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元旦的黑板報范文1
關鍵詞：玉米大斑病菌（Setosphaeria turcica）；黑色素；酵母單雜交報告載體
中圖分類號：Q78 文獻標識碼：A 文章編號：0439-8114（2015）14-3542-04
DOI：10.14088/ki.issn0439-8114.2015.14.053
Construction of Report Vectors of Melanin HNreductase Gene of
Setosphaeria turcica in Yeast One-hybrid
JIA Hui， GUO Li-jie， MENG Qing-jiang， CAO Zhi-yan， SONG Ya-feng
（College of Life Science， Agriculture University of Hebei/Hebei Key Laboratory of Physiological and Molecular Plant Pathology，
Baoding 071000， Hebei， China）
Abstract： According to the restriction enzyme sites of melanin biosynthesis promoter region of reductase gene St3HNR， St4HNR and reporter vector pHIS2.1 of Setosphaeria turcica， two pairs of primers containing restriction enzyme sites were designed， the fragment length about 1 000 bp obtained by PCR using genomic DNA of S.turcica 01-23 strain as templet， and double digested by the corresponding restricted enzymes respectively， recycled and connected， constructed the yeast one-hybrid reporter vector of reductase gene. The results showed that the fragment length of two genes were both 998 bp， vectors were successfully constructed by PCR， sequencing， restriction enzyme digestion， and lay the foundation for the study of the transcription factor.
Key words： Setosphaeria turcica； melanin； report vectors of the yeast one-hybrid system
玉米大斑病是玉米（Zea mays L.）的重要葉部病害，病斑呈梭形，直接影響玉米的產量和品質，造成嚴重的經濟損失[1]。玉米大斑病菌（Setosphaeria turcica）是引起玉米大斑病的一種絲狀病原真菌，在其侵入寄主過程中，主要依靠附著胞產生機械壓力穿透植物表皮細胞[2，3]。成熟的附著胞內沉積著一層黑色素，黑色素是由病菌產生的一種非均質的不溶于水的無定形小顆粒狀類多酚聚合體，其作為重要的毒力因子，在維持附著胞內機械壓力方面起著重要的作用。玉米大斑病菌能夠代謝DHN黑色素，其在病菌附著胞壁上的沉積，保證了病菌能夠產生足夠的膨脹壓力而穿透寄主組織致病[4]。對不同病原真菌中DHN黑色素合成途徑的研究結果表明，DHN黑色素合成途徑起始于聚酮體合成酶（Polyketide synthase），其后經2個還原酶（HNreductase）、2個脫水酶（Scytalone dehydratase）和1個氧化酶（Laccases）催化聚合而形成黑色素，另外還存在一個調控黑色素生物合成的轉錄因子（MR）[5]。在玉米小斑病菌（Helminthosporium maydis）、水稻胡麻斑病菌（Bipolaris oryzae）中均存在該轉錄因子，其對黑色素合成酶基因的轉錄具有調控作用[6，7]。河北農業大學真菌霉系與植物病理學實驗室根據其他真菌中已知DHN黑色素調控基因設計引物獲得StMR1基因片段，并通過RACE（Rapid amplification of cDNA ends）技術得到該基因全長。
