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父愛短詩范文1
《神偷4》這款游戲對于顯卡的要求并不高，哪怕是酷睿i3-4130處理器的核芯顯卡，也可滿足30幀以上的流暢運行速度。預算不多的話也可以購買奔騰G3220這樣的低端雙核處理器，再用余下的400多元去購買一塊低端獨立顯卡，游戲性能反倒更好。
顯卡選購：A卡主推R7 240
考慮到只有400多元的顯卡預算，因此A卡陣營當中的R7 240才是最佳的選擇。不到450元，便可買到銘瑄、昂達、盈通、迪蘭恒進等多個品牌的R7 240顯卡，而且還都配備了GDDR5這樣的高速顯卡。而如果喜歡N卡，則可以考慮GDDR5顯存版本的GT640顯卡，售價同樣可以低至450元以內。
GTX650Ti顯卡已經全面退市，不如考慮GTX750顯卡，性能更好。推土機FX4300主頻高達3.6GHz，8MB三級緩存，是500元以內很好的游戲處理器。機箱電源航嘉品牌的即可，350W的額定功率絕對夠用。鍵鼠不妨考慮宜博EKM059BKC-E眼鏡蛇有線套裝，不僅物美價廉而且性能出色。顯示器推薦購買MVA面板的產品，在以黑暗場景為主的游戲下可以提供更純凈的黑色，非常適合于主流的大型3D游戲。優派VA2214s售價不到700元，非常值得購買。
其他配件：中規中距即可
內存最好是4GB DDR 1600的，畢竟它是市面上最具性價比的選擇。硬盤則是1TB最好，并且最好是單碟1TB的新硬盤。希捷新酷魚和西數藍盤的售價為370元和360元，盤體編號則為ST1000DM003和DT01ACA100，選購時認準編號即可買到單碟1TB新硬盤。電源方面，考慮到游戲電腦需要日后升級顯卡，所以最好是額定功率為300W的產品。
筆記本選購：GT740M獨顯本
GT740M獨顯在筆記本市場已經成為了絕對主流，最低售價甚至還不到3000元。游戲玩家在選購時，就不要再考慮GT710M和GT720M這樣的獨顯本了，游戲性能實在不怎么樣，售價也便宜不了多少。除此之外，選購時最好考慮已經預留SSD固態硬盤升級接口的機型，這樣便可為日后升級帶來更大的便利。
Q：天氣越來越熱了，想買一個筆記本散熱底座，不知對筆記本散熱有多大提升。另外需要詢問的是，有的筆記本散熱底座具備支架功能，請問是否值得購買？
A：對筆記本用戶來說，用配備風扇的底座來輔助筆記本散熱是很有必要的。即便不開風扇，也能將筆記本抬高架空，有效加快機身底部的空氣流通，提高散熱性能。至于具備支架功能的散熱底座，則必須符合人體工學設計才行，這樣便可帶來更舒適的操控體驗。至于價格，具備支架功能的散熱底座，最好不要超過100元，否則性價比就顯得太低了。
Q：家里沒有路由器，所以想用筆記本搭配隨身Wi-Fi，好讓智能手機無線上網。看了360品牌的隨身Wi-Fi，只賣19.9元，不知怎樣？
A：隨身Wi-Fi必須依賴筆記本開機才能發射無線信號。筆記本不用時也得開機，不僅費電而且還麻煩。實際上無線路由器已經很便宜了，比如說斐訊FIR150M和磊科NW604這樣的無線路由器京東售價僅為34元和39元。如果僅僅在家上網，直接購買無線路由器即可。
父愛短詩范文2
被爸爸寵出來的壞脾氣
小時候的袁詠儀，漂亮極了。一頭濃密的黑色卷發，大大的眼睛，圓圓的小臉，整個一洋娃娃。但她并不是個安靜的娃娃，自出娘胎，袁詠儀就愛大哭大鬧，人稱“喊包”。
記者：我看過你小時候的照片，好漂亮。能夠擁有你這么漂亮的“洋娃娃”，父母一定很驕傲了?
袁是啊。我爸寵我到“不可理喻”的地步。他下班回家第一件事就是抱女兒，而且遠離人群，不讓任何人碰一下，別人即使只是看看，也得站遠些才可以。以至于鄰居們后來跟我“控訴”說：“你很小的時候，人家都以為你爸是個瘋子，懷里抱個假洋娃娃自我陶醉。”
記者：你是獨女嗎?
