現，我經常把爸爸媽媽的話當成耳旁風。而且，爸爸媽媽的說的話有時我也不聽從，還和他們吵架，比起亞瑪來，我的做法可真是差遠了!
這本書讓我明白了很多的道理，從今天起，我要更加愛我的父母。
《孤島野犬》讀后感5《孤島野犬》這本書是日本著名作家椋鳩十的作品。這本書講了三個不同的故事，分別是《王者之座》、《消逝了的野狗》和《崗丘的野狗》。
甑島浮于東海之上，是屬于鹿兒島縣的一座孤島。而這座島上一直住著野犬群。這些野犬有著原始的野性，常常襲擊村莊里的家畜，村民們經常不勝其擾。《孤島野犬》講了野犬群中的三個野犬王：納契、亞瑪和阿卡。
納契是一只勇敢、聰明并且強壯的軍用犬，因為士兵撤離時并沒有帶走它和他的同伴，所以它只好在野外生活，因為野犬的攻擊，軍用犬一只只的減少，最后只剩下納契一只，納契只好加入野犬群，經過一番苦戰，納契加入了野犬群，還成為了犬王。而亞瑪和阿卡都是野犬，被主人收養后因為無法在村里生活，只好在主人的逼迫下重新回到了大自然。
納契本是一條被拋棄了的軍用犬，但是因為它的堅強與不退縮，是他當上了犬王。在生活中，很多人碰到一點小的挫折就會退縮，看過《孤島野犬》后，我明白不管遇到了多大的挫折，都要堅強的面對困難，不退縮。
《孤島野犬》讀后感6這本書主要寫了三個部分。第一部分王者歸來，讓我感動最深的是：士兵丟下了那50只精良的狼犬，它們被人類排擠，還讓山里的野狗引出幾只吃完了，最后只剩下一只狼狗了，它叫納敖，它一看同伴死完了很傷心。我覺的人類不應該讓狼狗們獨自在外面，士兵走了，當地人應該領養幾只。因為狼狗們已經習慣了食來張口，所以人們應該多包容一下狼狗，不能讓他們再被人類打了。
第二部分“消逝的野狗”。這一部分最讓我感動的是因為名叫三吉的小販非常有同情心。
第三部分是本書中最讓我感動的一部分，名字叫崗丘上的野狗，其中最最讓我感動的是：阿卡在地板下不出來，怕被抓到、而他是被人類給誤會了，別人都認為是阿卡偷的牲口，但是人們萬萬沒有想到的是阿卡不是元兇，是另一個村里的無賴干的事。阿卡那么聽話，那么可愛。我覺的人們要把事情搞清楚之后再來處置兇手呀!
這一本書讓人感到親近，就像看連續劇一樣，自己的心跟著書中的情節人物等跌宕起伏，時高興，時傷心。
《孤島野犬》讀后感7讀了《孤島野犬》中的“崗丘的野犬”后，我覺得這篇文章不錯，介紹給大家。
這篇小說主要講的是東海甑島上的一只聰明的野狗經過十多天的仔細觀察，最終認為農民松吉是一個可以信任的人，松吉也非常喜歡這條懂事的野狗。并且給這只野狗取名為“阿卡”。阿卡白天陪松吉一起干活，晚上跟他一起回家，住在他家里。他倆成為一對親密的好朋友。阿卡到松吉家一個多月后，發生了一件事：村里的雞呀，兔啊，接二連三的失蹤了，村里的人本來就怕野狗，這下子都認為是阿卡干的，阿卡無緣無故地成了禍害雞兔的罪犯了。
村長和村警命令松吉把阿卡殺死。盡管松吉很愛阿卡，想保護阿卡。最后還是被負責人逼迫下，把一只有毒的雞拋給了阿卡，出于對主人的信任，阿卡舔了一口雞內臟，結果中毒了!它跌跌撞撞地逃回了養育它的森林里。
過了一年左右，在村子里偷雞兔的“犯人”找到了---原來是住在山對面村子里的無賴漢干的。
讀了這篇小說，我有兩處感想：
1、我們不能毫無證據地懷疑一件事物干了壞事，這樣做可能讓好人受到冤屈、傷害。
聰明、可愛的阿卡就是被這種無緣無故懷疑的可憐受害者。
感到孤獨范文6
（1．長江大學農學院，湖北 荊州 434025；2．福建農林大學植物病毒研究所，福州 350002）
