前言：中文期刊網精心挑選了贈內人范文供你參考和學習，希望我們的參考范文能激發你的文章創作靈感，歡迎閱讀。
贈內人范文1
2006年是股改年，2007年是并購年。這已成為市場的共識。
顯然，并購重組是好事，它有助于提高上市公司質量，做大做強資本市場，在全流通條件下尤其如此。但是，并購活動中內部人操縱的跡象卻有愈演愈烈之勢。
一個突出的表現是定向增發。
定向增發也稱私募，是并購重組的重要方式。日前，證監會有關部門負責人在接受記者采訪時專門談到，定向增發正在成為推動資本市場結構性調整的重要手段，特別是向特定對象發行股份認購資產方式的推出(即整體上市――筆者)，是資本市場發生轉折性變化的一個重要標志。通過定向增發，可以實現整體上市，引入戰略投資者，挽救財務危機公司，增強控股權等目的。這話當然不錯，但是，通過分析相關價格數據，我們卻被告知，大股東及那些有資格參與私募的戰略投資者，正凌駕于普通投資人之上，堂而皇之地成為并購重組活動的最大受益者。
即以今年為例，迄今滬深股市先后有22家上市公司實施定向增發，共發行股份23.35億股，募資(包括收購實物資產)190億元，平均增發價為8.14元。但是，其公告增發完成上一日的股價平均達13.62元，即增發完成之日，參與者平均獲利已高達67.32％。而從今年元月1日的2715點，就算到最高點2月27日3050點，漲幅也不過12.34％。普通股民和那些有資格參與私募的“特權階層”的收益差距何其大也!例如，3月12日公告完成增發的建投能源，增發價3.76元，公告上一日股價為8.13元，市價比增發價高出116.22％；1月17日公告增發的廣電網絡，增發價12.98元，上日股價24.77元，市價高出增發價90.83％；1月27日公告增發的中鐵二局，增發價5.05元，上日股價9.57元，市價高出增發價89.5％；3月2日公告增發的云南銅業，增發價9.50元，上日股價17.42元，市價高出增發價83.37％；等等。
分析這22家定向增發公司，還可以發現這樣一個現象，即大股東或內部人參與增發的比例較高者，獲利往往也越高。如獲利率(116.22％)最高的建投能源，其增發的6億股新股，大股東河北建設投資公司和二股東華能電力分別認購3.3億股和1.67億股，合計4.97億股，占增發股份的82.8％。增發剛剛結束，這兩家財團賬面盈利便分別高達14億多元和7億多元。增發獲利89％的中鐵二局，大股東認購35％；增發獲利83％的云南銅業，大股東以資產認購54％；增發獲利80％的山西三維，山西當地一家煤炭運輸公司認購35％，而按規定，其所持股份一年后即可上市流通。相反，大股東和內部人基本不參與，增發股份僅僅由數家機構認購者，獲利率也較低。如增發3800萬股的六國化工，由7家機構認購，到增發公告日獲利為32％；由10家機構參與增發的山東藥玻，獲利率也才44％，低于平均獲利水平。
贈內人范文2
【關鍵詞】 Fas；Fas配體；子宮內膜增生；子宮內膜腫瘤
Fas/FasL系統的生理功能在于通過對細胞凋亡的調節，限制某些細胞群落的過分膨脹或過分萎縮，參與正常細胞增殖、分化和凋亡動態平衡的維持，在臨床多種疾病的發生過程中具有重要的作用［1-2］. 近年的研究發現，在多種腫瘤細胞出現Fas表達下調和 FasL表達上調的現象， 直接參與或間接促進了腫瘤逃避機體免疫系統的監視，從而有利于腫瘤細胞的進展和轉移［3］. 但有關Fas/FasL系統與子宮內膜增生過長和子宮內膜癌發生中的作用少見報道. 本實驗采用免疫組化和原位雜交方法檢測Fas/FasL系統在子宮內膜增生過長和子宮內膜癌中的表達，旨在探討其在子宮內膜癌發生發展中蛋白及基因表達的意義，為臨床診斷和治療提供依據.
1材料和方法
1.1材料
選用第四軍醫大學西京醫院婦產科200201/200304手術切除子宮標本83例. 分為子宮內膜腺癌組18例，年齡（44.2±7.8）歲；子宮內膜增生過長組40例，年齡（44.5±8.2）歲；以正常子宮內膜25例作為對照組，年齡（45.5±7.6）歲. 子宮內膜腺癌采用國際婦產科聯盟（IFGO）的三級分類法分為I級7例，II級5例，III級6例. 子宮內膜增生過長按1985年國際婦科病理協會提出的分類標準進行分類，根據腺體增殖程度及腺上皮有無非典型性（atypical，ATP）分為四類：單純性增殖不伴ATP 11例，單純性增殖伴有ATP 12例，復雜性增殖不伴ATP 9例，復雜性增殖伴有ATP 8例.
Fas和FasL多克隆抗體（兔抗人）及通用型超敏SP kit（福州邁新試劑公司）；FasL原位雜交試劑盒（武漢博士德試劑公司）；地高辛標記的FasL mRNA多相寡核苷酸探針序列為：① 5′CCCAG ATCTA CTGGG TGGAC AGCAG TGCCA3′，② 5′TATTC CAAAG TATAC TTCCG GGGTC AATCT3′，③ 5′CTCTC TGGTC AATTT TGAGG AATCT CAGAC3′，由上海生工生物工程技術服務有限公司合成.
1.2方法
1.2.1免疫組化SP法測定
Fas和FasL蛋白的表達水平標本經40 g/L多聚甲醛固定，石蠟切片厚4 μm，抗原經微波熱修復，Fas及FasL一抗的工作濃度均為1∶100，DAB顯色. 操作方法按試劑盒說明書進行.
1.2.2原位雜交法測定
FasL mRNA石蠟切片常規脫蠟至水，30 mL/L H2O2室溫處理10 min，DEPC水洗2×5 min，用胃蛋白酶37℃消化30 min，0.5 mol/L PBS洗3×5 min，進行40℃預雜交3 h，用濾紙吸去預雜交液，加入FasL mRNA探針的原位雜交液雜交過夜. 以鏈霉素過氧化物酶（SABC）免疫組化法染色，DAB顯色. 操作方法參照說明書進行.
1.2.3對照設計
免疫組化分別用已知Fas和FasL均陽性的乳腺癌組織切片作為陽性對照，用PBS代替一抗作為陰性對照. 原位雜交用雜交試劑盒內配置的陽性切片作為陽性對照，雜交過程中加不含標記探針的原位雜交液作為陰性對照.
1.2.4結果判定
免疫組化和原位雜交染色，以黃色和棕黃色為陽性信號. 根據染色強度和顯色細胞比例的綜合評分，將染色結果分為“-，+， ， ”四級： ① 按內膜組織中顯色有無及深淺評分：無顯色為0分，淺黃色或黃色為1分，棕黃色為2分，棕褐色為3分. ② 按內膜組織的顯色比例評分：＜5%為0分，5%～25％為1分，25%～50％為2分，＞50%為3分. 每例標本的積分為（①＋②）/2，按積分高低分為：0分為陰性（-），0.5～1分為弱陽性（+），1.5～2分為陽性（），2.5～3分為強陽性（）.
統計學處理：應用SPSS 11.0軟件進行統計分析. FasL，Fas及FasLmRNA表達的強弱程度用KruskalWallis檢驗，組間多重比較采用Nemenyi檢驗.