袁不是啊。我在家排行老二，上有哥，下有妹，但爸爸獨寵我一個。我跟妹妹吵架，不管誰對誰錯，爸爸鐵定幫我：三個孩子分到一樣的糖果，我打開自己那包吃一半，見哥哥的那包還沒打開，就要跟哥哥換，居然也能得到允許。
記者：爸爸是個和藹的、沒什么脾氣的人嗎?
袁不是的。我爸爸是做警察的，很威武，在外面天不怕地不怕，唯獨在我面前脾氣全無，任我對他大喊大鬧，他只會滿心歡喜地嘿嘿笑。直到現在，我跟爸爸聊天時仍可以大喊大叫，好像是在吵架。但如果是另外一個人用這種語氣跟他講話，他是絕不會輕饒的。
記者：爸爸這樣寵愛你，對你的性格有沒有什么影響?
袁：有啊。爸爸這樣寵愛我，一手培養了我的霸氣，以致后來有媒體形容我說：“袁詠儀除了演技精湛、外形出色外，她最大的特色是人人敬而遠之的壞脾氣?！逼鋵?，我的脾氣都是自小被爸爸寵壞的。
記者：那媽媽對你怎樣?
袁媽媽對我太嚴厲了，所以我常常懷疑她是不是我親媽。
記者：嚴厲到什么程度?居然讓你產生這種想法。
袁：從小媽媽就把我送入女校，杜絕我同男生接觸的一切機會。有一次，我哥哥到學校找我，他那時已經當警察了，校長看見后緊張地打電話到我家告狀：“有男生來接袁詠儀?！被丶液?，媽媽就試探著問誰接我。我很氣惱，大聲反問：“你兒子來接我，不可以嗎?”還有，我想跟同學外出旅游，在野外露營住幾天，本來很平常的事情，哥哥和妹妹都去過好幾次，可媽媽從不準我去。
記者：后來有沒有問過媽媽，為什么不讓你去露營?
袁有問過。記得15歲那年，我問過媽媽為什么獨獨不讓我去，媽媽說
“因為我是你媽媽，我太了解你的性格，你是那種一玩起來，就連自己姓什么都會忘記的人?！?/p>
記者：當時理解媽媽的回答嗎?
袁我小時候太調皮、太貪玩，而且膽大得出奇，什么都不怕?，F在明白了，媽媽那是為我好，只是方法同其他小朋友的媽媽不一樣。
貪玩的香港小姐
記者：你上學的時候成績好嗎?
袁：不算好。因為有媽媽管我，分數還可以，屬于中等水平，但我不是愛讀書的人。上學的時候，常常盯著書本看半天，也不知道書上寫了些什么。但我記廣告詞很厲害，電視上播任何個廣告，所有的廣告詞，我都知道。
記者：不愛讀書的孩子，都有一些別人不太理解的興趣愛好，你那時候的興趣是什幺?
袁不知道什么原因，初中的時候，我居然狂愛跑步。每天放學后，就跟同學一起坐公車去運動場跑步，上課也心不在焉地惦記著跑步，常常不耐煩地看表。老師發現后到媽媽那兒告狀：“袁詠儀讀書呢，還可以，但是她每天想著去跑步，這樣會影響學習。”后來，媽媽就跟我達成協議要想跑步，就要好好學習，如果下次考不好，就不許再去跑步。
記者：后來怎樣?誰勝利了?
袁我啊。為了這個協定，我努力讀書，后來考得很好，得以繼續跑步。但媽媽開始并不知道我不喜歡讀書，志向也不在讀書，我是為了跑步才好好讀書。所以，媽媽明白后，常常寬慰我：“沒關系，最重要是你盡力了?！?/p>
記者：在競選港姐前，你做什么工作?
袁做文書。但我的性格實在不適合做文書，3個月下來，自己差點被“悶”死不說，老板快被我折磨瘋了。老板看我在辦公室亂竄，到處找人聊天，頭疼得大叫：“你相不相信，你再亂竄，我去買條繩子來把你綁起來!”
記者：哈哈!看來你確實不適宜干這份工，沒見過你這么不安分的文書，那不做文書，做什么呢?
袁后來我又做起了老本行――拍廣告。你知道，我從侶歲就開始拍廣告了，拍廣告還蠻適合我的性格，跑來跑去，永不安靜。
記者：那怎么想到去競選港姐?