研究蛋白質與DNA互作的方法很多，包括DNA蛋白質印跡雜交、凝膠阻滯電泳、DNasel足跡法、DNA與蛋白質復合體的電鏡觀察、紫外交聯法、體內交聯與免疫沉淀相結合等[8]。酵母單雜交體系（Yeast one-hybrid system）是一種識別穩定結合于DNA上的蛋白質的研究技術，它是根據DNA結合蛋白（即轉錄因子）與DNA順式作用元件結合調控報告基因表達的原理來研究目的轉錄因子與基因（DNA或cDNA）互作的體系，該方法也是在細胞內分析鑒定轉錄因子與順式作用元件結合的有效方法[9，10]。真核生物中各種轉錄因子在轉錄水平的調控是基因表達調控的主要方式。典型的轉錄因子都有DNA結合區與轉錄激活區（或抑制區），在特定的時間、部位或特定條件（如脅迫條件）下，特定的轉錄因子與靶基因啟動子的順式作用元件特異性結合并相互作用，就可以激活或抑制靶基因的表達[11]。要闡明細胞內各種信號轉導與基因表達的機制，以及細胞對外界環境刺激引起的一系列信號傳遞與應答基因表達調控等機理，鑒定各種調控基因表達的順式作用元件和轉錄因子至關重要。本研究構建了玉米大斑病菌黑色素合成還原酶基因St3HNR、St4HNR啟動子區酵母單雜交報告載體，為探究轉錄因子StMR1和還原酶基因St3HNR、St4HNR的作用機制奠定基礎。
1 材料與方法
1.1 材料
玉米大斑病菌菌株01-23、大腸桿菌（Eschrichia coli）DH5α感受態細胞、SDS堿裂解溶液由河北農業大學真菌毒素與植物分子病理學實驗室保存或制備，pHIS2.1載體由河北農業大學生命科學學院張彩英教授惠贈；質粒提取試劑盒、凝膠回收試劑盒、Taq DNA聚合酶、dNTPs、限制性內切酶、T4 DNA連接酶、pMD？R19-T Simple Vector購自寶生物工程（大連）有限公司；引物合成與序列測定由生物工程技術（上海）有限公司完成。
1.2 方法
1.2.1 PCR擴增 根據St3HNR、St4HNR啟動子區的基因序列和載體pHIS2.1上的多克隆位點分別設計一對引物，并分別添加Sac I、Spe I和EcoR I、Spe I酶切位點，引物序列見表1。采用CTAB法提取玉米大斑病菌01-23菌株基因組DNA[12]，用于PCR反應模板，擴增體系為DNA 2 μL，10×Taq Buffer（Mg2+）2.5 μL，dNTPs（2.5 mmol/L）2 μL， Taq DNA聚合酶（5 U/μL）0.3 μL，3HPF（4HNF）（10 μmol/L）1.0 μL，3HPR（4HPR）（10 μmol/L）1.0 μL，加ddH2O至25 μL。PCR擴增程序為95 ℃預變性 5 min；94 ℃變性30 s，52 ℃退火30 s，72 ℃延伸1 min，30個循環；72 ℃延伸10 min。PCR擴增產物用1.5%瓊脂糖凝膠電泳檢測，用紫外凝膠成像儀（Bio-Rad）觀察結果，凝膠回收試劑盒回收擴增產物。
1.2.2 St3HNR、St4HNR基因啟動子區的克隆 將凝膠回收的目的基因片段與pMD？R19-T Simple Vector 16 ℃連接30 min或過夜。連接產物轉化大腸桿菌DH5α感受態細胞，隨機挑取白色單菌落于3 mL含100 μg/mL Amp+ 的LB液體培養基中，37 ℃下220 r/min 振蕩培養過夜。取2 μL菌液作為模板，利用pMD19-T Simple載體克隆載體上的通用引物M13+和M13-進行PCR檢測。選取PCR檢測陽性的單克隆測序，將測序正確的陽性克隆分別命名為pMD19-3HNRP、pMD19-4HNRP。
1.2.3 酵母單雜交報告載體的構建 采用SDS堿裂解法制備質粒DNA。將質粒pMD19-3HNRP、pMD19-4HNRP以及pHIS2.1載體分別進行雙酶切，電泳檢測并回收酶切目的片段進行連接反應，連接完畢后轉化大腸桿菌感受態細胞，提取陽性克隆質粒酶切驗證，構建完成St3HNR、St4HNR基因啟動子酵母單雜交的報告載體pHIS-3HNRP、pHIS-4HNRP。