2結果
2.1FasL/Fas蛋白的表達三組間年齡差異無統計學意義. FasL蛋白在子宮內膜增生過長組與子宮內膜腺癌組中的陽性表達率分別為68%和94%，均明顯高于正常子宮內膜對照組32%，差異具有統計學意義（P
2.2FasL基因的表達FasLmRNA的表達
強度在子宮內膜增生過長組與子宮內膜癌組亦明顯高于正常子宮內膜對照組，差異有統計學意義（P＜0.05，表2）. 表2FasL mRNA在各種子宮內膜中的表達(略)
3討論
Fas及FasL蛋白在正常子宮內膜中的生理性表達，有利于維持細胞增殖和細胞凋亡平衡［2］. Fas的表達隨月經周期波動，在增生期無表達或弱表達，而在分泌期則逐漸增強；FasL在整個月經周期中呈陰性表達或弱表達，且不隨月經周期波動［3］.
二者主要定位于功能層腺上皮細胞的胞質中. 在月經周期中激素水平不斷變化的情況下，Fas/FasL系統在調節正常內膜組織的增殖平衡與結構再建中起重要作用［4-5］. 我們的實驗結果表明，子宮內膜腺癌Fas表達的陽性率明顯低于子宮內膜增生過長，子宮內膜腺癌FasL蛋白及基因的表達的陽性率明顯高于子宮內膜增生過長 ，FasL蛋白及基因的表達在子宮內膜增生過長中明顯高于正常子宮內膜 (P0.05). 這與國外學者的研究結果一致［5］.
Fas抗原屬于神經生長因子/腫瘤壞死因子受體超家族的成員之一［6］. FasL是Fas抗原的配體，屬于TNF家族，兩者結合可導致細胞調亡［7］. Fas/FasL系統參與子宮內膜增生過長的形成［8］. 正常功能時，Fas通過誘導凋亡而作為腫瘤抑制因子，Fas信號失活導致細胞凋亡失敗、不正常細胞生存、腫瘤形成.
趙向陽等［9］的研究發現，Fas在癌變組織中表達的下調，細胞凋亡減少，而FasL則與Fas在胃癌發生發展過程中的表達呈現相反趨勢，表達強度呈增強趨勢，這種Fas/FasL的不協調表達可能也是造成胃癌細胞凋亡減弱的原因之一. 我們研究表明子宮內膜癌Fas表達降低，導致Fas介導的細胞凋亡相對減少，細胞增殖相對增加. 這可能是子宮內膜癌發病機制之一.
綜上，子宮內膜癌FasL表達增高和Fas的低表達，可導致細胞對局部免疫細胞產生抑制，對周圍正常組織的侵襲，使子宮內膜癌得以發生、發展.
【參考文獻】
［1］BohanaKashtan O， Civin Cl. Fas ligand as a tool for immunosuppression and generation of immune tolerance［J］. Stem Cells， 2004， 22 ( 6): 908-924.
［2］李海民，竇科峰，帝振宇，等. 肝內嵌合Sertoli細胞對肝組織中Fas/FasL表達的影響及其意義［J］. 第四軍醫大學學報，2003，24(12):1091-1093.
［3］王濱，鄭維國，辛曉燕，等. Fas/FasL系統在子宮內膜異位癥中的表達與意義［J］. 山西醫科大學學報，2003，34:490-492.
［4］Wang S， Pudney J， Song J， et al. Mechanisms involved in the evolution of progestin resistance in human endometrial hyperplasiaprecursor of endometrial cancer［J］. Gynecol Oncol，2003，88(2):108-117.
［5］Taylor DD， Lyons KS， GercelTaylor C， et al. Shed membrane fragmentassociated markers for endometrial and ovarian cancers［J］. Gynecol Oncol， 2002，84(3):443-448.
［6］桑威. Fas/FasL系統參與的幾種生物學效應［J］. 國際免疫學雜志，2006，11(9):389-392.
［7］Iwase M， Kondo G， Watanabe H， et al. Regulation of fasmediated apoptosis in neutrophils after surgery induced acute inflammation［J］. J Surg Res， 2006，134(1):114-123.
贈內人范文3
【摘要】 目的：探討姜黃素對人子宮內膜癌細胞(HEC1B)增殖和凋亡的影響。方法 ：應用6.67～66.67μmol/ L的姜黃素分別處理HEC1B 48h后，采用MTT法檢測姜黃素對HEC1B的增殖程度的影響；流式細胞儀進行細胞周期時相分析；熒光顯微鏡觀察細胞核形態的變化。結果： ①MTT法顯示培養48h后，姜黃素組的吸光度值A490nm低于對照組(P
【關鍵詞】 姜黃素； HEC1B； 增值 ； 細胞周期； 凋亡
姜黃（curcuma）是一種傳統的中藥，廣泛用于食品上色和調味。姜黃素(curcumin)是從姜黃中提取的酚性色素，是姜黃的主要有效成分，具有抗炎、抗氧化、抗凝、降血脂及抗動脈粥樣硬化、抗腫瘤等作用，尤其作為一種具有良好發展前景的抗癌藥物，日益引起人們的關注，成為研究的熱點［1］。本實驗采用體外細胞培養的方法來探討姜黃素對人子宮內膜癌細胞（HEC1B）的作用。
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 細胞株 人子宮內膜癌細胞株（HEC1B）由北京細胞中心提供。
1.1.2 藥物及試劑 MEM培養液，1：250胰蛋白酶，Hoechst 33258染色劑，姜黃素C1386 (美國sigma公司)；標準胎牛血清(standard FBS，天津灝洋生物制品科技責任有限公司，批號20071230)；Annexin VFITC 試劑盒(晶美生物工程有限公司)。
1.2 方法
1.2.1 細胞增殖的測定（MTT法） 取對數期生長的HEC1B，胰酶消化制成密度為5×106/ L的細胞懸液，接種于96孔板，每孔200μl。24h后細胞完全貼壁展開，更換培養液，分別設對照孔(不加姜黃素而加等量的培養液)、空白對照孔(不加細胞，其他條件與前相同)和不同濃度(6.67，16.67，33.33，66.67μmol/ L)姜黃素組，每組設12個復孔。將培養板移入CO2孵箱中，培養44h后，每孔加入5g/L MTT溶液10μl，37℃避光孵育4h，終止培養。吸去孔內培養液，每孔加入100μlDMSO溶解振蕩15min，待結晶物充分溶解后(溶解呈藍紫色)，酶標儀檢測各孔吸光值（A490nm）。癌細胞生長抑制率=（1-實驗組A值/對照組A值）。