袁，有天，給我拍廣告的人拿著張香港小姐報名表來找我，可我要不要去選香港小姐。當時我想都沒想，就把表格扔進垃圾桶。然后有天，我在電視上看到香港小姐的宣傳片，靈機動：“試一下又何妨?”就跑進廚房告訴媽媽這個想法。媽媽正在做飯，瞪大眼睛問我為什么。我回答：“第一，我要不嘗試，過幾年會后悔，第二，我覺得我是個漂亮的女孩?！?/p>
記者：這么理直氣壯，看來媽媽沒理由不支持了。
袁對啊。媽媽說：“好，你去吧。我雖然覺得不好，但如果你決定了，就去試試吧。以后有什么不開心的，你要記住，這是你自己的選擇。”
記者：那時候競選港姐，你有沒有壓力?
袁：完全沒有思想負擔。那時候，現場評判覺得我的眼睛很漂亮，懷疑我整過容，就問我：“袁詠儀，你的眼睛是真的還是假的?”我說：“是真的。我跟我媽媽很像。我那個整容手術，已經在出生前，在我媽媽肚子里就做好了?！痹u判都被我逗樂了。
記者：現在想起當年競選港姐的事情，印象最深的是什么?
袁：再熱鬧的花團錦簇，也已經過去，剩下的是同幾個女孩的友誼。那時候，入選的18個小女生每天在一起吃飯、訓練、玩耍、旅行，要多開心有多開心。我跟幾個國外回來的女生最要好，常常不顧規定，在各屋亂竄，化好了妝還要出去玩，哪怕回來再要補妝。人家在彩排得獎后如何走臺，我卻和小姐妹們在后臺玩牌，等聽到宣布我是冠軍的時候，只好匆忙上臺，將臺步快快走完。
口無遮攔導致“冷藏”
袁詠儀的性格直來直去，反應又快，來不及顧及別人的感受，已經將自己要說的話竹筒倒豆子――一傾而盡了。過后，又會后悔，覺得自己不應該那么倔，態度亦不該那么強烈。但為時已晚，人已經被她得罪了。這令她在入行之初，有些舉步維艱。
記者：成為港姐后，我知道你簽約了TVB，成為它旗下的藝員。但奇怪的是，善于制造明星的TVB為什么
獨獨沒能讓你紅起來?我發現你出名，是在離開TVB之后。這到底是為什么?
袁：我得罪人呀!剛選上港姐時，第二、三名小姐都有工作，只有我要義務為香港做一年形象宣傳。后來又要我主持一檔音樂節目。我本來不喜歡當主持，又不太會講話，要我去做什么主持，簡直要命耶。每次到現場，我表情都木木的，輪到我說話了，要人家捅捅我，說：“袁詠儀，到你了?！蔽也呕剡^神來：“是嗎?好好，下一個有請劉德華?！?/p>
記者：除了當主持人，那時候就沒有別的選擇嗎?
袁：做了三個月，跟我一起主持的人走了，當然我也想走，就跟老板說我也不做了，因為一直都是搭檔提醒我，我才說話的，他們不做，我也不做了?？墒抢习逭f：“不行耶，觀眾太喜歡看你常常忘記的樣子了，你走了，人家看什么?”我說我才不要香港小姐看起來那么笨，總之我是不做了。
記者：所以后來就去拍戲了?
袁：是啊。終于安排我去拍戲，演一個女強人，管理很多人，跟公司里一個男人明爭暗斗。但有一天，我接到劇本，兩個人之間的關系發生了180度大轉彎，女強人變溫順了，我很吃驚，就去問編劇，為什么女強人會變成這樣。你知道那個編劇怎么說嗎?“去拍吧，觀眾忘記了。”我很生氣，覺得你把觀眾當，但不要把我也當。之后正好有記者采訪我，我就把自己的氣憤發泄出來。第二天報紙登出來了：袁詠儀不滿編劇把觀眾當。
記者：當時有沒有意識到問題的嚴重性?
袁沒有啊。新聞出來后，公司一個高層負責人看了報道很生氣，跟別人咆哮：“袁詠儀什么態度呀?有什么問題來找我，在外面亂說什么?”可她沒有把這話直接跟我說，而是叫另一個人傳話給我。我告訴傳話的人：“她有什么問題來跟我說，不要再跟你說?！碑斎晃业南聢鼍褪遣豢梢杂?所以在TVB兩年，我只拍了三個電視劇。
記者：后來有沒有反省，改變這口無遮攔的情況?
袁：人一定要經歷了，才能明白。很多年過去了，我才知道，原來是自己的不對?，F在我學乖了，雖然有時控制不住壞脾氣，但罵完了，趕緊去道歉。我媽常說的“一口屎，一口糖”，很形象，我就是那種人。
經歷三段情才懂什么是愛
記者：你那么貪玩，應該會早戀吧?你的初戀是在什么時候?