2 結果與分析
2.1 St3HNR、St4HNR基因啟動子片段的擴增
分析St3HNR、St4HNR基因啟動子區序列的酶切位點，結合酵母單雜交報告載體質粒pHIS2.1上的多克隆位點，分別選用限制性內切酶Sac I、EcoR I和Spe I，設計2對帶有酶切位點的特異引物擴增目的片段，分別得到998 bp兩條條帶，與預期大小相符（圖1）。
2.2 St3HNR、St4HNR基因啟動子的克隆
回收純化片段并與pMD？R19-T Simple Vector連接，轉化大腸桿菌感受態細胞，轉化后選擇單克隆進行菌液檢測，引物用載體通用引物M13/M17和特異引物3HPF/3HPR和4HNF/4HNR進行PCR擴增（圖2）。選取PCR鑒定為陽性的克隆送生工生物工程技術（上海）有限公司測序，并命名為pMD19-3HNRP、pMD19-4HNRP。
2.3 pMD19-3HNRP、pMD19-4HNRP的酶切鑒定
將與pMD？R19-T Simple Vector載體連接并且測序正確的單克隆pMD19-3HNRP、pMD19-4HNRP分別用Sac I和Spe I，EcoR I和Spe I進行雙酶切驗證，均得到預期大小的目的條帶（圖3），成功克隆得到St3HNR、St4HNR基因啟動子。
2.4 pHIS2.1載體酶切鑒定
提取pHIS2.1載體質粒，用Sac I和Spe I，EcoR I和Spe I進行雙酶切并回收，得到7 190 bp大小的片段，所得片段與預期結果一致（圖4）。
2.5 St3HNR、St4HNR基因啟動子酵母單雜交報告載體的構建
將pMD19-3HNRP和pHIS2.1質粒載體分別用Sac I、Spe I進行雙酶切，回收目的片段后將帶有相同黏性末端的3HNRP和線性的pHIS2.1連接，得到pHIS-3HNRP重組載體。將pMD19-4HNRP與pHIS2.1分別用EcoR I、Spe I進行雙酶切，回收純化目的片段后再連接，得到pHIS-4HNRP重組載體。pHIS-3HNRP、pHIS-4HNRP重組載體全長約8 200 bp，Sac I與Spe I雙酶切得到大小為7 190 bp和998 bp的條帶，EcoR I與Spe I酶切得到大小為7 190 bp和998 bp條帶，結果均與預期大小相符（圖6），玉米大斑病菌黑色素還原酶基因啟動子的酵母單雜交載體構建成功。
3 小結與討論
目前，在研究DNA-蛋白質相互作用中，酵母單雜交體系主要有以下3種用途：①確定已知DNA-蛋白質之間是否存在相互作用；②分離編碼結合于目的順式調控元件或其他短DNA結合位點蛋白的新基因；③定位已經證實的具有相互作用的DNA結合蛋白的DNA結合結構域以及準確定位與DNA結合的核苷酸序列[13]。應用酵母單雜交體系已經識別并驗證了許多與目的DNA序列結合的蛋白質。
StMR1基因是DHN黑色素合成途徑中的具有轉錄調控作用的轉錄因子，St3HNR、St4HNR基因是該途徑中編碼還原酶的基因。據報道，瓜類炭疽病菌、玉米小斑病菌中調控基因CMR1的轉錄產物直接或間接作用于還原酶基因，影響其表達，進而影響黑色素的合成[5，6]。本試驗構建了玉米大斑病菌黑色素合成還原酶基因St3HNR和St4HNR的酵母單雜交報告載體，為其研究調控基因的互作機制奠定了基礎。
參考文獻：
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元旦的黑板報范文2
展示風采 喜迎新年
二、活動目的
為了迎接元旦的到來，感受節日的氣氛，使同學們過上一個歡慶的新年，本次活動特提供展示學生風采的舞臺，通過黑板報、書法、繪畫、文藝匯演等形式，進一步豐富校園文化生活，活躍校園氛圍，增強學生集體榮譽感和合作精神，使同學們成為德、智、體、美、勞的全面發展的合格人才。
三、活動內容
1、班級慶元旦黑板報評比
2、慶元旦書法、繪畫比賽
3、元旦文藝匯演
四、相關活動安排與說明
1、黑板報評比
內容：慶祝元旦 評比檢查時間：12月26日
評比檢查人員：有經驗的美術老師
評比方法：100分制 其中內容50分，設計50分。
獎項設置：一等獎二名 二等獎三名 三等獎四名
2、元旦書法、繪畫比賽
比賽內容：