1.2.2 細胞周期檢測 取對數期生長的HEC1B，胰酶消化制成密度為5×106 /L的細胞懸液，接種于15個培養瓶內，每瓶4mL，37℃ 培養箱中培養24h，細胞完全展開貼壁。此時換液，分別設對照組和不同濃度的(6.67，16.67，33.33，66.67μmol/ L)姜黃素組，每組3個樣本。繼續培養48h，終止培養。4℃預冷的PBS沖洗2次，用2.5g/l胰蛋白酶消化成懸液，離心8min，去上清，分別收集于15個EP管，每個EP管加碘化丙啶(PI)1mL，避光孵育15min，用流式細胞儀(FACS)分析細胞周期時相。
1.2.3 熒光染色凋亡細胞核形態觀察 取對數期生長的HEC1B，胰酶消化制成密度為5×106/ L的細胞懸液，接種于24孔培養板，每孔1.5ml。24h后細胞完全貼壁展開，更換培養液，分別設對照孔和不同濃度的(6.67，16.67，33.33，66.67μmol/ L)姜黃素組，每組4個復孔。繼續培養48h，終止培養。移去培養基，用冷的PBS洗3次，4%的多聚甲醛固定30min，棄固定液，PBS沖洗3次，加5mg/L Hoechst33258閉光染色15min，棄掉，PBS沖洗后熒光顯微鏡下觀察細胞核形態，以核碎裂、核固縮、染色體斷裂、凋亡小體形成和熒光強度增強等作為凋亡細胞指征。每張片隨機選取4個高倍視野，計算凋亡細胞占每個視野總細胞數的百分比，求出4個視野平均百分比，作為該樣本的凋亡百分比，每組取3張蓋玻片。
1.2.4 統計學分析 實驗數據以( ±s)表示，應用SPSS11.5統計軟件對資料進行單因素方差分析。P
2 結果
2.1 姜黃素對子宮內膜癌細胞增殖的影響
與未加藥的對照組相比，給藥各組癌細胞的A490nm值明顯降低，差異有非常顯著性意義 (P
2.2 姜黃素對子宮內膜癌細胞周期時相的影響
與對照組比較，姜黃素作用48h后，子宮內膜癌細胞G0/G1比例降低，G2/M期比例增高。在一定濃度范圍內，G2/M期的比例隨姜黃素濃度的增加而增加，并呈劑量依賴性，差異有顯著性意義 (P< 0.05)，見表2。表2 姜黃素對子宮內膜癌細胞周期的影響注： * P < 0.05， 與對照組比較. ΔP< 0.05， 與姜黃素Ⅰ， #P< 0.05，與姜黃素Ⅱ 。
2.3 姜黃素對HEC1B細胞凋亡的影響
姜黃素各組作用48h后，熒光顯微鏡觀察發現，與對照組比較，姜黃素各組細胞出現細胞核固縮、細胞核碎裂、凋亡小體等明顯凋亡特征性改變（圖1）。凋亡百分比從正常的6.81%±1.79%增加到34.72%±1.88% (P
3 討論
姜黃素是姜科植物姜黃的主要成分，具有多方面的藥理作用，尤其是作為一種具有良好發展前景的抗癌藥物，具有抗癌譜廣、毒副作用小的優點，最近被腫瘤學家們認為是一種潛在的第三代抗腫瘤藥［2］。大量體內外研究證實，姜黃素能抑制結腸癌［3］、肝癌［4］等的增殖，顯著減少腫瘤細胞的數目，縮小瘤體大小。本實驗應用MTT比色法檢測姜黃素對子宮內膜癌細胞增殖的抑制率，結果表明，姜黃素可明顯抑制子宮內膜癌細胞增殖，且細胞增殖的抑制率在一定濃度范圍內隨姜黃素濃度的增加而增加，呈劑量依賴性。MTT試劑可被哺乳動物活細胞線粒體中的脫氫酶還原成藍色甲瓚顆粒，且甲瓚生成的量與活細胞數量及細胞活化狀態成線性關系。因此被廣泛用于腫瘤藥物的篩選。
細胞增殖是通過細胞周期來實現的。在細胞生長周期中，存在著兩個調節細胞周期正常進行的關鍵點，即G1/S，G2/M期。近年來大量研究表明，G2/M阻滯與細胞凋亡的發生關系密切，G2/M期阻滯可能是DNA修復期使受損的DNA在染色體分離前得到修復［6］，修復成功的腫瘤細胞繼續進入增殖周期。不能修復者則進入凋亡途徑。Weir等［7］用姜黃素來處理對順伯耐藥的人卵巢癌細胞，結果表明，姜黃素可干擾細胞周期進程，誘導人卵巢癌細胞凋亡，并使其阻滯于G2/M期。Holy等［8］報道姜黃素可通過干擾正常的紡錘體的形成是腫瘤細胞不能正常的有死分裂，從而發生G2/M期阻滯。本實驗用流式細胞儀定量分析細胞周期并分選不同細胞周期時相細胞，用分析軟件計算百分比，結果提示，在一定濃度范圍內姜黃素將HEC1B細胞阻滯于G2/M期，使細胞停止于DNA合成期可分裂末期，且隨著姜黃素濃度的增加G2/M期的細胞所占的百分比也隨之增加。本實驗又應用Hochest33258熒光染色觀察了姜黃素誘導細胞凋亡的情況，實驗結果表明，隨著姜黃素劑量的增加，凋亡率也隨之增加，使細胞向凋亡方向發展。由此推斷阻止細胞周期進程可能是姜黃素完成其抗腫瘤作用的機制之一。
綜上所述，姜黃素能抑制人子宮內膜癌細胞的增殖，誘導細胞凋亡。其誘導細胞凋亡的機制可能是通過將細胞阻滯在G2/M期來實現的。與細胞毒類藥物相比，姜黃素毒副作用小，有望成為治療子宮內膜癌的輔藥物，促進我國傳統抗腫瘤藥的開發利用，但姜黃素具體通過何種機制阻滯細胞周期和誘導細胞凋亡以及同目前用于子宮內膜癌常規化療藥物的療效比較、體內實驗是否有著類似的結果、與其它抗腫瘤藥物聯合應用是否有協同作用等問題，有待于進一步研究。
參考文獻
1 Lin JK， Pan MH， Lin Shiau SY. Recent studies on the biofunctions and biotransformations of curcumin . Biofactors. 2000， 13(1-4): 153～158．
2 Lin JK， Jinshiau SY．Mechanisms of cancer chemoprevention by curcumin．Proc Natl Sci Counc ROC(B)， 2001， 25(2):59～66．
3 Johnson JJ， Mukhtar H. Curcumin for chemoprevention of colon cancer. Cancer Lett. 2007， 255(2):170～181.
4 Shi shodi a S， Ami n H. M， Lai R， et al . Activation of NFκB is inhibited by cur cumin and related enones.Biochemical Pharmacology， 2005， 70: 700.
5 Bedi A， Barber JP， Bedi GC， et a1. BCRABLmediated inhibition of apoptosis with delay of G2/M transition after DNA darhage: A mechanism of resistance to multiple anticancer agents. Blood， 1995， 86(3): 1148～1158．
6 Weir NM， Selvendiran K， Kutala VK， et al. Curcumin induces G2/M arrest and apoptosis in cisplatin-resistant human ovarian cancer cells by modulating Akt and p38 MAPK. Cancer Biol Ther. 2007， 6(2):178～184.