袁：很小的時候有過一次早戀吧，壽命極短，只維持了一個禮拜。有一天媽媽問我：“你是不是跟人拍拖了?”我說：“對呀?！眿寢尯芎蜌獾貑枺骸澳阋灰讶藥Щ貋恚屓思业皆奂襾硗?”我也不知是媽媽在用計，隔了幾天，就把人帶回家了。吃過晚飯，把人送出門去，回轉身媽媽就說：“你現在才16歲，你跟他拍拖，這樣會把你的交際圈子縮小，許多人就不方便再跟你做朋友了。
記者：哇，好厲害的媽媽!她知道16歲的孩子最叛逆，所以用這么巧妙的理由建議你。
袁：是啊，當時我聽了媽媽的話，覺得有道理，自己是個那么愛自由的人，怎么可能給人家關住呢，第二天就對那個男生說：“對不起，我們分手吧!”
記者：第二次戀愛，時間是不是長了些?
袁：跟第二個男朋友交往的時間比較長一點。我們分手，是在我選香港小姐期間。我參加初賽時，他也鼓勵我去，可等到我快要選上了，他突然跟我說“希望你不要再選”。我回家想一下，倒也是。他如果早跟我說，我可能會考慮，但那時已經遲了。所以，第二個男朋友就沒了。
記者：第三個男朋友怎樣呢?
袁：第三個男朋友是有婦之夫，年紀比我大很多，很沉默，但對我特別好。我今天想去美國，明天就可以走了，一下飛機，直接去飯店，吃住他都幫我安排好了，什么都不用我想，我每天只是想去哪兒玩。
記者：那為什么分手呢?
袁：這樣被寵愛著，初時還覺得幸?？鞓?，但突然有一天，我發現自己真正需要的是一份可以見光的真感情，一個能夠在圣誕節等重要日子陪伴自己的男朋友?？蛇@個男人做不到。于是兩個人分開，成了一輩子的好朋友。
記者：怎么評價你的這三段感情?
袁：每一次分手，我都不傷心，因為我明白那些都不是自己的最愛。直到遇到張智霖，我才知道，愛一個人，不光是開心，還伴隨著痛苦和焦心。
記者：你和張智霖兩個人，性格是互補還是相同的呢?
袁：我們性格很相似，愛玩愛鬧，從開始拍拖到現在，感覺越來越近，很舒服。除了家人，我最愛的人就是他了。雖然在一起快10年了，但我現在看到他還是很新鮮，有著頭一次見面的開心刺激。可能是因為不怎么在起，經常兩地分離，互相思念吧，每一次見面，我們都有說不完的話。
記者：“相愛容易相處難”，相處實在是一門藝術。在這方面，你有什么心得嗎?
袁：聰明的女人，要懂得什么時候關燈，什么時候開燈。我以前不懂，亂發脾氣，常讓張智霖丟面子?，F在學聰明了。比方他在朋友面前開玩笑，說我身材不好，我當時不把憤怒表現出來，等他進了我的屋，一關門我再變臉：“剛才說什么呢?”這時我的火氣已經下來了，而且也不會傷他的面子。
記者：關于理財，在錢這個問題上，你和張智霖怎么協調?
袁我曾經開玩笑說：“你的錢，就是我的錢；我的錢，還是我的錢?！眱蓚€相愛的人，女人可以這樣霸道地對男人說，但萬萬不可強求。要對方心甘情愿地把錢送到你手里才行。
父愛短詩范文3
effect of sirnamediated inhibition of nfκb combination with 5fu on cell cycle of escc cell lines
tian fang1，2，chai yurong3，xu peirong2，liu hongtao2，xue lexun2
1. department of pathophysiology, basic medical college of zhengzhou university, zhengzhou 450052, china，2. laboratory for cell biology，3. department of histology and embryology
corresponding author：xue lexun，email：xuelx@371.netabstract：objective rna interference (rnai) was employed to inhibit the expression of p65 and to evaluate the effects of nfκb signaling pathway as a target for gene therapy in escc cell lines. methods a fluoresceinlabeled nonspecial sirna was used to monitor efficiency in ec9706. ec9706 and eca109 were transfected with 50 nm p65sirna, p65 and cyclind1 protein levels were determined using western blotting. after transfected with or without p65sirna at 72h, cells were tested for nuclear activity of nfκb using nuclear extracts by emsa. escc cells were treated with or without p65sirna, 5fu or combinations thereof for 48h. the cells were stained with pi and analyzed cell cycle by flow cytometry. results a fluoresceinlabeled nonspecial sirna was used to monitor efficiency in ec9706, demonstrating nearly 90% transfection efficiency. the protein level of p65 and cyclind1 decreased after transfected with p65sirna at 72h. and p65sirna also suppressed the nfκbdnabinding. p65sirnatransfected cells showed an increase in the percentage of cells in the g0/g1 phase and a decrease in the percentage of cells in the s phase. while combination with 5fu, the results were more prominence. conclusion p65sirna inhibits the constitutively active nfκb signaling pathway, and downregulats the expression of cyclind1. the strong constitutive nfκb signaling pathway in escc makes nfκb a target for the development of novel therapeutic strategies.