摘要：褐飛虱（Nilaparvata lugens Stal）可攜帶多種病毒，其中褐飛虱呼腸孤病毒（Nilaparvata lugens reovirus， NLRV）和水稻鋸齒葉矮縮病毒（Rice ragged stunt virus，RRSV）均為dsRNA基因組的呼腸孤病毒。通過接種、dsRNA小量提取及RT－PCR等方法分析NLRV對RRSV傳播和增殖的影響，初步探討這兩種呼腸孤病毒之間的關系。結果表明，褐飛虱攜帶NLRV比率高低影響褐飛虱接種RRSV效率；攜帶NLRV的褐飛虱種群接種RRSV后兩種病毒的含量差異較大，NLRV的含量遠遠大于RRSV的含量，推測褐飛虱體內的NLRV某種程度上干擾了RRSV的傳播和增殖。
關鍵詞 ：dsRNA病毒；褐飛虱呼腸孤病毒；水稻鋸齒葉矮縮病毒
中圖分類號：S432．1 文獻標識碼：A 文章編號：0439－8114（2015）05－1090-04
DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2015.05.015
收稿日期：2014－06－06
基金項目：長江大學大學生創新創業訓練計劃項目（2013022）；國家自然科學基金青年基金項目（31301638）
作者簡介：蔡振政（1992－），男，廣東韶關人，在讀本科生，研究方向為植物保護，（電子信箱）164397952＠qq．com；通信作者，章松柏（1978－），男，湖北黃梅人，講師，博士，主要從事植物病毒監測和分子病毒學的研究，（電話）18972361635（電子信箱）yangtze2008＠126．com。
病毒學研究往往多集中在單一病毒的諸多特性方面，對寄主或介體體內病毒與病毒之間，病毒與其它生物之間的復合感染以及復合感染所引起的生物學現象關注較少［1，2］。越來越多的證據顯示病毒的復合感染是一種極其普遍的現象［3］。病毒的復合感染可以減輕或加重某種病害的發生，這主要取決于病毒之間的協同或拮抗或競爭等關系［4－7］，根據這種關系可以解釋病害加重或減輕發生的原因，從而采取相應措施控制病害的發生［8］。褐飛虱（Nilaparvata lugens Stal）也可以攜帶多種病毒，其中褐飛虱呼腸孤病毒（Nilaparvata lugens reovirus，NLRV）和水稻鋸齒葉矮縮病毒（Rice ragged stunt virus，RRSV）均為dsRNA基因組的呼腸孤病毒［9］。NLRV是斐濟病毒屬（Fijivirus）成員，可以經卵傳播給后代，同時還可以通過水稻傳染給不帶毒的褐飛虱，但病毒在水稻內不復制［10－12］；RRSV是水稻病毒屬（Oryzavirus）的成員，由褐飛虱持久性攜卵而引發水稻鋸齒葉矮縮病，并隨著褐飛虱的長距離遷飛而傳播擴散［13－18］，兩種病毒之間的關系未知。與褐飛虱一樣，白背飛虱也是南方稻區最重要的稻飛虱之一，危害水稻和傳播水稻病毒（南方水稻黑條矮縮病毒，Southern rice black streaked dwarf virus，SRBSDV）。但白背飛虱攜帶和傳播SRBSDV的效率極高［19，20］，這可能是SRBSDV易造成爆發和大面積流行的原因之一；而褐飛虱攜帶和傳播RRSV的效率都較低，因此推測可能是水稻鋸齒葉矮縮病一直僅限于局部地區流行的原因之一。導致褐飛虱攜帶和傳播RRSV效率都較低的原因及與NLRV等病毒的關系一直是研究者比較感興趣的問題。基于此，通過接種、dsRNA小量提取和RT－PCR等方法，初步研究NLRV對RRSV傳播和增殖的影響，為深入研究這兩種病毒間的關系奠定基礎。