贈內人范文4
關鍵詞：二次人口紅利 經濟增長 動力 內涵 機制
引言
我國現階段的人口紅利實質是依靠資本以及勞動力等生產要素的不斷投入而增加的，并且現階段的“人口紅利”只是數量型的發展，而沒有變成質量型的發展。改革開放30多年來，我國的GDP年增長率不斷平穩走高，造成這一成效的是勞動密集型產業與人口紅利以及改革與制度的紅利。這一結果證明，現階段我國的經濟發展對于外界的依賴程度比較高，其生態以及環境條件更加脆弱，各種資源更加稀缺，整個國家的創新能力普遍不高，其經濟增長的方式不能夠一直延續。對于質量型的“人口紅利”來說，其本質就是依靠著各種人力資本，并且使其成為經濟能夠可持續增長的來源，我國的“人口紅利”正處于下降的趨勢，要想經濟保持平穩快速發展，必須要使“人口紅利”轉型，將我國的“二次人口紅利”作為我國經濟增長的動力、內涵和機制，以使其為我國未來的自主創新發展奠定基礎。
二次人口紅利與我國經濟增長的動力
人口紅利是我國經濟增長的重要源泉與不懈動力，在“二次人口紅利”中，我國應該從提高人口數量和轉變人口規模兩個方面，為經濟的快速平穩增長提供源源動力。
（一） 提高人口數量，推動我國經濟增長
對于“人口紅利”來說，其具有“效率”及“要素”兩方面的功能。對于要素這方面來講，其主要是相關生產要素的投入：大量的適齡勞動人口為經濟增長以及勞動密集型的企業，提供了非常充分的要素輸入，這就是“人口紅利”的實質。當開始的人口紅利不斷增長并到達其頂端之后，人口紅利的影響就將逐步減弱了。并且在開放性條件下，對于其他的有相似人口結構以及資源的國家，人口紅利的作用顯現并且會一直被放大，會導致一個結果：就是進一步使人口紅利下降國的紅利更快地衰退。換一個方面來思考，一個國家的人力資本存在數量的價值增加和素質提升，存在數量增加以及結構改善等，這往往能夠提高人口在推動自主創新、經濟增長、經濟結構優化等方面的效率，從而補充數量型要素投入的影響力及遞減性，最終能夠為推動相關新興產業的發展和科技革命，開發新的經濟增長點，提供強大的動力支持。
（二）轉變人口模式，促進我國經濟增長
當人口的增長到達頂峰時，想要通過人口進一步轉變所帶來的人力資本質量以及存量的改變，就需要轉變人口模式：從數量型人口模式轉向多層次的質量型人口模式。這樣就能夠很好地形成有利于全新發展的人力資本，可以在很大程度上彌補勞動力人口數量的減少所產生的發展方式轉型以及經濟增長等問題，同時轉變質量型的人口模式，能夠使得整個經濟社會發展趨勢由資源型經濟轉型改變為創新型經濟，并且能夠在很長的一段時間內，對一些革命性變化起到關鍵的影響作用，這就是“二次人口紅利”的本質。二次人口紅利與傳統的人口紅利不同，傳統的人口紅利是依賴數量型勞動力供給的經濟增長效應，而二次人口紅利是在不同質量層次的人力資本條件下，創新效率的提升以及勞動力生產發展，從而帶來的相關的自主創新效應以及經濟發展效應等。同時，二次人口紅利也是我國在社會與經濟的轉型期間，相關的人口轉變進入到了后期階段的表現，這時就需要相關的制度革新，來挖掘、培養和釋放人力資本的存在數量以及增長數量。與此同時，還能夠激勵與支持各個層次人力資本的相關創新活動以及產業優化發展，最終能夠從本質上促進經濟的增長。
二次人口紅利與我國經濟增長的內涵
二次人口紅利的內涵，就是通過探索傳統資源中的隱形人力資源與回流科技人力資源，促進我國經濟的增長。
（一）傳統資源中的隱性人力資源
二次人口紅利將在三個層次中推動我國經濟的增長：第一個是企業家層次，一群年輕的群體，主導著經濟發展的方向以及速度；第二個是智力國民層次，社會中的每一個人，都能夠發揮自身的潛能，為了國家的經濟發展而積極創新，提高經濟發展的內在動力；第三個是技工層次，大量的、熟練的技工，為了我國的經濟增長提供了高效的勞動力。
首先是相關的企業家人力資本，這是促進經濟增長的內涵之一。因為相關的企業家人力資本是具有創新能力以及創新精神的人力資本，擁有一個有效的激勵制度，能夠提高企業家人力資本對國家經濟資源配置的效率，可以在很大程度上影響到國家的經濟發展水平和技術創新能力。在相關的創新活動或是創新經濟中，企業家在其中起的作用非常關鍵，主要表現在對于決策、管理、承擔風險和創新的綜合能力。但是，對于企業家人力資本的估測難度非常大，應將企業家人力資本看作是企業發展甚至是經濟增長的關鍵要素。企業家人力資本的天性表現為對于相關生產以及創新活動中隱性知識的掌握和運用，而知識能夠更好地幫助企業家發現創新機遇，以此來挖掘并更大限度地發揮自身及企業之外的資源優勢，從而能夠更好地管理與組織企業，優化企業的資源配置，提高企業的核心競爭力。這樣能夠更好地促進我國整體經濟的增長與技術進步。對于國家來講，改革開放的相關制度與環境，能夠為相關的企業家群體形成以及發展，提供良好的平臺與條件，從而推動企業和區域地區經濟的快速發展。
其次是非職業的發明家及創新者，這是促進經濟增長的又一內涵。非職業的發明家大多數的社會身份是個體科研者、私營企業家、創新愛好者等，而他們往往具有強烈的創造發明熱情，同時具有一定的專業知識以及技能，且有勇于嘗試、不怕失敗的勇氣。非職業的發明家以及其相關的發明創新活動與國家的科研計劃、重大科研項目不同，前者缺乏非常明確的目的性、時間性，并且缺少政策支持以及相關部門的資金保障。一般情況下，就是通過自主研發完成其發明，同時將其創造轉變為成果，但是往往受到資金等現實條件以及環境的制約。我國存在著大量或者是具有創新知識技能的人，他們是“二次人口紅利”促進經濟增長的新興力量。
最后是農村人力資本的提升，這是經濟未來增長的關鍵因素。對于我國來說，不得不面臨年輕勞動力增長即將減速的事實，但農村的數千萬農民工逐漸變為城市工人，將農民工素質快速提升，可以形成大量技工，從而推動新一輪的經濟增長。
（二） 發展與回流之中的科技人力資源
科技人力資源是接受了或者是參與了相關專業培訓，且參與到了系統的科學技術知識的發展、生產、擴散以及應用和價值實現過程中的相關人員。這也是“二次人口紅利”在經濟增長中的一個不可忽視因素?？萍既肆Y源必須要滿足兩個條件中的一個，第一是需要高等教育正式資格的科技崗位工作人員，換個詞就是科技活動從業者；第二是需要完成科學技術領域的高等教育人員，就是科技人力資源儲備。
對于科技人力資源來說，其包括了整個經濟活動中的高素質人員。我國雖然在科技人力資源的人員總量上占據著領先地位，但是我國每一萬名勞動力中的科技人才數量與每一萬名勞動力中研究人員數量都大大低于發達國家。由于我國的人口基數大，勞動力的數量也大，因此，盡管我國的科技人力資源總量雄居世界第一，相關的科技研發人員總量也能位居世界第二位，但我國在研究人員這一指標上卻低于發達國家。從另外一個方面來講，我國的科技人才分布不均，大多數集中于一線以及二線城市，其涉及的行業或領域主要集中在相關的公務員等公共服務行業以及大中型的科研院所，而相關的企業、農村地區以及經濟領域缺乏很多科技人才。對于我國的中西部與東部比較來說，研發人員在水平以及數量上的差距較大，而西部存在的問題是相關的科技人力資源結構中，高層次創新人才非常缺乏，科技人才供給不足，造成了創新管理體制機制的落后，并與經濟發展脫節等問題，這些都在很大程度上影響了我國經濟增長方式的轉變。對于我國來說，其自主創新的發展以及產業結構的升級，與很多發達國家存在較大差距，但是其中仍有很大的挖掘潛力。
自從改革開放35年來，我國吸引了眾多海外優秀科技人才，自從我國加入世界貿易組織之后，每年進入我國的科技人員達到幾十萬人?！笆濉币詠?，我國實施了各種人才計劃，使人才引進數量再創新高。對于高層次科技人力資源的回流，不僅能夠為企業的創新發展提供最為直接的要素以及動力，同時也是我國“二次人口紅利”促進經濟增長的主要源泉。