key words：esophageal squamous cell carcinoma;nfkappab;rna interference;cyclin d1
食管鱗癌是一種侵襲性很強的腫瘤，它的預后差，臨床進展迅速，多伴有淋巴結轉移，且易復發。核因子nfκb (nuclear factorkappa b) 是近年來發現的轉錄調控因子，最常見的形式是由 p50 和p65組成的異源二聚體，在絕大多數靜止期的細胞中，nfκb 與其阻抑物iκbα蛋白相結合，以非活性形式存在于細胞質中。許多刺激物可以通過對iκbα的磷酸化而使其降解，使解離的nfκb進入到核內并暴露它的核識別位點，從而促進靶基因的轉錄?；罨膎fκb信號通路可增強腫瘤細胞對放化療藥物的抵抗力，從而產生耐藥性。有研究表明，在許多人類腫瘤中nfκb信號通路的激活在腫瘤的發生發展中起著重要的作用[13]。
rna干擾(rna interference，rnai)是由雙鏈rna(doublestranded rna，dsrna)引發的轉錄后基因靜默機制，是目前研究基因功能強有力的工具之一[4]。rnai 的功能是由21～23 個堿基長的短雙鏈rna完成的 ,即sirna(small interference rna ,sirna)，它具有與目的基因互補的序列。目前這一方法被用于體外細胞水平的基因敲除或基因表達抑制,為其成為基因治療的手段開辟了廣闊的前景。本研究擬應用rna干擾技術，使用針對nfκb信號通路中p65的特異性sirna,觀察其對p65表達的抑制作用及聯合化療藥5fu對食管鱗癌ec9706和eca109細胞周期的影響，探討將nfκb作為基因治療靶點的價值。
1 材料與方法
1.1 材料
1.1.1 細胞系及細胞培養 食管癌細胞系eca109由本室保存，食管癌細胞系 ec9706由中國醫學科學院腫瘤醫院腫瘤研究所分子腫瘤學國家重點實驗室惠贈。兩株細胞在含有10%的胎牛血清，100u/ml青霉素，100μg/ml鏈霉素的1640培養液(gibco公司)中于37 ℃、5% co2 的條件下培養，實驗細胞均處于對數生長期。
1.1.2 抗體和試劑 鼠抗人p65(sc8008)單克隆抗體和兔抗人cyclin d1(sc753)購自santa cruz biotechnology 公司;細胞核和細胞質蛋白提取試劑盒、生物素3′末端標記試劑盒(89818)、化學發光emsa 試劑盒(78833)均購自 pierce 公司。nfκb p65 sirna干擾試劑盒購自cell signaling technology公司，碘化吡啶pi購自美國sigma公司。
1.2 方法
1.2.1 sirna的轉染及效率檢測 按照cell signaling technology公司sirna干擾試劑盒說明書的要求，進行轉染。在轉染前，ec9706(5×104) 和eca109(6×104)按一定細胞數鋪于6孔板中，使用無抗生素的培養基培養24h。將含有sirna的轉染試劑或熒光素標記的對照sirna與細胞共孵育5h后，加入新鮮培養基孵育24h。用日本nikon公司顯微熒光攝像/照相系統檢測熒光素標記的對照sirna在ec9706細胞中的轉染效率并照相。
1.2.2 胞漿、胞核蛋白的制備 按照細胞核和細胞質蛋白提取試劑盒說明書，分別提取細胞質、細胞核蛋白，bradford 法檢測蛋白質的含量，-70℃保存。
1.2.3 western blot測定蛋白的表達 轉染p65sirna72h后，從ec9706和eca109細胞中取細胞質蛋白，與預染的蛋白質分子量標準一起上樣。檢測p65和非靶向mapk蛋白表達，及細胞周期蛋白cyclin d1的表達，經12%sdspage分離，電轉到硝酸纖維膜上。5%的脫脂奶粉tbst溶液封閉2h，抗體按1∶100 孵育4℃過夜，tbst溶液洗滌10min×3次，硝酸纖維膜分別與辣根過氧化物酶標記的二抗(1∶50 000)室溫孵育1h后，tbst溶液洗滌10min×3次，dab顯色。實驗重復三次。