1 材料與方法
1．1 試驗材料
植物材料：水稻鋸齒葉矮縮病病株于2010年采集于福建省龍巖市發病田間，鑒定后隔離種植；接種水稻品種為水稻鋸齒葉矮縮病感病品種Ⅱ優航2號。
昆蟲介體：褐飛虱群體2010年采集于福建福州市郊區無水稻鋸齒葉矮縮病發生的田塊，并經過鑒定后于實驗室網箱中飼養。
1．2 生物學接種
1．2．1 褐飛虱飼毒 采用兩種飼毒RRSV的方法。第一種方法是抓取網箱中飼養的二齡若蟲于病株上飼毒，第二種方法是模擬自然條件下，抓取網箱中飼養的雌性褐飛虱成蟲在病株上產卵，卵孵化成若蟲后直接在病株上飼毒。飼毒后的介體度過循回期（29 ℃下循回期平均為7．6 d［21，22］）備用。
1．2．2 單管單苗接種 選擇飼毒后度過循回期的褐飛虱成蟲（每種方法40頭，重復3次）進行單蟲單管單苗生物學接種，接種水稻苗處于2葉1心期（下同），傳毒8 d，然后將傳毒成蟲低溫保存，接種苗每24 h換一次，接種苗按編號種植于防蟲溫室內。
1．3 快速小量提取dsRNA
介體昆蟲體內的dsRNA參照食用菌病毒dsRNA的提取［23］。方法如下：選用褐飛虱100～200頭，用液氮研磨成粉末；加入0．7 mL 2×STE和0．7 mL酚／氯仿／異戊醇（25∶24∶1）抽提處理，離心后取上清液，將上清液配制成含17％乙醇的溶液；注入含17％乙醇的1×STE溶液平衡過的纖維素（CF－11）中，充分混勻，離心后去上清，再用含17％乙醇的1×STE溶液反復洗滌3～4次；最后用不含乙醇的1×STE洗脫，洗脫液經過異丙醇沉淀和75％乙醇漂洗，沉淀即為dsRNA，干燥后溶于RNase－free的水中。dsRNA產物經1％瓊脂糖凝膠電泳，EB染色后BioRad凝膠成像系統觀察記錄。
1．4 RT－PCR法檢測褐飛虱介體帶毒率
取傳毒后低溫保存的成蟲各24頭，用RT－PCR法檢測褐飛虱攜帶兩種病毒的情況，RRSV和NLRV兩種病毒的dsRNA作為陽性對照。RRSV的檢測引物為P9F／P9R（P9F：5′－ATGAAGACTGCCTTTGCCA
GA－3′，P9R：5′－CTACCCCGAGG CCTTCTGAGA－3′），根據泰國分離物S9片段（NC＿003757）設計，擴增片段大小為1 017 bp；NLRV的檢測引物為N8F/R（N8F：5′－AATCACTCATTGAACAAGGA TGGACG－3′，N8R：5′－CTACCAACCCAGTCGGTCCTTCAAATA－3′），根據已發表的NLRV S8的序列，擴增片段大小為560 bp［24］。單頭褐飛虱總RNA采用Trizol試劑盒（北京天根）提取，參照說明進行，最后用20 μL的無核酸酶滅菌水溶解。反轉錄按照反轉錄試劑盒（Fermentas）說明進行操作。PCR反應體系按照TaKaRa的rTaq酶使用說明進行，反應程序為：94 ℃變性4 min，35個循環的擴增（94 ℃ 30 s，55 ℃ 30 s，72 ℃ 45 s），最后72 ℃延伸10 min，產物經1％瓊脂糖凝膠電泳，EB染色后BioRad凝膠成像系統觀察記錄。
2 結果與分析
2．1 生物學接種結果