繪畫：畫種不限，兒童畫、色彩畫、國畫、紙版畫皆可;
書法：篇幅、風格不限，毛筆、硬筆均可，書法字體不限。
參賽對象：全體學生和教師。
參賽要求：
①、繪畫書法內容要求表現學生生活，發揮兒童的想象空間，繪畫作品必須是反映積極向上和美好的事物。 嚴禁教師或幫助學生涂色。
②、書法、繪畫作品背面右下角請務必用鉛筆注明班級和姓名，以便于評獎。
③、參賽辦法、表彰及獎勵：本次比賽分為書法和繪畫兩個組，分別對書法和繪畫比賽進行設獎。屆時，將評選出一、二、三等獎若干名。對獲獎的選手將進行表彰，其中的優秀作品將在學校宣傳窗中展出。
④、考評小組。由學校美術老師、書法老師及部分老師對作品進行評選。
3、文藝匯演活動
元旦的黑板報范文3
半年來，學校團委在校黨委和上級團委的正確領導下，立足學校實際，本著服從學校管理，利于德育工作，利于學生成長的原則，配合學校各項活動，開展了一系列教育活動，營造了良好的校園文化氛圍?，F將本學期的工作總結如下：
一、主要工作回顧
（1）常規工作：堅持做好每周一的升旗與國旗下講話的安排；每周五第八節課對國旗護衛隊成員進行訓練，周日晚對國旗下講話的學生進行培訓，確保升旗順利進行；每周六教室、寢室衛生大檢查評比；每天校園衛生責任區的檢查；每天早晚各播音一次，關注校園，關注時事。
（2）每月具體工作
9月：
1各班級以班會形式，對暑期開展的“孝行月”活動進行總結。
2組織開展一期主題為“新學期，新征程”的主題黑板報評比活動。
3 做好新一屆團委會，學生會的組建準備工作。
4繼續對新一屆國旗護衛隊隊員繼續進行培訓。
5 報學校黨委批準,升級改造了校園廣播設備。
6 完成了部分畢業生“智慧團建”網上團關系轉接工作。
7舉辦了“我和我的祖國”書法美術作品比賽活動。
10月：
1 完成了新一屆團委會、學生會的組建工作，并召開了學生干部會，布置相關工作。
2 開展主題為“騰飛的祖國”中華魂主題讀書系列活動。選拔3名學生代表學校參加縣關工委組織的演講比賽活動，并對他們進行演講方面指導與培訓。
3 10月12日，組織200名學生參加了縣文明辦組織開展的“省級文明縣城創建萬人簽名”活動。
4 組織學生志愿者清掃學校門前河道。
5 開展了一期主題為”慶中秋迎國慶”的黑板報評比活動.
11月：
1開展了一期主題為的“期中復習迎考”黑板報評比活動。
2 組織學校青年志愿者清掃學校門前河道。
3 組織學校青年志愿者到縣福利院開展“孝老敬老”志愿服務活動。
4 組織學生參加了網上“青年大學習”答題活動。
5 整理了高二年級學生團員檔案.按團縣委要求,清理了部分違規發展的團員.
12月：
1 配合體衛藝處組織籌備開展了學校2020年元旦晚會。
2組織學校教職工完成了中國志愿服務網志愿者注冊工作。
3 按上級部門要求，發展了一批新團員。
4 上報本年度納新團員信息、團情統計及下年度納新團員計劃情況。
5 組織開展了一期主題為“奮進吧2020”的黑板報評比活動
1月
1 組織開展元旦晚會總結表彰會，表彰在元旦晚會中表現突出的班級及個人，并頒發獎狀與榮譽證書。
2 做好團委本學期各項工作清理與總結。
元旦的黑板報范文4
元旦黑板報資料參考：
中國的元旦，據傳說起于三皇五帝之一的顓頊，距今已有3000多年的歷史。“元旦”一詞最早出現于《晉書》：“顓帝以孟夏正月為元，其實正朔元旦之春”的詩中。南北朝時，南朝蕭子云的《介雅》詩中也有“四季新元旦，萬壽初春朝”的記載。
中國最早稱農歷正月初一為“元旦”，元是“初”、“始”的意思，旦指“日子”，元旦合稱即是“初始的日子”，也就是一年的第一天。正月初一從哪日算起，在漢武帝以前也是很不統一的。因此，歷代的元旦月、日也并不一致。夏朝的夏歷以孟喜月（元月）為正月，商朝的殷歷以臘月（十二月）為正月，周朝的周歷以冬月（十一月）為正月。秦始皇統一中國后，又以陽春月（十月）為正月，即十月初一為元旦。從漢武帝起，才規定孟喜月（元月）為正月，把孟喜月的第一天（夏歷的正月初一）稱為元旦，一直沿用到清朝末年。但這是夏歷，亦即農歷或陰歷，還不是我們今天所說的元旦。
元旦的黑板報范文5
為了活躍節日氣氛，豐富學校文化生活，促進教職工的交流合作，增進教職工間的友誼，創設文明、健康、和諧的校園文化氛圍，特組織本次活動。
二、活動時間：
12月30日晚上
三、活動形式和內容：
1、學校統一組織，各部門、班組協調配合。
3、各部門、班組積極協助支持。