1.2.4 凝膠電泳遷移率(electrophoretic mobility shift assay，emsa)檢測nfκb與 dna的結合活性 ec9706和eca109細胞轉染p65sirna 72h后，收集轉染細胞和未轉染細胞提取細胞核蛋白，檢測轉染前后p65與dna結合活性的變化，方法如下：采用生物素3′末端標記法將nfκb探針5′agt tga ggg gac ttt ccc agg c3′，3′tca act ccc ctg aaa ggg tcc g5′進行標記。將細胞核提取物(10μg)與生物素標記的探針在20μl的緩沖液(10m trishcl，ph 8.5，0.5 mm edta，5mm mgcl2，1m kcl，0.05% np40，2.5% glycerol，1μg/μl poly (di·dc) and 0.2μg/μl bsa)中充分結合，行6%非變性聚丙烯酰胺凝膠電泳后，采用毛吸轉移法轉移至帶正電荷的尼龍膜上，120mj紫外交聯5min。生物素標記的dna探針與hrp標記的親和素之間相結合，通過化學發光，顯影，定影。
1.2.5 流式細胞儀檢測細胞周期 轉染和未轉染p65 sirna的食管鱗癌細胞，在50ml培養瓶中培養，5fu單獨或聯合應用，進行試驗分組和處理，作用48h后，收集細胞;1 000 r/min離心5min，棄去上清;用pbs洗兩遍，離心后棄去，加入70%冰乙醇固定，4℃過夜;上機前，1 000 r/min離心5min，棄去乙醇，pbs洗三遍;加入1ml pbs制成細胞懸液，加rnasea(終濃度50μg/ml)，室溫放置1h;調整細胞濃度為1×106，加1ml pi(100μg/ml)，避光30min，上機檢測細胞周期，每個樣本檢測10 000個細胞。
2 結果
2.1 sirna轉染食管鱗癌細胞ec9706的效率
將熒光素標記的對照sirna，在同樣條件下轉染到ec9706細胞中，置37℃、5%co2孵育箱內培養48h，通過熒光顯微鏡觀察轉染效率，見圖1。sirna轉染食管鱗癌細胞的效率可達90%以上。
2.2 食管鱗癌細胞轉染p65sirna后p65蛋白的表達水平
western blot檢測細胞中p65的蛋白表達水平，見圖2。結果表明，與未轉染p65 sirna的ec9706和eca109細胞相比，轉染后的ec9706和eca109細胞，p65蛋白的表達水平下調，而非靶向蛋白mapk的表達無影響。
2.3 食管鱗癌細胞轉染p65sirna后，nfκb與κb位點結合活性的改變
ec9706和eca109細胞轉染p65sirna72h后，收集各組細胞提取細胞核蛋白，emsa檢測nfκb與dna結合活性的變化。結果發現，與未轉染p65 sirna的ec9706和eca109細胞相比，轉染p65 sirna的ec9706和eca109細胞中，nfκb與dna的結合活性明顯下降，見圖3。提示：p65 sirna可以抑制p65的表達，下調nfκb與靶基因的結合活性。
2.4 p65sirna阻斷nfκb信號通路下調cyclind1的表達
食管鱗癌細胞ec9706和eca109在轉染p65 sirna72h后，分別提取細胞總蛋白檢測細胞周期cyclin d1蛋白的表達情況。結果表明，與未轉染的細胞相比，cyclin d1的表達在轉染72h后開始下降，見圖4。
2.5 p65sirna單獨或聯合5fu對食管鱗癌ec9706和eca109細胞周期的影響
食管鱗癌細胞ec9706和eca109按以下方法分組：未轉染組;轉染p65 sirna72h組;單獨使用5fu組;轉染p65 sirna48h后，使用5fu治療24h組。各組細胞使用pi染色，以未轉染組為對照，檢測細胞周期變化情況。結果顯示，ec9706和eca109在轉染p65 sirna后，g0/g1期的細胞開始增加，同時s期的細胞逐漸減少;當轉染細胞聯合使用5fu時，g0/g1期的細胞明顯增加，同時s期的細胞明顯減少，見表1、2。