二次人口紅利與我國經濟增長的機制
二次人口紅利促進我國經濟增長的機制，一般包含人口優勢、人口轉變方向、現代型人口結構、競爭優勢、制度紅利等，本文重點從勞動力分流、人力資源匹配、產業發展三個重要內容，進行二次人口紅利的機制分析。
（一）相關勞動力的充分流動
勞動力的充分流動包括了新型的人力資本在產業內或者是行業內以及組織內部的流動；農村剩余勞動力從經濟欠發達地區向發達地區的流動；創新型高級人力資本從發達國家向國內的流動等。這一機制可以有效地為我國經濟的增長奠定人才基礎。
（二）人力資本匹配性的投資
對于人力資本的匹配性投資，不僅需要與國家經濟發展方向進行匹配，并且還需要一定的前瞻性投資，就是根據世界經濟的動態，來建立與之相適應的前瞻性人力資本投資計劃。這一機制為人力資本存儲數量的累積及相關的優化奠定了結構基礎。
（三）實施配套性的產業發展
對于人力資本來說，不能自動地促進自主創新以及經濟增長，同時也不會自動地產生紅利，就像人口紅利一樣，中國在人力資本的存量上一直具有相當大的優勢。人力資本的結構以及質量、培育與其相適應，對各種層次的產業結構進行優化和升級，才是產生二次人口紅利創新和發展的關鍵。通過跨越不同人力資本的門檻，使更多的、適用的人力資本可以參與到不同屬性以及層次的創新活動之中，從而形成多種層次的自主創新結構以及人力資本結構，同時全面提高要素的生產率。對于二次人口紅利來說，不僅是傳統人口紅利從數量型到質量型的轉變，最為關鍵的是將各個層次的質量型人力資本體系進行重新塑造以及利用。這一機制為經濟增長奠定了強有力的保障基礎。
結論
對于我國的二次人口紅利來說，其可以為傳統經濟以及其未來發展模式的轉變提供全新的機會。對于我國而言，具有“二次人口紅利”的潛力以及條件，因此，需要我國政府在制度層面創造良好的環境，這其中涵蓋采用一系列的關于金融、教育以及政治體制等改革的措施，來盡力挖掘隱含的人力資本，從而培養新型的人力資本，提升相關的人力資源質量以及相配套的產業結構、相互協作的組織形式、創新的社會空間，這樣可以使我國經濟增長的路徑暢通，使質量型人力資本所作用的要素提高生產率，最終達到為我國經濟持續增長取得紅利與獲得新源泉的目標。
參考文獻：
1.李剛，林曼.論人口紅利下降對我國人力資源會計應用的影響[J].商業時代，2013，7（20）
2.孟令國，李超.令我國二次人口紅利的困境擺脫與現實愿景[J].改革，2013（1）
3.劉三林.人口紅利、劉易斯拐點與廣州產業結構升級研究[J].商業時代，2013，3（7）
贈內人范文5
【關鍵詞】 番荔枝內酯；抗腫瘤；凋亡；增殖；caspase-9；Raji細胞
Abstract：Objective To investigate the effects of annonaceous acetogenin on proliferation and apoptosis in Raji cells and its mechanism. Methods Raji cells cultured in vitro were pided into control group， annonaceous acetogenin group and adriamycin group. Raji cells were effected by 6.25， 12.5， 25， 50 μg/mL annonaceous acetogenin. Proliferation of Raji cells were evaluated by MTT assays， apoptosis percentage was assessed by flow cytometry. Caspase-9 protein was detected by immunohistochemistry. Results The Raji cell proliferation rate of annonaceous acetogenin decreased compared with the control， that of 25， 50 μg/mL group were lower than adriamycin group， and it was related to the concentration， relying on the incubating time. The apoptosis rate was higher than control， that of 25， 50 μg/mL group were higher than adriamycin group， and it was related to the concentration and the incubating time. The expression of caspase-9 protein of annonaceous acetogenin group was higher than control， and it had a positively relationship with the concentration and incubating time. Conclusions Annonaceous acetogenin could inhibit cell proliferation in a dose-dependent and time-dependent manner in Raji cells， and it may induce Raji cells apoptosis by up-regulating caspase-9 expression.
Key words：annonaceous acetogenin；antitumor；apoptosis；proliferation；caspase-9；Raji cell
番荔枝(Annona squamosa Linn.)為番荔枝科番荔枝屬植物，我國廣東、廣西、海南、福建、云南等省及臺灣地區均有栽培，東南亞、南美國家及地區也有廣泛分布。番荔枝內酯(annonaceous acetogenins)分布在番荔枝科多種植物的根、樹皮、種子、葉以及果實中。研究表明番荔枝內酯是一類很有希望的新抗癌藥物。筆者研究番荔枝內酯在淋巴瘤治療中的應用，現將體外實驗結果報道如下。
1 實驗材料
1.1 藥物
番荔枝內酯類化合物：為本研究組參照Dos Santos等[1]方法從番荔枝種子中提取分離所得，為白色蠟狀粉末。使用前以少許無水乙醇溶解，加生理鹽水配制成所需濃度，乙醇終濃度不超過1%；鹽酸阿霉素為意大利法瑪西亞公司產品。
1.2 主要試劑
四甲基偶氮唑藍(MTT，美國Sigma公司)，AnnexinV-FITC凋亡檢測試劑盒(南京凱基生物公司)，半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-9 (caspase-9)免疫組化試劑盒(深圳晶美生物工程有限公司)。
1.3 瘤株
人Burkitt’s淋巴瘤細胞系Raji細胞購自華中科技大學同濟醫學院免疫教研室，并由本院實驗室傳代保存。
2 實驗方法
2.1 分組
番荔枝內酯組：細胞培養基中加入生理鹽水溶解的番荔枝內酯，實驗終濃度分別為6.25、12.5、25、50 μg/mL；未干預組：細胞培養基中加入與實驗組等體積的生理鹽水；阿霉素組：細胞培養基中加入生理鹽水溶解的阿霉素，終濃度為0.1 μg/mL。
2.2 MTT比色試驗