兩種飼毒方法獲得的褐飛虱成蟲單管單苗生物學接種結果見表1。從表1中得出，能夠傳毒的褐飛虱成蟲分別占試驗成蟲總數的22．50％、50.00％；生物學接種320株水稻分別有24株、44株發病，發病率為7．50％、13．75％。
2．2 褐飛虱體內dsRNA的提取和檢測結果
收集接種RRSV和未接種RRSV的褐飛虱種群，提取并檢測褐飛虱種群體內的dsRNA情況，以協助了解介體體內的帶毒情況以及dsRNA病毒種類。經過反復試驗，從褐飛虱體內提取dsRNA以0．2~0．3 g為宜（100~200頭）。圖1是褐飛虱（100－200頭）體內的dsRNA，從其dsRNA基因圖譜中可清晰地看到褐飛虱體內存在NLRV，飼毒RRSV后體內的病毒除了NLRV外，還有RRSV，但兩種病毒的含量差別較大，NLRV含量遠大于RRSV。
2．3 褐飛虱介體帶毒率
由圖2可知，在方法1和方法2中，24頭成蟲中攜帶RRSV分別有13頭和18頭，帶毒率分別為54．17％、75．00％，帶毒率差異較大；而攜帶NLVR分別為23頭、24頭，帶毒率分別為95．83％、100．00％，帶毒率差異較小。
3 小結與討論
生物學接種試驗和褐飛虱帶毒率檢測結果表明，在方法1中，使用二齡若蟲飼毒RRSV，度過循回期后成蟲帶毒率為54．17％，帶毒且能夠傳毒的成蟲為42．85％，這些數據與以往報道的數據相符合［13，21，25，26］；在方法2中，模擬自然條件下在病株上產卵、飼毒和度過循回期后，帶毒率較高，成蟲帶毒率約為75％，帶毒且能夠傳毒的成蟲約為50％，這些數據皆比以往報道的數據高一些［13，21，25，26］。兩種方法不同點之處在于飼毒RRSV時褐飛虱攜帶NLRV的差異。NLRV可以經卵傳播，經卵傳播比率為15％［10，12］，在方法1中，卵孵化成若蟲后攜帶NLRV的比率低于15％，多數介體首先接種的是RRSV；而室內飼養的褐飛虱種群帶毒率一般都在90％以上［10，24］。在方法2中，二齡褐飛虱若蟲在飼毒RRSV之前多數都攜帶了NLRV。因此，根據生物學接種和褐飛虱帶毒率檢測結果初步推測NLRV能在一定程度上影響褐飛虱生物學接種RRSV以及褐飛虱的傳毒效率。此外，NLRV和RRSV都是褐飛虱體內增殖性病毒［12，15］，但兩者同時存在時，NLRV的含量遠遠大于RRSV（如圖2），這也說明NLRV可能某種程度上干擾了RRSV在體內的增殖。褐飛虱是一種典型的遷飛性害蟲，每年春季或夏季由南向北遷移、秋季由北向南回遷，在中國境內分布范圍幾乎覆蓋全境，褐飛虱一旦帶毒，則可以將水稻鋸齒葉矮縮病毒傳進遷入地區［13，14，16－18］。水稻鋸齒葉矮縮病首先發現于菲律賓和印度尼西亞，并于20世紀70年代末在日本、印度及東南亞一些國家局部地區引起水稻大面積減產［13－15］；在中國該病自1978年以來，先后在臺灣、福建、廣東和江西等省發生流行，對水稻生產造成了一定的影響［15，21，25］。但相對于白背飛虱傳播的水稻南方黑條矮縮病毒病等大面積流行病害來說，水稻鋸齒葉矮縮病一直僅限于局部地區流行，危害程度遠不及水稻南方黑條矮縮病毒?。?0，27］，具體原因鮮見報道。本研究發現NLRV可能某種程度上干擾了RRSV在褐飛虱體內的增殖以及傳播，從病毒與病毒之間的拮抗方面初步分析了NLRV的存在可以減輕水稻鋸齒葉矮縮病的發生和流行，從某種程度上解釋了水稻鋸齒葉矮縮病一直僅限于局部地區流行的現象。
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