3 討論
研究表明，活化的nfκb信號通路存在于多種人類腫瘤中，作者以往的研究已證實在兩種食管鱗癌細胞中存在有激活的nfκb信號通路[5]。但是，激活的nfκb信號通路在食管鱗癌細胞的增殖及對化療藥的耐受性等機制中是否起作用，尚不清楚。本研究使用rna干擾技術，特異性的阻斷nfκb亞單位p65的表達，研究nfκb信號通路在食管鱗癌的發生發展中的作用。western blot實驗中，將終濃度為50nm的p65 sirna分別轉染ec9706和eca109細胞，持續作用72h，檢測p65的蛋白表達水平，結果發現，在轉染72h后，與未轉染細胞相比，p65的蛋白表達水平也明顯下降，而非靶向抗體mapk的表達水平未受到影響。表1 p65 sirna轉染前后與5fu單獨或表2 p65 sirna轉染前后與5fu單獨或聯合
活化的nfκb可以進入到核內，與下游調控基因上共同的κb序列結合，參與細胞的增殖、轉化、浸潤及抗凋亡。抑制nfκb信號通路的活性，最終是抑制nfκb與κb的序列結合，阻斷它促進下游基因表達的功能。本研究采用凝膠滯留實驗檢測nfκb與dna的結合，結果發現，在轉染72h后，nfκb與dna的結合活性明顯下降。以上實驗結果表明，p65 sirna可以高效的轉染到食管鱗癌細胞中，特異性的抑制目的基因p65在mrna和蛋白水平上的表達，導致nfκb與dna結合能力下降，從而抑制nfκb信號通路的活化。
cyclin d1的高表達存在于多種腫瘤中，如mega等[6]的研究發現，在食管鱗癌組織中，cyclin d1和e2f1的高表達會促進腫瘤的發展，導致病人的預后欠佳。在研究中國南方的食管癌組織中發現，cyclin d1的高表達存在于61%的樣本中，提示cyclin d1的表達是食管癌發生的早期事件，并在腫瘤的進展中cyclin d1的表達不斷積累[7]。本研究采用western blot法，檢測轉染p65sirna，阻斷nfκb信號通路后，是否能夠下調nfκb下游基因cyclin d1的表達。將終濃度為50nm的p65 sirna分別轉染ec9706和eca109細胞，72h后收集細胞總蛋白，結果發現，與未轉染細胞相比，轉染細胞中cyclin d1的表達受到抑制。本研究還采用流式細胞儀檢測食管鱗癌細胞在轉染前后及單獨或聯合應用5fu后，對細胞周期的影響。ec9706和eca109在轉染p65 sirna后，g0/g1期的細胞開始增加，s期的細胞逐漸減少;當轉染細胞聯合使用5fu時，g0/g1期的細胞明顯增加，同時s期的細胞明顯減少。以上這些結果表明，由于cyclin d1是細胞周期進行中一個重要的調節者，當使用p65 sirna阻斷食管鱗癌細胞中nfκb信號通路時，cyclin d1的表達下調，腫瘤細胞被停滯在g1期，提示cyclin d1是受nfκb調節的一個重要的下游基因，nfκb可以通過對cyclin d1的調控來促進食管鱗癌細胞的增殖。p65 sirna阻斷食管鱗癌細胞中nfκb信號通路并聯合使用5fu，可以明顯抑制食管鱗癌細胞的增殖，使更多細胞停滯在g1期，減少細胞的分裂。
因此，激活的nfκb信號通路在食管鱗癌細胞的增殖及耐藥中起著重要的作用，通過轉染p65 sirna可以特異性的阻斷nfκb信號通路，抑制食管鱗癌細胞的增殖，增加細胞對化療藥的敏感性，提示nfκb信號通路可以成為食管癌基因治療中一個強有力的作用靶點。
【參考文獻】
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父愛短詩范文4
13歲開始寫小說，14歲開始創作詩歌，作品被知名作家稱為“天才的作品”，16歲已當選為浙江省作家協會會員。初中時，請假在家補習，中考竟考上溫州中學。高中時，發表詩歌、童話和小說上百篇，并如愿考上中山大學博雅學院。她到底是怎樣一個女子？類似于曾經的韓寒，游離在傳統學校、家庭教育之外，還是在無涯學海中有自己的獨到之處？本期慈琪將為我們講述她的成功之路。