取處于對數生長期的Raji細胞1×105/mL，接種于96孔培養板，分別加入不同濃度番荔枝內酯以及阿霉素各10 μL，孵育24、48、72 h。孵育結束前4 h，各培養孔加入MTT(5 mg/mL)10 μL，離心，棄上清，加入10%二甲基亞砜震蕩溶解結晶，上酶標儀于波長λ＝492 nm處測吸光度(OD)值。通過OD值計算細胞增殖抑制率。流式細胞儀測定細胞凋亡率。細胞增殖抑制率(%)＝(未干預組OD均值－實驗組OD均值)/未干預組OD均值×100%。
2.3 實驗步驟
嚴格按照AnnexinV-FITC凋亡檢測試劑盒說明進行。每份樣品檢測105個細胞，雙參數結果以二維散點圖顯示，數據由FCM的計算機軟件分析輸出。
2.4 免疫細胞化學法檢測caspase-9蛋白表達
將處理組和對照組細胞用PBS洗1遍，調整細胞濃度1×105/mL，取50 μL滴片，無水丙酮固定20 min，晾干。嚴格按照試劑盒操作步驟進行，滴加正常山羊血清，一抗caspase-9兔抗人多克隆抗體，二抗山羊抗兔IgG孵育，滴加辣根酶標記工作液，DAB顯色，蘇木素輕度復染，中性樹脂封片。以PBS代替一抗作染色的陰性對照。結果判定：細胞胞漿出現棕黃色顆粒為陽性細胞，在高倍光鏡下至少觀察200個細胞，計算陽性細胞數。
3 統計學方法
數據為計量資料。統計分析采用SPSS13.0軟件。實驗數據以x±s表示，多組間比較用方差分析，2組間比較用t檢驗；以P＜0.05認為差異有統計學意義。
4 結果
4.1 番荔枝內酯對細胞caspase-9蛋白表達的影響
在番荔枝內酯組中，隨著藥物濃度的增大、作用時間的延長，細胞中caspase-9蛋白表達量逐步增加，與未干預組比較，各組表達量均高于未干預組(F＝43.25，P＜0.05)。與阿霉素組比較，番荔枝內酯12.5、25 μg/mL組無統計學意義，6.25 μg/mL組caspase-9表達低于阿霉素組(P＜0.05)，50 μg/mL濃度組表達高于阿霉素組(F＝27.68，P＜0.05)。見表1。表1 各組不同時點Raji細胞caspase-9蛋白表達的比較(略)注：與未干預組比較，P＜0.05；與阿霉素組比較，P＜0.05(下同)
4.2 番荔枝內酯對細胞增殖的影響
細胞增殖率與阿霉素、番荔枝內酯藥物作用時間呈依賴性，并與番荔枝內酯藥物濃度呈負相關，r＝-0.67，P＜0.05。番荔枝內酯組對細胞增殖率影響除6.25 μg/mL濃度組在24 h作用點時與未干預組差異無統計學意義外，余濃度組及作用時間點與干預組比較，差異均有統計學意義(F＝53.64，P＜0.05)。番荔枝內酯6.25 μg/mL組在各個作用時間點對細胞增殖率均高于阿霉素組，但隨著濃度的增加，增殖率逐步降低，至25 μg/mL濃度組時，增殖率低于阿霉素組(F＝25.37，P＜0.05)。見表2。表2 各組不同時點Raji細胞增殖率比較(略)
4.3 番荔枝內酯對細胞凋亡的影響
Raji細胞凋亡率與番荔枝內酯藥物濃度呈正相關(r＝0.72，P＜0.05)，并有時間依賴性。番荔枝內酯組除6.25 μg/mL組于24 h作用點時與未干預組差異沒有統計學意義外，其余濃度組及作用時間點與未干預組比較，均高于未干預組，差異有統計學意義(F＝33.632，P＜0.05)。番荔枝內酯25、50 μg/mL組細胞凋亡率高于阿霉素組，6.25 μg/mL組細胞凋亡率低于阿霉素組(F＝27.623，P＜0.05)，12.5 μg/mL組與阿霉素組差異沒有統計學意義。見表3。表3 各組不同時點Raji細胞凋亡率比較(略)
5 討論
番荔枝內酯又稱為番荔素、番荔枝皂素、番荔枝乙酞苷元和番荔技乙酞精寧等，共有6種結構類型：單四氫呋喃環型，鄰雙四氫呋喃環型，間雙四氫呋喃環型，裂雙四氫呋喃環型，鄰三四氫呋喃環型，裂三四氫呋喃環型。目前其主要來源是通過從番荔枝科植物中采用天然加工方法提取，成本低，產率高，其有廣泛生物活性的天然成分，能發揮驅蟲、抗微生物、抗寄生蟲、抗瘧、抗腫瘤等作用，故而日益受到學者們的廣泛關注，現今報道，從番荔枝科植物中提取的番荔枝內酯化合物達300余種[2]。自1982年Jolad等首先從番荔枝科的紫玉盤屬植物中分離出一種具有抗腫瘤活性的內酯以來，引發了對番荔枝內酯抗腫瘤作用的研究熱潮[3-4]。番荔枝內酯中抗癌活性最強的內酯是泡番荔枝辛(bullatacin)，按重量計算為紫杉醇抗白血病作用的300倍，被譽為明日抗癌之星[5]。其他如asimicin、 trilobacin、trilobin、squamocin等也都具有較強的抗癌活性[6]。Huang等[7]將番荔枝內酯用于誘導體外胃癌細胞的凋亡研究獲得成功；Lu等[8]發現番荔枝內酯squamocin對人體外白血病細胞有抑制作用，可呈濃度依賴性地將細胞增殖阻滯于G2/M期；任氏等[9]觀察了番荔枝內酯對肝癌細胞的影響，發現番荔枝內酯對體外肝癌細胞增殖有抑制作用，并隨藥物濃度的增加而抑制作用增強。目前關于番荔枝內酯對人淋巴瘤Raji細胞作用研究還少有報道。
番荔枝內酯引起細胞凋亡的機制目前尚沒有完全一致的結論。番荔枝內酯是一條以含末端Y-內酯環及四氫呋喃環為主要結構特征的長烷基鏈化合物，對線粒體復合物Ⅰ具有強烈抑制作用，其作用機理可能是通過抑制線粒體NADH氧化還原酶，從而阻止呼吸鏈電子的傳遞，使ATP產生迅速減少。由于能量的減少引起可滲透性糖蛋白(P-gp)功能的減弱及隨后的細胞凋亡，并用此作為番荔枝內酯應用于多重耐藥癌細胞治療的理論依據[10]。也有報道說番荔枝內酯可通過使腫瘤細胞內cAMP和cGMP水平的降低，從而誘導了凋亡[11]。另外，番荔枝內酯可能引起細胞內活性氧的增加和線粒體膜電位的降低，活性氧的大量釋放和線粒體膜電位的降低均能引起caspase-9的釋放，從而激活了caspase-3，活化的caspase-3使其底物PARK 降解，從而誘導腫瘤細胞的凋亡[12]。
本研究通過MTT比色法和流式細胞儀分別檢測了番荔枝內酯對體外培養人淋巴瘤Raji細胞增殖和凋亡的影響，實驗結果表明，番荔枝內酯顯著抑制Raji細胞增殖，促進其凋亡，并在一定范圍內與作用時間、藥物濃度成正相關。阿霉素是目前淋巴瘤藥物治療的一個經典用藥，本實驗用其作為陽性對照，結果表明，阿霉素對抑制Raji細胞的增殖和促進其凋亡都有明顯作用，與其比較發現，番荔枝內酯在較低劑量(12.5 μg/mL)時即能達到常規劑量阿霉素的作用效果，濃度提高甚至超過阿霉素的作用效果。已知細胞凋亡有兩條途徑[13-14]：一是死亡受體途徑，為腫瘤壞死因子(TNF)受體家族成員參與的通過caspase-8活化的途經，又稱為外源性凋亡途徑；二是線粒體途徑，為細胞色素-C參與的通過caspase-9活化的途徑，又稱為內源性凋亡途徑。兩條途徑最后均通過激活下游的效應因子caspase-3，7使細胞發生凋亡。caspase-9是內源性凋亡途徑的啟動因子，caspase-3則被認為是涉及兩條途徑的重要效應caspase。細胞凋亡不僅在腫瘤的發生發展過程中起重要的作用，而且與腫瘤治療和藥物敏感機制以及耐藥性有關，目前已發現大多數抗癌藥發揮其抗癌效應是通過誘導腫瘤細胞凋亡[15-16]。本實驗通過細胞免疫組化檢測細胞的caspase-9蛋白表達，發現隨番荔枝內酯實驗濃度加大和作用時間的延長，caspase-9蛋白表達增多。結果提示，番荔枝內酯誘導Raji細胞的凋亡伴caspase-9的高表達，該藥可能通過線粒體途徑誘導Raji細胞凋亡。
參考文獻
[1] Dos Santos， Boaventura， Pimenta. A new bis-tetrahydrofuran Annonaceous acetogenin from Annona cornifolia[J]. Biochemical Systematics and Ecology，2006，34(1)：78－82.