4、各組分組聚餐，8：30在衛星接收教室聚會。
四、活動地點：
衛星接收教室。
五、具體安排與分工：
1、主持人：李小龍 姚志麗
2、團委、政教處負責音響、場地的布置。
3、王愛萍老師負責出好會場黑板報。
4、周永吉、張洋、周靜、徐曉麗老師負責做好會場服務工作。
六、后勤保障服務：
李守生、李志軍
七、議程：
1、張校長致辭。
元旦的黑板報范文6
一、本班少先隊隊員情況分析:
制定出少先隊工作計劃的基礎是將班級內學生狀況了解清楚。本班學生在這學期共45人，轉出去3個，又進來了3個插班生，學生人數比上年有所增加，總體看來男生仍多于女生，在上個學期的學習中，學生在學習、生活上的很多情況我都有了比較詳細的了解，不再象剛接手這個班級時的毫無頭緒。有的學生經過一年來的品德行為訓練,對行為規范有了一定的掌握,十分清楚一些基本的學生守則,能很好地遵守紀律。
二、工作分類：
1、五項競賽工作
制定詳細的班級衛生工作計劃。這是體現學生紀律、衛生等行為品德方面的一個具象的表現，學生哪個方面不好，哪方面比較欠缺，都能在這里得到體現。這個學期關于五項競賽中的相關內容，我制定了一系列的措施，因為上一學期可以說是我來做主體，是扶著學生一步步走來，而這一學期，我試著放開手，讓學生自己走走看。而讓他們自己走，就得告訴他們如何走，怎樣走才是最好的走姿。要形成這個最好的走姿，就得有一系列完全嚴密的規章制度，為此，我試著制定了一些新的制度，做到每個干部責任分明。
2、設立衛生監督員
結合學生健忘的特性，我在班級里設立了一個衛生監督員，用來提醒一日三掃制度，衛生監督員的職責是提醒組長，組長則提醒組員。如果衛生監督員忘了，是衛生監督員的責任，如果衛生監督員提醒了，組長沒有很好的實施，是組長的責任，組長說了，組員不行動，是組員的責任，做到責任到人。而且平時衛生監督員和組長負有巡邏、檢查教室衛生的職責。
為了讓衛生監督員時刻知道自己的職責，我為他配備了一個漂亮的胸卡，讓他看到胸卡時知道自己該做什么了。
另外，為了增加憂患意識，我要求一星期給衛生監督員打分，不合格的撤換，優秀的加以獎勵。而評分的標準則是一星期的競賽成績。組長，組員也是如此，一個月評出最好的一組，加以獎勵。
3、設立“三帶”檢查員
三帶，具體說是戴紅領巾、戴小黃帽、戴?；者@三樣東西。每天早上我讓一個乘車的來得早的學生，站在門口，檢查每個學生的三戴情況，并對沒有戴齊的學生進行記錄，加以扣分處理。
檢查員的打分，也是一周一次，進行評比，不合格者撤換。
4、班長進行協調工作
班長我讓她每天早上中午兩次對班級內的同學，進行點名，發現未到的學生，及時通知老師，并且我把點名冊掛在教室里，班長每天記錄好后，都把他掛在墻上，在記錄冊里，我注明了每個學生的聯系電話，這樣即使不是班主任負責的課，其他老師如果要聯系學生，了解學生情況，就來得容易的多了。
另外，對于衛生監督員、三戴檢查員的評比，開始可以由我主持，適應了一段時間后，我將把這個工作教給班長，每天的扣分單，班長統一收集，一周統計一次，并進行評比。把評比情況告知教師。讓小干部真正動起來。
5、黑板報工作
這也是訓練學生能力的好途徑，一年級的時候，黑板報可以說是我一手包辦，從不讓學生插手，如今二年級了，我決定讓他們一步步學起來，先是教師設計好版面，讓學生按著教師的安排進行添色、畫圖，到后來再慢慢放手讓學生自己來出一期黑板報。
三、少先隊工作思路
1、認真貫徹愛國主義教育，采取讀愛國書、看愛國影片、唱愛國歌曲等形式，激發學生的愛國熱情。
2、營造一個溫馨，和諧，自然的學習環境，讓學生到了班里就象回到了家里一樣。
3、教會學生學會生存的技巧，學會與人相處的能力，學會付出和愛，學會關心愛護他人等美好的品格。
4、利用晨會、集會、黑板報、圖片展等形式，開展安全知識教育，讓學生對安全知識有很大的了解，明白什么危險的事情是不能做的。
5、關愛每一個學生，走進每一個學生的心里，成為學生的真正意義上的朋友，為學生排憂解難，樹立信心。
6、上好每一節班隊課，認真抓好課堂紀律，讓班級永遠充滿活力，積極，向上，永爭第一!
四、工作安排
九月份
1、五項競賽開始
十月份
1、慶祝國慶節
2、建隊節活動
3、老人節慰問活動
十一月份
1、五項競賽小結
2、講故事比賽(一-三年級)
3、野炊活動
4、第三期校報刊出(二1-一3)
十二月份
迎元旦大合唱比賽
一月份