揭秘1：書海中的成長路
出生于1992年的慈琪，3歲就已在時任中學教師的母親的教育下學會了簡單的拼音規則，可以獨立讀故事畫冊；4歲就入了父親執教的小學讀書。她喜歡看書在同學里是出了名的，她隨時隨地都可以看書，而且一看書別人就很難跟她搭上話。她看的書，以童話、奇幻、故事類為主，安徒生、鄭淵潔、周銳等人的作品，被她看了又看，《西游記》則被她翻爛。酷愛讀書的慈琪從小就對書籍有著超乎常人的著迷，以至于經常把課外書帶到課堂中來，偶有靈感便隨意寫寫畫畫……
都說父愛深沉、母愛細膩，這話一點也不假。讀書之余，慈琪開始從事寫作，爸爸媽媽常常做她的第一個讀者。當慈琪還是個不經世事的孩子時，在網上找雜志社郵箱、發表文章這些事一直都是媽媽在操持著。多年來，媽媽一直為慈琪收集整理著所有有關她的出版作品，而爸爸對慈琪取得的成績似乎并沒有大加贊賞，只是常常告訴慈琪要往前看。父母為慈琪提供了難能可貴的創作環境。在向來推崇傳統教育的中國，慈琪的爸爸媽媽為她阻擋了世俗的叨擾，營造出了一個寬松融洽的創作氛圍。父母無微不至的關懷，想必一定是她成功路上最為堅固的基石。
長期的閱讀讓慈琪有了比較厚實的文學積淀。慈琪得知比她小1歲的女孩趙荔出了3本書，感覺不服氣，認為自己也能行，便決定在自己14周歲生日時也要完成一部長篇小說。
果不其然，在慈琪14歲生日當天，她的第一部作品《漫畫世界傳奇》順利“出爐”，次年10月由中國文聯出版社出版。“要是寫兒童文學以外的其他作品，我可能還比不上身邊的同學?！贝如髡f，她目前主要是在兒童文學、兒童詩歌里盡情發揮，對于創作與成人領域相關的作品，還沒有足夠的閱歷來支撐。
慈琪寫東西一般不會提前構思，都是隨著感覺走，漫步在自己想象出來的無限空間，如草原、森林等等。在這個屬于她的“空間”里，她可以塑造各種動物、植物等等“意象”，并對它們“組合”，“導演”一幕幕情節。
她的代表作《夢游的孩子》，原是一首短詩，后來她忽然產生了繼續探索下去的欲望，計劃寫成33首的組詩。在備考期末的同時，她一鼓作氣地完成，有時一個晚上寫四五首，“下筆如有神”，擋也擋不住。后來該組詩被《少年文藝》（江蘇）精選，于2008年第10期開辟新欄目“第一推薦”頭條刊發；被《中國兒童文學》開專欄部分轉載，并配發主編評論。
慈琪詩選：
這樣的魔法有沒有
世界上有沒有一個魔法
讓哭泣的小孩子能夠快樂起來
世界上有沒有一個魔法
讓凍僵的小花兒在春天柔軟地綻開
世界上有沒有一個魔法
可以把會噴火的魔鬼變得不那么壞
世界上有沒有一個魔法
讓蒲瑪 讓蒲瑪不要再這么笨笨呆呆
第一個魔法
是好心腸的摘莓子老奶奶實現的
這個季節 她做了一大罐莓子果醬
所有的小孩子都吃得 忘了哭
第二個魔法
是山坡底下那只鼴鼠實現的
它將洞里的棉絮全都搬了出來
第二年春天 開心地欣賞
那美麗的小花兒
第三個魔法
是魔鬼的媽媽實現的
因為無數個媽媽的告狀
她再也不能容忍
這個頑劣孩子的胡來
第四個魔法……
嗯，真好！
到現在還沒有人實現
因此 我可以繼續奔跑在世界的每個角落
和所有可愛的小東西
都打個快樂的招呼
揭秘2：在家自學迎高考
“高三的時候我很少去學校上課，一個人在家里做題，一本接一本，做完‘一課一練’再做《五年高考三年模擬》，做完了把錯題答案涂掉重頭再做一遍，直到不會錯為止。做累了就寫東西。我高三那一年生活特別簡單，除了做題就是寫東西，除了寫東西就是看書，偶爾去學校圍觀一下同學們的高三生活。很慚愧地說，我當時幾乎沒有感覺到什么壓力，高考之前我完成了三個組詩，整整一百首?！贝如鬟@樣講述自己的高考之路。
高考對中國的家家戶戶太重要了。父母會給孩子選擇收費較貴的幼兒園，為的是“不輸在起跑線上”，而賽道的另一端就是十幾年后的高考。但是，慈琪當年的學習之路并非一帆風順。
初二下學期結束時，老師通知家長，說慈琪的成績連普通高中都別想考上。
“當時，慈琪的成績考上普高的希望也很渺小”，慈琪的母親曾說。他們并不在意孩子的學習成績，但面對中考，不得不重視起來。