[2] 李艷芳，符立梧.番荔枝內酯抗腫瘤作用研究進展[J].中國藥理學通報， 2004，20(3)：245－247.
[3] Takahashi S， Yonezawa Y， Kubota A， et al. Pyranicin， a non- classical annonaceous acetogenin， is a potent inhibitor of DNA polymerase， topoisomerase and human cancer cell growth[J]. International Journal of Oncology，2008，32：451－458.
[4] Liu HX， Huang GR， Zhang HM， et al. Annonaceous acetogenin mimics bearing a terminal lactam and their cytotoxicity against cancer cells[J]. Bioorgantic & Medicinal Chemistry Letters，2007， 17(12)：3426－3430.
[5] 韓金玉，于良濤，王 華.泡番荔枝辛——明日抗癌之星[J].中草藥，2002， 33(4)：380－382.
[6] Fall D， Pimentel L， Champy P， et al. A new adjacent bis- tetrahydrofuran annonaceous acetogenin from the seeds of Uvaria chamae[J]. Planta Medica，2006，72(10)：938－940.
[7] Huang GR， Jiang S， Wu YL， et al. Induction of cell death of gastric cancer cells by a modified compound of the annonaceous acetogenin family[J]. Chembiochem，2003，4(11)：1216－1221.
[8] Lu MC， Yang SH， Hwang SL， et al. Induction of G2/M phase arrest by squamocin in chronic myeloid leukemia (K562) cells[J]. Life Sciences，2006，78(20)：2378－2383.
[9] 任鳳梅，蒯玉花，張曉春，等.番荔枝內酯化合物對人肝癌細胞株HepG2的作用[J].中國中醫藥信息雜志，2007，14(3)：35－36.
[10] Abe M， Kubo A， Yamamoto S， et al. Dynamic function of the spacer region of acetogenins in the inhibition of bovine mitochondrial NADH-ubiquinone oxidoreductase (complex 1)[J]. Biochemistry，2008， 47(23)：6260－6266.
[11] Chiu HF， Tohih TT， Hsian YM， et al. Bullatacin，apotent antitumor annonaoesous acetogenin，induces a poptosis through a reduction of tracellu1ar cAMP and cGMP levels in human hepatoma 2.2.15 cells[J]. Biochem Pharmacol，2003，65(3)：319－327.
[12] Yuan SF， Chang HL. Selective cytotoxicity of squamocin on T24 bladder cancer cells at the S-phase via a Bax-， Bad-， and caspase-3-related pathways[J]. Life Sciences，2006， 78(8)：869－874.
[13] White MK， Amini S， Khalili K， et al. Development of a bidirectional caspase-3 expression system for the induction of apoptosis[J]. Cancer Biology & Therapy，2008，7(6)：949－958.
[14] 高 欣，康立源，高秀梅.腦缺血后神經細胞凋亡通路及中藥干預[J].中國中醫藥信息雜志，2007，14(7)：96－98.
贈內人范文6
[關鍵詞] 姜黃素；紫杉醇；Caspase-3；子宮內膜癌；增殖；凋亡
[中圖分類號] R737.33 [文獻標識碼] A [文章編號] 1674-4721（2013）06（b）-0021-03
姜黃素（curcumin，CCM）是從姜科植物姜黃中提取的一種酚性化合物，毒性低，耐受性好，具有抗腫瘤、抗氧化、抗炎[1-2]、抑制血管增生、降血脂[3-5]等多種藥理作用。近幾年的研究表明，姜黃素具有抑制腫瘤細胞增殖、誘導腫瘤細胞凋亡的作用。紫杉醇（paclitaxel，PIX）是子宮內膜癌的常規化療用藥，但由于藥物毒性及耐藥性使其實際療效與人們期望的相差很大。本實驗主要研究CCM與PIX聯用對人子宮內膜癌細胞株增殖的影響及其機制，探討其是否有協同作用，為CCM應用于臨床提供基礎理論依據。
1 材料與方法
1.1 實驗材料
人子宮內膜癌細胞株（Ishikawa）（上海復祥生物科技公司）；姜黃素（Sigma公司）；紫杉醇（哈藥集團）；兔抗人Caspase-3多克隆抗體、Sp Rabbit HRP Kit（羊抗兔）（北京康為世紀公司）；AnnexinV-FITC試劑盒（凱基公司）；胎牛血清（四季青）；RPMI-1640培養液、0.05%胰蛋白酶、MTT細胞增殖試劑盒、二甲基亞砜（DMSO）等試劑。姜黃素用DMSO溶解為25 mmol/L，4℃冰箱保存，用時稀釋到工作濃度。
1.2 方法
1.2.1 細胞培養
將人子宮內膜癌細胞接種于培養瓶中，培養基為含10%新生小牛血清的RPMI-1640，置37℃，5%CO2培養箱培養，待細胞長滿培養瓶80%～90%時，0.05%胰蛋白酶消化。
1.2.2 MTT法檢測細胞增殖抑制率
1.2.2.1 CCM對Ishikawa細胞增殖的影響 用0.05%胰蛋白酶消化對數生長期的Ishikawa細胞后，加入培養基終止消化，調整細胞數為3×104個/mL，各取100 μL細胞懸液接種于96孔培養板，放入培養箱中培養24 h，棄上清，加入含不同濃度CCM的培養基，使其終濃度為3.33、6.67、16.67、33.33、66.67 μmol/L，每個濃度設5個復孔。同時設空白對照孔（僅含培養基）、對照孔（細胞、培養基）。繼續培養48 h后，每孔加入5 g/L的 MTT溶液10 μL，繼續培養4 h后，每孔加入100 μL的Formanzan溶解液，置搖床上低速振蕩30 min。在490 nm的波長下測定各孔吸光度值（OD值）。細胞生長抑制率（%）=（1-實驗組OD值/對照組OD值）×100%。
1.2.2.2 PIX聯用不同濃度CCM對Ishikawa細胞增殖的影響 處理同上，設對照組、CCM組（不同濃度CCM）、PIX組（50 μg/mL）、聯合組（PIX 50 μg/mL聯合不同濃度的CCM）。在490 nm的波長下測定各孔吸光值。聯合用藥對細胞增殖抑制率按下式推測[6]：q=E（AB）/[EA+（1-EA）×EB]。其中E（AB）為兩藥合用的抑制率，EA和EB為兩藥單用的抑制率，q=0.85～1.15表明兩藥作用相加；q>1.15表明兩藥作用協同；q
1.2.3 流式細胞術檢測細胞凋亡率
取單細胞懸液接種于6孔板中培養后，加藥物。設對照組、CCM組（3.33、6.67、16.67 μmol/L）、PIX組（6 μg/mL）、聯合組（PIX 6 μg/mL聯合CCM 3.33 μmol/L），繼續培養24 h后去廢液，PBS洗滌，離心收集細胞，PBS洗滌，調整細胞濃度5×105個/mL，加入200 μL Binding Buffer液懸浮細胞，再加入5 μL Annexin V-FITC和5 μL PI混勻，室溫避光反應20 min，用流式細胞儀檢測細胞凋亡率。
1.2.4 免疫組化法檢測Caspase-3的表達
將無菌蓋玻片置于6孔板中，每孔加入單細胞懸液于蓋玻片上，待細胞貼壁后加入培養液培養24 h后，去上清，加藥物，設對照組、CCM組（6.67、16.67、33.33 μmol/L）、PIX組（50 μg/mL）、聯合組（PIX 50 μg/mL聯合CCM 16.67 μmol/L），繼續培養48 h，去廢液，PBS洗滌，4%多聚甲醛固定30 min后，PBS洗滌，采用SP法，以細胞核或細胞質內出現棕黃色顆粒為陽性作為結果判定。
1.2.5 統計學分析
采用SPSS 19.0軟件對所得數據進行統計學分析，所有數據采用均數±標準差（x±s）表示，采用單因素方差分析。檢驗水準α=0.05。
2 結果
2.1 CCM單獨及聯合PIX對人子宮內膜癌細胞Ishikawa的增殖抑制效應
MTT法表明，不同濃度的CCM作用于人子宮內膜癌細胞的吸光度值均較對照組低（P < 0.01），表明CCM對人子宮內膜癌細胞的增殖有顯著抑制作用，且隨著染毒劑量的增加，抑制率升高。CCM與PIX聯用抑瘤作用明顯強于單獨應用CCM、PIX組。CCM與PIX聯合q>1.15，表明兩藥作用協同（表1）。
2.2 不同濃度的CCM聯用PIX對人子宮內膜癌細胞Ishikawa凋亡的影響
流式細胞術結果顯示，CCM組、PIX組及聯合組人子宮內膜癌細胞Ishikawa的凋亡率均顯著高于對照組（P < 0.01），隨著CCM劑量的增加，凋亡率呈升高趨勢（P < 0.05），且聯合組凋亡率又分別高于單用CCM、PIX組（P < 0.01）（表2）。
2.3 Caspase蛋白表達的結果
與對照組比較，各實驗組中Caspase-3蛋白的表達均升高，且隨CCM濃度的升高，Caspase-3的表達升高，聯合組Caspase-3蛋白的表達分別高于單獨應用CCM、PIX組，差異有統計學意義（P < 0.05）（表3）。
3 討論
子宮內膜癌為女性生殖道三大惡性腫瘤之一，也是常見的婦科惡性腫瘤，占女性全身惡性腫瘤的7%，占女性生殖道惡性腫瘤的20%～30%[7]。近年來此病發病率呈上升趨勢，在部分國家發生率已高于宮頸癌，成為最常見的女性生殖道惡性腫瘤[8]。細胞凋亡對子宮內膜癌的發生起負性調節作用。細胞凋亡與Caspase的激活有關，半胱氨酸蛋白酶Caspase-3是Caspase家族成員中執行細胞凋亡的關鍵蛋白酶，激活后產生誘導細胞凋亡的作用。在子宮內膜癌組織中，Caspase-3處于低表達水平，可以抑制腫瘤細胞的凋亡，可能是子宮內膜癌發病機制之一。
姜黃素具有抑制腫瘤細胞增殖、誘導腫瘤細胞凋亡的作用[9]，可以通過多種途徑產生抗腫瘤作用。目前普遍認為可能主要與誘導腫瘤細胞凋亡有關。近年來已有姜黃素對卵巢癌細胞、宮頸癌細胞、子宮內膜癌細胞等婦科腫瘤細胞增殖和凋亡的影響的研究報道[10-11]。李偉宏等[12]研究表明，姜黃素可明顯抑制子宮內膜癌細胞增殖，誘導細胞凋亡。化療是治療子宮內膜癌的有效措施，但由于藥物毒性及耐藥性使其實際療效與人們期望的相差很大。紫杉醇是一種新的抗微管藥物[13-14]，是治療子宮內膜癌有效的化療藥物，是通過誘導細胞凋亡途徑實現對子宮內膜癌細胞的殺傷作用的。姜黃素與傳統化療藥物的聯合使用，不僅可以增強傳統化療藥物的抗癌效應，而且可以降低不良反應和耐藥的發生率。
本實驗表明，姜黃素、紫杉醇均可抑制人子宮內膜癌細胞的增殖、誘導細胞凋亡、上調細胞Caspase-3表達，隨著姜黃素劑量的增加，其抗瘤效應也隨之增加，且兩者聯用具有協同作用。本實驗通過對聯合用藥作用的研究為臨床治療子宮內膜癌提供新途徑、新思路及基礎理論支持。姜黃素來源廣泛、價格低廉、毒性小[15]，不僅具有抗腫瘤作用，而且還可以增強化療藥對腫瘤細胞的殺傷作用，減少化療藥的用藥劑量及毒副作用[16]和耐藥的發生率，它是一種較理想的化療增效劑和保護劑。姜黃素和紫杉醇聯合應用治療子宮內膜癌，通過體外實驗研究為臨床應用提供了理論依據。
[參考文獻]
[1] Ukil A，Maity S，Karmakar S，et al.Curcumin，the major component of food flavor turmeric，reduces mucosal injury in trinitrobenzenesul-phonic acid-induced colitis [J]. Br J Pharmacol，2003，139（2）：209-210.
[2] Li M，Zhang Z，Donald L，el al. Curcumin，a dietary component，has anticancer，chemosensitization，and radiosensitization effects by down-regulating the MDM2 oncogene through the Pi3K/mTOR/ETS2 pathways[J].Cancer Res，2007，67（5）：1988-1996.
[3] 潘贊紅，李薇，金鑫，等.姜黃素對高脂血癥動物的實驗研究[J].天津中醫，1999，16（5）：135-136.
[4] 沃興德，洪行球，趙革平，等.姜黃素對低密度脂蛋白和載脂蛋白（a）代謝的影響[J].中國動脈硬化雜志，1999，7（4）：339-341.
[5] Gomez G，Mansouraty G，Gardea J，et al.Acceleration of oxidative protein folding by curcumin through novel non-redox chemistry[J].Biochem Biophy Res Commun，2007，364（3）：561-566.
[6] Shao ZM，Shen ZZ，Liu CH.Cureumin exerts multiple suppressive effects on human breast carcinoma cells [J]. Int J Cancer，2002，98（2）：234.
[7] 王愛梅，許恪淳，祝明潔，等.子宮內膜癌p16、p53和C-erbB-2的表達及其臨床意義[J].上海交通大學學報，2007，8（27）：993-995.
[8] Kanekura T，Chen X，Kanzaki T，et al.Basigin（CDl47） is expressed on melanoma cells and induces tumor cell invasion by stimulating production of matrix metallopreteinases by fibreblasts [J]. Int J Cancer，2002，99（4）：520-528.
[9] Weber WM，Hunsaker L.A，Roybal CN，et al.Curcumin（diferuloylmethane） inhibits constitutive NF-κB activation，induces G1/S arrest，suppresses proliferation，and induces apoptosis in mantle cell lymphoma [J]. Bioorg Med Chem，2006，14：2450.
[10] Nessa MU，Beale P，Chan C，et al.Studies on combination of platinum drugs cisplatin and oxaliiplatin with phytochemicals anethole and curcumin in ovarian tumor models [J]. Anticancer Res，2012，32（11）：4843-4850.
[11] Singh M，Singh N. Curcumin counteracts the proliferative effect of estradiol and induces apoptosis in cervical cancer cells [J]. Mol Cell Biochem，2011，347（1-2）：1-11.
[12] 李偉宏，焦金菊，王青青，等.姜黃素對人子宮內膜癌細胞增殖和凋亡的影響[J].數理醫藥學雜志，2009，22（2）：141-143.
[13] Lane DP.A death in life of P53[J].Nature，1993，362：786-788.
[14] Pisano C，Greggi S，Tambaro R，et al.Activity of chemotherapy in mucinous epithelial ovarian cancer：A retrospective study[J].Anticancer Res，2005，25（5）：3501-3505.
[15] 沃興德，洪行球，金明敏，等.姜黃素長期毒性試驗[J].浙江中醫學院學報，2000，24（1）：61-65.